專利名稱：小球藻提取液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種小球藻提取液的制備方法。
小球藻，又稱綠藻，是一種單細(xì)胞藻類，含有獨(dú)特成份細(xì)胞生長(zhǎng)促進(jìn)因子(C.G.F.)和豐富的營(yíng)養(yǎng)成分。由于小球藻細(xì)胞壁堅(jiān)固，難于破解，所以多種營(yíng)養(yǎng)成份不易為人所吸收。1989年8月23日公開(kāi)的CN1034860A專利申請(qǐng)說(shuō)明書(shū)闡述了一種小球藻制得提取物的方法，它主要操作是向小球藻加水于100℃下加熱及分離不溶性物質(zhì)諸步驟以得到作為濾出液的提取物。這種提取液中只含有10％左右的蛋白質(zhì)、10％左右的糖和約4.5mg/ml的核酸，小球藻中大量的營(yíng)養(yǎng)成分還沒(méi)有充分分解及提取。
本發(fā)明的目的就是提供一種小球藻提取液的制備方法，它能有效地分解出小球藻中含有的、容易被人體吸收的C.G.F.和多種氨基酸、多糖、核酸類等物質(zhì)，且有效成份含量高。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下方法來(lái)制備小球藻提取液A、小球藻細(xì)胞加水配制成細(xì)胞懸浮液，60～99℃保溫1～5小時(shí)，離心或抽濾得初次清液和初次沉淀物，初次清液于4～10℃暫存；B、初次沉淀物再加水配制成細(xì)胞懸浮液，50～99℃保溫；C、加入纖維素酶和果膠酶，50～60℃保溫1～2小時(shí)；D、加入蛋白酶，50～60℃繼續(xù)保溫1～5小時(shí)，離心或抽濾得二次沉淀物和二次清液；E、把初次清液與二次清液混合，經(jīng)濃縮、保溫、消毒、冷卻，得小球藻酶解提取液母液。
為了節(jié)省酶的用量，降低工藝成本，可在加入上述酶之前，調(diào)節(jié)反應(yīng)物適當(dāng)?shù)乃釅A度，并向反應(yīng)缸中加入發(fā)芽種子勻漿物過(guò)濾液。發(fā)芽種子可以是豆芽或麥芽。
發(fā)明人選用蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)，采用上述制備方法，經(jīng)過(guò)檢測(cè)分析證明，小球藻提取液中含高達(dá)19種氨基酸，其中包括8種人體必需氨基酸，濃縮前氨基酸總含量為1.85mg/ml左右，酸性多糖含量為1.7～2.3mg/ml，核酸類物質(zhì)含量為8.2～8.4mg/ml。
表1是對(duì)本方法制備的小球藻酶解提取液中游離氨基酸的檢測(cè)結(jié)果。
發(fā)明人通過(guò)微生物常規(guī)檢測(cè)法，研究了本方法制成的小球藻提取液對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。結(jié)果表明，添加了小球藻提取液的奶粉-豆乳培養(yǎng)基(添加量為1％)和馬鈴薯-奶粉培養(yǎng)基(添加量為2％)中，嗜熱鏈球菌活菌數(shù)比對(duì)照分別增加了72.7％和228.6％，保加利亞乳酸桿菌的增加率則為185.7％和100％；于4℃下存放七日后，嗜熱鏈球菌活菌數(shù)減少率分別為36.8％和43.5％(對(duì)照組為86.4％和64.3％)，而保加利亞乳酸桿菌的減少率則為25％和90.4％(對(duì)照組為65.7％和92.3％)?？梢?jiàn)，本方法制成的小球藻提取液有顯著增加乳酸菌數(shù)目和延長(zhǎng)活菌的存活時(shí)間的功能，對(duì)乳酸菌的生長(zhǎng)起一定的促進(jìn)效應(yīng)，證明小球藻提取液具有豐富的活性組份和營(yíng)養(yǎng)成分，且易為人體吸收，是具有食療作用的保健佳品。本發(fā)明的小球藻提取液的制備方法，工藝流程簡(jiǎn)單，無(wú)需特殊設(shè)備，成本低，提取效率高。
實(shí)施例1用干藻粉加水按1∶10比例配制細(xì)胞懸浮液，并用鹽酸調(diào)PH值至5.5左右，慢速攪拌，95℃保溫2小時(shí)，保溫后離心或抽濾得初次清液和初次沉淀，分別計(jì)量。將初次沉淀物重新放入反應(yīng)缸內(nèi)，待酶解。將初次清液放入冷庫(kù)于4～10℃暫存。在放有初次沉淀的反應(yīng)缸內(nèi)加水，再次配制成細(xì)胞懸浮液，加水量為第一次加水量的60％，并同時(shí)加入氫氧化鈉溶液，調(diào)PH值到12左右，65℃保溫2小時(shí)后，加入50％醋酸溶液，調(diào)PH到5.5左右，即加入綠豆芽勻漿物過(guò)濾液(每10公斤干藻粉用350克左右綠豆種子)，慢速攪拌，55℃保溫1小時(shí)。按10公斤干藻粉加3克酶計(jì)，稱取纖維素酶、果膠酶，分別溶于檸檬酸緩沖液中，再加入反應(yīng)缸中，慢速攪拌，55℃繼續(xù)保溫1小時(shí)。按10公斤干藻粉加1克酶計(jì)，稱取木瓜蛋白酶，溶于少量檸檬酸緩沖液中，慢速攪拌，60℃保溫1小時(shí)，離心或抽濾得二次沉淀物和二次清液。將初次清液和二次清液混合，濃縮、分裝，85℃兩次保溫各20分鐘，再冷至室溫，放冷庫(kù)或陰涼處存放。此產(chǎn)品即為小球藻酶解提取液母液。
上述綠豆芽勻漿物過(guò)濾液的制備方法如下取綠豆種子，浸水5～8小時(shí)，把種子平鋪在細(xì)布上；加水微微浸過(guò)種子，放30～32℃過(guò)夜；第二天，把發(fā)芽種子水洗，瀝干；加入與發(fā)芽種子重量等同的檸檬酸緩沖液；打碎發(fā)芽種子，勻漿，用紗布?jí)簽V得乳白色溶液；濾渣再用少量檸檬酸緩沖液調(diào)勻，攪拌，再壓濾。把兩次濾液合并，即得。
實(shí)施例2用干藻粉加水按1∶8比例配制細(xì)胞懸浮液，并用鹽酸調(diào)PH值至5.8，慢速攪拌，60℃保溫5小時(shí)，保溫后離心或抽濾得初次清液和初次沉淀物，分別計(jì)量。將初次沉淀物重新放入反應(yīng)缸內(nèi)，待酶解。將初次清液放入冷庫(kù)于4～10℃暫存。在放有初次沉淀物的反應(yīng)缸內(nèi)加水，再次配制成細(xì)胞懸浮液，加水量約為第一次加水量的70％，并同時(shí)加入氫氧化鈉溶液，調(diào)PH值到10左右，55℃保溫3小時(shí)后，加入50％醋酸溶液，調(diào)PH到5.5左右，即加入綠豆芽勻漿物過(guò)濾液，每10公斤干藻粉用400克左右綠豆種子，慢速攪拌，60℃保溫1小時(shí)。按10公斤干藻粉加4克酶計(jì)，稱取纖維素酶、果膠酶，分別溶于檸檬酸緩沖液中，再加入反應(yīng)缸中，慢速攪拌，60℃繼續(xù)保溫1小時(shí)。按10公斤干藻粉加1克酶計(jì)，稱取蛋白酶，溶于少量檸檬酸緩沖液中，慢速攪拌，55℃保溫3小時(shí)，離心或抽濾得二次沉淀物和二次清液。將初次清液和二次清液混合，濃縮、分裝，90℃兩次保溫各20分鐘，冷至室溫，放冷庫(kù)或陰涼處存放。此產(chǎn)品即為小球藻酶解提取液母液。
實(shí)施例3用干藻粉加水按1∶10比例配制細(xì)胞懸浮液，99℃保溫1小時(shí)，保溫后離心或抽濾得初次清液和初次沉淀物，分別計(jì)量。將初次沉淀物重新放入反應(yīng)缸內(nèi)，待酶解。將初次清液放入冷庫(kù)于4～10℃暫存。在放有初次沉淀的反應(yīng)缸內(nèi)加水，再次配制成細(xì)胞懸浮液，加水量為第一次加水量的70％，并同時(shí)加入氫氧化鈉溶液，調(diào)PH值到11，55℃保溫3小時(shí)后，加入50％醋酸溶液，調(diào)PH到6，即加入麥芽勻漿物過(guò)濾液，每10公斤干藻粉用300克左右麥種子，慢速攪拌，60℃保溫2小時(shí)。按10公斤干藻粉加2克酶計(jì)，稱取纖維素酶、果膠酶，分別溶于醋酸緩沖液中，再加入反應(yīng)缸中，慢速攪拌，60℃繼續(xù)保溫2小時(shí)。按10公斤干藻粉加1克酶計(jì)，稱取蛋白酶，溶于少量醋酸緩沖液中，慢速攪拌，60℃保溫3小時(shí)，離心得二次沉淀物和二次清液。將初次清液和二次清液等量混合，濃縮、分裝，85℃兩次保溫各20分鐘，冷至室溫，放冷庫(kù)或陰涼處存放。此產(chǎn)品即為小球藻酶解提取液母液。
實(shí)施例4用干藻粉加水按1∶10比例配制細(xì)胞懸浮液，95℃保溫5小時(shí)，保溫后離心或抽濾得初次清液和初次沉淀物，分別計(jì)量。將初次沉淀重新放入反應(yīng)缸內(nèi)，待酶解。將初次清液放入冷庫(kù)于4～10℃暫存。在放有初次沉淀的反應(yīng)缸內(nèi)加水，再次配制成細(xì)胞懸浮液，加水量為第一次加水量的60％，并同時(shí)加入氫氧化鈉溶液，調(diào)PH值到10，70℃保溫2小時(shí)后，加入50％醋酸溶液，調(diào)PH到5.5，即加入綠豆芽勻漿物過(guò)濾液，每10公斤干藻粉用300～400克綠豆種子，慢速攪拌，60℃保溫2小時(shí)。按10公斤干藻粉加10克酶計(jì)，稱取纖維素酶、果膠酶，分別溶于檸檬酸緩沖液中，再加入反應(yīng)缸中，慢速攪拌，50℃繼續(xù)保溫2小時(shí)。按10公斤干藻粉加5克酶計(jì)，稱取蛋白酶，溶于少量檸檬酸緩沖液中，慢速攪拌，55℃保溫4小時(shí)，離心得二次沉淀物和二次清液。將初次清液和二次清液混合，濃縮、分裝，85℃兩次保溫各20分鐘，冷至室溫，放冷庫(kù)或陰涼處存放。此產(chǎn)品即為小球藻酶解提取液母液。
權(quán)利要求
1.一種小球藻提取液的制備方法，其特征在于依次包括如下步驟A、小球藻細(xì)胞加水配制成細(xì)胞懸浮液，60～99℃保溫1～5小時(shí)，離心或抽濾得初次清液和初次沉淀物，初次清液于4～10℃暫存；B、初次沉淀物再加水配制成細(xì)胞懸浮液，50～99℃保溫；C、加入纖維素酶和果膠酶，50～60℃保溫1～2小時(shí)；D、加入蛋白酶，50～60℃繼續(xù)保溫1～5小時(shí)，離心或抽濾得二次沉淀物和二次清液；E、把初次清液與二次清液混合，經(jīng)濃縮、保溫、消毒、冷卻，得小球藻酶解提取液母液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述步驟B中配制成細(xì)胞懸浮液后，加堿調(diào)控PH值至10～12，55～70℃保溫2～3小時(shí)，然后加酸調(diào)控PH至5～6；
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取方法，其特征在于步驟A中保溫之前加酸調(diào)PH值至5～6。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取方法，其特征在于步驟A中保溫溫度為95℃。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取方法，其特征在于步驟B與C之間還有如下操作加入發(fā)芽種子勻漿物過(guò)濾液，50～60℃保溫1～2小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于所述發(fā)芽種子為豆芽或麥芽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取方法，其特征在于所述小球藻細(xì)胞是小球藻干藻粉。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取方法，其特征在于每10公斤小球藻干粉加用300～400克綠豆種子。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取方法，其特征在于每10公斤小球藻干藻粉加1～10克纖維素酶、1～10克果膠酶和1～5克蛋白酶，所用的酶事先溶于檸檬酸緩沖液中。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種小球藻提取液的制備方法。小球藻細(xì)胞懸浮液經(jīng)溫育處理后加入果膠酶、纖維素酶和蛋白酶,再保溫處理。酶解提取液中富含小球藻生長(zhǎng)因子、多種氨基酸、多糖和核酸類物質(zhì),且工藝流程簡(jiǎn)單,無(wú)需特殊設(shè)備,成本低,提取效率高。
文檔編號(hào)A23J3/00GK1360847SQ0013088
公開(kāi)日2002年7月31日 申請(qǐng)日期2000年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月25日
發(fā)明者周金鑫, 張孝慈, 齊雨藻, 范曉健, 王瑋, 陳波, 肖詠之, 辜小蓮 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)