一種用于優(yōu)化葡萄籽粕營養(yǎng)價值的復(fù)合菌群的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于生物優(yōu)化葡萄籽粕營養(yǎng)利用價值的復(fù)合微生物菌群，包括有草酸青霉菌F67、乳酸菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌。本發(fā)明優(yōu)化篩選了最佳發(fā)酵菌種組合、最佳菌種比例，其發(fā)酵效果優(yōu)于傳統(tǒng)的單一菌種及沒有配比的復(fù)合菌種發(fā)酵，能大大的葡萄籽粕酶解產(chǎn)物中的蛋白含量，降低纖維含量，并且可以有效縮短生產(chǎn)周期、降低生產(chǎn)成本、增加生產(chǎn)效率、改善產(chǎn)品品質(zhì)和適口性、提高產(chǎn)品營養(yǎng)利用價值，滿足如今飼料行業(yè)廉價和安全需求，為葡萄籽粕的系統(tǒng)開發(fā)利用提供了更加科學(xué)的方法。
【專利說明】一種用于優(yōu)化葡萄籽粕營養(yǎng)價值的復(fù)合菌群

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵飼料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種用于優(yōu)化葡萄籽柏營養(yǎng)價值 的復(fù)合菌群。

【背景技術(shù)】
[0002] 葡萄籽柏是葡萄酒廠的下腳料或是壓榨葡萄籽油后的副產(chǎn)品，粗纖維含量高達(dá) 50. 81%，粗蛋白11. 52%，鈣0.80%，磷0.28%，木質(zhì)素含量為14. 98%。隨著我國畜牧業(yè) 的迅猛發(fā)展，飼料資源愈來愈缺乏；在玉米等常規(guī)飼料及其加工副產(chǎn)品價格不斷升高的情 況下，將加工處理后的葡萄籽柏產(chǎn)品替代部分常規(guī)飼料原料飼喂畜禽，已被同行們所關(guān)注。 另外，葡萄籽柏富含大量的多酚類物質(zhì)，具有清除自由基，抗衰老，抗氧化，增強(qiáng)免疫力的作 用。如果將其合理利用對提高畜禽生產(chǎn)水平、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力具有重要作用。因此，許多飼 料生產(chǎn)廠家都期望尋找新的飼料資源，期望將葡萄籽添加到畜禽飼糧中，以便節(jié)約玉米，提 高豬畜禽的生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益。
[0003] 然而，由于葡萄籽柏中纖維素含量很高，蛋白質(zhì)含量低，并含有大量的單寧等抗?fàn)I 養(yǎng)因子，營養(yǎng)利用價值低，為此在畜禽利用上受到了一定的限制，僅少量直接應(yīng)用于牛、羊 粗飼料中。目前，葡萄籽柏沒有得到科學(xué)的開發(fā)和利用，造成資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。
[0004] 迄今為止，國內(nèi)外對于飼用葡萄籽柏加工利用沒有進(jìn)行系統(tǒng)的研究，葡萄籽柏發(fā) 酵技術(shù)還處于空白。其它發(fā)酵飼料菌種無法在葡萄籽柏發(fā)酵工藝中進(jìn)行復(fù)制利用。為此， 深入研究最佳復(fù)合菌群發(fā)酵葡萄籽柏技術(shù)，對進(jìn)一步提高其營養(yǎng)利用價值，擴(kuò)大其在飼料 中的應(yīng)用范圍，以廉價的發(fā)酵飼料替代常規(guī)飼料，大大提高經(jīng)濟(jì)效益降低生產(chǎn)成本的目的。 該發(fā)明具有重要的經(jīng)濟(jì)和社會價值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種用于生物優(yōu)化葡萄籽柏營養(yǎng)價值的復(fù)合微生物菌群組 合，從而填補(bǔ)該領(lǐng)域技術(shù)的空白。
[0006] 申請人:通過長時間的研究，根據(jù)葡萄籽柏的營養(yǎng)特性、菌種的優(yōu)點及菌種之間的 相互協(xié)同關(guān)系，最終篩選確定出優(yōu)化葡萄籽柏的最佳菌種組合、菌群中各種菌的數(shù)目比例， 從而促成了本發(fā)明。
[0007] 本發(fā)明的用于生物優(yōu)化葡萄籽柏營養(yǎng)利用價值的復(fù)合微生物菌群，包括有草酸青 霉菌F67、乳酸菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌。
[0008] 上述的復(fù)合微生物菌群中，F(xiàn)67、乳酸菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌的菌種比例 為 3:1:2:1 ;其菌種數(shù)量為 3X IO7: IX IO7:2X IO7: IX 107。
[0009] 本發(fā)明優(yōu)化篩選了最佳發(fā)酵菌種組合、最佳菌種比例，其發(fā)酵效果優(yōu)于傳統(tǒng)的單 一菌種及沒有配比的復(fù)合菌種發(fā)酵，能大大的葡萄籽柏酶解產(chǎn)物中的蛋白含量，降低纖維 含量，并且可以有效縮短生產(chǎn)周期、降低生產(chǎn)成本、增加生產(chǎn)效率、改善產(chǎn)品品質(zhì)和適口性、 提高產(chǎn)品營養(yǎng)利用價值，滿足如今飼料行業(yè)廉價和安全需求，為葡萄籽柏的系統(tǒng)開發(fā)利用 提供了更加科學(xué)的方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1:單菌固態(tài)發(fā)酵試驗產(chǎn)物的粗蛋白及纖維含量圖；
[0011] 圖2 :混合菌株固態(tài)發(fā)酵試驗產(chǎn)物的粗蛋白及纖維含量圖；
[0012] 圖3 :36h菌體生長狀況圖；
[0013] 圖4 :不同菌種接種比例對產(chǎn)物粗蛋白及纖維的含量的影響圖；
[0014] 圖5 :混和菌種的不同接種量對發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白及纖維含量的影響圖；
[0015] 圖6:不同麩皮比例對發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白及纖維含量的影響圖。

【具體實施方式】
[0016] 本發(fā)明的用于生物優(yōu)化葡萄籽柏的菌種組合，其復(fù)合菌株由F67、乳酸菌、枯草芽 孢桿菌和釀酒酵母菌組成。
[0017] 1)選用菌株的理化特性與組合原理：
[0018] 選用的F67能夠產(chǎn)生高活力降解纖維素的纖維素酶和果膠酶；其中纖維素酶能將 葡萄籽柏中的纖維素降解為糖，供其它菌種生長所需營養(yǎng)；分解的果膠酶能夠作用于植物 飼料（包括葡萄籽柏）細(xì)胞壁中膠層，使細(xì)胞壁變薄、相鄰細(xì)胞壁消失、細(xì)胞壁排列疏松、細(xì) 胞壁結(jié)構(gòu)破壞，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)與消化酶充分接觸，提高動物內(nèi)源酶（如淀粉酶、胰蛋白酶和脂 肪酶等）的活性；并水解果膠中以〇-1，4糖苷鍵結(jié)合的半乳糖醛基，產(chǎn)生還原糖；從而提 高機(jī)體對飼料中纖維、蛋白質(zhì)、鈣、磷等營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另外，磷的吸收率增加，可以有 效降低畜牧場磷的排泄量，減少環(huán)境污染，有利于保護(hù)生態(tài)；另外，F(xiàn)67還能夠產(chǎn)生抑制雜 菌生長的青霉素，減輕發(fā)酵過程中的雜菌污染。
[0019] 選用的枯草芽孢桿菌是專用于微生態(tài)制劑的菌株，具有較強(qiáng)的產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、 脂肪酶等解酶的活性，同時還具有降解植物性飼料中非淀粉多糖酶，如果膠酶、葡聚糖酶、 纖維素酶等，特別是葡萄籽柏中的主要抗?fàn)I養(yǎng)因子單寧，促進(jìn)畜禽對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。 枯草芽孢桿菌可以消耗大量的氧，維持腸道厭氧環(huán)境，抑制致病菌的生長，維持腸道正常生 態(tài)平衡；枯草芽孢桿菌的芽孢可刺激產(chǎn)生免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。另外，該菌發(fā)酵之 后有清香味，提高畜禽適口性；
[0020] 選用的乳酸菌進(jìn)入腸道后會形成優(yōu)勢菌種，從而抑制病菌的繁殖，并且自身可以 產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)，可以抑制或殺死病原微生物，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，增加機(jī)體抵抗 力，最終改善畜禽的消化和生長性能。另外，乳酸菌能調(diào)節(jié)發(fā)酵飼料的適口性。
[0021] 選用的釀酒酵母菌能在有糖的培養(yǎng)基中快速增值，是發(fā)酵葡萄酒的專用菌種，對 葡萄有很強(qiáng)的發(fā)酵能力；酵母菌是畜禽動物的長居微生物之一，也是優(yōu)勢菌群。在飼料中添 加酵母菌可刺激動物腸道中益生菌的數(shù)量增加，改善動物腸道中的微生物環(huán)境；酵母菌的 細(xì)胞壁由特殊的酵母纖維組成，主要是由甘露聚糖和葡萄糖組成。甘露聚糖能增強(qiáng)機(jī)體的 免疫力；葡聚糖可以抑制黃曲霉毒素的活力，對黃曲霉毒素中毒有解毒作用。另外，該菌也 是常用的單細(xì)胞蛋白飼料，是提高飼料中小肽含量的主要菌種。
[0022] 本發(fā)明選擇的上述四種發(fā)酵菌種復(fù)合發(fā)酵，其中F67能夠?qū)⑵咸炎寻刂械睦w維素 降解為單糖供其它三個菌種利用，同時將葡萄籽柏細(xì)胞壁降解，將細(xì)胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)析出，為 后續(xù)菌種利用提供條件；枯草芽孢桿菌能夠降解葡萄籽柏中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子（單寧），同 時具有清香味，賦予產(chǎn)品特殊的味道；釀酒酵母菌能夠利用F67產(chǎn)生的單糖快速生長，進(jìn)而 提高產(chǎn)品中微生物蛋白含量；以上三個菌種的生長可以消耗大量的氧，維持發(fā)酵過程中的 厭氧環(huán)境進(jìn)而為乳酸菌生長提供條件；乳酸菌在生長過程中產(chǎn)生乳酸，與枯草芽孢桿菌一 起共同賦予葡萄籽柏產(chǎn)品清酸香味。以上四個菌種相互促進(jìn)，又相互拮抗，復(fù)合應(yīng)用，具有 增加葡萄籽柏的營養(yǎng)物質(zhì)含量、提高動物適口性與營養(yǎng)利用率、降解葡萄籽柏有毒有害物 質(zhì)和良好的動物生產(chǎn)中的益生作用。
[0023] 本發(fā)明具體實施例中所用的乳酸菌為嗜酸乳酸菌，其菌株編號為ACCC10637 ;枯 草芽孢桿菌的編號為CICC20506 ;釀酒酵母菌的編號為CICC1012。但在本發(fā)明的思路下，可 以選用其它同種的菌株。
[0024] 草酸青霉F67,該菌由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所從鵝腸道中分離獲得的，具有 對纖維素很高降解能力，已經(jīng)過中國科學(xué)院微生物研究所鑒定并保藏于中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心（微生物保藏編號：CGMCC No. 2260)。上述4種菌種組方使 用能夠最大提高葡萄籽柏中的蛋白含量和降低纖維素含量，并且能夠完全降解主要抗?fàn)I養(yǎng) 因子單寧。
[0025] 本發(fā)明選擇的上述四種發(fā)酵菌種復(fù)合應(yīng)用，具有增加發(fā)酵飼料的營養(yǎng)物質(zhì)含量、 提高動物適口性與營養(yǎng)利用率、降解葡萄籽柏中有毒有害物質(zhì)和良好的動物生產(chǎn)中的益生 作用。
[0026] 2)發(fā)酵菌種擴(kuò)增培養(yǎng)基的制備：
[0027] F67擴(kuò)增培養(yǎng)基配制方法：在燒杯內(nèi)加蒸餾水1000ml，依次加入胨5. 0g，磷酸氫二 鉀I. 〇g，酵母浸出粉2. 0g，硫酸鎂0. 5g，微溫溶解，調(diào)節(jié)PH值約為6. 8,煮沸，加入葡萄糖 20. Og溶解后，搖勻，紗布濾清，調(diào)節(jié)PH值使滅菌后為6. 4±0. 2,分裝在各個三角瓶中里，力口 棉花塞，用高壓鍋滅菌。培養(yǎng)溫度為30°C，培養(yǎng)時間為18h?24h，培養(yǎng)結(jié)束后，從搖床中取 出放在4 °C的冰箱中保存。
[0028] 乳酸菌擴(kuò)增培養(yǎng)基配制方法：在燒杯內(nèi)加蒸饋水1000ml，依次加入蛋白胨10. 0g， 牛肉浸取物（牛肉膏）10. 〇g，酵母提取液（酵母膏或酵母粉）5. 0g，葡萄糖20. 0g，乙酸鈉 5. 〇g，檸檬酸氫二胺2. 0g，吐溫-801. Oml，磷酸氫二鉀2. 0g，七水硫酸鎂0. 2g，七水硫酸錳 0. 05g，用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH6. 2?6. 4,分裝在各個三角瓶中里，加棉花塞，用高壓鍋滅菌。接 種后培養(yǎng)溫度為42°C，兼性厭氧，培養(yǎng)溫度為18h?20h，培養(yǎng)結(jié)束后，從培養(yǎng)箱中取出放在 4°C的冰箱中保存。
[0029] 枯草芽孢桿菌擴(kuò)增培養(yǎng)基配制方法：在燒杯內(nèi)加蒸餾水1000ml，依次加入蔗糖 l〇g、大豆蛋白胨l〇g、NaCl 5g，放在火上加熱。待完全溶解后，用10%鹽酸或10%的氫氧 化鈉調(diào)整pH值到7. 2?7. 6,分裝在各個三角瓶中里，加棉花塞，用高壓鍋滅菌。接種后培 養(yǎng)溫度為37°C，培養(yǎng)時間為18h?24h，培養(yǎng)結(jié)束后，從搖床中取出放在4°C的冰箱中保存。
[0030] 釀酒酵母菌擴(kuò)增培養(yǎng)基配制方法：取250g干麥芽，將干麥芽磨碎，粒度為100目， 放入大燒杯，加入1000ml蒸餾水，在64°C?66°C水浴鍋中糖化3h?4h。將糖化液用4? 6層紗布過濾，濾液如果渾濁不清，用雞蛋白澄清。方法是，將一個雞蛋中的蛋白取出加水 20ml，調(diào)勻用玻璃棒攪拌至生泡沫為止，然后倒入糖化液中攪拌煮沸后，用8層紗布過濾。 濾液調(diào)節(jié)PH為7. 0?7. 2,糖度用糖度計測量并加蒸餾水稀釋到50Be，分裝在各個三角瓶 中里，加棉花塞，用高壓鍋滅菌。培養(yǎng)溫度為25°C?28°C，培養(yǎng)時間為24h，培養(yǎng)結(jié)束后，從 搖床中取出放在4 °C的冰箱中保存。
[0031] 下面結(jié)合實施案例對本發(fā)明的方法進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0032] 實施例1 :生物優(yōu)化葡萄籽柏菌種的篩選試驗
[0033] 1)原材料處理
[0034] 將市售的葡萄籽柏和麩皮用粉碎機(jī)粉碎，粒度為40目，按葡萄籽柏和麩皮的比例 為9:1，料水比為3:1混合加入到250ml三角瓶中，每個三角瓶中加葡萄籽柏45g，麩皮5g， 蒸饋水12. 5ml，加棉花塞，用高壓鍋121°C滅菌30min。
[0035] 2)單一菌株生物優(yōu)化葡萄籽柏試驗
[0036] 將擴(kuò)增好的F67、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌菌液分別用無菌水稀釋到 IX IO7個/ml，接種到發(fā)酵培養(yǎng)基上，每一個培養(yǎng)基上分別接種5ml的菌液。接種完后加棉 花塞，三角瓶口用牛皮紙包住，放在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72h，培養(yǎng)結(jié)束 后把培養(yǎng)基取出，將發(fā)酵產(chǎn)物放在烘箱中烘干，烘干溫度為35°C，烘干后測定粗蛋白（CP)、 真蛋白（TP)中性洗滌纖維（NDF)、酸性洗滌纖維（ADF)及粗纖維（CF)的含量。參照（GB/T 6432-1994)測定發(fā)酵產(chǎn)物中蛋白質(zhì)含量；參照（GB/T 6434-1994)測定發(fā)酵產(chǎn)物中的粗纖 維含量；參照（GB/T 27985-2011)測定發(fā)酵產(chǎn)物中單寧含量。
[0037] 試驗結(jié)果表明，所選的四個菌種均能提高粗蛋白含量，降低粗纖維含量；四個菌 種的發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白含量釀酒酵母組的蛋白提高最多，比未生物優(yōu)化的葡萄籽柏提高了 9. 20% ;而粗纖維F67降低最多，比未發(fā)酵的葡萄籽柏降低了 22. 22% ;說明四個菌種適合 作為生物優(yōu)化葡萄籽柏的菌株（圖1)。
[0038] 3)混合菌株發(fā)酵試驗
[0039] 將四個菌株雙菌混合和多菌混合分別接入固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，菌種組合為：1+2、 1+3、1+4、2+3、2+4、3+4、1+2+3、1+2+4、1+3+4、2+3+4、1+2+3+4(1代表卩67、2代表乳酸菌、3代 表枯草芽孢桿菌、4代表釀酒酵母菌）。每一個培養(yǎng)基上分別接種5ml的菌液進(jìn)行混合發(fā)酵 (例：如果是雙菌發(fā)酵及個菌種加菌液2. 5ml，其它依次類推）。接種完后加棉花塞，三角瓶 口用牛皮紙包住，放在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72h。
[0040] 試驗結(jié)果表明，混合菌種發(fā)酵的產(chǎn)物CP含量明顯高于單菌發(fā)酵，三菌高于雙菌， 四菌又高于三菌。其中1+2+3+4菌種組合發(fā)酵產(chǎn)物的CP含量較其它組含量最高，比未生物 優(yōu)化的葡萄籽柏提高了 46. 52%，粗纖維相比降低了 25. 60%，單寧含量為零。且生長迅速， 在培養(yǎng)36?48h后即可看見菌絲覆蓋基質(zhì)。見附圖2和附圖3。
[0041] 4)最佳菌種接種比例試驗
[0042] 將四個菌種按不同的比例分別接入固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，菌種的接種比例為： 1:1:1:1、1:1:1:2、1:1:2:1、2:1:1:2、1:2:1:2、3:1:2:1、2:1:1:1、1:1:2:2、2:2:1:1、 1:2:2:1、1:2:2: 2、2:2:2:1 (依次為F67:乳酸菌：枯草芽孢桿菌：釀酒酵母菌，因葡萄籽柏 CF含量較高，增加F67的比例）。每一個培養(yǎng)基上分別接種5ml的菌液進(jìn)行混合發(fā)酵（例： 如果菌種接種比例為1: 1:1: 1，及每個菌種的菌液添加量為I. 25ml，菌種數(shù)量為3X IO7 : I X IO7 :2 X IO7 :1 X 107,將四個菌液的濃度均用無菌水稀釋至I X IO7個/ml。接種完后加棉 花塞，三角瓶口用牛皮紙包住，放在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72h。
[0043] 試驗結(jié)果表明，菌種的接種比例為3:1:2:1時，發(fā)酵效果最好，CP含量較其它組含 量最高，比未生物優(yōu)化的葡萄籽柏提高了 47. 30%，粗纖維降低了 26. 53%，單寧含量為零。 見附圖4。
[0044] 5)最佳接種量試驗
[0045] 將四個菌種按比例3:1:2:1 (F67X3:乳酸菌Xl :枯草芽孢桿菌X2 :釀酒酵母 菌 XI，菌種數(shù)量為 3X 107 :1 X 107 :2X 107 :1 X 107)分別以 2%、5%、10%、15%、20%的接 種量接入到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中。接種完后加棉花塞，三角瓶口用牛皮紙包住，放在30°C的恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72h。
[0046] 試驗結(jié)果表明，菌種的接種量為15%時，發(fā)酵效果最好，CP含量較其它組含量最 高，比未生物優(yōu)化的葡萄籽柏提高了 48. 69%，粗纖維降低了 27. 54%。見附圖5。
[0047] 實施例2 :生物優(yōu)化葡萄籽柏發(fā)酵培養(yǎng)基輔料添加量試驗
[0048] 為了使菌種更好的生長，向培養(yǎng)基中添加一定量的麩皮；麩皮中含有豐富的維生 素和礦物質(zhì)，能夠調(diào)節(jié)發(fā)酵基質(zhì)的營養(yǎng)；另外，它還是一種很好的膨松劑，同時也可作為輔 助氮源。
[0049] 將四個菌種按最佳比例配合成菌液，按15%的接種量接種到不同配合固態(tài)發(fā)酵 培養(yǎng)基上。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的配合比例為：麩皮5%，葡萄籽柏95% ;麩皮10%，葡萄籽柏 90% ;麩皮15 %，葡萄籽柏85 % ;麩皮20%，葡萄籽柏80 %。接種完后加棉花塞，三角瓶口 用牛皮紙包住，放在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72h。
[0050] 試驗結(jié)果表明，生物優(yōu)化效果隨著麩皮添加量的增加而增大，而在20%的添加 量時CP含量較其它組含量最高，比未生物優(yōu)化混合底物提高了 46. 96%，粗纖維降低了 25. 82%。見附圖6。
[0051] 實施例3 :復(fù)合菌株生物優(yōu)化葡萄籽柏回歸試驗
[0052] 采用復(fù)合菌株分別為：F67、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌；其菌種數(shù)量為 3X IO7 :1 XlO7 :2X IO7 :1 X 107,將四個菌液的濃度均用無菌水稀釋至IX IO7個/ml ;其 按照重量分?jǐn)?shù)的最佳接種量為15% ;固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基麩皮的添加比例為20%，通過5次 驗證試驗發(fā)現(xiàn)，在該條件下所得CP含量比未生物優(yōu)化的葡萄籽柏依次提高了 46.98%、 47. 53%、47. 32%、47. 33%、47. 21% ;CF含量比未生物優(yōu)化葡萄籽柏依次降低了 25. 82%、 24. 93%、25. 62%、25. 64%、25. 76% ;單寧含量為零。與實施案例2的結(jié)果基本一致；表明 本發(fā)明的復(fù)合微生物菌群對于葡萄籽柏具有很好的發(fā)酵效果。
[0053] 實施例4 :不同菌株與復(fù)合菌株生物優(yōu)化葡萄籽柏效果對比試驗
[0054] 1)単菌發(fā)酵效果試驗：分別將納豆芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和產(chǎn)阮假 絲酵母菌四個菌液的濃度均用無菌水稀釋至IXlO7個/ml，其按照重量分?jǐn)?shù)15%接種到葡 萄籽柏發(fā)酵培養(yǎng)基上，放在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72h。并對發(fā)酵產(chǎn)品進(jìn)行 粗蛋白和纖維素含量測定。
[0055] 2)復(fù)合菌發(fā)酵效果試驗：分別將F67、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌菌種（組 合1)和F67、乳酸菌、納豆芽孢桿菌、產(chǎn)阮假絲酵母菌菌種（組合2,專利：CN201310362029. X)按接種比例接種到葡萄籽柏發(fā)酵培養(yǎng)基上，放在30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為 72h。并對發(fā)酵產(chǎn)品進(jìn)行粗蛋白（CP)、真蛋白（TP)和纖維素含量測定。
[0056] 實驗結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌發(fā)酵效果顯著優(yōu)于納豆芽孢桿菌，CP含量相比提高 了 8.53%，TP提高了 2.99%，CF含量降低了 7.54% ;釀酒酵母菌的發(fā)酵效果優(yōu)于產(chǎn)阮假 絲酵母菌CP含量提高了 9. 05%，TP含量提高了 3. 76%，CF含量降低了 4. 48%。菌種組 合1真蛋白平均為13. 35%，比為發(fā)酵產(chǎn)品提高了 90.86% ;與組合2比較，CP含量提高了 14. 69%，TP含量提高了 8. 22%，CF含量降低了 3. 00%。表明，本發(fā)明所選的菌株和菌種組 合優(yōu)于專利CN201310362029. X的菌種和菌種組合，本發(fā)明的生物優(yōu)化葡萄籽柏的菌種組 合無法用上述的發(fā)明方法代替。試驗結(jié)果詳見表1。
[0057] 表1.不同菌株生物優(yōu)化葡萄籽柏營養(yǎng)價值的比較
[0058]

【權(quán)利要求】
1. 一種復(fù)合微生物菌群，其特征在于，所述的復(fù)合微生物菌群由草酸青霉菌、乳酸菌、 枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌組成。
2. 如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌群，其特征在于，所述的草酸青霉菌的保藏編號 為 CGMCC No. 2260。
3. 如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌群，其特征在于，所述的復(fù)合微生物菌群中，草酸 青霉菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌的數(shù)量比例為3:1:2:1。
4. 如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌群，其特征在于，所述的復(fù)合微生物菌群中，草酸 青霉菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母菌數(shù)量為3 X 107、1 X 107、2 X 107、1 X 107。
5. 權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌群在處理葡萄籽柏中的應(yīng)用。
【文檔編號】A23K1/00GK104381588SQ201410563567
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月21日
【發(fā)明者】王寶維, 張開磊, 隋麗, 葛文華, 張名愛 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)