一種防治植物根結線蟲的微生物制劑及應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治植物根結線蟲的微生物制劑及其應用。該制劑由淡紫擬青霉，枯草芽孢桿菌，貝殼粉，蝦殼粉，風化煤腐殖酸，草炭土混合而成。添加了貝殼粉、蝦殼粉來誘導淡紫擬青霉產(chǎn)生幾丁質酶。該制劑可室溫保存，在25℃保存90天后，淡紫擬青霉存活率大于80%。本發(fā)明通過番茄盆栽試驗和黃瓜大田試驗驗證了該制劑具有顯著的防治根結線蟲作用；同時，通過土壤定殖試驗驗證了該制劑中淡紫擬青霉在土壤中定殖情況良好。
【專利說明】
一種防治植物根結線蟲的微生物制劑及應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及生物防治技術領域，特別是涉及一種防治植物根結線蟲的微生物制劑 及其應用。
【背景技術】
[0002] 植物線蟲病害是由植物寄生線蟲侵入和寄生引起的病害。調查發(fā)現(xiàn)受線蟲病害影 響的植物或作物有3000多種。主要有糧食類作物，如小麥、甘薯、水稻;蔬菜類作物，番茄、辣 椒、菠菜;及其他類作物。植物線蟲病害在我國常有發(fā)生且危害嚴重，發(fā)生面積時有擴大，尤 其是重茬作物，根結線蟲尤其嚴重。線蟲侵入植物后使植物正常的生長發(fā)育受到迫害，從而 使產(chǎn)量和質量下降。線蟲防治一直是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中急需解決的問題。
[0003] 目前，常用的線蟲防治方法主要是化學藥劑，市場中常見的農(nóng)藥如阿維菌素，噻唑 膦，丁硫克百威等。然而，化學防治只能在短時間內有效果，農(nóng)戶需要定期用藥且給作物和 土壤帶來一定的危害，造成大量農(nóng)藥殘留，影響地下水、土壤環(huán)境及產(chǎn)品質量。
[0004] 研究表明生物防治技術可以做到無公害且有效防治植物線蟲。食線蟲真菌是自然 界中控制線蟲數(shù)量的重要生物因子。目前，生防菌中使用較多且效果顯著的是淡紫擬青霉 (Paeciioffijces Jiiacious)，屬半知菌綱，絲孢菌目，絲孢菌科，擬青霉屬，其廣泛分布于世 界各地，具有功效高、寄主廣、易培養(yǎng)等優(yōu)點。
[0005] 由于淡紫擬青霉生長溫度廣泛，在8_38°C都可以萌發(fā)生長，且在高溫下容易死亡， 所以在實際的應用中往往受到保存條件的影響，從而大大限制了淡紫擬青霉的開發(fā)應用。 現(xiàn)有的淡紫擬青霉制劑生產(chǎn)要經(jīng)過各種工藝加工，添加各種溶劑、穩(wěn)定劑、助劑等，方 法復雜，其他輔助成分的添加增加了生產(chǎn)成本，并且防治效果并不夠好。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供一種防治植物根結線蟲的微生物 制劑及其應用，該制劑在25°C可以有效保存，使淡紫擬青霉在生產(chǎn)應用中的穩(wěn)定性限制在 一定程度上得到解決。本發(fā)明生產(chǎn)操作簡單，無需包埋，擠壓，造粒等特殊工藝；同時添加成 本較低的風化煤腐殖酸和草炭土，在室溫條件下使得該制劑保存時間得以延長，利于規(guī)模 性推廣;枯草芽孢桿菌與淡紫擬青霉配合能夠有效定殖防治植物線蟲，還具有促進植物生 長，提高作物產(chǎn)量等多種功能。
[0007] 本發(fā)明的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑及其應用技術方案為，包括以下成 分:淡紫擬青霉菌劑，枯草芽孢桿菌菌劑，貝殼粉，蝦殼粉，風化煤腐殖酸，草炭土。
[0008] 每100 g防治植物根結線蟲的微生物制劑中含有： 淡紫擬青霉菌劑:2-4 g， 枯草芽孢桿菌菌劑:2-4 g， 貝殼粉:2 g， 4下殼粉:2 g， 風化煤腐殖酸:50 g， 草炭土 :38-42 g。
[0009] 所述的貝殼粉和蝦殼粉為10-60目。
[0010] 淡紫擬青霉菌劑為固體粉劑，初始有效活菌數(shù)在80-100億/g，防治植物根結線蟲 的微生物制劑中，淡紫擬青霉活孢子數(shù)多2億/g。
[0011] 枯草芽孢桿菌菌劑為固體粉劑，初始有效活菌數(shù)在80-100億/g。
[0012] 所述的微生物制劑在抑制秀麗隱桿線蟲的生長方面的應用。
[0013] 所述的微生物制劑在防治番茄根結線蟲病方面的應用。
[0014] 所述的微生物制劑在防治黃瓜根結線蟲病方面的應用。
[0015] 本發(fā)明的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑及其應用有益效果為:該制劑由淡 紫擬青霉，枯草芽孢桿菌，貝殼粉，蝦殼粉，風化煤腐殖酸，草炭土混合而成，本發(fā)明生產(chǎn)操 作簡單，無需包埋，擠壓，造粒等特殊工藝。添加了貝殼粉、蝦殼粉來誘導淡紫擬青霉產(chǎn)生幾 丁質酶，同時添加成本較低的風化煤腐殖酸和草炭土，使得該制劑可室溫保存，在25°C保存 90天后，淡紫擬青霉存活率大于80%，使淡紫擬青霉在生產(chǎn)應用中的穩(wěn)定性限制得到解決， 利于規(guī)模性推廣?？莶菅挎邨U菌與淡紫擬青霉配合能夠有效定殖防治植物線蟲，還具有促 進植物生長，提高作物產(chǎn)量等多種功能。本發(fā)明通過番茄盆栽試驗和黃瓜大田試驗驗證了 該制劑具有顯著的防治根結線蟲作用；同時，通過土壤定殖試驗驗證了該制劑中淡紫擬青 霉在土壤中定殖情況良好。
[0016]
【附圖說明】： 圖1所示為本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑對秀麗隱桿線蟲抑制效果對比圖； 圖2所示為本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑對番茄根結線蟲抑制效果對比圖； 圖3所示為微生物制劑中淡紫擬青霉在土壤中的定殖情況。
[0017]
【具體實施方式】： 為了更好地理解本發(fā)明，下面用具體實例來詳細說明本發(fā)明的技術方案，但是本發(fā)明 并不局限于此。
[0018] 本發(fā)明的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑，包括以下成分:淡紫擬青霉菌劑， 枯草芽孢桿菌菌劑，貝殼粉，蝦殼粉，風化煤腐殖酸，草炭土。各成分均通過商業(yè)途徑購買， 實施例中所用成分： 淡紫擬青霉菌劑:湖北啟明生物工程有限公司， 枯草芽孢桿菌菌劑:湖北啟明生物工程有限公司， 貝殼粉、蝦殼粉(10-60目）:海興海之源飼料有限公司， 風化煤腐殖酸：山東創(chuàng)新腐植酸科技股份有限公司， 草炭土:撫順沃野園藝資材有限公司。
[0019] 實施例1 淡紫擬青霉穩(wěn)定性試驗 取一定量的淡紫擬青霉菌劑分成4份，分別放于25 °C、30 °C、35 °C、40 °C的干燥環(huán)境中， 定時取樣采用梯度稀釋法檢測孢子存活情況，以初步確定淡紫擬青霉的保存溫度，具體請 見表1、表2所不。
[0020] 表1淡紫擬青霉在25 °C、30 °C和35 °C的保存情況
[0021]表2淡紫擬青霉在40 °C的保存情況
[0022]表1和表2試驗結果表明，在25°C條件下淡紫擬青霉保存9天后，孢子存活率保持在 75%以上；隨著溫度的升高，孢子存活率降低；在40°C時保存24小時后孢子存活率下降到 73%。初步得出結論在25°C，能夠使淡紫擬青霉的保存時間有所延長，高溫會導致孢子死 亡。
[0023] 實施例2 防治植物根結線蟲的微生物制劑的制備 制備本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑100 g的各成分及含量如下： 淡紫擬青霉菌劑:2 g， 枯草芽孢桿菌菌劑:2 g， 貝殼粉:2 g， 4下殼粉:2 g， 風化煤腐殖酸:50 g， 娃藻土 :42 g。
[0024]按照配方稱取各成分，混合在一起后攪拌均勻，并密封保存即可。
[0025] 實施例3 防治植物根結線蟲的微生物制劑的制備 制備本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑100 g的各成分及含量如下： 淡紫擬青霉菌劑:4 g， 枯草芽孢桿菌菌劑:4 g， 貝殼粉:2 g， 4下殼粉:2 g， 風化煤腐殖酸:50 g， 娃藻土 ：38 g。
[0026] 按照配方稱取各成分，混合在一起后攪拌均勻，并密封保存即可。
[0027] 實施例4 防治植物根結線蟲的微生物制劑保存溫度試驗 按照實施例2和實施例3配方分別制成防治植物根結線蟲的微生物制劑。取該防治植物 根結線蟲的微生物制劑，分別放于25°C、30°C、35°C的環(huán)境中，定時取樣采用梯度稀釋法檢 測孢子存活情況，見表3和表4。
[0028]表3防治植物根結線蟲的微生物制劑在25°C條件下的存放情況
[0029]表4防治植物根結線蟲的微生物制劑在30°C和35°C條件下的存放情況
[0030] 由表3和表4可以看出，在25°C條件下，本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑保 存90天后，孢子的有效存活率仍可以維持在80%以上。在30°C到35°C可以分別保存50-40天 左右，孢子存活率在80%以上。說明加工成制劑后，孢子存活率明顯提高。因此，淡紫擬青霉 菌劑:2-4 g，枯草芽孢桿菌菌劑:2-4 g，貝殼粉:2 g，蝦殼粉:2 g，風化煤腐殖酸:50 g，草 炭土:38-42 g，制備成防治植物根結線蟲的微生物制劑能夠有效延長淡紫擬青霉在室溫條 件下的保存時間。
[0031] 實施例5 防治植物根結線蟲的微生物制劑對秀麗隱桿線蟲抑制試驗 線蟲培養(yǎng)： 試驗使用的線蟲為模式生物秀麗隱桿線蟲，能夠以大腸桿菌（cA e r i cA i a c 〇 2 i 0P50)為食進行生長繁殖。取適量大腸桿菌稀釋液涂布于LB平板上，37°C培養(yǎng)24 h后，使菌 落長滿平板。將秀麗隱桿線蟲接到長滿大腸桿菌的LB平板上，20°C培養(yǎng)3-4天后，在顯微鏡 下觀察其生長情況，備用。
[0032]試驗設計如下：對照組采用空白處理，實驗組采用本發(fā)明的防治植物根結線蟲的 微生物制劑。
[0033] 1.按照PDA和LB的混合成分配制培養(yǎng)基并制成平板，配方如下:胰蛋白胨10 g/L， 酵母提取物5 g/L，氯化鈉10 g/L，馬鈴薯200 g/L，葡糖20 g/L，瓊脂15 g/L。取適量大腸桿 菌稀釋液涂布于混合培養(yǎng)基平板上，37°C培養(yǎng)24 h，使菌落長滿平板，備用。
[0034] 2.對照組為不做任何處理的1述長滿菌落的平板。
[0035] 3.試驗組為本發(fā)明的防治植物根結線蟲的微生物制劑，稱取該制劑10 g到90 mL 無菌水中，震蕩均勻，取20 uL滴加到1述長滿菌落的平板。
[0036] 4.滴加稀釋液的方法為，在平板上離中心約2 cm處的同一半徑上均勻選取3個 點，滴加稀釋液。
[0037] 6.將各組平板30°C培養(yǎng)，待試驗組長出淡紫擬青霉菌落后，取出各組平板，將線 蟲接種于平板中央。
[0038]各處理平板置于20°C下培養(yǎng)3-4天。使用顯微鏡觀察各處理平板上線蟲的生長情 況。選取滴加稀釋液周圍的培養(yǎng)基進行拍照，對比不同處理對線蟲生長的影響。
[0039]結果分析： 從說明書附圖圖1可以看出，對照組平板上線蟲以大腸桿菌為食進行生長繁殖;試驗組 的微生物制劑，淡紫擬青霉孢子在平板上萌發(fā)成菌落，線蟲生長受到抑制。
[0040]由此可以得出結論： 防治植物根結線蟲的微生物制劑能夠較明顯的抑制線蟲的生長。
[0041 ] 試驗例6 防治植物根結線蟲的微生物制劑對番茄根線蟲的防治 用下述試驗驗證本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑對番茄根結線蟲的防治效果： 取根結線蟲嚴重的大棚土于花盆中，在番茄移栽時將供試制劑采用穴施的方法，施于番茄 根部，采用多株重復試驗。試驗期間適時澆水，精心管理。一定時間后挖出番茄根，觀察根部 的線蟲侵染情況。說明書附圖圖2可以看出對照組的番茄根部受到線蟲侵染嚴重，根結數(shù)量 多;試驗組經(jīng)過供試制劑的處理，線蟲侵染得到有效防治，根部無明顯根結。
[0042] 試驗例7 防治植物根結線蟲的微生物制劑對黃瓜根線蟲的防治 選取根結線蟲嚴重的大棚做本發(fā)明制劑的田間藥效對比試驗。每個處理采用多株重復 試驗，于黃瓜苗移栽前穴施。分別于處理30天和60天后，調查植株的根結線蟲侵染情況。試 驗共3個處理，分別為空白組，噻唑膦對照組，本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑試驗 組。
[0043]大田試驗結果表明：黃瓜苗移栽30天后，空白組線蟲侵染情況嚴重，根結明顯；噻 唑膦和本制劑組線蟲無明顯侵染，黃瓜根部沒有根結。60天后，空白組黃瓜除根部表現(xiàn)出根 結嚴重外，黃瓜植株底部葉片開始發(fā)黃;噻唑膦對照組的黃瓜根部開始受到線蟲的侵染，根 結明顯;本發(fā)明防治植物根結線蟲的微生物制劑試驗組與對照組相比防治效果要好，黃瓜 根部無明顯根結。由此得出結論:本發(fā)明制劑的線蟲防治效果優(yōu)于噻唑膦，防線蟲效果持續(xù) 時間更長。
[0044] 試驗例8 防治植物根結線蟲的微生物制劑中淡紫擬青霉在土壤中定殖情況 對施入土壤的微生物制劑中淡紫擬青霉進行定殖檢測，采用平板涂布方法獲得目的菌 株的定殖情況。
[0045]說明書附圖圖3中依次為空白處理的土壤，施用本發(fā)明制劑的番茄根部土壤和黃 瓜根部土壤中淡紫擬青霉定殖情況。可以看出盆栽番茄和大棚黃瓜試驗中，施入本發(fā)明防 治植物根結線蟲的微生物制劑后，淡紫擬青霉能夠在土壤中定殖，從而起到防治根結線蟲 的作用，同時抑制了其他有害真菌的繁殖。而沒有使用該制劑的空白對照土壤中雜菌較多， 有益菌較少，沒有分離到淡紫擬青霉。
【主權項】
1. 一種防治植物根結線蟲的微生物制劑，其特征在于，包括以下成分：淡紫擬青霉菌 劑，枯草芽孢桿菌菌劑，貝殼粉，蝦殼粉，風化煤腐殖酸，草炭土。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑，其特征在于，每100 g 防治植物根結線蟲的微生物制劑中含有： 淡紫擬青霉菌劑:2-4 g， 枯草芽孢桿菌菌劑:2-4 g， 貝殼粉:2 g， 4下殼粉:2 g， 風化煤腐殖酸:50 g， 草炭土 ：38-42 g。3. 根據(jù)權利要求1所述的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑，其特征在于，所述的貝 殼粉和奸殼粉為10-60目。4. 根據(jù)權利要求1所述的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑，其特征在于，淡紫擬青 霉菌劑為固體粉劑，初始有效活菌數(shù)在80-100億/g，防治植物根結線蟲的微生物制劑中，淡 紫擬青霉活孢子數(shù)多2億/g。5. 根據(jù)權利要求1所述的一種防治植物根結線蟲的微生物制劑，其特征在于，枯草芽孢 桿菌菌劑為固體粉劑，初始有效活菌數(shù)在80-100億/g。6. 如權利要求1所述的微生物制劑在抑制秀麗隱桿線蟲的生長方面的應用。7. 如權利要求1所述的微生物制劑在防治番茄根結線蟲病方面的應用。8. 如權利要求1所述的微生物制劑在防治黃瓜根結線蟲病方面的應用。
【文檔編號】A01N63/00GK105994383SQ201610385950
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月3日
【發(fā)明人】黃道跟, 楊春玉, 閻鵬, 高超, 李恒
【申請人】山東魯虹肥料研究院, 山東大學