一種類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系培育方法。本發(fā)明的培育方法基本步驟包括親本挑選、群體構(gòu)建、幼體培育、海區(qū)養(yǎng)殖和多代群體選擇步驟，可培育出類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系；獲得的新品系中，96%個(gè)體的貝殼棱柱層為金黃色、96%個(gè)體的外套膜、閉殼肌與鰓絲為金黃色，其體內(nèi)類胡蘿卜素含量是對(duì)照群體的2?5倍。本發(fā)明利用群體選擇育種技術(shù)培育類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝新品系，具有明顯的金黃殼色，而且貝體內(nèi)類胡蘿卜素含量高；本發(fā)明方法容易在生產(chǎn)單位推廣，具有顯著的實(shí)用價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專利說(shuō)明】
一種類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種馬氏珠母貝優(yōu)良品種的選育方法，具體說(shuō)是一種類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]類胡蘿卜素是一類脂溶性的有色化合物，廣泛存在自然界中，一般只能在植物、真菌和某些細(xì)菌中合成。自1928年Kuhn和Karrer首次闡明了β-胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)以來(lái)，已經(jīng)報(bào)道了 800多種類胡蘿卜素。類胡蘿卜素在動(dòng)物體內(nèi)具有重要的生物功能，人體類胡蘿卜素的攝入量與抗氧化、細(xì)胞調(diào)節(jié)、基因表達(dá)以及免疫能力的強(qiáng)弱密切相關(guān)，類胡蘿卜素還可以有效降低患癌癥以及心血管等疾病的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物而言，類胡蘿卜素起到改善卵質(zhì)、減少胚胎發(fā)育死亡率、提高免疫生殖能力與著色等作用。雙殼類、腹足類、多板類及頭足類等貝類體內(nèi)含有豐富的類胡蘿卜素，但貝類自身不能合成類胡蘿卜素，主要通過(guò)食物鏈從食物中攝取并在體內(nèi)沉積，體內(nèi)的部分類胡蘿卜素還可以被轉(zhuǎn)化為其他形式；目前國(guó)內(nèi)有關(guān)類胡蘿卜素含量研究的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖貝類包括華貴柿孔扇貝CjWaffijs夷扇貝Pai10joecie/?yessoaosis、^節(jié)孑L扇貝 GWaffiF /a_rre_ri與三角帆蟲(chóng)豐/fyr1psis cumingii。
[0003]馬氏珠母貝是我國(guó)南方沿海重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖貝類，主要用于生產(chǎn)有核珍珠，是我國(guó)廣東、廣西與海南特色海洋產(chǎn)業(yè)。在上世紀(jì)90年代達(dá)到產(chǎn)業(yè)高峰，年產(chǎn)珍珠20噸，從業(yè)人員30萬(wàn)，近幾年來(lái)珍珠產(chǎn)業(yè)嚴(yán)重下滑，目前年產(chǎn)量3-5噸。珍珠顏色是決定珍珠商業(yè)價(jià)值的重要指標(biāo)之一。馬氏珠母貝生產(chǎn)的珍珠(未經(jīng)過(guò)加工)顏色常有白色、金黃色以及少量的粉色，其中白色帶粉的珍珠最為珍貴?，F(xiàn)有研究表明，類胡蘿卜素可能是決定珍珠顏色的重要因素之一，如，有機(jī)類胡蘿卜素能使淡水養(yǎng)殖珍珠呈現(xiàn)顏色，而白色珍珠不含有有類胡蘿卜素。除了生產(chǎn)珍珠以外，馬氏珠母貝也是一種重要經(jīng)濟(jì)食用貝類，具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，具有豐富蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，谷氨酸與甘氨酸等呈味氨基酸，不飽和脂肪酸、牛磺酸，鋅與砸等微量元素。馬氏珠母貝殼顏色包括褐色、紅色、金黃與白色等，不同殼色個(gè)體的生長(zhǎng)性狀與產(chǎn)珠性狀均存在明顯差異。
[0004]近年來(lái)，本專利的
【申請(qǐng)人】對(duì)此進(jìn)行了大量的研究，結(jié)果表明，馬氏珠母貝金黃殼色群體的類胡蘿卜素含量明顯高于正常殼色(褐色)群體，然而金黃殼色群體內(nèi)個(gè)體間類胡蘿卜素含量存在明顯不同，這主要受到遺傳因素影響。目前未見(jiàn)關(guān)于類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)合遺傳育種技術(shù)手段篩選金黃殼色個(gè)體類胡蘿卜素含量高的個(gè)體作為親本繁育子代群體，以獲得具有金黃殼色外殼、類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法;該方法包括親本挑選、構(gòu)建群體、幼體培育、海區(qū)養(yǎng)殖和多代群體選擇等步驟，通過(guò)在馬氏珠母貝育苗上采用人工解剖授精方式、珍珠貝育苗過(guò)程中，建立馬氏珠母貝不換水苗種育苗的方法等措施，對(duì)傳統(tǒng)的育種技術(shù)進(jìn)行改良，不需轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)，即可實(shí)現(xiàn)類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝新品系的培育。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:一種類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法，基布步驟如下:
(1)親本選擇:先直接挑選貝殼棱柱層為金黃色的個(gè)體，再利用開(kāi)口鉗栓口，挑選閉殼肌、外套膜與鰓絲均呈現(xiàn)金黃色的馬氏珠母貝個(gè)體作為親本；
(2)群體構(gòu)建:將親本解剖，剪取性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本的卵子與雄性的精子混合授精;受精卵在1000L孵化桶孵化，受精后20-24h，收集孵化桶中上浮的D型幼蟲(chóng)，轉(zhuǎn)移到4m X 3m X 2.5m水泥池或1000L玻璃鋼桶進(jìn)行幼體培育；
(3)幼體培育:幼體培育密度為0.5-1.0個(gè)/ml，微量充氣，不換水;每天定點(diǎn)投喂餌料，投喂時(shí)間為8:00，幼體浮游期間投喂酵母片；當(dāng)40-50%數(shù)量的幼體出現(xiàn)眼點(diǎn)后，投放附著基，幼體附著后，每天換水I次，換水量為50%，投喂蝦塘藻;附著基上的苗種規(guī)格達(dá)到2mm，將苗種從附著基轉(zhuǎn)移到目數(shù)80目的網(wǎng)袋；
(4)海區(qū)養(yǎng)殖:將步驟(3)裝有苗種的網(wǎng)袋轉(zhuǎn)移到海區(qū)養(yǎng)殖，每隔5-7天清洗網(wǎng)袋表面的污泥與附著物，根據(jù)苗種規(guī)格，及時(shí)更換網(wǎng)袋調(diào)整養(yǎng)殖密度，養(yǎng)殖密度由初始的1000-1500個(gè)/袋逐漸降低為40個(gè)/籠；網(wǎng)目由初始的80目更換為孔徑為2.5-3.0cm的單層網(wǎng)籠；
(5)群體選擇:從步驟(4)獲得的群體中挑選貝殼棱柱層、外套膜、閉殼肌與鰓絲金黃色純度的個(gè)體作為親本;剪取親本性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本卵子與雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化，受精后20-24h，收集上浮的D型幼蟲(chóng)，轉(zhuǎn)移到4m X 3m X 2.5m水泥池培育;按照步驟(3 )與(4 )進(jìn)行苗種培育與海區(qū)養(yǎng)殖；
(6)新品系培育:重復(fù)(5)步驟2-3次，培育出選育群體，該選育群體具有明顯金黃色外殼，閉殼肌、外套膜與鰓絲均為金黃色養(yǎng)殖新品系，且金黃殼色個(gè)體比例達(dá)到96%以上。
[0007]優(yōu)選的，步驟(2)和步驟(5)所述受精卵孵化條件為:孵化水溫26_30°C，鹽度28-30 ο
[0008]優(yōu)選的，步驟(3)所述酵母片投喂量為0.1-0.5mg/l，蝦塘藻投喂量25000-50000cells/ml0
[0009]優(yōu)選的，所述步驟(5)中，從群體中挑選的親本其平均性狀大于群體性狀平均值的10-15%，所挑選親本數(shù)量為80-100個(gè)，雌雄比為1:1。
[0010]進(jìn)一步的，步驟(4)所述根據(jù)苗種規(guī)格，及時(shí)更換網(wǎng)袋調(diào)整養(yǎng)殖密度的方法是:當(dāng)苗種規(guī)格達(dá)到2_3mm時(shí)，養(yǎng)殖密度為1000-1500個(gè)，網(wǎng)袋為80目；當(dāng)苗種規(guī)格達(dá)到5-6cm時(shí)，養(yǎng)殖密度為40個(gè)，網(wǎng)袋為2.5-3.0cm0
[0011 ]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的有益效果如下:
(1)結(jié)合遺傳育種技術(shù)手段篩選金黃殼色個(gè)體類胡蘿卜素含量高的個(gè)體作為親本繁育子代群體，能有效提高養(yǎng)殖群體的類胡蘿卜素含量;在傳統(tǒng)育種的技術(shù)上進(jìn)行了優(yōu)化，不需要轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)，操作方便，能培育出同時(shí)具有金黃殼色與類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系;經(jīng)本發(fā)明方法選育的新品系具有明顯金黃色外殼，閉殼肌、外套膜與鰓絲均為金黃色，且金黃殼色個(gè)體比例達(dá)到96%以上；與現(xiàn)有的馬氏珠母貝相比，本發(fā)明選育的新品系其體內(nèi)的類胡蘿卜素含量可提高150%以上；
(2)群體構(gòu)建過(guò)程采用人工解剖授精方式，在珍珠貝育苗過(guò)程中，建立了馬氏珠母貝不換水苗種育苗方法，充分考慮和結(jié)合了馬氏珠母貝的生長(zhǎng)、生活習(xí)性，通過(guò)在對(duì)馬氏珠母貝新品種的選育過(guò)程不同階段，變化水、餌料投喂、養(yǎng)殖密度等養(yǎng)殖條件，使幼體、苗種在最適合的環(huán)境下生長(zhǎng)從而提高受精率，也可促使培育過(guò)程其體內(nèi)類胡蘿卜素含量的提高；
(3)經(jīng)本發(fā)明方法選育的新品系，96%個(gè)體的貝殼棱柱層為金黃色、96%個(gè)體的外套膜、閉殼肌與鰓絲為金黃色，其體內(nèi)類胡蘿卜素含量是對(duì)照群體的2-5倍;本發(fā)明方法容易在生產(chǎn)單位推廣，具有明顯的實(shí)用價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，這些實(shí)施例僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍。
[0013]實(shí)施例采用以下步驟實(shí)現(xiàn)本發(fā)明:2009年4月和6月，構(gòu)建群體。挑選貝殼棱柱層、外套膜、閉殼肌與鰓絲均呈現(xiàn)金黃色的馬氏珠母貝個(gè)體作為親本，貝齡2齡，殼長(zhǎng)6.0-6.5cm，剪取性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本卵子與雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化;受精20h后，將上浮的D型幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到1000L玻璃鋼桶培育;孵化水溫26-28°C，鹽度28;幼體密度控制為I個(gè)/ml，微充氣，幼體培育期間不換水;浮游期間投喂酵母片，投喂量為0.1-0.5mg/l;當(dāng)50%的幼體出現(xiàn)眼點(diǎn)后，投放附著基，幼體附著后，每天換水I次，換水量為50%，投喂蝦塘藻;附著板的苗種規(guī)格達(dá)到2mm，將苗種從附著板轉(zhuǎn)移到網(wǎng)袋;海區(qū)養(yǎng)殖前期每隔5-7天清洗網(wǎng)袋表面的污泥與附著物，根據(jù)苗種生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換網(wǎng)袋;養(yǎng)殖密度由初始的1500個(gè)/袋逐漸降低為40個(gè)/籠；網(wǎng)目由初始的80目更換為孔徑為2.5-3.0cm的單層網(wǎng)籠。
[0014]2011年4月，第2代選育群體構(gòu)建。從群體中篩選貝殼棱柱層、外套膜、閉殼肌與鰓絲均呈現(xiàn)金黃色，親本平均性狀大于群體平均值15%;剪取性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本卵子與雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化;受精20h后，將上浮的D型幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到1000L玻璃鋼桶培育；孵化水溫26-28°C，鹽度28;幼體密度控制為I個(gè)/ml，微充氣，幼體培育期間不換水;浮游期間投喂酵母片，投喂量為0.1-0.5mg/l;當(dāng)50%的幼體出現(xiàn)眼點(diǎn)后，投放附著基，幼體附著后，每天換水I次，換水量為50%，投喂蝦塘藻;苗種規(guī)格達(dá)到2mm，將苗種從附著板轉(zhuǎn)移到網(wǎng)袋;海區(qū)養(yǎng)殖前期每隔5-7天清洗網(wǎng)袋表面的污泥與附著物，根據(jù)苗種生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換網(wǎng)袋;養(yǎng)殖密度由初始的1500個(gè)/袋逐漸降低為40個(gè)/籠；網(wǎng)目由初始的80目更換為孔徑為2.5-3.0cm的單層網(wǎng)籠。
[0015]2013年5月，第3代選育群體構(gòu)建。從第2代選育群體篩選貝殼棱柱層、外套膜、閉殼肌與鰓絲均呈現(xiàn)金黃色個(gè)體作為親本，親本平均性狀性狀大于群體平均值12%;剪取性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本卵子與雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化;受精20h后，將上浮的D型幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到1000L玻璃鋼桶培育；孵化水溫26-28°C，鹽度28;幼體密度控制為I個(gè)/ml，微充氣，幼體培育期間不換水;浮游期間投喂酵母片，投喂量為0.1-0.5mg/l;當(dāng)50%的幼體出現(xiàn)眼點(diǎn)后，投放附著基，幼體附著后，每天換水I次，換水量為50%，投喂蝦塘藻;附著板的苗種規(guī)格達(dá)到2mm，將苗種從附著板轉(zhuǎn)移到網(wǎng)袋;海區(qū)養(yǎng)殖前期每隔5-7天清洗網(wǎng)袋表面的污泥與附著物，根據(jù)苗種生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換網(wǎng)袋;養(yǎng)殖密度由初始的1500個(gè)/袋逐漸降低為40個(gè)/籠；網(wǎng)目由初始的80目更換為孔徑為2.5-3.0cm的單層網(wǎng)籠。
[0016]2015年5月，第4代選育群體構(gòu)建。從第3代選育群體篩選貝殼棱柱層、外套膜、閉殼肌與鰓絲均呈現(xiàn)金黃色個(gè)體作為親本，親本平均性狀性狀大于平均值10%;剪取性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本卵子與雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化;受精20h后，將上浮的D型幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到1000L玻璃鋼桶培育;孵化水溫26-28°C，鹽度28;幼體密度控制為I個(gè)/ml，微充氣，幼體培育期間不換水;浮游期間投喂酵母片，投喂量為
0.卜0.5mg/l;當(dāng)50%的幼體出現(xiàn)眼點(diǎn)后，投放附著基，幼體附著后，每天換水I次，換水量為50%，投喂蝦塘藻;附著板的苗種規(guī)格達(dá)到2mm，將苗種從附著板轉(zhuǎn)移到網(wǎng)袋;海區(qū)養(yǎng)殖前期每隔5-7天清洗網(wǎng)袋表面的污泥與附著物，根據(jù)苗種生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換網(wǎng)袋;養(yǎng)殖密度由初始的1500個(gè)/袋逐漸降低為40個(gè)/籠；網(wǎng)目由初始的80目更換為孔徑為2.5-3.0cm的單層網(wǎng)籠。貝齡I齡時(shí)，選育群體與對(duì)照群體的類胡蘿卜素含量分別為184.32 ± 8.與72.56±7.66pg/g0
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種類胡蘿卜素含量高的馬氏珠母貝養(yǎng)殖新品系的培育方法，其特征在于:基本步驟如下: (1)親本選擇:先直接挑選貝殼棱柱層為金黃色的個(gè)體，再利用開(kāi)口鉗栓口，挑選閉殼肌、外套膜與鰓絲均呈現(xiàn)金黃色的馬氏珠母貝個(gè)體作為親本； (2)群體構(gòu)建:將親本解剖，剪取性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本的卵子與雄性的精子混合授精;受精卵在1000L孵化桶孵化，受精后20-24h，收集孵化桶中上浮的D型幼蟲(chóng)，轉(zhuǎn)移到4m X 3m X 2.5m水泥池或1000L玻璃鋼桶進(jìn)行幼體培育； (3)幼體培育:幼體培育密度為0.5-1.0個(gè)/ml，微量充氣，不換水;每天定點(diǎn)投喂餌料，投喂時(shí)間為8:00，幼體浮游期間投喂酵母片；當(dāng)40-50%數(shù)量的幼體出現(xiàn)眼點(diǎn)后，投放附著基，幼體附著后，每天換水I次，換水量為50%，投喂蝦塘藻;附著基上的苗種規(guī)格達(dá)到2mm，將苗種從附著基轉(zhuǎn)移到目數(shù)80目的網(wǎng)袋； (4)海區(qū)養(yǎng)殖:將步驟(3)裝有苗種的網(wǎng)袋轉(zhuǎn)移到海區(qū)養(yǎng)殖，每隔5-7天清洗網(wǎng)袋表面的污泥與附著物；根據(jù)苗種規(guī)格，及時(shí)更換網(wǎng)袋與調(diào)整養(yǎng)殖密度，養(yǎng)殖密度由初始的1000-1500個(gè)/袋逐漸降低為40個(gè)/籠；網(wǎng)目由初始的80目更換為孔徑為2.5-3.0cm的單層網(wǎng)籠； (5)群體選擇:從步驟(4)獲得的群體中挑選貝殼棱柱層、外套膜、閉殼肌與鰓絲金黃色純度的個(gè)體作為親本;剪取親本性腺，利用300目篩絹沖洗、分散配子;將雌性親本卵子與雄性的精子混合授精，受精卵在1000L孵化桶孵化，受精后20-24h，收集上浮的D型幼蟲(chóng)，轉(zhuǎn)移到4m X 3m X 2.5m水泥池培育;按照步驟(3 )與(4 )進(jìn)行苗種培育與海區(qū)養(yǎng)殖； (6)新品系培育:重復(fù)(5)步驟2-3次，培育出選育群體，該選育群體具有明顯金黃色外殼，閉殼肌、外套膜與鰓絲均為金黃色養(yǎng)殖新品系，且金黃殼色個(gè)體比例達(dá)到96%以上。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)和步驟(5)所述受精卵孵化條件為:孵化水溫26-30 °C，鹽度28-30。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)所述酵母片投喂量為0.1-0.5mg/I，蝦塘藻投喂量25000-50000 cells/ml。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)所述根據(jù)苗種規(guī)格，及時(shí)更換網(wǎng)袋調(diào)整養(yǎng)殖密度的方法是:當(dāng)苗種規(guī)格達(dá)到2-3mm時(shí)，養(yǎng)殖密度為1000-1500個(gè)，網(wǎng)袋為80目；當(dāng)苗種規(guī)格達(dá)到5-6cm時(shí)，養(yǎng)殖密度為40個(gè)，網(wǎng)袋為2.5-3.0cm05.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟(5)中，從群體中挑選的親本其平均性狀大于群體性狀平均值的10-15%，所挑選親本數(shù)量為80-100個(gè)，雌雄比為1:1。
【文檔編號(hào)】A23K50/80GK105900874SQ201610252833
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月22日
【發(fā)明人】鄧岳文, 王慶恒, 杜曉東, 黃榮蓮, 焦鈺, 雷超, 吳小芬, 梁飛龍, 李俊輝
【申請(qǐng)人】廣東海洋大學(xué)