專利名稱：：生物活性組合物的高壓處理的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物活性組合物的高壓處理，尤其涉及壓力處理生物組合物，以防止至少一種不想要的;微生物生長，同時4吏至少一種生物活性組分保持在期望的活性水平的方法。背景提供具有有用保存期的安全產(chǎn)品的同時保持生物活性的要求限制了在食品或其它可攝取的產(chǎn)品中遞送生物活性組分(例如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或其水解物以及益生微生物)。具有有用保存期的產(chǎn)品即具有良好的保存性并且不易腐壞。期望遞送生物活性組分，這至少是因為這些組分在攝取時具有生理活性，以及這些組分能夠具有積極的健康效益，其包括但不限于骨骼健康、免疫效益、抗炎活性、心臟健康和癌癥治療功效。確保有用保存性的傳統(tǒng)方法對食品等的生物活性具有消極影響。特別是熱處理的方法，對生產(chǎn)商業(yè)化的無菌生物活性產(chǎn)品并非都適用。例如，對商業(yè)化乳制品中的免疫球蛋白的分析顯示盡管60-75%的免疫球蛋白可在巴氏滅菌法處理后得以保存，但是在UHT或罐裝(蒸發(fā)處理)的牛奶中，免疫球蛋白的水平幾乎可以忽略不計(Li-Chanetal,1995)。通過使用比罐裝產(chǎn)品稍低的溫度加熱可完成對酸性食品的商用滅菌，但是在加熱時，免疫球蛋白由于酸化而對變性的敏感性有所加劇(Dominguez等人，2001)。益生微生物是當將其以足夠量給予時，賦予寄主健康效益的微生物。活益生微生物顯示出生物活性作用，而失活益生微生物可以以穩(wěn)定、工藝上較少限制的使用和配售形式提供生物活性。在應(yīng)用中，活微生物因其不想要的活性(例如酶或酸分泌)而不合需要，失活微生物更有利于仍然提供生物活性，而不具有由于其生存性而產(chǎn)生的不想要的活性。國際PCT申請WO2004/032655報導(dǎo)了4吏用高壓處理來減少食品由細菌引起的損壞和/或提供所消費食品的安全，同時保留可存活的期望的培養(yǎng)菌。生物活性產(chǎn)品、成分和食品生產(chǎn)中的一些方法可導(dǎo)致部分或全部喪失生物活性。就基于乳制品的成分和食品而言，可影響到生物活性的涉及加熱的步驟包括熱巴氏滅菌法(thermalpasteurisation)、勻漿化(homogenisation)、熱化(thermalisation)、蒸發(fā)和干燥。就食品力口工而言，可影響生物活性的加熱步驟的實例包括發(fā)酵前的熱處理，UHT處理、干餾、熱填充和熱包裝。在食品生產(chǎn)過程中，生物活性組分通常經(jīng)歷一道或者多道這樣的加熱步驟。這對于乳制品尤其如此，其中處理通常包括最初的巴氏滅菌步驟，并且其通常還包括包裝和銷售前的進一步加熱步驟。Korhonen等人(1998)報道稱，加熱到60。C至90。C的溫度范圍使蛋白質(zhì)變性，因此降低了生物活性蛋白的活性。用巴氏滅菌乳所生產(chǎn)的產(chǎn)品的干燥可用于改善保存性，同時損失高達40。/。的免疫球蛋白(Li-Chan,1995)，但是其商業(yè)應(yīng)用限于直接食用(例如奶片)或新鮮產(chǎn)品(例如酸乳酪)，其中干燥過的生物活性成分基本上不再進行后續(xù)加熱。由于干燥和加熱所造成的損失可通過補充具有所關(guān)注的生物活性的中間產(chǎn)品或最終產(chǎn)品來補償，但是這可能增加末端消費者的費用?，F(xiàn)已報導(dǎo)，使用約350MPa以上壓力的壓力處理可使肉制品、蔬菜和水果類產(chǎn)品(例如分別為熟火腿、鱘梨產(chǎn)品和果汁)的保存性達到商業(yè)上有益的改進。然而，Huppertz等人(2002)報道稱，高壓使乳中的乳清蛋白變性。此外，Korhonen等人(1998)報道稱，在多數(shù)情況下，約500MPa或以上壓力的壓力處理使蛋白質(zhì)不可逆地變性。免疫球:蛋白變性。'"、。、'、Masuda等人(2000)報道稱，大于等于400MPa的壓力無法用于改善牛初乳的保存性，因為這樣的壓力可使免疫球蛋白質(zhì)變性。Tonello等人(1992)報道稱，可使用200MPa壓力處理2小時可用來保持至少85%的免疫球蛋白活性，盡管初乳中的微生物含量僅下降了2個對數(shù)周期。在63。C時同樣的處理能夠使4斂生物含量下降到檢測限以下(超過7個對數(shù)周期)，但這樣處理會導(dǎo)致至少50%的免疫球蛋白活性丟失。存在對能夠為諸如食品或其它可攝取產(chǎn)品等的生物活性產(chǎn)品提供商業(yè)上可用的食品保存性，同時保持至少一種生物活性組分的生物活性的處理方法的需求。因此，本發(fā)明的目的旨在提供在防止不想要的微生物生長的同時將至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平的改良方法或可供選擇的方法，或至少向公眾提供可用的選擇。發(fā)明概述本發(fā)明涉及維持或提高生物活性組合物的保存性，同時使水平的方法。因此，本發(fā)明一方面涉及處理生物活性組合物以維持或提高其保存性的方法，其包括(a)選擇生物活性組合物，該組合物包含至少一種選自下列組分的生物活性組分一種或多種蛋白質(zhì)、一種或多種脂質(zhì)、一種或多種蛋白質(zhì)水解物、一種或多種脂質(zhì)水解物、一種或多種碳水化合物、或一種或多種益生因子或其混合物，所述至少一種生物活性組分在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力和約3.0至8.0的pH下進行壓力處理后能夠保持期望的活性水平；以及(b)在所述預(yù)定壓力和pH下對所述組合物進行壓力處理以防止可能存在于所述組合物中的不想要的生物體生長，同時使至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平。本發(fā)明的另一方面涉及處理生物活性組合物以維持或提高其保存性的方法，其包括(a)選擇生物活性組合物，該組合物包含至少一種選自下列組分的生物活性組分一種或多種蛋白質(zhì)、一種或多種脂質(zhì)、一種或多種蛋白質(zhì)水解物、一種或多種脂質(zhì)水解物、一種或多種碳水化合物、或一種或多種益生因子或其混合物，所述至少一種生物活性組分在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力和約3.0至8.0的pH以及約0至5分鐘的停留時間進行壓力處理后能夠保持期望的活性水平；以及(b)在所述預(yù)定壓力、pH和停留時間下對所述組合物進行壓力處理以防止可能存在于所述組合物中的不想要的生物體生長，同時使至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平。本發(fā)明的另一方面涉及處理益生組合物的方法，其包括(a)選擇包含一種或多種益生微生物菌抹的組合物，該益生微生物具有一種或多種益生因子，所述益生因子在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力下進行壓力處理后能夠至少保持在期望的活性水平；以及種益生微生物菌林生長，同時使一種或多種益生因子至少保^在期望的活性水平。本發(fā)明的另一方面涉及處理益生組合物的方法，其包括(a)選擇包含一種或多種益生微生物菌株的組合物，該益生微生物選自一種或多種嗜酸乳酸桿菌菌林(丄a"o6a"7/wa"Wo//n7"s)、一種或多種鼠李糖乳桿菌菌4朱(丄ac/o6ad〃wW^mwosi^)、或一種或多種動物雙歧桿菌亞種菌才朱(5zy^/oZa"en't/marn'ma/Zssubsp./ac似)或其混合物，所述一種或多種益生孩么生物菌抹具有一種或多種益生因子，所述益生因子在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力下進行壓力處理后能夠至少保持在期望的活性水平；以及(b)在所述預(yù)定壓力下對所述組合物進行壓力處理以防止一種或多種益生微生物菌株生長，同時使一種或多種益生因子至少保持在期望的活性水平。以下實施方案可涉及上文或下文所描述的任何方面。所述組合物可以是液體，其包括固體在液體中形成的混懸液。組合物可以是產(chǎn)品或成分。優(yōu)選地，為維持或改善食品的保存性對所述組合物所進行的處理包括為減緩、延遲、防止或消除至少一種不想要的微生物的生長所進行的處理，優(yōu)選為減緩、延遲、防止或消除全部不想要的微生物的生長所進行的處理。在一實施方案中，處理后的需氧菌平板計數(shù)(APC)為小于或等于約100,000、75,000、50,000、25，000、IO，OOO、5,000、l，OOO、100或10集落形成單位每毫升(cfu/ml),優(yōu)選小于或等于約50,000cfu/ml在一實施方案中，一種或多種蛋白質(zhì)可以是重組的、合成的或天然存在的蛋白質(zhì)或其混合物。在一實施方案中，至少一種生物活性組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種乳^f汙生的生長因子、TGFj81、TGFjS2、一種或多種益生因子或其混合物。在另一實施方案中，至少一種生物活性組分包含一種或多種益生因子。在另一實施方案中，生物活性組合物包含乳品蛋白組合物。本實施方案中的至少一種生物活性組分優(yōu)選地選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種乳衍生的生長因子、TGF/51或TGF/52或其混合物。在另一實施方案中，生物活性組合物選自初乳MPC、初乳MPI、初乳WPC、初乳WPI、MPC、MPI、WPC、WPI、超免疫MPC、超免疫MPI、超免疫WPC或超免疫WPI或其混合物。本實施方案中的至少一種生物活性組分優(yōu)選地選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、TGF]31或TGF(32或其混合物。在另一實施方案中，生物活性組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種免疫J求蛋白(包括一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、或一種或多種對不同表位特異的IgA,IgD,IgE，IgG或IgM)、糖巨肽、一種或多種生長因子(包括一種或多種乳衍生的生長因子)、TGFjSl、TGF/32、一種或多種益生因子、一種或多種非極性脂質(zhì)、或一種或多種極性脂質(zhì)(例如一種或多種磷脂、鞘脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、或神經(jīng)酰胺或其混合物)或其混合物。在優(yōu)選的實施方案中，生物活性組份選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種乳衍生的生長因子、TGF01、TGF02、一種或多種益生因子、一種或多種非極性脂質(zhì)、一種或多種磷脂、一種或多種鞘脂、一種或多種神經(jīng)節(jié)苷脂或一種或多種神經(jīng)酰胺或其混合物。在可供選擇的優(yōu)選實施方案中，生物活性組份選自乳鐵蛋白、一種或多種IgA、一種或多種IgG、一種或多種IgM、TGFj31、TGF^2或一種或多種益生因子或其混合物。在一實施方案中，所述組合物包含生物活性組分、基本上由生物活性組分組成或由生物活性組分組成，所述生物活性組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種免疫球蛋白(包括一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、或一種或多種對不同表位特異的IgA，IgD，IgE，IgG或IgM)、糖巨肽、一種或多種生長因子(包括一種或多種乳衍生的生長因子、包括TGF/31和TGF/32)或一種或多種益生因子或其混合物。在另一實施方案中，所述組合物包含生物活性組分、基本上由生物活性組分組成或由生物活性組分組成，所述生物活性組分選自一種或多種非極性脂質(zhì)、一種或多種諸如磷脂、鞘脂、神經(jīng)節(jié)苷脂或神經(jīng)酰胺的極性脂質(zhì)或其混合物。在一實施方案中，所述組合物包含至少約0.01%、0.05%、0.1%、0.5%、1%，5%、10%、15%、20o/o、25o/0、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%或100%重量的生物活性組分，所述組合物基本上由至少約0.01%、0.05%、0.1%、0.5%、1%,5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%或100%重量的生物活性組分組成，或所述組合物由至少約0.01%、0.05%、0.1%、0.5%、1%,5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%、99.5%或100%重量的生物活性組分組成，所述生物活性組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種免疫球蛋白(包括一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、或一種或多種對不同表位特異的IgA,IgD,IgE,IgG或IgM)、糖巨肽、生長因子(包括乳衍生的生長因子、包括TGF(31和TGF^2)或一種或多種益生因子或其混合物。在一實施方案中，所述組合物富含基本上由或由生物活性組分組成的組合物，所述生物活性組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種免疫球蛋白(包括一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、或一種或多種對不同表位特異的IgA,IgD，IgE,IgG或IgM)、糖巨肽、生長因子(包括乳衍生的生長因子、包括TGF01和TGF/32)、包含至少約1%w/w免疫球蛋白的組合物、通過為提高抗體水平而對動物進行接種所制得的產(chǎn)品、免疫乳或一種或多種益生因子或其混合物。即，將基本上由或由生物活性成分組成的組合物加入到組合物中以提高生物活性組分的濃度，所述生物活性組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種免疫球蛋白(包括一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、或一種或多種對不同表位特異的IgA，IgD,IgE，IgG或IgM)、糖巨肽、生長因子(包括乳衍生的生長因子、包括TGF/31和TGF|32)、包含至少約1。/。w/w免疫球蛋白的組合物、通過為提高抗體水平而對動物進行接種所制得的產(chǎn)品(超免疫乳或超免疫初乳)、免疫乳或一種或多種益生因子或其混合物。在一實施方案中，所述益生因子選自一種或多種細菌DNA基序、一種或多種細菌表面蛋白、一種或多種細菌小分子有機酸、或一種或多種細菌細胞壁組分或其混合物。在一實施方案中，所述不想要的生物體選自一種或多種細菌(包括益生菌)、一種或多種真菌、一種或多種霉菌或者一種或多種酵母菌和一種或多種藻類或其混合物。在一實施方案中，所述不想要的生物體為腐敗菌，其選自一種或多種細菌、一種或多種真菌、一種或多種霉菌、一種或多種酵母菌或者一種或多種藻類或其混合物。在一實施方案中，所述不想要的生物體為病原體，其選自一種或多種細菌、一種或多種真菌、一種或多種霉菌、一種或多種酵母菌或者一種或多種藻類或其混合物。在可供選擇的實施方案中，所述不想要的生物體包含益生生物體和任選地附加不想要的生物體。在一實施方案中，所述不想要的生物體或所述益生微生物選自乳酸菌(Z^"o6ac飾51)、鏈球菌(&re,coccm)、乳球菌、明串珠菌(丄ewcowostoc)、片J求菌(尸ec^ococo/5:)、雙歧桿菌(Szy^o6fl"m'謂)、丙酸軒菌(/Vo/7/om力^m.Mm)、腸球菌(五",eracoccw"或芽胞桿菌(Bacillus)或其混合物。在另一實施方案中，所述纟敖生物選自嗜酸乳酸桿菌(丄ac,oZjad〃maczWo;/n7^)、德氏乳桿菌^f呆力口利亞種(丄a"oZ^cz'〃1/51de/Z)n/ecA:〃smZ^j:.Zw/gan'cw)、干賂孝L^干菌(丄a"o6flc/〃wsca"/)、巻曲孝L牙干菌(丄a"oZacz7/wc77's/a^/51)、約氏享L4干菌(Z^ctoZjflcz'〃m51y'oAwsom7)、才直凈勿享L斥干菌(Za"o6ac/〃"s//aw^zn/m)、羅"f尹氏豸'L4干菌(丄a"o6ac/〃1^ret^en')、鼠李#唐乳4干菌(丄a"oZacz7/iwAamwosM力、唾液乳桿菌(丄a"o6a"7/iwsa/z.van—、兩歧雙歧桿菌CS!yc^,oZ)ac^en.w附6(/dM附)、4豆3又歧才干菌(5(/c^o6acten'wmZreve)、嬰JL雙岐桿菌0B(/^oZ)a"en'm附/"/a""s)、動物雙歧桿菌丄ac"51亞種(5zyc/z'oZa"m.wmam,則//51/ac""、長雙山支軒菌(5(/^/oZja"m'wm/owgi/m)、或嗜熱鏈J求菌(5^r^ococciwWermo;/n7i^)或其混合物。在另一實施方案中，所述不想要的生物體或所述益生微生物選自鼠李糖乳桿菌HN001(Za"oZ^"7/iwWmm"osi^HN001)(AGALNM97/09514)、動物雙歧桿菌亞種HN019(5zy^/o6ac^7'm附amma/"sw^;./actoHN019)(AGALNM97/09513)、嗜酸乳桿菌HN017(丄acto^c/〃iwa"Wop/n7i^HN017)(AGALNM97/09515)、鼠李糖乳桿菌HN067(丄a"oZ^c/〃MsW^m"cwwHN067)(AGALNM97/01925)(US6,379,663中對其全部進行了描述)、約氏乳桿菌NCC533(i:a"o^"7/附y(tǒng)Wmsom7NCC533)(Lal)(CNCM1-1225)、鼠李一唐乳桿菌GG(丄a"oZ)acz.〃t^r/mwwos^GG)(ATCC53103)、養(yǎng)樂多代田菌(丄a"o6a"7/w;sSA/ra^O(FERM-P4751)、嗜酸乳桿菌NCFM(丄a"oZ^c"/wa"Wo//n7iNCFM)(ATCC700396)、才直物乳桿菌299v(丄a"o6acz.〃1^;/朋Mn/m299v)(DSMZ9843)、干酪乳才干菌DN114001(丄a"oZ^"7/wcwe/DN114001)(CNCM1-1518)、唾液乳桿菌UCC4331(丄a"o6ac〃/wsa/zVan'MUCC4331)(NCIMB40829)、動物雙歧桿菌丄ac^s亞種BB12(5(/d/oZjac^n'i/mawz'ma/&swZ)s/7./ac"sBB12)(ATCC27536和DSMZ10140)、或嬰兒雙岐桿菌35624(5(/^o6a"eWMm/"/a"^35624)(NCIMB41003)或其混合物。優(yōu)選的不想要的有機體或益生孩i生物包括鼠李糖乳桿菌(丄a"oZac"/wW^m"osw)HN001、動物乂又歧4干菌丄ac/k亞種HN019(5zyJz'o6acZeWt/mst/Z^/7./ac"sHN019)、嗜酸乳桿菌(丄a"o^c/〃twfl"W叩/n7w)HN017、或鼠李糖乳桿菌(Xflctoftflcz'〃M51r/(3m"os—HN067或其混合物。在一實施方案中，所述益生微生物為失活益生微生物。失活益生微生物可以是不能存活的、不能存活但仍具有代謝活性的或死亡的。在一實施方案中，所述組合物包含一種或多種不想要的凝:生物，例如一種或多種細菌(包括一種或多種益生細菌)、一種或多種真菌、一種或多種霉菌、一種或多種酵母菌、或一種或多種藻類或其混合物。應(yīng)當理解，在一實施方案中，本方明所使用的方法優(yōu)選地旨在防止至少一種不想要的微生物的生長。然而，所述方法通常以預(yù)防疾病為目的實施，實際上可能并沒有任何不想要的生物體存在。在這種情況下，實施所述方法來維持或改善食品保存性，或?qū)嵤┧龇椒ㄒ宰袷厥称钒踩蟆F(xiàn)行生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范或法規(guī)要求。無論不想要的微生物是否存在，本發(fā)明所使用的壓力處理方法使至少一種生物活性組分保持在期望的活性水平，并且該方法用于維持或提高食品的保存性。因此，所述方法優(yōu)選地防止至少一種不想要的孩支生物生長，同時使至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平。在一實施方案中，所述組合物是乳，包括綿羊乳、山羊乳、豬乳、鼠乳、水牛乳、駱駝乳、牦牛乳、馬乳、驢乳、駝馬乳(llamamilk)、牛乳或人乳或其混合物。所述乳優(yōu)選為牛乳。在另一實施方案中，所述組合物包含乳品蛋白質(zhì)或所述組合物是乳品成分。乳品蛋白組合物或乳品成分優(yōu)選為重組的或新鮮的全脂乳、重組的或新鮮的脫脂乳、再生的全脂奶粉或脫脂奶粉、脫脂乳濃縮物、脫脂乳分離物、全脂奶粉或脫脂奶粉、脫脂乳滲余物(retentate)、煉乳、酪乳、超濾乳滲余物、乳蛋白濃縮物(MPC)、乳蛋白分離物(MPI)、脫鈣乳蛋白濃縮物、脫4丐乳蛋白分離物、低脂乳、低脂乳蛋白濃縮物、低脂乳蛋白分離物、初乳、初乳分餾物(colostrumfraction)、初乳蛋白濃縮物(CPC)、初乳乳蛋白濃縮物、初乳乳蛋白分離物，初乳乳清、初乳乳清蛋白濃縮物，初乳乳清蛋白分離物、來自初乳的免疫球蛋白分餾物、乳清、乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)、甜乳清、乳酸乳清、無機酸乳清、再生的乳清粉、超免疫乳、超免疫乳蛋白濃縮物，超免疫乳蛋白分離物、超免疫乳清、超免疫乳清蛋白濃縮物、超免疫乳清蛋白分離物、超免疫初乳、超免疫初乳乳蛋白濃縮物、超免疫初乳乳蛋白分離物、超免疫初乳乳清、超免疫初乳乳清蛋白濃縮物、超免疫初乳乳清蛋白分離物、由任何乳或初乳工業(yè)生產(chǎn)液流衍生的組合物、由任何乳或初乳工業(yè)生產(chǎn)液流的超濾或微過濾所獲得的滲余物或滲透物衍生的組合物、或由任何乳或初乳工業(yè)生產(chǎn)液流的色譜分離所獲得的穿透的或吸附的分餾物衍生的組合物、或這些組合物中任一組合物的全部或部分水解物或其混合物。所述乳品蛋白組合物或乳品成分優(yōu)選源自奶牛、綿羊、山羊、豬、鼠、水牛、駱駝、牦牛、馬、驢、駝馬或人、或者上述各種源乳品蛋白組合物或乳品成分的混合物。在另一實施方案中，益生組合物是乳品組合物，例如上文所描述的那些組合物。在一實施方案中，所述組合物在進行壓力處理前經(jīng)巴氏滅菌、干燥、蒸發(fā)或過濾(包括膜過濾)。在另一實施方案中，所述期望的活性水平是未處理的對照的活性的至少約35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%,可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約35%至約100%、約50%至約100%、約60%至約100%、約70%至約100%、約80%至約100%以及約90%至約100%)。優(yōu)選地，所述至少一種生物活性組分為蛋白并且通過ELISA、流式細胞計、HPLC或BiaCore來測定所保持的活性。優(yōu)選地，所述至少一種生物活性組分為脂質(zhì)并且通過流式細胞計、氣相色譜法(GC)或HPLC來測定所保持的活性。優(yōu)選通過流式細胞計或PBMC分泌細胞因子檢測法來測定所述的益生菌活性。優(yōu)選地，所述期望的活性水平是未處理的對照的活性的至少約35%、是未處理的對照的活性的至少約50%、是未處理的對照的活性的至少約60%、是未處理的對照的活性的至少約70%、是未處理的對照的活性的至少約80%、或是未處理的對照的活性的至少約卯％、95%、99%或100%。在一實施方案中，所述處理壓力選自至少約350MPa、360MPa、370MPa、380MPa、390MPa、400MPa、410MPa、420MPa、430MPa、440MPa、450MPa、460MPa、470MPa、480MPa、490MPa、500MPa、510MPa、520MPa、530MPa、540MPa、550MPa、560MPa、570MPa、580MPa、590MPa、600MPa、610MPa、620MPa、630MPa、640MPa、650MPa、660MPa、670MPa、680MPa、690MPa、700MPa、750MPa、謂MPa、850MPa、900MPa、950MPa和1000MPa或更高，可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約350MPa至約400MPa、約350MPa至約450MPa、約350MPa至約500MPa、約350MPa至約550MPa、約350MPa至約600MPa、約350MPa至約650MPa約350MPa至約700MPa、約350MPa至約750MPa、350MPa至約800MPa、約350MPa至約850MPa、約350MPa至約900MPa、約350MPa至約950MPa以及約350MPa至約MPa、約400MPa至約1000MPa、約450MPa至約1000MPa、約500MPa至約1000MPa、約550MPa至約1000MPa、約600MPa至約1000MPa、約650MPa至約1000MPa、約700MPa至約1000MPa、約750MPa至約1000MPa、約800MPa至約1000MPa、約850MPa至約1000MPa、約900MPa至約1000MPa、約950MPa至約1000MPa、約500MPa至約550MPa、約500MPa至約600MPa、約500MPa至約650MPa、約500MPa至約700MPa、約500MPa至約750MPa、約500MPa至約800MPa、約550MPa至約800MPa、約600MPa至約800MPa、約650MPa至約800MPa、約700MPa至約800MPa、約750MPa至約800MPa、約400MPa至約800MPa、約400MPa至約750MPa、約400MPa至約700MPa、約400MPa至約650MPa、約400MPa至約600MPa、約450MPa至約800MPa、約450MPa至約750MPa、約450MPa至約700MPa、約450MPa至約650MPa、約450MPa至約600MPa、約500MPa至約800MPa、約500MPa至約750MPa、約500MPa至約700MPa、約500MPa至約650MPa、約500MPa至約600MPa、約525MPa至約675MPa、約550MPa至約650MPa和約575MPa至約625MPa)。所述處理壓力優(yōu)選為至少約350MPa、400MPa、450MPa、500MPa或600MPa。在可供選擇的實施方案中，其中所述組合物優(yōu)選包含益生生物體，所述處理壓力選自至少約500MPa、510MPa、520MPa、530MPa、540MPa、550MPa、560MPa、570MPa、580MPa、5卯MPa、600MPa、610MPa、620MPa、630MPa、640MPa、650MPa、660MPa、670MPa、680MPa、690MPa和700MPa，可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約500MPa至約550MPa、約500MPa至約600MPa、約500MPa至約650MPa、約500MPa至約700MPa、約550MPa至約700MPa、約600MPa至約700MPa、約650MPa至約700MPa和約550MPa至約650MPa)。所述處理壓力優(yōu)選為至少約550MPa、600MPa或650MPa。在一實施方案中，當對所述組合物進行壓力處理時，其pH小于約5.0，優(yōu)選小于約4.6、更優(yōu)選為約3.0至約4.6，最優(yōu)選為約3.5至約4.1。在另一實施方案中，當對所述組合物進行壓力處理時，其pH至少為約3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3,9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0或更大,以及可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約pH3.0至約pH4.5、約pH3.0至約pH5.0、約pH3.0至約pH5.5、約pH3.0至約pH6.0、約pH3.0至約pH6.5、約pH3.0至約pH7.0、約pH3.0至約pH7.5、約pH3.0至約pH8.0、約pH3.1至約pH4.9、約pH3.2至約pH4.8、約pH3.3至約pH4.7、約pH3.4至約pH4.6、約pH3.5至約pH4.5、約pH3.6至約pH4.4、約pH3.7至約pH4.3、約pH3.8至約pH4.2和約pH3.9至約pH4.1)?；蛘?，在另一實施方案中，在壓力處理前將所述組合物的pH調(diào)節(jié)到上述所列出的pH或pH范圍中。在一實施方案中，所述方法在環(huán)境溫度下進行。所述壓力處理優(yōu)選在至少約0。C、4。C、5。C、10°C、15。C、20。C、25。C、30。C、35。C、40°C、45。C、50°C、55。C或60。C的溫度下進4亍，以及可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約5。C至約40。C)。在一實施方案中，所述溫度為約0。C至約40。C。在另一實施方案中，所述溫度為約4°C至約25°C。在一實施方案中，可使所述處理壓力持續(xù)約1秒至約30分鐘的處理時間。所述處理時間優(yōu)選地選自約1秒、5秒、10秒、20秒、30秒、60秒、90秒、120秒、150秒、180秒、210秒、240秒、270秒或300秒或約0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、IO分鐘、15分鐘、20分鐘、25分鐘、30分鐘、35分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、55分鐘或60分鐘，以及可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約1分鐘至約IO分鐘、約1分鐘至約5分鐘或約2分鐘至約4分鐘)。在另一實施方案中，在處理時間內(nèi)使處理壓力基本上保持為常數(shù)。在另一實施方案中，在處理時間內(nèi)將壓力從環(huán)境壓力(通常為大氣壓力)升高至處理壓力，然后再回到環(huán)境壓力。環(huán)境壓力通常為大氣壓力。應(yīng)當理解，在一實施方案中，上文列出的一段處理時間是將壓力從大氣壓力升高到處理壓力然后再返回大氣壓力所用的時間。從而，在一實施方案中，1分鐘的處理時間是指在1分鐘內(nèi)將壓力從大氣壓力升高到處理壓力，然后再返回大氣壓力。應(yīng)當理解，在另一實施方案中，上文列出的一)更處理時間是將壓力維持在所述處理壓力下的時間("停留時間")。>火而，在一實施方案中，1分鐘的處理時間是指將壓力維持在所述處理壓力l分鐘。因此，在本實施方案中，o分鐘處理時間(或"不停留，，)是指將壓力升高至所述處理壓力但是不停留，然后壓力再返回至大氣壓力。在本實施方案中，優(yōu)選的處理時間包括O分鐘(不停留)、0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘、5分鐘、5.5分鐘、6分鐘、6.5分鐘、7分鐘、7.5分鐘、8分鐘、8.5分鐘、9分鐘、9.5分鐘和IO分鐘。優(yōu)選地，使所述壓力維持約0分鐘、0.5分鐘、1分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘或5分鐘，或者使所述壓力維持約0分鐘、0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘或3分鐘，或者約0分鐘。在一可供選擇的實施方案中，總處理時間小于約0.5分鐘、1分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘、5分鐘、5.5分鐘、6分鐘、6.5分鐘、7分鐘、7.5分鐘、8分鐘、8.5分鐘、9分鐘、9.5分鐘和10分鐘。也就是說，將壓力從環(huán)境壓力(通常為大氣壓力)升高然后再返回環(huán)境壓力所用的時間小于約0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘、5分鐘、5.5分鐘、6分鐘、6.5分鐘、7分鐘、7.5分鐘、8分鐘、8.5分鐘、9分鐘、9.5分鐘和10分鐘。所述時間優(yōu)選小于約8分鐘、優(yōu)選小于約7分鐘、優(yōu)選小于約6分鐘或優(yōu)選小于約5分鐘。在另一實施方案中，所述組合物可以進行附加的壓力處理。處理壓力可以/人一處理壓力變?yōu)榱硪惶幚韷毫?，而無需首先返回至大氣壓力。每一壓力處理可在單獨的處理時間內(nèi)進fl"。>夂人而，在一實施方案中，將壓力從環(huán)境壓力升高至第一處理壓力維持第一處理時間，然后將所述壓力轉(zhuǎn)變?yōu)榈诙幚韷毫S持第二處理時間。優(yōu)選地，第一處理時間比第二處理時間長。優(yōu)選地，第一處理時間比第二處理時間短。在另一實施方案中，在所述處理時間內(nèi)將壓力升高至第一處理壓力，然后再轉(zhuǎn)變?yōu)榈诙幚韷毫?。在一實施方案中，^吏所述組合物在并入產(chǎn)品前處于處理壓力下。在另一實施方案中，使所述組合物在并入產(chǎn)品后處于處理壓力下。/人而，所述方法還包括使組合物在并入產(chǎn)品前或后處于處理壓力下。在另一實施方案中，使所述組合物在包裝前處于處理壓力下。在另一實施方案中，使所述組合物在包裝后處于處理壓力下。從而，所述方法還包括在包裝前或后使組合物處于處理壓力下。在一實施方案中，所述組合物還包含穩(wěn)定劑。優(yōu)選的穩(wěn)定劑選自下列樹膠槐豆膠、瓜爾膠、黃原膠、肉桂膠、魔芋粉(konjacflour)、/3葡聚糖、他拉膠、阿拉伯樹膠(gumArabic)、結(jié)冷膠、羧曱基纖維素、曱基纖維素、羥丙基曱基纖維素、黃蓍膠、刺梧桐膠、阿拉伯樹膠(gumacacia)、殼聚糖、arabinoglactins、藻酸鹽、果膠、角叉菜膠、或歐車前或其混合物。穩(wěn)定劑優(yōu)選為果膠或羧曱基纖維素(CMC)或其混合物。在另一實施方案中，所述組合物還包含疏水配體。所述疏水配體優(yōu)選地選自十六酸、肉豆蔻酸、亞麻油酸、共軛亞油酸(CLA)、一種或多種磷酯、一種或多種縮醛磷脂酰膽堿、一種或多種鞘磷脂、一種或多種神經(jīng)節(jié)苷酯、丁酸、一種或多種w-3脂肪酸(包括但不限于二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA))、一種或多種植物甾醇、一種或多種植物甾醇酯、一種或多種植物甾醇乙酸酯、一種或多種w-6脂肪酸(包括但不限于魚油)、脂溶性疏水維生素(包括維生素A[視黃醇]和維生素D)、番茄紅素、或十二烷基硫酸鈉或其混合物。在本實施方案中，所述組合物的pH優(yōu)選為約5.0至8.0。在另一實施方案中，所述組合物還包含至少一種附加的生物活性蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、蛋白水解物、脂質(zhì)水解物或碳水化合物或其混合物。該組合物包括但不限于如上所述的乳品蛋白組合物或乳品成分。在另一實施方案中，所述組合物還包含至少一種附加的生物活性組分，該組分選自乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種免疫球蛋白(包括一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、或一種或多種對不同表位特異的IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)、糖巨肽、生長因子(包括乳衍生的生長因子、包括TGF/1和TGF/32)、包含至少約1%w/w免疫球蛋白的組合物、通過為提高抗體水平而對動物進行接種所制得的產(chǎn)品(超免疫乳或超免疫初乳)、免疫乳或一種或多種益生因子或其混合物。在另一實施方案中，所述組合物還包含至少一種附加的生物活性組分，該組分選自一種或多種非極性脂質(zhì)或一種或多種諸如一種或多種磷脂、一種或多種鞘脂、一種或多種神經(jīng)節(jié)芬脂或一種或多種神經(jīng)酰胺的極性脂質(zhì)或其混合物。在另一實施方案中，所述組合物還包含至少約1%w/w的免疫球蛋白，其中所述免疫球蛋白包含一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG或IgM或其混合物、一種或多種對不同表位特異的IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。在一實施方案中，所述組合物或產(chǎn)品為食品。所述食品優(yōu)選為酸化飲料或碳酸飲料。所述食品優(yōu)選為包括凝固型(set)、攪拌型、調(diào)味型、水果型以及益生菌型(probiotic)酸乳酪在內(nèi)的酸乳酪，法國白芝士(fromagefrais),新鮮優(yōu)格芝士(petitSuisse),4l制脫脂酸奶干酪(quarg)，發(fā)酵食品或飲料，酸化飲料或乳制品。所述食品優(yōu)選為果凍。在一實施方案中，處理壓力為約400MPa、500MPa、600MPa或700MPa,處理時間為1分鐘、2分鐘、3分鐘或不停留。在另一實施方案中，處理壓力為約350MPa至約500MPa,處理時間為約0分鐘至約5分鐘。所述組合物或產(chǎn)品優(yōu)選為酸乳酪。在另一實施方案中，處理壓力為約400MPa至約700MPa，處理時間為約O分鐘至約5分鐘。所述組合物或產(chǎn)品優(yōu)選為發(fā)酵飲料。在另一實施方案中，處理壓力為約400MPa至約700MPa，處理時間為約0分鐘至約10分鐘。所述組合物或產(chǎn)品優(yōu)選為酸性飲料、液體濃縮物(包括凝膠)或酸乳酪。在另一實施方案中，處理壓力為約350MPa至約800MPa，處理時間為約0分鐘至約10分鐘，所述組合物或產(chǎn)品的pH為約pH3.0至約pH7.0。在一實施方案中，所述生物活性組分是免疫球蛋白或乳鐵蛋白；所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.0值約pH5.0，優(yōu)選為約pH3.8至約pH4.5,優(yōu)選為約pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa,優(yōu)選為600MPa;以及所述處理時間選自1分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。在另一實施方案中，所述生物活性組分是乳鐵蛋白；所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.5至pH4.5,優(yōu)選為pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa，優(yōu)選600MPa;以及所述處理時間選自l分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳MPC或初乳WPC;所述生物活性組分是免疫球蛋白，優(yōu)選為IgG;所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.5至pH7.0，優(yōu)選為pH3.5至pH5.0,優(yōu)選為pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa,優(yōu)選為600MPa;以及所述處理時間選自l分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。'在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳MPC或初乳WPC;所述生物活性組分是乳鐵蛋白；所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.5至pH7.0，優(yōu)選為pH3.5至pH5.0，優(yōu)選為pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa,優(yōu)選為600MPa;以及所述處理時間選自l分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。在另一實施方案中，所述生物活性組分是免疫乳或免疫乳蛋白濃縮物或免疫乳乳清蛋白濃縮物；所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.5至pH7.0,優(yōu)選為pH3.5至pH5.0，優(yōu)選為pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa，優(yōu)選為600MPa;以及所述處理時間選自l分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。在另一實施方案中，所述生物活性組分是免疫乳或免疫乳蛋白濃縮物或免疫乳乳清蛋白濃縮物；所述生物活性組分是免疫球蛋白，優(yōu)選為IgG;所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.5至pH4.5,優(yōu)選為pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa，優(yōu)選為600MPa;以及所述處理時間選自l分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。在另一實施方案中，所述生物活性組分是免疫乳或免疫乳蛋白濃縮物或免疫乳乳清蛋白濃縮物；所述生物活性組分是乳鐵蛋白；所述產(chǎn)品或組合物的pH為約pH3.5至pH4.5，優(yōu)選為pH4.1;所述處理壓力為約550MPa至650MPa，優(yōu)選為600MPa;以及所述處理時間選自l分鐘、2分鐘或3分鐘或不停留。在另一實施方案中，所述生物活性組分是一種或多種IgG,所述處理壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0,以及所述停留時間為約0分鐘或1分鐘、2分鐘或3分鐘。在一實施方案中，所述生物活性組合物是生物活性乳品蛋白組合物，所述生物活性組分是IgG或乳鐵蛋白，所述壓力為約350MPa至650MPa，優(yōu)選為350MPa至550MPa,所述pH為約3.2至4.5,以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳MPC，所述生物活性組分是IgG,所述壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.2至4.5,以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳MPC，所述生物活性組分是IgG，所述壓力為約550MPa至650MPa,所述pH為約3.8，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳MPC，所述生物活性組分是IgG，所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.2至7.0，以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳脫脂奶粉，所述生物活性組分是IgG，所述壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.2至5.5,以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳脫脂奶粉，所述生物活性組分是IgG,所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.2至5.5,以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳乳清，所述生物活性組分是IgG，所述壓力為約350MPa至650MPa,所述pH為約3.2至5.5，以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳乳清，所述生物活性組分是IgG，所述壓力為約550MPa至650MPa,所述pH為約3.2至5.5,以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是初乳乳清超濾滲余物，所述生物活性組分是IgG,所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.2至5.5,以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是超免疫乳、超免疫乳蛋白濃縮物或超免疫乳清蛋白濃縮物、超免疫初乳、超免疫初乳乳蛋白濃縮物或超免疫初乳乳清蛋白濃縮物，所述生物活性組分是IgA、IgG、IgM或乳鐵蛋白，所述壓力為約550MPa至650MPa,所述pH為約3.2至5.5，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組分是乳鐵蛋白，所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.0至7.5，以及所述4f留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組分是TGF-/31或TGF-(S2，所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.0至8.0,以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是酸乳酪，所述生物活性組分是乳鐵蛋白，所述壓力為約450MPa至650MPa，所述pH為約3.5至5.0，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是飲料，所述生物活性組分是IgG，所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分4中。在另一實施方案中，所述生物活性組合物是果凍，所述生物活性組分是乳鐵蛋白，所述壓力為約550MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0，以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。本發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的方法處理的或生產(chǎn)的組合物。本發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的方法處理的或生產(chǎn)的益生組合物。本發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的方法處理的或生產(chǎn)的組合物在諸如食品、飲料、食品添加劑、飲料添加劑、膳食補充劑、營養(yǎng)品、醫(yī)療食品(medicalfood)、營養(yǎng)藥品(nutraceutical)、藥劑或藥物等的可食用產(chǎn)品制造中的用途。本發(fā)明的另一方面涉及包含一種或多種益生微生物的紅L合物或基本上由一種或多種益生微生物組成，并且根據(jù)本發(fā)明的方法處理的組合物，該益生微生物選自一種或多種嗜酸乳桿菌菌抹("c/oZ)fl"7/"s"^^>/>》//"力、一種或多種德氏乳才干菌寸呆力口利亞種菌才朱(丄aCo6a"7/i^scfe/6n/ecA:"si/Zw/.5w/ga〃'ci^)、一種或多種干酪乳桿菌菌才朱(丄aco6acz.〃1/51case/)、一種或多種巻曲乳桿菌菌#朱(丄(2"oZacz7/^c〃'印a^s)、一種或多種約氏乳牙干菌菌4朱(X""o6(2"-〃"^乂o力似ow/z〕、一種或多種植物乳桿菌菌抹(丄a"oZ^c"/w戶/朋&n/m)、一種或多種羅伊氏乳桿菌菌株(丄a"c^fl"7/Mrew&n')、一種或多種鼠李糖乳桿菌菌才朱(丄a"o6acz7/w51/^amwosi^)、一種或多種唾液乳桿菌菌才朱(Za"o6acZ〃"s■sfl//van'i)、一種或多種兩^支雙》支桿菌菌才朱(5zydz'o6a"en'MW6^dimz)、一種或多種短雙歧桿菌菌抹C8zy^oZ^c^7'wm6wve)、一種或多種嬰兒雙岐桿菌菌抹C8zy^o6a"en'wmz'"/a""s)、一種或多種動物雙歧桿菌丄flc"s亞種菌才朱(5(/^^'oZ)(3Cen'M附aw/ma/z\s丄ac"s)、一種或多種長雙岐桿菌菌林(5zy^oZ)a"en'wm/owgwm)、一種或多種嗜熱鏈球菌菌才朱(S&e/^ococcws"enwo//n7iw)或其〉'毘合4勿。在本發(fā)明的另一方面涉及包含一種或多種益生微生物的組合物或基本上由一種或多種益生微生物組成，并且根據(jù)本發(fā)明的方法處理的組合物，該益生微生物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄^ote"/i/;s由附"o愿HN001)、動物雙歧桿菌亞種HN019(5(/^/z'oZ)a"en'wwam.附a//51swZw/.HN019)、p耆酸孝L斥干菌HN017(丄G"由c"/wsaczW—toHN017)或鼠李糖乳桿菌HN067(丄actoZ)flc/〃M51r/纖"osMsHN067)或其混合物。本發(fā)明的另一方面涉及包含乳鐵蛋白、溶霉菌、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種生長因子、TGF/51、或TGFP2或其混合物，或基本上由乳鐵蛋白、溶霉菌、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種生長因子、TGF/31、或TGF]S2或其混合物組成，并且才艮據(jù)本發(fā)明的方法處理的組合物。本發(fā)明的另一方面涉及包含乳鐵蛋白、一種或多種IgA、一種或多種IgG、一種或多種IgM、TGF/1、或TGFj82或其混合物，或基本上由乳鐵蛋白、一種或多種IgA、一種或多種IgG、一種或多種IgM、TGF|81、或TGF/52或其混合物組成，并且根據(jù)本發(fā)明的方法來處理的組合物。本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的組合物在食品、飲料、食品添加劑、飲料添加劑、膳食補充劑、營養(yǎng)品、醫(yī)療食品、營養(yǎng)藥品、藥劑或藥物的制造中的用途，所述用途優(yōu)選對有需要的個體進行處理，優(yōu)選對有需要的個體的免疫系統(tǒng)進行激發(fā)。從而，本發(fā)明的另一方面涉及激發(fā)有需要的個體的免疫系統(tǒng)的方法，包括將本發(fā)明的組合物進行給藥。本發(fā)明的其它方面涉及包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理的組合物、包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的組合物、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的組合物、包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的纟斂生物的壓力處理后的組合物、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的孩i生物的壓力處理后的果凍、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的酸乳酪、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的飲料、包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳《失蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的果凍、包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的酸乳酪、包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳4失蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的飲料、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的果凍、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的酸乳酪、包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的々欠料、包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的果凍、包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的酸乳酪、包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的々大料。這類組合物的pH和對其進行處理的壓力可選自上文所描述的范圍。本發(fā)明的其它方面涉及包含一種或多種不能存活的益生孩i生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的組合物；包含一種或多種不能存活的益生微生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的組合物，該益生孩史生物培養(yǎng)物選自一種或多種嗜酸乳桿菌菌抹(丄a"oZ)ac/〃wacWo;/n7""、一種或多種德氏.享L^干菌4呆力口利亞種菌才朱(丄a"o6acz7/1^de/6n/ecA:"swfe/.5w/gan.ow)、一種或多種干酪乳桿菌菌4朱(丄a"oZjacz7/1^cwd)、一種或多種巻曲乳^干菌菌才朱(Za"o6a"7/wcn、/W^)、一種或多種約氏乳桿菌菌才朱(丄(3"oZfl"7/w51y。/mso"")、一種或多種植物乳桿菌菌抹(丄G"oft"c"/wsp/"w^zn^m)、一種或多種羅^f尹氏乳桿菌菌才朱(丄a"o6ac〃/w51reWe〃〕、一種或多種鼠李糖乳桿菌菌株(丄a"o6ac"/twAamwosM"、一種或多種唾液乳桿菌菌4朱(丄a"o6a"7/wssa/z'van'i^)、一種或多種兩歧雙歧桿菌菌才朱(5!y^/o6a"en'i/m6(/^wm)、一種或多種短雙歧桿菌菌才朱C8zy^/o6a"en'wm6wve)、一種或多種嬰兒雙岐桿菌菌才朱(5(/Mo6a"en'wm/"/aw"》、一種或多種動物雙歧桿菌Zac^s亞種菌才朱(5(/cf/o6a"en'i/附am'mafcra^;.丄acto)、一種或多種長雙岐桿菌菌才朱(5zy^/oZa"en'wwz/owgwm)、或一種或多種嗜熱鏈J求菌菌才朱(5^印/ococci^A^7wo//n7w"或其混合物；包含一種或多種不能存活的益生微生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的樣i生物的壓力處理后的組合物，該益生-微生物培養(yǎng)物選自鼠李糖乳桿菌HN001(￡a"oZ)ac/〃MW^mwosT^HNOOl)、動物雙歧桿菌丄ac"s亞種HN019(5zy&o6ac化nM附amma/&/ac"'sHN019)、嗜酸乳桿菌HN017(丄a"o6ac〃/wsaczV/op/^/wsHN017)、或鼠李糖乳桿菌HN067(丄a"o6ad〃^Aam"aywHN067)或其混合物；以及包含不能存活的鼠李糖乳桿菌HN001(^z"o^。7/wW^mwoswHN001)的培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理后的組合物。這類組合物的pH和對其進行處理的壓力可選自上文所描述的范圍。若有的話，本文將上文和下文中所引用的所有申請、專利和出版物的全部公開內(nèi)容引入作為參考。本發(fā)明所公開的供參考的數(shù)字范圍(例如，1至10)還旨在將本范圍內(nèi)供參考的全部有理數(shù)(例如，1、1.1、2、3、3.9、4、5、6、6.5、7、8、9和10)與本范圍內(nèi)任意有理數(shù)范圍(例如，2至8、1.5至5.5以及3.1至4.7)合并在一起，并且因此本發(fā)明所清楚公開的所有范圍的子范圍是清楚公開的。僅列舉具有特定意圖的實例，并且認為所列舉的最低值和最高值之間全部可能的數(shù)值聯(lián)合是以相似方式在本申請中清楚聲明的。附圖的簡要描述圖1比較了83.5。C熱處理保持3分鐘后保留在酸化乳品々大料(pH3.5時含3.6%蛋白質(zhì))中的免疫球蛋白片斷(如用HPLC所測定的)與600MPa壓力處理保持3分鐘后保留在酸化乳品飲料中的免疫球蛋白片斷。圖2的四幅圖顯示了不同pH下，熱處理(85。C/10分4中)和壓力處理(600MPa/3分鐘停留時間)對(A)6%w/v初乳乳清組合物、(B)6%w/v初乳乳清超濾滲余物組合物(10kDa超濾)、(C)6%w/v初乳脫脂奶粉組合物以及(D)6%w/v初乳MPC組合物的不同IgG組分的效果。圖3的兩幅圖顯示了(A)7%w/vHI-MPC組合物和(B)7%w/vHI-WPC組合物樣品在壓力處理(600MPa/不停留和600MPa/3分鐘停留時間)和熱處理(85。C/10分鐘)后剩余的IgA、IgG、IgM和乳纟失蛋白(LF)水平(Q/。)。結(jié)果表達為未處理的對照樣品的IgA、IgG、IgM和乳鐵蛋白水平的百分比。圖4的兩幅圖顯示了7%w/vWPC組合物樣品在未處理、壓力處理(600MPa/3分鐘)和熱處理(75。C/5分鐘)后剩余的IgG和乳鐵蛋白(LF)水平。圖5顯示了對6。/ow/v乳鐵蛋白溶液樣品進^f亍如下壓力處理后剩余的LF水平(l)對照、(2)600MPa/5分鐘、(3)600MPa/15分鐘、(4)600MPa/30分鐘、(5)600MPa/45分鐘、(6)75。C/5分鐘、(7)85°C/5分鐘和(8)90°C/5分鐘。圖6顯示了在不同pH下，對6%w/v乳鐵蛋白溶液才羊品進行如下所示的壓力處理或熱處理后剩余的LF水平(％):600MPa/5分鐘、600MPa/15分鐘、600MPa/30分鐘、600MPa/45分鐘或85°C/5分鐘。結(jié)果表達為未處理的對照樣品的乳鐵蛋白水平的百分比。圖7的兩幅圖顯示了7%w/vHI-WPC溶液樣品在熱處理或壓力處理后剩余的生長因子(TGFjSl和TGFjS2)的水平。圖8的流程圖概述了對照LF酸乳酪、熱處理的LF酸乳酪和HPP處理的LF酸乳酪的制造過程。圖9顯示了對照LF酸乳酪、熱處理的LF酸乳酪和HPP處理的LF酸乳酪中剩余的LF水平。圖10的流程圖扭克述了標準(熱處理)酸性々大料、未處理的(對照)酸性飲料和HPP處理的酸性飲料的制造過程。圖11顯示了對照酸性々欠料、熱處理的酸性々欠料和HPP處理的酸性飲料中剩余的IgG水平。圖12的流程圖概述了對照(未處理)LF果凍和HPP處理的LF果凍的制造過程。圖13顯示了對照LF果凍和HPP處理的LF果凍中剩余的LF水平。圖14是顯示人體外PBMC響應(yīng)鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"o6acz7/wsAam"oswsHN001)(HN001)處理產(chǎn)生IFN-7的箱線圖，其中每一箱表示中位數(shù)(水平線)的上四分位間距和下四分位間距，垂直線表示總范圍以及星號表示離散數(shù)據(jù)，圖14顯示了無HN001(僅培養(yǎng)基)培養(yǎng)的PBMC、用存活的HNOOl(HNOOl活)培養(yǎng)的PBMC、用熱滅活的HNOOl(HNOOl熱)培養(yǎng)的PBMC或用UHP滅活的HNOOl(HNOOlUHP)培養(yǎng)的PBMC響應(yīng)鼠李糖乳桿菌HNOOl(丄a"o^c/〃i/;yr/m附"os^HNOO1)處理產(chǎn)生的結(jié)果。圖15是顯示了人體外PBMC響應(yīng)HNOOl處理產(chǎn)生IL-10的箱線圖。圖16的箱線圖比較了人體外PBMC對在pH7.4的PBS緩沖液(UHP-pH7.4)中或在pH5.0的乙酸鹽緩沖液(UHP—pH5.0)中經(jīng)UHP(600MPa/3分鐘)滅活的HNOOl的響應(yīng)而產(chǎn)生IL-10和其對活HNOOl(活)或熱滅活HNOOl(熱)的響應(yīng)而產(chǎn)生IL-10的對比。圖17是10張熱處理(90。C/l分鐘至4分鐘-上排)的或壓力處理(600MPa/1分鐘至4分鐘-下排)的補加疏水配體的7%w/vWPC樣品的PAGE凝膠的照片。在每一凝膠中，每一道對應(yīng)的處理時間如下所示道l:未處理的對照；道2:1分鐘；道3:2分鐘；道4:3分鐘；以及道5:4分鐘。將高分子量聚集體標記為"(i)"、將IgG標記為"(ii)"和將乳鐵蛋白標記為"(iii)"。發(fā)明的簡要描述1.定義關(guān)于生物活性組分的"活性"是指生物活性組分在攝取時具有生理活性，當通過任何方法(優(yōu)選口服)對動物，特別是包括人類在內(nèi)的哺乳動物進行給藥時，該活性能夠具有積極的健康效益。對不同生物活性組分活性的評定如下所示。關(guān)于保留活性(retainingactivity)是指壓力處理的生物活性組分所保留的活性是未處理的對照的活性的至少約35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%,可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約35%至約100%、約50%至約100%、約60%至約100%、約70%至約100%、約80%至約100%以及約90%至約100%)。在某些實例中，蛋白質(zhì)活性與正確的蛋白質(zhì)折疊相關(guān)。研究顯示，UHT(超熱處理的)乳中的天然LF和鐵負載的LF的變性影響了其與不同種類細菌結(jié)合的能力并且降低了其相互作用的能力(Paulsson等人，1993)。因此，可使用分析技術(shù)來測定活性，該分析技術(shù)給出所關(guān)注的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)完整性的信號。諸如放射免疫擴散法(RID)、表面等離子共振法(SPR)和親合性HPLC-MC等的免疫測定要求IgG在進行測量前保持完整。在酶聯(lián)免疫吸收劑分析(ELISA)中，正確折疊的IgG或LF被抗體所束縛，并且能夠使用酶聯(lián)比色劑(enzyme-linkedcolorimetricagent)對其進4亍檢測和顯象。Li等人，2003中也提供了熱處理的超免疫乳產(chǎn)品的生物活性丟失的信息。因此，某些實施方案中，通過在壓力處理前或后測定蛋白質(zhì)正確折疊的量來提供保留活性的評定。生物活性組分優(yōu)選為蛋白質(zhì)，并且優(yōu)選通過如下所述的ELISA、流式細胞計、HPLC或BiaCore來評定保留活性。脂質(zhì)的生物活性與完整脂質(zhì)或脂肪酸分子相關(guān)。對脂質(zhì)組合物進行干餾(于120。C熱處理15分鐘)使所述組合物產(chǎn)生過量褐變(色變)，這是由于磷脂降解造成的。例如，將100gNZMP磷脂(PC500)樣品和200g的無水乳脂肪樣品在600MPa下壓力處理0分鐘、3分鐘或15分鐘，或者將所述樣品在120。C下干餾20分鐘。干餾后，磷脂樣品變?yōu)樯詈稚?未顯示數(shù)據(jù))。相反，壓力處理的樣品保持不變(未顯示數(shù)據(jù))。生物活性組分優(yōu)選為脂質(zhì)，并且優(yōu)選通過氣相色譜法(GC)或HPLC來測定保留活性。可通過4吏用如下所述的ELISA、流式細胞計、HPLC或解物的保留的生物活性。在一實施方案中，所述活性是益生活性。益生活性如下所述。所述生物活性組分優(yōu)選為益生菌，并且優(yōu)選通過PBMC分泌細月包因子檢測法來測定益生活性。本說明書和權(quán)利要求中所用術(shù)語"包含"指"至少部分由......組成"。當解釋本說明書和權(quán)利要求中包含該術(shù)語的敘述時，在每一敘述中以該術(shù)語起始的特征都必須存在，但是其它特征也可以存在。諸如"包含(comprise)"和"包含(comprised)"的相關(guān)術(shù)語以相同方式來解釋。本發(fā)明所使用的術(shù)語"生物活性組合物"或"生物活性產(chǎn)品"或"生物活性成分，，是指因存在生物活性組分而具有生物活性的組合物或產(chǎn)品或成分，其包括食品和食物成分。雖然優(yōu)選的實施方案集中在食品和食物成分上，尤其集中在乳制品和乳品成分上，但是應(yīng)成分，包括非食物的藥品，例如口服給藥或腸胃外給藥的藥品。還應(yīng)理解，在某些實施方案中，所述生物活性產(chǎn)品為并入到其它產(chǎn)品中的成分?？捎玫氖称坊蚴澄锍煞职ㄈ魏慰墒秤卯a(chǎn)品或成分，其包括々大料(包括酸化飲料、碳酸飲料、消耗液體和凝膠)、營養(yǎng)藥品和用于這些產(chǎn)品的成分。應(yīng)當理解，在某些實施方案中，所述食品為并入到其它產(chǎn)品中的成分。所述生物活性組合物還可以是藥物組合物。所述組合物可以是液體，其包括固體在液體中形成的混懸液(包括糊或漿)。這類組合物的實例包括濃縮物(包括凝膠)、飲料(包括酸化飲料和碳酸飲料)、果凍或酸乳酪。生物活性組合物的實例包括乳品蛋白組合物和諸如以上所描述的那些乳品成分。本發(fā)明所使用的術(shù)語"生物活性組分"是指在攝取時具有生理活性的一種或多種蛋白質(zhì)(包括天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì)或其變體，例如重組蛋白質(zhì)、合成蛋白質(zhì)以及修飾蛋白質(zhì))、一種或多種脂質(zhì)(包括修飾脂質(zhì))、一種或多種蛋白水解物、一種或多種脂質(zhì)水解物、一種或多種碳水化合物(包括修飾的碳水化合物)或其混合物，當通過任何方法(優(yōu)選口服)對動物，特別是包括人類在內(nèi)的哺乳動物進行給藥時，該生物活性組分能夠具有積極的健康效益。Sambrook等人，(1989)描述了重組蛋白的制備。生物活性蛋白的實例包括但不限于乳鐵蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白(包括IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)、糖巨肽以及生長因子(包括乳^f汙生的生長因子，包括TGF/31和TGF/32)。生物活性蛋白水解物的實例包括但不限于酪蛋白水解物，乳清蛋白水解物。該乳清蛋白水解物包括水解乳清，水解乳清蛋白濃縮物(WPC)，水解乳清蛋白分離物(WPI)或獨立水解的乳清蛋白，例如a乳清蛋白、卩乳清蛋白、際蛋白胨、免疫球蛋白(包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)、糖巨肽、生長因子(例如TGF(81和TGF/32)、牛血清清蛋白、乳鐵蛋白和乳過氧化物酶。其它實例包括如WO99/65326和WO02/19837中所描述的那些水解物、乂人乳清水解物中分離的ACE肽(如WO02/19837中所描述的那些水解物)。蛋白水解物可按以下所描述的來制備。生物活性脂質(zhì)的實例包括但不限于非極性脂質(zhì)和諸如磷脂、鞘脂、神經(jīng)節(jié)香脂和神經(jīng)酰胺等的極性脂質(zhì)。含有至少一種生物活性蛋白、脂質(zhì)、蛋白水解物、脂質(zhì)水解物、或碳水化合物或其混合物的生物活性組合物的實例包括如以上所描述的乳品蛋白組合物和乳品成分。生物活性組合物的實例還包括但不限于包含至少約1%w/w免疫球蛋白的組合物，其中所述免疫球蛋白包含一種或多種IgA、IgD、IgE、IgG和IgM;通過為提高抗體水平而對動物進行接種所制得的產(chǎn)品；以及免疫乳。術(shù)語"停留時間"是指優(yōu)選的實施方案，其中處理時間為將壓力維持在處理壓力的時間。例如，1分鐘的停留時間是指所述壓力在處理壓力下維持1分鐘。0分鐘的停留時間(或"不停留")是指將所述壓力升高至處理壓力但不停留，然后再返回至環(huán)境壓力(通常為大氣壓)。在本實施方案中，優(yōu)選的處理時間包括0分鐘(不停留)、0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘、5分鐘、5.5分鐘、6分鐘、6.5分鐘、7分鐘、7.5分鐘、8分鐘、8.5分鐘、9分鐘、9.5分鐘和10分鐘。應(yīng)當理解，雖然不特意使所述壓力維持在處理壓力，但是由于所使用設(shè)備的性質(zhì)，可以有非常短的停留期(可能若干毫秒)。這種非常短的停留期不太可能對所述方法的實施具有實質(zhì)上的影響。本發(fā)明所使用的術(shù)語"保存性"是指隨著時間的流逝，組合物抑制不想要的微生物生長的能力。未熱處理的組合物或者非如本發(fā)明所提供的供選擇的可接受方法處理的組合物不太可能具有商業(yè)上可接受的保存性。關(guān)于維持保存性是指本發(fā)明的方法在延長壓力處理組合物的保存期上與熱處理對照至少同樣有效。關(guān)于提高(increasing)或提高(increased)、或改善(improving)或改善(improved)保存性是指與未處理組合物相比，所述組合物抑制不想要的微生物隨著時間的流逝而生長的能力有所提高。提高的保存性優(yōu)選地導(dǎo)致諸如延長的保存期和提高的耐溫度變化能力等性質(zhì)。溫度變化(例如從冷藏庫中取出)能夠誘導(dǎo)任何殘存的細菌的生長。優(yōu)選地，根據(jù)需氧菌平板計數(shù)(APC)來測定保存性。APC是用于估計樣品中細菌密度的細菌計數(shù)方法，其還被稱為總平板計數(shù)(TotalPlateCount)、標準平板計數(shù)(StandardPlateCount)或總活菌凄丈(TotalViableCount)。將樣品采集、混合、稀釋、并接種在適于檢測待研究細菌(例如，食品或乳品污染物，例如大腸桿菌(Esc/^n'c/n'aco//)、金黃色葡萄球菌(iS鄉(xiāng)^y/ococcMawrew51)、沙門氏菌、志賀菌(幼/geZ/ae)、大腸菌、酵母菌和霉菌、嗜溫性孢子、嗜熱性孢子)的瓊脂培養(yǎng)基中。APC的結(jié)果是在32。C下接種并孵育72小時后1毫升樣品中產(chǎn)生的集落生成單位數(shù)(cfu/ml)。對于不含有某些可存活的培養(yǎng)物的新鮮乳制品高度優(yōu)選50,000cfu/ml或更小的APC。具有50,000cfu/ml或更高的APC的產(chǎn)品不太可能具有可接受的保存性，除非存在的生物體是特別適合于所述產(chǎn)品的生物體之一-后一類型的產(chǎn)品實例包括酸乳酪或發(fā)酵產(chǎn)品，其中可存活培養(yǎng)物是合乎需要的。因此，在一實施方案中，優(yōu)選的方法是其中在處理后的需氧菌平板計數(shù)(APC)小于或等于約100,000、75,000、50,000、25,000、10,000、5,000、1,000、100或10集落生成單位每毫升(cfu/ml)的方法。APC優(yōu)選小于約50,000cfu/ml。術(shù)語"乳鐵蛋白"指任何非糖基化或糖基化的野生型哺乳動物的，優(yōu)選?；蛉说娜殍F蛋白氨基酸序列或其變體。術(shù)語"乳衍生的生長因子"意在包括哺乳動物的乳或初乳中，優(yōu)選牛乳或牛初乳中發(fā)現(xiàn)的任何生長因子，例如胰島素樣生長因子I(IGF-I)、胰島素樣生長因子II(IGF-II)、轉(zhuǎn)化生長因子j81(TGF-]S1)、轉(zhuǎn)化生長因子iS2(TGF-]S2)、血小板衍生的生長因子(PDGF)和肝素結(jié)合生長因子。其還包括表皮生長因子。術(shù)語"壓力處理"指超高壓力(UHP)處理。通常接受的這類處理所使用的壓力至少為lOOMPa。這也被稱為"高壓"處理、"高靜水壓"(HHP)或"高壓處理"(HPP)。"壓力處理的，，產(chǎn)品是那些經(jīng)UHP處理的產(chǎn)品；即，在至少lOOMPa，優(yōu)選在至少約350MPa、400MPa、450MPa、500MPa、600MPa、700MPa或800MPa(或在如上所述的范圍內(nèi)的其它值)的壓力下壓力處理。術(shù)語"益生活性"指某些微生物刺激免疫系統(tǒng)的能力。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知測量益生微生物活性的類型和水平的方法；參見，例如Mercenier等人，(2004);Leyer等人，(2004)或Cummings等人(2004)。優(yōu)選通過PBMC分泌細胞因子^r測法來測定益生活性。關(guān)于保持益生活性是指減毒益生微生物或被消滅的益生微生物仍具有有效的益生活性。雖然沒有清楚指明負責(zé)介導(dǎo)益生活性的細菌分子，然而可能備選的分子包括細菌DNA基序、表面蛋白、小分子有機酸以及諸如脂磷壁酸和肽聚糖的細胞壁組分。假定這些分子與寄主免疫系統(tǒng)的組分相互作用，產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)效果。優(yōu)選地，保留活性是未處理的對照的活性的至少約35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%,可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約35%至約100%、約50%至約100%、約60%至約100%、約70%至約100%、約80%至約100%以及約90%至約100%)。術(shù)語"益生因子"指負責(zé)介導(dǎo)益生活性的細菌分子，包括但不限于細菌DNA基序、表面蛋白、小分子有機酸或諸如脂磷壁酸和肽聚糖等的細胞壁組分或其混合物。如上文所指出的，雖然這些分子沒有被清楚地指明，但是如果存在益生生物體，則存在這類分子。術(shù)語"個體"指動物，優(yōu)選為哺乳動物、更優(yōu)選為哺乳伴J呂動#勿(mammaliancompanionanimal)或人。4半4呂動凈勿優(yōu)選包4舌3苗、3句和馬。術(shù)語"不想要的微生物"指壓力處理前可生長在組合物中的全部微生物。雖然這種生長是不合需要的，但是包括不能存活的微生物、減毒微生物或已死亡的微生物在內(nèi)的微生物以不生長狀態(tài)的存在可以是不影響結(jié)果的或合乎需要的。關(guān)于防止不想要的微生物的生長是指基本上減緩、延遲或消滅諸如細菌(包括益生菌)、真菌、霉菌、酵母菌和藻類等微生物的生長。微生物并不全是導(dǎo)致酸敗的原因或其不都是病原體。能夠通過視覺檢查或使用本領(lǐng)域公知的標準技術(shù)來評價不想要的微生物的生長，所述標準技術(shù)包括但不限于顯微鏡法、染色法、PCR、細胞分選法(cellsorting)等(參見Lund等人，2000)。壓力處理后，組合物的APC優(yōu)選小于或等于約100,000cfu/ml、75,000cfu/ml、50,000cfu/ml、25,000cfu/ml、10,000cfu/ml、5,000cfu/ml、1,000cfu/ml、100cfu/ml或10cfu/ml，優(yōu)選小于約50,000cfu/ml。如上所述，未熱處理的或未壓力處理的組合物不太可能具有商業(yè)上可接受的保存性。換句話說，由于沒有采取步驟來防止不想要的微生物的生長，所以未處理組合物的保存性通常是不可接受的。當采取這樣的步驟處理后，所述保存性將得到改善。小于或等于約100,000、75,000、50,000、25,000、10,000、5,000、l，OOO、100或10集落生成單位每毫升(cfu/ml)，優(yōu)選小于約50,000cfu/ml的處理后需氧菌平板計數(shù)(APC)，將減緩、延遲或消滅任何存在的生物體對保存性的影響能力。結(jié)合低pH或結(jié)合冷藏(在低于約10°C，優(yōu)選低于約4。C的溫度下貯存)或結(jié)合這兩種方法，將進一步減緩、延遲或消滅其影響保存性的能力。在使用益生微生物的實施方案中，益生微生物的生長是不想要的，但是益生微生物的存在是合乎需要的。因此，在本實施方案中關(guān)于防止不想要的微生物的生長是指基本上減緩、延遲或消滅不想要的益生微生物的生長。優(yōu)選地，壓力處理將減弱益生微生物的毒性；或更優(yōu)選地，壓力處理將殺滅益生微生物，同時保持至少期望水平的益生活性。在一實施方案中，益生^f效生物是失活益生^:生物，然而其仍保持至少期望水平的益生活性。失活益生微生物可以是不能存活的、不能存活但仍具有代謝活性的或死亡的，然而在所有的情況中，其仍保持至少期望水平的益生活性。在另一實施方案中，益生微生物在壓力處理前是失活益生微生物。本實施方案中的壓力處理防止了其它不想要的微生物的生長，同時使存在的益生因子保持益生活性。術(shù)語"變體"指天然存在(例如等位基因變體)或非天然存在(例如人工產(chǎn)生的突變體)的蛋白質(zhì)，其通過一種或多種氨基酸的增加、刪除或取代而不同于蛋白質(zhì)的主要野生型氨基酸序列。通常，當根據(jù)下述實例進行測定時，蛋白質(zhì)變體普遍具有定性的生物活性。此外，這些變體可共享的同一性為至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。術(shù)語"變體"的釋義中還包括同源物。同源物通常為來自不同物種的蛋白質(zhì)，但是基本上共享與初始蛋白質(zhì)相同的生物功能或活性。優(yōu)選的變體蛋白質(zhì)與野生型序列的同一性優(yōu)選為至少約70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%,優(yōu)選為至少約90%、95%或99%。通過使用從NCBI(ftp:〃ftp.ncbi.nih.gov/blast/)公開獲得的BLAST軟件(2.2.12版；2005年8月28日)(Tatusova等人，(1999);McGinnis等人，(2004))比較備選氨基酸序列能夠測定同一性。在不顯著改變其生物活性的情況下，對一個或若干個氨基酸進行的保守置換也很有用。技術(shù)人員知道進行表型無聲氨基酸置換的方法(參見例如Bowie等人，(l"O))。2.生物活性組合物的壓力處理本發(fā)明人指出，在一定條件下，對包含生物活性組分的生物活性組合物在達到商業(yè)上可用的保存性，同時保持生物活性組分的生物活性的條件下進行壓力處理是可能的。在實施例1中，與熱處理后喪失50%以上的活性相比較，在對生物活性產(chǎn)品(基于初乳的飲料)進行壓力處理后，生物活性組分喪失僅4%以下的生物活性。通過實例，可將^f艮據(jù)本發(fā)明處理的生物活性組合物在壓力處理的產(chǎn)品或成分中輸送；添加到不再進行后續(xù)熱處理的產(chǎn)品或成分中；或者添加到進行后續(xù)壓力處理的產(chǎn)品或成分中。本發(fā)明人還指出，進行壓力處理的益生微生物保持刺激免疫系統(tǒng)的能力。因此，壓力處理是防止益生微生物生長于該生長不合乎需要的應(yīng)用中的可用的工具。本發(fā)明人還指出，使用疏水配體能使生物活性組分在pH為約7.0，優(yōu)選pH為約5.0至8.0下進行UHP處理，同時其所保持的活性水平比該配體不存在時所獲得的活性水平高。因此，如本文所描述的，本發(fā)明涉及維持或提高生物活性組合物的保存性，同時使至少一種存在于所述組合物中的生物活性組分至少保持在期望的活性水平的方法。本發(fā)明還涉及處理益生組合物以防止益生微生物生長，同時至少維持期望水平的益生活性的方法。雖然壓力處理不限于此，但是用于本發(fā)明方法的可用的壓力處理優(yōu)選包括以下步驟(i)將待壓力處理的組合物放入壓力容器的腔室內(nèi)并密封該腔室；(ii)將腔室內(nèi)的壓力升高至預(yù)設(shè)壓力("處理壓力")；(iii)使腔室在該壓力下保持預(yù)定的時間，包括小于1分鐘("停留時間，，)；(iv)釋放腔室壓力；以及(v)取出壓力處理的組合物?？墒褂瞄g歇處理或者連續(xù)處理設(shè)備遵照這樣的方案進行。應(yīng)當理解，在處理過程中，壓力處理可導(dǎo)致組合物或產(chǎn)品或成分的溫度波動。因此，壓力處理過程中所參考的優(yōu)選溫度是指升高壓力前組合物的溫度。根據(jù)本發(fā)明預(yù)先確定所使用的處理壓力的一種方法是選擇生物活性組合物并將其置于適于控制一種或多種不想要的微生物的處理壓力下進行處理。如果需要，出于測定的目的，可使用不想要的微生物來接種所述組合物。然后按照本文所述來測定生物活性組合物的保留生物活性。根據(jù)本發(fā)明預(yù)先確定所使用的處理壓力的另一方法是選擇生物活性組合物并將其置于使至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平的處理壓力下進行處理。然后可根據(jù)本文所述來測定任過測定處理后的需氧菌平板計數(shù)。參見例如，Lund等人，(2000)的測定tl生物生長的方法。還可以-使用這些測定方法通過改變pH和停留時間確定防止不想要的微生物的生長并保留至少期望水平的生物活性的條件的聯(lián)合，如下文所例示。3.生物活性組分的生物活性優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明方法處理或制備的生物活性組合物4吏至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平。在一優(yōu)選的實施方案中，期望的活性水平等于或大于對生物活性組合物進行熱處理所保持的活性水平。例如，與未處理的對照中的生物活性組分的活性相比，生物活性組合物的熱處理使至少一種生物活性組分保持至多34%的活性，如實施例1所示。相反，本發(fā)明的方法提供的生物活性組合物中至少保持約34%或更多活性的生物活性組合物，如實施例1中所示。對于某些生物活性組合物，熱處理甚至更為有害。因此，取決于應(yīng)用，在一實施方案中，與未處理的對照中的生物活性組分的活性相比，優(yōu)選至少保持約35%活性的至少一種生物活性組分。優(yōu)選至少保持約35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%活性的至少一種生物活性組合物，優(yōu)選的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約70%至約100%)。在可供選擇的實施方案中，優(yōu)選地，生物活性組分所保持的活性是熱處理的生物活性組分的至少約10%、25%、50%、75%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500%、600%、700%、800%、900%或1000%,優(yōu)選的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約100%至約400%)。可通過^^知的用于測定選定生物活性組合物的選定活性的方法來測定根據(jù)本發(fā)明進行壓力處理前和壓力處理后的生物活性組合物的生物活性，例如上文和下文中所描述的那些方法。測量生物活性的可接受的方法的實例包括但不限于HPLC、基于細胞的測定、基于酶的測定、ELISA測定、流式細胞計量法(正成為ELISA之外的選擇)、放射免疫測定和使用動物模型的體內(nèi)測定。例如，測量乳鐵蛋白的生物活性的可接受方法包括但不限于色譜法(Palmano等人，2002)、包括ELISA在內(nèi)的免疫技術(shù)(Desmazeau,1993)和生物傳感器免疫測定法(Indyk等人，2005)。如下文實施例中所述，可測定免疫球蛋白和生長因子的生物活性。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知測量益生微生物的生物活性的類型和水平的方法。參見，例如Mercenier等人，(2004);Leyer等人，(2004);Cummings等人，(2004)以及下文所描述的PBMC分泌細胞因子檢測法。4.生物活性組合物乳汁不僅是嬰兒的全部營養(yǎng)來源，而且提供生理上生物活性組分的豐富來源，因而被稱為"天然藥物"。除提供完整的營養(yǎng)之外，乳還在青少年的成長、保護和治療恢復(fù)中起到重要的作用。健康的成年人通常僅需要乳的營養(yǎng)功效，但是對處于慢性疾病的疾病狀態(tài)中的成年人，源自乳的生物活性在疾病的預(yù)防和治療方面可提供更多。所述乳優(yōu)選為綿羊乳、山羊乳、豬乳、鼠乳、水牛乳、駱駝乳、牦牛乳、馬乳、驢乳、駝馬乳、牛乳或人乳，以及更優(yōu)選為牛乳。已知乳品蛋白質(zhì)是免疫刺激物。初乳是在標準乳的產(chǎn)生開始之前，分娩后立即產(chǎn)生的頭乳(pre-milk)。來自母牛的最佳的初乳在產(chǎn)犢后第一個6小時內(nèi)獲得，但能夠在產(chǎn)犢后的前兩天里采集初乳。最佳的初乳與分娩約48小時后同一奶牛的乳中所發(fā)現(xiàn)的相比通常含有兩倍以上的乳固體物，以及4倍的蛋白質(zhì)。最佳的初乳中的消化酶、免疫球蛋白(包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)、細胞活素、干擾素、生長因子、糖蛋白、富含脯氨酸的肽以及維生素A、D、E和K的濃度均比標準乳高?？砂凑誆lfstrand等人，2002所描述的方法來制備初乳蛋白濃縮物(MPC)和初乳乳清蛋白濃縮物(WPC)。乳和初乳衍生物和其制造方法是本領(lǐng)域公知的。通常通過聯(lián)合離心法(為了除去脂肪)、酪蛋白沉降法(使用酸或酶)、過濾法(為了除去乳糖、礦物質(zhì)和水，或任選地除去蛋白質(zhì))、色譜法(為了純化蛋白組分)來獲得這些衍生物，這些衍生物包括重組的或新鮮的全脂乳、重組的或新鮮的脫脂乳、再生的全脂或脫脂奶粉、脫脂乳濃縮物、脫脂乳分離物、全脂奶粉或脫脂奶粉、脫脂乳滲余物、煉乳、酪乳、超濾乳滲余物、乳蛋白濃縮物(MPC)、乳蛋白分離物(MPI)、脫鈣乳蛋白濃縮物、脫鈣乳蛋白分離物、低脂乳、低脂乳蛋白濃縮物、低脂乳蛋白分離物、初乳、初乳分餾物、初乳蛋白濃縮物(CPC)、初乳乳蛋白濃縮物、初乳乳蛋白分離物，初乳乳清、初乳乳清蛋白濃縮物，初乳乳清蛋白分離物、來自初乳的免疫球蛋白分餾物、乳清、乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)、甜乳清、乳酸乳清、無機酸乳清、再生的乳清粉、源自任何乳或初乳工業(yè)生產(chǎn)液流的組合物、源自通過任何乳或初乳工業(yè)生產(chǎn)液流的超濾或微過濾所獲得的滲余物或滲透物的組合物、或源自通過任何乳或初乳工業(yè)生產(chǎn)液流的色譜分離所獲得的穿透的或吸附的分餾物的組合物、或這些組合物中任一組合物的全部或部分水解物或其混合物。參見例如DairyProcessingHandbook(乳制品加工手冊)(TetraPakProcessingSystems,Lund,Sweden,1995)。其它的這類衍生物包括上述的乳品蛋白組合物和乳品成分。乳中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)包括免疫球蛋白(包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)、生長因子、牛血清白蛋白(BSA)、a乳白蛋白、/3乳球蛋白和大量酪蛋白，它們?nèi)渴橇椎鞍住３业鞍滓酝?，這些蛋白還存在于乳清中。已知乳包含多種有絲分裂蛋白和可直接涉及骨再建的蛋白。通過陽離子交換色譜法可從乳或乳清中回收生長因子(IGF-胰島素樣生長因子、TGF-轉(zhuǎn)化生長因子等)、免疫球蛋白(包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)、BSA和某些/3乳球蛋白。某些生長因子作為中性蛋白被回收。酪蛋白糖巨肽(CGMP)是可通過陰離子交換回收的的酸性蛋白片斷。骨橋蛋白是存在于所有體液(包括乳)中的高度磷酸化和糖基化的蛋白質(zhì)。CGMP是在乳酪制作過程的粗質(zhì)凝乳酶介導(dǎo)的酪蛋白凝固步驟(通過凝乳酶的作用)中由K-酪蛋白釋放的肽，該肽存在于稱作甜乳清或乳酪乳清的乳清片段中。CGMP有時簡單地被稱作GMP(糖巨肽)。乳酪乳清蛋白包含15-20%的CGMP。如WO00/49885所報道的，CGMP被提出作為一種乳中的骨健康促進成分。通過用乳酸菌發(fā)酵或者通過在酪蛋白酸鹽或農(nóng)家干酪(cottagecheese)和意大利乳清干酪的制造過程中，直接加入乳酸來生產(chǎn)乳酸乳清。通過在酪蛋白酸鹽制造過程中加入無機酸來生產(chǎn)無機酸乳清。乳酸乳清和無機酸乳清不包含CGMP。這兩種方法的原理是將pH降至約4.6使酪蛋白沉淀，而不是使用凝乳酶的作用形成沉淀。因此，任何未暴露在凝乳酶中的乳制品不含CGMP。乳清是乳酪或酪蛋白制造的副產(chǎn)品，源自乳清的蛋白產(chǎn)品可基于其蛋白含量進行分類，其包括含有至少30%蛋白的乳清蛋白濃縮物(WPC),至含有至少90。/。蛋白的乳清蛋白分離物(WPI)(Huffman,1996;IDF,1998)。薄膜超濾和膜滲濾(diafiltration)通常用于這類產(chǎn)品的制造，以便在干燥前將乳清蛋白濃縮并純化至25%-35%的固體，在本領(lǐng)域中將源自薄膜超濾步驟的蛋白濃縮物稱為滲余物。乳清蛋白是包含若干個獨立蛋白質(zhì)(包括但不限于o;乳清蛋白、/3乳清蛋白、脈蛋白胨、免疫球蛋白(包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)、糖巨肽、生長因子(例如TGFi31和TGF/2)、牛血清白蛋白、乳鐵蛋白和乳過氧化物酶)的集合術(shù)語，并且在本發(fā)明中可包括全體乳清蛋白或其片段。Zadow(1992)和Sienkiewicz等人(1990)描述了適于乳清的工業(yè)生產(chǎn)的方法。生產(chǎn)WPC和WPI的方法是本領(lǐng)域7>知的并且在USDairyExportCouncilReferenceManualforU.S.WheyandLactoseProducts,Chapter7:WheyProducts-Definition,Composition,Functions(美國乳清和孝L4唐產(chǎn)品的美國乳品出口協(xié)會參考手冊，第七章乳清產(chǎn)品一定義、組合4勿、功能)；Page,J"Meyer,D.，Haines,B"Lagrange,V.和Kenney，A.(Eds)，AmericanDairyProductsInstitute(美國乳制品研究所)，Elmhurst，IL,USA,(2004年6月)(還可乂人http:〃www.usdec.org/files/pdfs/US08D—04.pdf在線獲得)中對其進行了討論。還可參見DairyProcessingHandbook(乳制品加工手冊)(TetraPakProcessingSystems,Lund,Sweden,1995)。已知乳品蛋白質(zhì)是免疫刺;敫物。通過使用來自病原體的抗原使產(chǎn)生孕育乳(pregnantmilk)的哺乳動物免疫以提高該初乳和乳中的特異性抗體來制備超免疫乳和超免疫初乳(參見Korhonen等人，2000中這類方法的綜述)。根據(jù)上文參考的公知方法可制備超免疫產(chǎn)品的蛋白濃縮物。超免疫乳和超免疫初乳是公知的免疫刺激物(Korhonen等人，2000)。超免疫乳和超免疫初乳可像普通的乳和初乳一樣處理，產(chǎn)生下列衍生物，例如超免疫乳蛋白濃縮物、超免疫乳蛋白分離物、超免疫乳清、超免疫乳清蛋白濃縮物、超免疫乳清蛋白分離物、超免疫初乳、超免疫初乳乳蛋白濃縮物、超免疫初乳乳蛋白分離物、超免疫初乳乳清、超免疫初乳乳清蛋白濃縮物、或超免疫初乳乳清蛋白分離物，或其混合物。乳鐵蛋白是存在于哺乳動物乳和初乳中的80kDa的鐵結(jié)合的糖蛋白。牛乳和牛初乳中的乳鐵蛋白濃度分別為大約0.2mg/ml和1.5mg/ml。它具有多種生物學(xué)功能，包括對鐵代謝、免疫功能和胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié)。乳鐵蛋白對一批病原體具有抗微生物活性，包括革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌、酵母菌和真菌。乳鐵蛋白的抗微生物作用基于其結(jié)合鐵的能力，而鐵對于病原體的生長是必需的。乳鐵蛋白還抑制若干種病毒的復(fù)制，并且其還通過結(jié)合細菌膜上脂多糖的脂質(zhì)A組分來增加某些細菌對抗生素和溶菌酶的敏感性。通過陽離子交換色譜，然后通過超濾和滲濾可從乳中分離乳鐵蛋白。除野生型乳鐵蛋白自身外，可用的變體還包括牛乳鐵蛋白變體bLf-a和bLf-b(Tsuji等人，(1989);Yoshida等人，(1991))?？捎玫淖凅w還包括糖基化和非糖基化形式的乳鐵蛋白(Pierce等人，(1991);Metz-Boutigue等人，(1984);vanVeen等人，(2004))以及糖基化突變體(具有不同的糖基化位點或不同的糖基側(cè)鏈)?？捎玫娜殍F蛋白片,史包括N葉片段和C葉片段(Baker等人，2002)和保留乳鐵蛋白結(jié)合袋的任何其它乳鐵蛋白多肽，例如截短的乳鐵蛋白多肽。還可以通過7>知的合成方法來產(chǎn)生乳鐵蛋白的變體或片段(例如參見Kimmerlin等人，2005)?；蛘?，乳鐵蛋白多肽或其功能性變體或片段能夠通過已確立的合成Fmoc化學(xué)法來產(chǎn)生，如Viejo-Diaz等人，(2003)所描述的人kaliocin-l和乳鐵蛋白肽衍生的肽；以及Nguyen等人，(2005)所描述的牛乳鐵蛋白肽(lactoferricinpeptide);以及vanderKraan等人，(2004)所描述的Lactoferrampin和更短片段。下述是從牛乳中分離乳鐵蛋白的示例性程序。新鮮的脫脂乳(7L，pH6.5)在4。C下以5ml/分鐘的流速通過用超純水(milliQwater)平衡的300ml的SSepharoseFastFlow柱。用2.5倍床體積的水洗去未結(jié)合蛋白，并用約2.5倍床體積的、濃度分別為0.1M、0.35M和1.0M的氯化鈉將結(jié)合蛋白逐步洗脫。收集1M氯化鈉洗脫所得的粉紅乳鐵蛋白條帶作為單一片段，并用超純水透析，然后凍干。將該凍干粉溶解在25mM、pH6.5磷酸鈉緩沖液中，并在SSepharoseFastFlow柱中，以3ml/分鐘的流速、使用上述緩沖液中至1M的氯化鈉梯度進行再層析。將含有經(jīng)過凝膠電泳和反相HPLC分析確定具有足夠純度的乳鐵蛋白的片段合并在一起，透析并凍干。在pH8.6、含0.15M氯化鉀的80mM磷酸二鉀溶液中，通過在Sephacryl300上進行凝膠過濾得到最終純化的乳鐵蛋白。合并所選擇的片段，用超純水透析并凍干。HPLC分析結(jié)果和對于鐵飽和形式的乳鐵蛋白其光譜比值(280nm/465nm)為~19或更低的事實表明該制備所得的乳鐵蛋白純度大于95%。通過選擇合適的具有已知特異性裂解的酶，例如胰蛋白酶、糜蛋白酶，并通過pH值、溫度、孵育時間以及酶和底物的比例來控制/限制蛋白質(zhì)水解能夠制備水解物。使用特異性內(nèi)肽酶能夠?qū)@樣分離的肽進行精制。通常，SDS-PAGE可用于通過將水解物與分子量標準對比來估計水解程度。大小排阻層析可用于分離水解物中的不同種類，并估計分子量的分布情況(distributionprofile)。蛋白水解物，尤其是乳品蛋白水解物是公知的免疫刺激物。通過實例，按照本發(fā)明處理的組合物或產(chǎn)品可傳輸至壓力處理的產(chǎn)品或成分中；加入至不再進行后續(xù)熱處理的產(chǎn)品或成分中；或加入至進行后續(xù)壓力處理的產(chǎn)品或成分中。為了降低對存在于按照本發(fā)明處理的組合物中的蛋白質(zhì)的不想要的影響，在所述組合物是液體的某些實施方案中，加入穩(wěn)定劑是合乎需要的。例如，為了穩(wěn)定任何存在于該組合物中的酪蛋白。因此，在一實施方案中，所述組合物還包含穩(wěn)定劑，例如選自下列的膠質(zhì)槐豆膠、瓜爾膠、黃原膠、肉桂膠、魔芋粉、/3葡聚糖、他拉膠、阿拉伯樹膠(gumArabic)、結(jié)冷膠、羧曱基纖維素、曱基纖維素、羥丙基曱基纖維素、黃蓍膠、刺梧桐膠、阿拉伯樹月交(gumacacia)、殼聚糖、arabinoglactins、藻酸鹽、果膠、角叉菜膠、或歐車前或其混合物。穩(wěn)定劑優(yōu)選為果膠或羧曱基纖維素(CMC)。根據(jù)需要，按照本發(fā)明的方法處理的組合物優(yōu)選包含約0.01%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%、0.3%、0.35%w/v或更高的穩(wěn)定劑。為了使生物活性組分在約中性pH下穩(wěn)定，在某些實施方案中，一種或多種疏水性配體包含在所述組合物中是合乎需要的。疏水性配體的存在允許生物活性組分在約pH7.0下，優(yōu)選在約pH5.0至pH8.0下進行壓力處理，同時其所保持的活性水平比在缺少該配體下易于獲得的生物活性組分的活性水平高。不希望被理論限制，申請人相信這些配體在該生物活性組分中與疏水袋(hydrophobicpocket)結(jié)合，在壓力處理過程中，降低了其對變性的敏感性。因此，在某些實施方案中，所述組合物還包含一種或多種選自下列的疏水性配體十六酸、肉豆蔻酸、亞麻油酸、共軛亞油酸(CLA)、一種或多種磷酯、一種或多種縮醛磷脂酰膽堿、一種或多種鞘磷脂、一種或多種神經(jīng)節(jié)香酯、丁酸、一種或多種w-3脂肪酸(包括但不限于二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA))、一種或多種植物甾醇、一種或多種植物甾醇酯、一種或多種植物甾醇乙酸酯、一種或多種co-6脂肪酸(包括^f旦不限于魚油)、脂溶性疏水維生素(包括維生素A[視黃醇]和維生素D)、番茄紅素、或十二烷基硫酸鈉或其混合物，這是合乎需要的。在本實施方案中，組合物的pH優(yōu)選為約5.0至8.0。本發(fā)明使用的產(chǎn)品配方的實例包括飲料(包括酸化飲料和碳酸飲料)、酸乳酪和果凍。這些產(chǎn)品可按照下文所述的方法配制，并按照上文和實施例中所述的方法進行評-階。因此，本發(fā)明還涉及包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理的組合物，以及包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳4失蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理的組合物。本發(fā)明還涉及包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的賴t生物的壓力處理的組合物，以及包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理的組合物。所述組合物可以是壓力處理的果凍、壓力處理的酸乳酪或壓力處理的飲料。通過本發(fā)明描述的方法可測定乳鐵蛋白或IgG濃度以及^L生物計數(shù)。本發(fā)明還涉及如上文所述的包含一種或多種不能存活的益生孩支生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物的壓力處理的組合物。通過本發(fā)明描述的方法可確定微生物計數(shù)。在一實施方案中，組合物包含至少約0.1mg/ml，優(yōu)選約0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、200mg/ml、200mg/ml、400mg/ml、500mg/ml、600mg/ml、700mg/ml、800mg/ml、900mg/ml或1000mg/ml的生物活性組分，可用的范圍可選自這些值中的任意值之間(例如，約0.1mg/ml至1000mg/ml、約1mg/ml至1000mg/ml、約2mg/ml至1000mg/ml、約3mg/ml至1000mg/ml、約4mg/ml至1000mg/ml、約5mg/ml至1000mg/ml以及約10mg/ml至1000mg/ml)。參照以下實施例，現(xiàn)對本發(fā)明的各個方面以非限制性方式來進行說明。實施例戶斤有孝L制品4尋自FonterraCo-operativeGroupLimited,NewZealand。就熱處理而言，將4ml樣品移至8ml的具螺旋帽的Wheaton玻璃瓶中，使之在30°C下平衡約5-10分鐘，然后將其浸入到油浴中，維持在75。C或85°C,并震動IO分鐘，然后在水中快速冷卻10分4中。在4。C下貯存樣品直至分析。樣品分析使用一種或多種選自目測法、聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)、HPLC、BiaCore或ELISA的技術(shù)來測定作為熱處理或壓力處理結(jié)果的IgG、IgM、IgA、生長因子或LF的定性和定量變^ft。還就壓力處理前以及壓力處理后各種微生物的存在(包括需氧菌平板數(shù)、大腸菌數(shù)、酵母菌和霉菌數(shù)、嗜溫性孢子數(shù)、嗜熱性孢子數(shù)以及其它)對樣品進行測定。1.ELISA:根據(jù)制造商的說明書執(zhí)行。2.HPLC-MC:通過Copestake等人，2006所描述的HPLC-MC方法將樣品稀釋并對其進行分析。酪蛋白能夠干擾由HPLC分析的IgG的精確度。為了確立對初乳產(chǎn)品的IgG分析的更精確以及可再現(xiàn)的方法，使用預(yù)先除去酪蛋白的高性能液相色譜法(HPLC-負離子酪蛋白(minuscasein)或HPLC-MC)。這確保了所測量的IgG濃度更接近地反映了RID、SPR和其它免疫測定法的測量。3.BiaCore:將樣品稀釋在PBS緩沖液中并使用Indyk和Filonzi(2005)所描述的BiaCore儀對其進行分析。通過參考標準曲線而獲得定量，所述標準曲線是使用高純度牛乳鐵蛋白或IgG而建立的。4.PAGE:使用Manderson等人(1998)所描述的方法對所選樣品(還原性的和非還原性的)進行十二烷基硫酸鈉(SDS)PAGE測定。5.微生物分析按照NZTM243.1-APC(需氧菌平板計數(shù))；NZTM248.1-大腸菌數(shù)；NZTM260.1-嗜熱菌數(shù)(thermophiliccount);NZTM259.1-嗜溫性孢子數(shù)；以及NZTM261.1-酵母菌和霉菌tt來進行;微生物分析，所有方法均來自NZTM2:NewZealandDairyIndustryMicrobiologicalMethodsManual(NZTM2:新西蘭乳品加工業(yè)微生物方法手冊)(PublishingSolutionsLimited,P.O.Box983，Wellington,NewZealand),基于InternationalDairyFederation(國際乳品業(yè)聯(lián)合會)和AOACInternationalmethods(AOAC國際方法)。實施例1:含有初乳成分的溶液將含有80%蛋白(以及6.6%免疫球蛋白)的初乳乳蛋白濃縮物4分末(FonterraCo-operativeGroupLimited)溶于水中并用乳酸將pH調(diào)節(jié)至3.5,得到3.6%的蛋白溶液。然后分別在83.5。C或600MPa下對溶液樣品進行熱處理或壓力處理，保持3分鐘，通過HPLC測量經(jīng)處理的飲料中免疫球蛋白的量，并與未處理溶液中免疫球蛋白的量進行比4交。結(jié)果如圖1所示。來自StanstedFluidPowerLtd,UK的HPP裝置用于全部實施例。實施例2:含有初乳MPC成分的溶液將初乳MPC溶于0.3%w/v的果膠溶液中來制備6%w/v的初乳MPC的原液。對初乳原液樣品進行酸化得到一系列pH值，并且在85。C下對其進行熱處理并保持10分鐘或如下文所述對其進行壓力處理。通過HPLC-MC測定相同pH下每一熱處理樣品或壓力處J里樣品相對于未處理對照的剩余免疫球蛋白G(IgG)。在600MPa進^f亍壓力處理后還可使用大腸桿菌、酵母菌和霉菌感染溶液并對這些生物體進行計數(shù)。在pH3.3下，與熱處理的初乳保留2%的IgG相比，在400MPa下進行壓力處理并保持3分鐘的初乳樣品保留67%的IgG。在pH4.1下，與熱處理的初乳保留2%的IgG相比，在600MPa下進行壓力處理并保持3分鐘的初乳樣品保留37%的IgG。在pH3.5下，與熱處理的初乳保留2%的IgG相比，在600MPa下進行壓力處理并保持3分鐘的初乳樣品保留34%的IgG。在pH4.1下，與熱處理的初乳保留2%的IgG相比，在500MPa下進行壓力處理并保持1分鐘的初乳樣品保留91%的IgG。如表1A所總結(jié)的，在pH4.1下，與熱處理的初乳保留2%的IgG相比，在400MPa、500MPa和600MPa下進行壓力處理并未停留的初乳樣品在400MPa下保留100。/。的IgG、在500MPa下保留91%的IgG以及在600MPa下保留48%的IgG。比4交這些樣品的樣史生物量并總結(jié)于表1A。根據(jù)需氧菌平板計數(shù)(APC)法得到未處理的對照制品具有9x103cfu/mL的大腸菌數(shù)，估計100cfu/mL的嗜溫性孢子數(shù)以及大于1x106cfu/mL的酵母菌/霉菌和集落。與之相比，在500MPa或600MPa下壓力處理且不停留的樣品中未檢出大腸菌或酵母菌/霉菌。在600MPa下，未檢出嗜溫性孢子或APC。在500MPa下，有估計20cfu/mL的嗜溫性孢子和27cfu/mL的APC。在400MPa下，有估計40cfu/mL的嗜溫性孢子和2100cfu/mL的APC。表1B顯示了600MPa下，pH范圍的剩余免疫球蛋白活性以及大腸菌數(shù)、酵母菌數(shù)和霉菌數(shù)。表1A:HPP的6%w/v的MPC樣品(pH4.1)的剩余IgG和APC<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>*感染的實施例3:不同pH下的初乳MPC成分將來自實施例2原液的初乳樣品酸化到pH3.5至4.1，在400MPa至600MPa(不停留)下壓力處理，并與熱處理的制劑進行比較。在所有的情況下，與壓力處理后保留45%-100%的剩余IgG相比，熱處理后保留的剩余IgG為約2%。pH越高，剩余IgG越高。結(jié)果總結(jié)于表2。表2:熱處理或壓力處理的6%w/v的初乳MPC的剩余IgG(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>實施例4:不同成分的效果通過HPLC-MC來分析在不同pH值下進行熱處理(85。C/10分鐘)和壓力處理(600MPa/3分鐘停留)的由部分初乳成分制備的初乳溶液的剩余IgG活性。結(jié)果如圖2所示，(A)初乳乳清(CW)、(B)初乳乳清UF滲余物(CWUFR)(使用具有10kDa分子量截留值的UF膜對凝乳酶乳清進行超濾)、(C)初乳脫脂奶粉以及(D)初乳MPC。在熱處理制品中的剩余IgG量始終J氐于10%。與用其它成分配制的溶液相比，初乳乳清UF滲余物成分(圖2B)在壓力處理后顯示較大的IgG損失。然而，在pH5.2或更低時，壓力處理的初乳脫脂奶粉制劑中仍保持可用的IgG水平。在pH5.2或更低時，在所有的其它壓力處理的制劑中基本上保留了IgG水平。特別是在pH4.1或更低時的初乳脫脂奶粉制劑(圖2C)和初乳MPC制劑(圖2D),以及在pH3.8時的初乳乳清制劑(圖2A),其剩余的IgG均大于約90%。初乳乳清在pH6.7時的剩余IgG水平(圖2A)也在可用的水平(約70%)。實施例5:來自超免疫(HI)初乳的成分配制兩份7%w/v的超免疫(HI)初乳原液，一份用超免疫初乳乳蛋白濃縮物(HI-MPC)來配制，一份用超免疫初乳乳清蛋白濃縮物(HI)來配制。將這些原液樣品調(diào)節(jié)至pH4.6，并且在85。C下熱處理，維持10分鐘；或在600MPa下壓力處理，不停留；或在600MPa下壓力處理，維持3分鐘。在處理和計數(shù)前，將樣品在環(huán)境溫度下貯存一周以進行微生物計數(shù)。測定所選擇的生物活性蛋白的剩余水平，如前所述，用ELISA和乳鐵蛋白BiaCore測定免疫球蛋白IgG、IgA以及IgM。用需氧菌平板計數(shù)(APC)法對微生物進行計數(shù)，如表3所示。在400MPa下并且不停留的處理后，HI-MPC的APC減少了4個對翁:級，HI-WPC的APC減少了3個對數(shù)級。在600MPa下并且維持3分鐘的處理后，HI-MPC的APC減少了5.8個對數(shù)級，HI-WPC的APC減少了大于5.6個對數(shù)級。然后將處理后的樣品在20°C下維持6周，再進一步進4亍計數(shù)以測定感染的微生物的生長。這些結(jié)果如表4所示。圖3顯示了剩余的生物活性蛋白水平(所示的pH均為4.1)。在85。C下熱處理10分鐘的樣品中保留非常少(2%-3%)的剩余IgA。相反，壓力處理的樣品具有高得多的剩余IgA活性(80%-85%的剩余IgA)。對IgM觀察到幾乎相似的趨勢，顯示與在600MPa下不4f留或600MPa下維持3分鐘的壓力處理后的樣品的剩余IgM活性大于95%相比，熱處理樣品的剩余IgM活性(保留約1。/。的剩余IgM)僅為可忽略的量。表3:壓力處理和熱處理的HI-MPC和HI-WPC的APC[cfu/ml成分對照400MPa不停留600MPa維持3分鐘850C維持10分鐘HI-MPCpH4.618，000，00046030未做HI陽WPCpH4.6370,000300未沖全出未做HI畫MPCpH6.918,000,00025,000,00054,0007HI-WPCpH6.9370,0001,600202表4:表3的樣品在20。C下維持6周后的APC[cfu/ml成分對照400MPa不停留600MPa維持3分鐘85°C維持10分鐘HI-MPCpH4.6變質(zhì)101010HI-WPCpH4.6變質(zhì)20未檢出未檢出HI-MPCpH6.9變質(zhì)變質(zhì)變質(zhì)變質(zhì)HI-WPCpH6.9變質(zhì)變質(zhì)50未檢出實施例6:低pH對生物活性的影響通過將適量的WPC粉末溶解在超純水中來制備7%w/v的商用乳清蛋白濃縮物(WPC)溶液。將每一溶液的pH分別調(diào)節(jié)至3.8、5.2、6.0、6.7和7.5，然后在600MPa下壓力處理該溶液，維持3分鐘或在75°C下熱處理該溶液，維持5分鐘，使用如前所述的BiaCore法分析剩余IgG和乳鐵蛋白含量。結(jié)果如圖4所示。剩余IgG活性在熱處理樣品中的范圍是5。/。至35%。相反，在600MPa下壓力處理3分鐘的樣品(圖4A)顯示50%-95%的剩余IgG。與在高pH(例如pH6.7或更高)下進行壓力處理的樣品相比，在低pH下進行壓力處理的樣品顯示相對較高的剩余IgG。類似地，與在600MPa下壓力處理維持3分鐘的樣品中60%-90%的剩余乳鐵蛋白活性相比，熱處理的WPC溶液中剩余乳4失蛋白活性為5%和70%(圖4B)。與在高pH(例如pH6.0或更高)下進4亍壓力處理的才羊品相比，低pH下進行壓力處理的樣品顯示相對較高的剩余LF(%)。實施例7:在pH4.0下乳鐵蛋白是高度耐壓的圖5顯示了在400MPa下，壓力處理5分鐘至50分鐘的稀LF溶液(0.2%w/v，pH4.0)的非還原性SDSPAGE(道1:未處理的對照；道2:400MPa/5分鐘；道3:400MPa/10分4中；道4:400MPa/20分鐘；道5:400MPa/30分鐘；道6:400MPa/40分鐘；道7:400MPa/50分鐘)。凝膠顯示，在400MPa下，延長壓力處理前后的LF的譜帶強度(bandintensity)基本上保持不變。這些結(jié)果顯示，即使延長對所述溶液的壓力處理時間，LF在該壓力下還是高度耐壓的。實施例8:在不同pH下含有乳鐵蛋白的溶液將乳鐵蛋白粉末溶解在超純水中并輕輕攪拌2-3小時來制備乳鐵蛋白溶液(6%w/v)。將該溶液調(diào)節(jié)至pH3.3、3.8、4.1或7.0，并分別進行壓力處理(600MPa維持至多45分鐘)或熱處理(85。C維持5分鐘)。用BiaCore法測定剩余的乳鐵蛋白并示于圖6。乳鐵蛋白溶液的顏色可表征蛋白質(zhì)鐵結(jié)合能力，該能力可被處理逆向影響。天然乳鐵蛋白的6%溶液為約15%鐵飽和的，且為深橙色，而鐵飽和度為0%的脫乳鐵蛋白溶液是無色的。在pH3.8、4.8和7.0時，同樣用還原性SDS-PAGE和非還原性SDS-PAGE對壓力處理的溶液(600MPa，維持5分鐘或30分鐘)和熱處理的溶液(85。C或90°C維持10分鐘)進行比較。在pH7.0、75。C或更高的溫度下進行5分鐘的熱處理后，剩余的乳鐵蛋白很少。在3.3至4.1的pH范圍加熱的樣品顯示較高的剩余乳鐵蛋白(圖6)，而在600MPa下，壓力處理一定的停留時間后，剩余乳鐵蛋白含量在同樣的pH值下始終保持很高。與未處理的對照相比，在75°C下熱處理5分鐘，在3.8-7.0的pH范圍導(dǎo)致顏色顯著變淺，表明鐵結(jié)合的或定向鐵結(jié)合的乳鐵蛋白減少(表5)。應(yīng)注意，在pH3.3時，乳鐵蛋白的鐵結(jié)合能力降低。在85°C或更高的溫度下熱處理5分鐘導(dǎo)致所述pH范圍內(nèi)的顏色顯著變淺。在pH7.0時形成厚沉淀，這表明大部分的乳《失蛋白已變性。表5:熱處理作為pH的函數(shù)對天然乳鐵蛋白的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>"+"符號表示肉眼觀察到的顏色深度。"+"符號越少表明鐵結(jié)合越少。相反，與未處理的對照相比較，在600MPa下壓力處理至多45分鐘未造成顏色變化或混濁，除了pH3.8和pH4.0的那些樣品，其顏色與較高pH值的溶液相當(表6)。表6:壓力處理作為pH的函數(shù)對天然乳鐵蛋白的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>"+"符號表示肉眼觀察到的顏色深度。"+"符號越少表明鐵結(jié)合越少。根據(jù)上文提到的SDS-PAGE凝膠(未顯示)，熱處理的溶液有聚合和聚集的跡象，或在分離凝膠的起點捕獲，或在堆積凝膠內(nèi)捕獲，或作為根本不進入凝膠的大聚合物。在pH3.8和pH4.8時存在無法滲入到非還原性凝膠中，且不存在于還原性凝膠中的聚集物。這表明該聚集是由熱誘導(dǎo)的聚合產(chǎn)生的。在pH7時保留的乳鐵蛋白幾乎無法測量。相反，壓力處理的溶液顯示其與未處理的對照幾乎沒有變化。還用酵母菌和霉菌感染調(diào)節(jié)至pH3.3、3,8、4.0、5.0、6.0、7.0和8.0的乳鐵蛋白溶液(6%w/v)，然后在600MPa下壓力處理0分鐘、5分鐘和15分鐘。未處理的對照中的酵母菌和霉菌計數(shù)和壓力處理后樣品中的酵母菌和霉菌計數(shù)顯示，未處理的對照的酵母菌和霉菌數(shù)為190,000(cfu/ml),而在所研究的全部壓力處理和全部pH范圍中進行壓力處理后的樣品中未檢出酵母菌和霉菌。實施例9:含有生長因子的溶液在pH6.9時，通過將HI-WPC粉末溶解在超純水中來制備HI-WPC(7%w/v)溶液。然后在600MPa下對該溶液進行壓力處理且不停留，或在600MPa下對該溶液進行壓力處理且維持3分鐘，或在85°C下對該溶液進4于熱處理10分鐘。相對于未處理的對照，對壓力處理和熱處理的樣品的兩種主要牛初乳生長因子TGFpi和TGFp2進行分析。結(jié)果如圖7(A)TGF卩l(xiāng)和(B)TGF卩2所示。熱處理樣品的剩余TGFpl生長因子為27%，未檢出TGFP2生長因子。相反，壓力處理且維持3分鐘的樣品的兩種生長因子為93%-99%。71實施例10:含有乳鐵蛋白的酸乳酪用圖8所示的三種不同方法來制備乳鐵蛋白酸乳酪。在第一方法(標準酸乳酪)中，在熱處理前將乳鐵蛋白加入到所述乳中；在第二方法(對照)中，在發(fā)酵后將乳鐵蛋白加入到酸乳酪中；以及在第三方法(HPP法)中，在發(fā)酵后將乳鐵蛋白加入到酸乳酪中，并在500MPa下對增強的酸乳酪進行壓力處理且不停留。測量酸乳酪的最終pH值為4.50。用BiaCore法測定酸乳酪中的乳鐵蛋白，結(jié)果如圖9所示。標準熱處理的乳鐵蛋白酸乳酪的剩余乳鐵蛋白活性為1%-2%(相對于對照法)。相反，壓力法得到的剩余乳鐵蛋白為80%。在4。C下貯存130天后，分析壓力處理的酸乳酪的酸敗微生物。根據(jù)需氧菌平板計數(shù)未檢出大腸菌，有60個嗜溫性孢子集落，未檢出葡萄球菌(staphylococci),酵母菌或霉菌以及約10個集落。相反，未處理的對照產(chǎn)品在制備的21天內(nèi)大量變質(zhì)，產(chǎn)生氣體和臭味。實施例ll:含有免疫球蛋白的飲料如圖10所示由初乳乳清濃縮物來制備含有免疫球蛋白(3。/。IgG)的酸化飲料(pH4.0)。在85。C下對飲料熱處理IO分鐘，或在600MPa下對該々大料進行壓力處理并維持3分鐘。相對于未處理的對照，用HPLC-MC法測定剩余IgG。結(jié)果如圖ll所示。通過熱處理方法制備的飲料的剩余IgG低于檢測限。相反，與對照相比，用壓力處理制備的飲料保留了約90%的剩余IgG(%)。在4°C下貯存130天后，分析在500MPa下壓力處理且不停留的產(chǎn)品的酸敗纟效生物。根據(jù)需氧菌平板計數(shù)未檢出大腸菌，有2個嗜溫性孢子集落，未檢出葡萄球菌、酵母菌或霉菌或集落。相反，未處理的對照產(chǎn)品在制備的21天內(nèi)大量變質(zhì)，產(chǎn)生氣體和臭味。實施例12:含有乳鐵蛋白的果凍如圖12所述由乳鐵蛋白粉末來制備pH3.8的水果味果凍。在600MPa下對該果凍壓力處理3分鐘，通過BiaCore法對其剩余乳鐵蛋白和未處理的對照樣品進行比較。結(jié)果如圖13所示。與未處理的對照果凍相比，壓力處理的果凍的剩余乳鐵蛋白超過90%。在冷藏130天后，分析該產(chǎn)品的酸敗微生物。根據(jù)需氧菌平板計數(shù)未檢出大腸菌、嗜溫性孢子、葡萄球菌、酵母菌或霉菌或集落。相反，未處理的對照產(chǎn)品在制備的21天內(nèi)大量變質(zhì)，產(chǎn)生氣體和臭味。實施例13:益生微生物的壓力處理滅活益生菌的制備在37。C下，將來自1:100接種物的鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"o^"7/^W^m"owsHN001)(AGAL保藏號NM97/09514,1997年8月18日；Cross等人，2002)在1升的靜態(tài)MRS培養(yǎng)液中生長18h。除非另有說明，培養(yǎng)物生長后，所有步驟在水上進行。該培養(yǎng)物在冷的無菌PBS中洗滌一次，并以150ml的最終總體積重新懸浮在該無菌PBS中，獲得約2x1(Tcfu/ml的估計濃度。然后將其分為五等份，每份30ml，置于50ml的標準聚丙烯離心管中，將其中的三份進行如下處理熱滅活的HN001—將30ml的細胞于70°C時在水浴中孵育30分鐘，然后移至冰上。然后將500jil的這些熱處理細胞進一步稀釋在PBS中，獲得1x108cfu/ml的估計濃度，將400pl的該熱處理細胞分散在Nalgene冷存管中，在液氮中驟冷并在-80。C貯存直至PBMC分泌細胞因子測定4吏用?；頗N001—除了不接受熱處理之外，與熱處理細胞精確相同地處理30ml的細月包。UHP滅活HN001—將30ml的細胞進一步等分，放入Beckman離心管中，密封，在600MPa下壓力處理并停留3分鐘。處理后，將壓力處理的細胞注入新的50mlStansted離心管中并混合。然后將500|Lil的這些細胞進一步稀釋在PBS中，獲得1x108cfu/ml的估計濃度，將400iliI的該細胞分散在Nalgene冷存管中，在液氮中驟冷并在-80。C貯存直至PBMC分泌細胞因子測定使用。人外周血單核細胞(PBMC)的制備在獲得知情同意后，從志愿者處采集全血樣品。將血采集到裝有肝磷脂作為抗凝血劑的管中。將20ml的等份移至50ml的無菌管中并用無菌PBS稀釋至35ml。用約15ml的Ficoll-Hypaque(d=1.077)是稀釋的血沉在下面，并在室溫下以1500g離心20分鐘。從界面采集PBMC，而紅細胞和嗜中性白細胞沉積在球狀沉淀物(pellet)上。將采集的PBMC在PBS中稀釋至少2倍，然后通過離心將其制成球狀(以400g離心5分鐘)。將上清液吸出后，將PBMC重新懸浮在50mlPBS中，移出一部分以進行計數(shù)。基于細胞數(shù)，將剩余的PBMC稀釋在RPMI1640/10%FCS中，得到1x106細胞/ml的最終濃度，并將2ml的細月包混懸液》文入無菌Falcon2054管中。細菌/PBMC協(xié)同培養(yǎng)將制備的細菌制品解凍并劇烈渦旋。將細菌稀釋在PBS中，并以20等4分加入到PBMC培養(yǎng)物中，得到1x106cfu/ml的最終濃度或?qū)τ跍缁罴毦苿┑玫?x106滅活cfu/ml的最終濃度。作為細胞因子產(chǎn)品的陽性對照，將1/ig/ml的細菌脂多糖(LPS)或25ng/ml的佛波醇12-肉豆蔻酯-13-乙酯(PMA)和1/ig/ml的^f尹屋i若霉素加入到PBMC中。作為陰性對照，PBMC管中無添加劑。全部管于37。C孵育24h,通過離心法采集上清液。在用ELISA進行細胞因子水平的分析前，將上清液暫時貯存在-20。C。根據(jù)制造商的說明書，使用匹配捕獲和檢測抗體對(R&DSystemsInc.,Minneapolis,MN)通過ELISA來測定上清液的干擾素-y(Ifn-力和白細胞介素-10(IL-10)的水平。如果適合，將上清液在稀釋試圍內(nèi)。HNOOl滅活的測定為了測定熱處理或UHP處理的滅活程度，在PBS稀釋前對未處理的HNOOl細胞和處理的HNOOl細胞進行平板計數(shù)。如表7所示，UHP對細胞的殺滅效果比熱處理稍強。但是，兩種方法均導(dǎo)致大的殺傷率，所測定的可培養(yǎng)細胞數(shù)比初始培養(yǎng)物的可培養(yǎng)細胞數(shù)低至少5個對數(shù)級。表7:熱處理和UHP對HN001生存力的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>PBMC對滅活HN001的細胞因子響應(yīng)測定由上文所述的體外PBMC產(chǎn)生的IFN-y和IL-10作為益生生物活性的標記。從一組健康個體(11=13)得到的外周血中分離出PBMC，用1:1比例的活細菌或等量死細胞來培養(yǎng)等份的PBMC。24h后，取出培養(yǎng)上清液并通過ELISA分析該上清液的IFN-y和IL-10水平。通過ANOVA和多重比較的Bonferroni法來分析每一處理對每一個體的結(jié)果，認為p〈0.05是具有統(tǒng)計學(xué)意義的。Cross等人2002及其他人的研究表明，IFN-y可在介導(dǎo)益生菌活性中起作用。如圖14所示，PBMC在單獨培養(yǎng)基中生長24小時后幾乎不產(chǎn)生可測量的IFN-y。然而，暴露在UHP滅活的HN001中的PBMC所產(chǎn)生的IFN-y比單獨培養(yǎng)基中的PBMC(p=0.006)或與熱滅活的HN001協(xié)同培養(yǎng)的PBMC(p=0.013)所產(chǎn)生的IFN-y顯著增多，但其與用活HN001處理的PBMC(p二0.91)的IFN-y水平相似。盡管與單獨培養(yǎng)基和熱滅活HN001處理所產(chǎn)生的IFN-y相比，響應(yīng)于活HN001所產(chǎn)生的IFN-y有增長的趨勢，但是該結(jié)果不具有統(tǒng)計學(xué)意義(分別為p=0.23和p=0.45)。通常認為IL-10是抑制TH1T細胞發(fā)育和抑制包括IFN-y在內(nèi)的多種細胞因子的產(chǎn)生的抗炎細胞因子。近來，IL-10因其在緩解包括腸易激綜合征(IBS)在內(nèi)的慢性炎癥疾病上的潛在作用而成為許多臨床研究的焦點。如圖15所示，生長在單獨培養(yǎng)基中的PBMC僅產(chǎn)生少量的IL-IO。與單獨培養(yǎng)基中的PBMC所產(chǎn)生的IL-10(p=0.0001)相比，PBMC與HN001協(xié)同培養(yǎng)導(dǎo)致所產(chǎn)生的IL-10顯著增長。在熱滅活HNOOl的使用導(dǎo)致IL-IO相對于活HNOOl(p=0.12)接近統(tǒng)計顯著性的減少的同時，UHP滅活的HNOOl的4吏用導(dǎo)致IL-10水平顯著高于單獨培養(yǎng)基中的PBMC(p<O.OOOO)和與熱滅活的HNOOl協(xié)同培養(yǎng)的PBMC(p=0.013)，而近似于與活HNOOl培養(yǎng)的PBMC(p=0.97)的IL-10水平。因此，在壓力處理后，益生因子仍保留活性。模擬處理的UHPHNOOl(即除了暴露在增加的壓力以外，用與UHP處理HNOOl相同的方式處理的HNOOl細胞)，其在體外PBMC刺激細胞因子產(chǎn)生的能力方面與活HNOOl無顯著不同。實施例14:pH對HNOOl滅活的影響兩份來自1:100接種物的HNOOl培養(yǎng)物在37°C下生長18h。將-H分培養(yǎng)物用pH5.0的乙酸鈉/乙酸緩沖液(根據(jù)Perrin&Dempsey，1974配制)洗滌一次，然后以1.6x1011cfu/ml的濃度重新懸浮。除了用pH7.4的PBS來替代pH5.0的乙酸鈉/乙酸緩沖液外，對另一份培養(yǎng)物進行相同處理。各取兩等份的每組細胞放入Beckman離心管中，密封并壓力處理3分鐘，于4。C下過夜貯存，然后用平板計數(shù)來測定滅活程度(表8)。<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table>實施例15:pH在HPP處理過程中對HN001的影響將HNOOl細菌細胞重新懸浮在PBS(pH7.4)中或乙酸鹽緩沖液(pH5.0)中，通過壓力處理滅活(600MPa/3分鐘)，并如上文所述通過測定人體外PBMC刺激IL-10產(chǎn)生的能力對其生物活性與活HNOOl以及熱處理HNOOl的生物活性進行比較。圖16顯示了三個個體的組合結(jié)果。在pH7.4或pH5.0時響應(yīng)壓力處理滅活的HNOOl所產(chǎn)生的IL-10水平與對活HNOOl所7見測的IL-10水平無顯著不同，<旦是其IL-10水平與熱滅活HNOOl相比有顯著提高(分別為p=0.043和p=0.037)。實施例16:配體結(jié)合對生物活性保持力的提高pH6.8時，配制乳清蛋白濃縮物(WPC)在水中的2%溶液(Alacen342,FonterraCo-operativeGroupLtd.)。將下列疏水性配體分別加入到WPC溶液中(其與蛋白的摩爾比為1:1):共軛亞油酸、十二烷基石克酸鈉、維生素A和十六酸。然后在600MPa下對該溶液壓力處理，維持1分鐘、2分鐘、3分鐘或4分鐘，或者在90。C下對該溶液熱處理1分鐘、2分鐘、3分鐘或4分鐘。在SDS-PAGE凝膠上評估IgG、乳鐵蛋白和高分子量蛋白聚集體的水平，并在圖17中將其與未處理的對照溶液和無配體加入的2%WPC溶液進行比較。帶的強度表示存在于溶液中的蛋白質(zhì)單體的量。在未處理的對照樣品中(道1),標記為(i)的區(qū)域為高分子量聚集體，標記為(ii)的帶為IgG，標記為(iii)的帶為乳鐵蛋白。在熱處理樣品中(上排)，IgG和乳鐵蛋白帶的強度基本上被減弱，表明蛋白質(zhì)的聚集和單體蛋白質(zhì)的減少。這是蛋白變性和聚集的結(jié)果。無論疏水性配體存在(B-E)或不存在(A)，該聚集可在熱處理的樣品中觀察到。相反，無配體的壓力處理的WPC溶液顯示減弱的強度(A,道2至道5)，而加入不同疏水性配體的壓力處理后的WPC溶液(B-E)顯示基本上較高的強度。向含有生物活性的溶液中加入疏水性配體可4吏在中性pH附近、壓力處理后的生物活性的保持力增強。實施例17制備具有ACE-I(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制)活性的乳清蛋白水解物溶液(6%w/v)并調(diào)節(jié)至pH3.5、4.5或7.0。對樣品進行壓力處理(600MPa維持3分鐘或600MPa維持10分鐘)或熱處理(85。C維持10分鐘或90。C維持10分鐘)，將所測定的ACE-I活性和微生物含量與未處理的對照進行比較。根據(jù)D.W.Cushman和H.S.Cheung(1971)的方法，使用FAPGG作為底物來測定ACE-I活性。結(jié)果顯示，與未處理的對照相比較，壓力處理和熱處理的樣品的大腸菌數(shù)、酵母菌和霉菌、需氧菌平板數(shù)、嗜溫性孢子和嗜熱菌數(shù)均減少超過3個對數(shù)級。壓力處理和熱處理樣品的ACE-I活性在未處理的對照的ACE-I活性的+A2標準偏差內(nèi)，其在統(tǒng)計學(xué)上沒有區(qū)別。工業(yè)應(yīng)用本發(fā)明的方法可用于防止供食品和健康產(chǎn)業(yè)使用的組合物中不想要的微生物的生長，同時避免或最小化對可能存在的生物活性組分的影響。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，本發(fā)明僅通過說明的方式來提供以上描述，而本發(fā)明不限于此。參考文獻BakerE，BakerHM，KiddRD.Functionalvariationsonacommonstructuralframework(共同結(jié)構(gòu)骨架上的功能性變體).Biochem.CellBiol.(2002)80,27-34,BowieJU，Reidhaar-OlsonJF,LimWA,SauerRT.Decipheringthemessageinproteinsequences:tolerancetoaminoacidsubstitutions(蛋白序列中的信息揭秘對氨基酸替代的耐受性).Science.(1990)247(4948):1306-10.Copestake,D.E.J.,Indyk，H.，Otter,D.E.(2006).AnaffinityliquidchromatographymethodforthequantificationofIgGinbovinecolostrumproducts(親和液相色譜法對牛初乳產(chǎn)品的IgG定量測定).J.AOACInt.(待刊).Cross,M.L.，Mortensen,R.R.，etal.(2002)."DietaryintakeofLactobacillusrhamnosusHNOOlenhancesproductionofbothThlandTh2cytokinesinantigen-primedmice(鼠李糖乳桿菌HNOOl的々大食才聶入可增強抗原啟動的小鼠的Thl和Th2細胞因子)".MedicalMicrobiologyandImmunology(Berlin)191:49-53.Cummings，J.H.，Antoine,J-M.等(2004)."GutHealthandImmunity(腸#:康和免疫)，，.EuropeanJournalofNutrition43:iill8-iil73.Cushman，D.W.禾口Cheung,H.S.，Spectrophotometricassayandpropertiesoftheangiotensin-convertingenzymeofrabbitlung(家兔肺部的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的分光光度測定和性質(zhì)).Biochem.Pharmacol.20，1637-1648,(1971)Desmazeaud，M.(1993》Determinationofindigenousantimicrobialproteinsofmilk(乳的原始抗微生物蛋白測定)，BulletinoftheInternationalDairyFederation(國際乳品聯(lián)合會7>告)(vol.284).Lactoferrin(pp29—42)(Chapter3).DominguezE,PerezMD,PuyolP,SanchezL,CalvoM,EffectofpHonantigen-bindingactivityofIgGfrombovinecolostrumuponheati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4f留時間進行壓力處理后能夠保持期望的活性水平；以及(b)在所述預(yù)定壓力、pH和停留時間下對所述組合物進行壓力處理以防止可能存在于所述組合物中的不想要的生物體的生長，同時使所述至少一種生物活性組分至少保持在期望的活性水平。17.如權(quán)利要求1至16中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述不想要的生物體選自一種或多種細菌、一種或多種真菌、一種或多種霉菌、一種或多種酵母菌或一種或多種藻類或其混合物。18.處理益生組合物的方法，其包括(a)選擇包含一種或多種益生微生物菌林的組合物，所述益生微生物具有一種或多種益生因子，所述益生因子在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力下進行壓力處理后能夠至少保持在期望的活性水平；以及種或多種益生微生物菌株的生長:同時使一種或多種益生因子至少保持在期望的活性水平。19.如權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述不想要的生物體或所述益生微生物選自嗜酸乳酸桿菌CLfl"oZ)acz7/wsa"Wo//n7w51)、德、氏享L^干菌寸呆力口利亞種(丄a"o6fl"7/iwde/6n^cA:"st/Z^j!7.Zw/gan'cw51)、干路孝L^干菌(丄a"oZac/〃1^c<xse/)、巻曲享L^干菌(丄a"o6ac/〃usm.s/齒力、約氏乳桿菌(丄actoZacz,〃wsj'o/msom'0、植物乳桿菌(丄acfoZac/〃ms;/awton/m)、羅寸尹氏享L^干菌(丄actoZac/〃M51ret^en〕、鼠李#唐乳4干菌(丄a"o6(3"7/ws^amwost/"、？垂'液乳才干菌(丄a"oZ)acZ〃w515^//van.w51)、兩jt支又又A支#干菌(5zy^z'oZa"e〃.i/m6(/kw附)、4豆只又歧4干菌(5zyd/o6ac^n'm附Zreve)、嬰JL只又山支^干菌(5(/^/o6ac化n'wmz'w/aw"s)、動凈勿乂又jt支斥干菌亞種(Szyk^.o6a"en'i/mam'ma/z、si/Zw/./ac"s)、長只又山支4干菌(5z，oZfl"en',/owgwm)、或嗜熱鏈球菌(浙一ococciwAermop/n'/i/s)或其混合物。20.如權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述不想要的生物體或所述益生微生物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"o6acz7/^r/mmwosi^HN001)、動物雙歧桿菌亞種HN019(5zy^/oZa"en'w附am7wa"51si/fe;./ac"'sHN019)、p耆酉臾乳才干菌HN017(丄a"o6acz7/wsa"Wop/n7MsHN017)、鼠李糖乳軒菌HN067(丄a"o6acz'〃1^由,osm51HN067)、約氏乳桿菌NCC533(丄aCo6a"7/t^y'o/mscm〃NCC533)(Lal)、鼠李糖乳桿菌GG(丄ac化Z)acz7/MsWmmwost^GG)、養(yǎng)樂多代田菌(丄a"oZ^cz7/mca"ZS/^raM)、嗜酸乳桿菌NCFM(丄a"o6ac/〃w51鎖Wo/7Az7wsNCFM)、植物乳軒菌299v(Za"o6acz'〃ws299v)、干酪乳桿菌DN114001(丄a"o6鎖'〃wcase/DN114001)、唾液乳桿菌UCC4331^"van'^UCC4331)、動物雙歧軒菌亞種BB12(5zy^/o6"Cer/謹朋/附afc/ac"sBB12)、或嬰兒雙岐桿菌35624C8zy^o^cten'i/m/"/a""s35624)或其混合物。21.處理益生組合物的方法，其包括(a)選擇組合物，所述組合物包含一種或多種選自下列菌抹的益生微生物菌抹一種或多種嗜酸乳酸桿菌菌4朱(丄a"o6fld〃"saczWo/Az7t/51)、一種或多種鼠李糖乳桿菌菌才朱(丄acto6ac/〃wsr/zamwosM"、或一種或多種動物雙歧桿菌丄flcto亞種菌才朱(5zyfif/oZac化n'Mmam'ma/k^Z印./a"&)或其混合物，所述一種或多種益生樣史生物菌才朱具有一種或多種益生因子，所述益生因子在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力下進行壓力處理后能夠至少保持在期望的活性水平；以及種或多種益生微生物菌抹的生長，同時使一種或多種益生因子至少保持在期望的活性水平。22.如權(quán)利要求1至21中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述不想要的生物體或所述益生微生物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"o6ac/〃MSr/mmwoswHN001)、動物雙i支桿菌丄ac^亞種HN019(5zy^Z/oZa"en'M附am7wa/^si/Zw/./ac/z、HN019)、p耆酸專'L^干菌HN017(Za"ote/toMmHN017)、或鼠李糖乳桿菌HN067(丄a"o6ac/〃i/j1r/mmwoswsHN067)或其混合物。23.如權(quán)利要求1至22中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述不想要的生物體或所述益生微生物是鼠李糖乳桿菌HN001(丄actoZ)a"7/iz51r/amwosi/sHNOOl)。24.如權(quán)利要求18至21中任一權(quán)利要求所述的方法，其中使所述壓力維持約0分鐘、0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘、5分鐘、5.5分鐘、6分鐘、6.5分鐘、7分鐘、7.5分鐘、8分鐘、8.5分鐘、9分鐘、9.5分鐘或10分鐘。25.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約350MPa至850MPa。26.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約350MPa至800MPa。27.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約350MPa至750MPa。28.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約350MPa至700MPa。29.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約350MPa至650MPa。30.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約400MPa至800MPa。31.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約400MPa至700MPa。32.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約400MPa至600MPa。33.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約500MPa至800MPa。34.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約500MPa至700MPa。35.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約500MPa至600MPa。36.如權(quán)利要求1至24中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述壓力為約550MPa至650MPa。37.如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物的pH為約3.0至7.0。38.如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物的pH為約3.0至6.0。39.如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物的pH為約3.0至5.0。40.如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物的pH為約3.2至4.8。41.如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物的pH小于約4.6。42.如權(quán)利要求1至41中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述期望的活性水平至少為未處理對照的活性的約35%。43.如權(quán)利要求1至41中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述期望的活性水平至少為未處理對照的活性的約50%。44.如權(quán)利要求1至41中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述期望的活性水平至少為未處理對照的活性的約60%。45.如權(quán)利要求1至41中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述期望的活性水平至少為未處理對照的活性的約70%。46.如權(quán)利要求1至41中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述期望的活性水平至少為未處理對照的活性的約80%。47.如權(quán)利要求1至41中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述期望的活性水平至少為未處理對照的活性的約90%、95%、99%或100%。48.如權(quán)利要求1至47中任一權(quán)利要求所述的方法，其中使所述壓力維持約O分鐘、0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘、3分鐘、3.5分鐘、4分鐘、4.5分鐘或5分鐘。49.如權(quán)利要求1至47中任一權(quán)利要求所述的方法，其中使所述壓力維持約0分鐘、0.5分鐘、l分鐘、1.5分鐘、2分鐘、2.5分鐘或3分鐘。50.如權(quán)利要求1至47中任一權(quán)利要求所述的方法，其中使所述壓力維持約0分鐘。51.如權(quán)利要求1至50中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括對組合物進行壓力處理，然后將所述組合物加入到產(chǎn)品中。52.如權(quán)利要求1至50中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括將組合物加入到產(chǎn)品中，然后對所述產(chǎn)品進行壓力處理。53.如權(quán)利要求1至50中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括對組合物進行壓力處理，然后包裝所述組合物。54.如權(quán)利要求1至50中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述方法包括包裝組合物，然后對所述包裝后的組合物進行壓力處理。55.如權(quán)利要求1至54中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物還包含穩(wěn)定劑。56.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述穩(wěn)定劑選自槐豆膠、瓜爾膠、黃原膠、肉桂膠、魔芋粉、0葡聚糖、他拉膠、阿拉伯樹膠、結(jié)冷膠、羧曱基纖維素、曱基纖維素、羥丙基曱基纖維素、黃蓍膠、刺梧桐膠、阿拉伯樹膠、殼聚糖、ambinoglactins、藻酸鹽、果膠、角叉菜膠、或歐車前或其混合物。57.如權(quán)利要求1至56中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物還包含疏水性配體。58.如權(quán)利要求57所述的方法，其中所述疏水性配體選自十六酸、肉豆蔻酸、亞麻油酸、共軛亞油酸、一種或多種磷酯、一種或多種卵磷脂、一種或多種鞘磷脂、一種或多種神經(jīng)節(jié)苷酯、丁酸、一種或多種w-3脂肪酸、一種或多種植物甾醇、一種或多種植物甾醇酯、一種或多種植物甾醇乙酰化物、一種或多種co-6脂肪酸、維生素A、維生素D、番茄紅素、或十二烷基硫酸鈉或其混合物。59.如權(quán)利要求57或58所述的方法，其中所述組合物的pH為約5.0至8.0。60.如權(quán)利要求1至59中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物為飲料。61.如權(quán)利要求1至59中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物為酸化飲料。62.如權(quán)利要求1至59中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物為酸乳酪。63.如權(quán)利要求1至59中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述組合物為果凍。64.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述組分為一種或多種IgG，所述處理壓力為約350MPa至650MPa,所述pH為約3.0至5.0，以及所述停留時間為約O分鐘或1分鐘、2分鐘或3分鐘。65.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述組合物為初乳MPC,所述組分為IgG,所述處理壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。66.如—又利要求1所述的方法，其中所述組合物為初乳MPC，所述組分為IgG，所述處理壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0,以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。67.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述組合物為初乳脫脂奶粉，所述組分為IgG，所述處理壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0，以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。68.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物為初乳乳清，所述組分為IgG,所述處理壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。69.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物為初乳乳清UF滲余物，所述組分為IgG,所述處理壓力為約350MPa至650MPa,所述pH為約3.0至5.0,以及所述停留時間為約0分鐘、1分鐘、2分鐘或3分鐘。70.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物是超免疫乳、超免疫乳蛋白濃縮物或超免疫乳清蛋白濃縮物、超免疫初乳、超免疫初乳乳蛋白濃縮物或超免疫初乳乳清蛋白濃縮物，所述組分為IgA、IgG、IgM或乳4失蛋白，所述壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.2至5.5,以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。71.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組分為乳鐵蛋白，所述壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至7.5，以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。72.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組分為TGF-i81或TGF-/32,所述壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至8.0以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。73.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物為酸乳酪，所述組分為乳《失蛋白，所述壓力為約350MPa至500MPa,所述pH為約3.5至4.6以及所述停留時間為約0分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。74.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物為^t料，所述組分為IgG,所述壓力為約350MPa至650MPa,所述pH為約3.0至5.0以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。75.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物為果凍，所述組分為乳鐵蛋白，所述壓力為約350MPa至650MPa，所述pH為約3.0至5.0以及所述停留時間為約O分鐘、l分鐘、2分鐘或3分鐘。76.如權(quán)利要求1至75中任一權(quán)利要求所述的方法，其中在所述壓力處理后，所述組合物的需氧菌平板數(shù)小于或等于約50,000cfu/ml。77.根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法進行處理的組合物。78.如權(quán)利要求77所述的組合物，其為飲料、果凍或酸乳酪。79.如權(quán)利要求78所述的組合物，其為飲料。80.如權(quán)利要求78所述的組合物，其為果凍。81.如權(quán)利要求78所述的組合物，其為酸乳酪。82.根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法進行處理的益生菌組合物。83.包含一種或多種益生微生物的組合物，所述益生微生物選自一種或多種嗜酸乳桿菌菌4朱(a"o6ac/〃wsaczW印/n7ws)、一種或多種德氏享L^干菌j呆力口利亞種菌才朱(丄aCo6ac"/iwcfe/Zn/ech7■smZw/.5w/ga〃'cw51)、一種或多種干酪乳桿菌菌株(丄a"oZ^"7/1^cfl化z')、一種或多種巻曲乳桿菌菌4朱(丄a"oZ)acz7/iwcn^;^w力、一種或多種約氏乳桿菌菌才朱(丄a"o6ac/〃w5170/msom7)、一種或多種才直物乳4干菌菌才朱(Z^c/oZjacz7/^p/aw&n/m)、一種或多種羅j尹氏乳桿菌菌才朱(丄a"o6flcz'〃1/51rei/ten')、一種或多種鼠李糖乳桿菌菌才朱(丄a"oZ)flc/〃wsWmmnow力、一種或多種唾液乳桿菌菌株(丄a"oZ)"cz'〃ws^"van'iw)、一種或多種兩歧雙歧桿菌菌才朱(5zy^oZa"en'wm、一種或多種短雙歧桿菌菌才朱(^y^oZ^"en'"m&eve)、一種或多種嬰兒雙岐桿菌菌抹(5(/^oZ)a"en'wm/"/awto)、一種或多種動物雙ot支桿菌亞種菌才朱Cffzyk^'oZ)ac化〃'wmam7wafeswZw;.丄ac"力、一種或多種長雙岐桿菌菌牙朱(5zy^/o6aCen.i/w/owgwm)、或一種或多種嗜熱鏈J求菌菌才朱(5^e;7tococcwsAe/7nop/H7M"或其混合物，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。84.基本上由一種或多種益生微生物組成的組合物，所述益生微生物選自一種或多種嗜酸乳桿菌菌林0"oZ^"7/mfl"V/o;/^7w力、一種或多種德氏乳桿菌保力口利亞種菌才朱(丄actoZ)acz7/1^de/6n^ch7s"Zw/7.5w/g"nfcM)、一種或多種干酪乳桿菌菌才朱(Z""oZ"c/〃wjcffi^)、一種或多種巻曲乳桿菌菌株(丄a"oZjacz7/1^cn'^a^s)、一種或多種約氏乳桿菌菌才朱(丄a"oZ)flC/〃W51乂oA/wow")、一種或多種植物乳桿菌菌才朱(丄a"oZ)acz7/i/s//朋^zram)、一種或多種羅4尹氏享L桿菌菌才朱(丄a"o6ac/〃wi1rei/化n〕、一種或多種鼠李jf唐乳桿菌菌才朱(丄aCo6acz7/iwr/mmwosi/力、一種或多種唾液乳桿菌菌株(丄a"o6ad〃ws^//van'M力、一種或多種兩歧雙歧桿菌菌株C8(/^/o^c&n'wm^y^/i/m)、一種或多種短雙歧桿菌菌株(5z/^/o^"en'Mw6reve)、一種或多種嬰兒雙岐桿菌菌才朱C8zyMo6a"en'MWz'"/aw"51)、一種或多種動物雙歧桿菌亞種菌才朱(5zyJ/o6a"en'wmam'ma/^swfe;.丄ac"力、一種或多種長雙岐桿菌菌才朱(5zydo6a"en."w/owgw附)、或一種或多種嗜熱鏈球菌菌才朱(5^e/^ococciwAerm印/n7i^)或其混合物，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。85.包含一種或多種益生微生物的組合物，所述益生微生物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"oZjacz7/i^r/^mwoswHN001)、動物雙歧桿菌丄ac"s種HN019(^i/(^oZac^n'i/mawzVwa/z'ssmZw/./ac"sHN019)、口者酸乳桿菌HN017(丄a"o6ac/〃M;sa"Wop/n7^HN017)、或鼠李糖乳桿菌HN067(Za"oZ)ac/〃1^Aam"asi^HN067)或其混合物，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。86.基本上由一種或多種益生微生物組成的組合物，所述益生微生物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"o6acz7/MsWwm"osi^HN001)、動物只又歧才干菌亞種HN019(5z/JZoZ)acZen'Mmaw/m"/^sw651/7./ac^sHN019)、嗜酸乳桿菌HN017(丄a"o6a"7/1^aczW叩/n7^HN017)、或鼠李糖乳桿菌HN067(丄a"o6a"7/1^Aam"oswsHN067)或其混合物，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。87.組合物，其包含乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種生長因子、TGF/31、或TGFj82或其混合物，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76的任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。88.組合物，其基本上由乳鐵蛋白、溶菌酶、一種或多種IgA、一種或多種IgD、一種或多種IgE、一種或多種IgG、一種或多種IgM、一種或多種生長因子、TGF/31、或TGF/32或其混合物組成，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。89.組合物，其包含乳鐵蛋白、一種或多種IgA、一種或多種IgG、一種或多種IgM、TGF|81或TGF;32或其混合物，并且才艮據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。90.組合物，其基本上由乳鐵蛋白、一種或多種IgA、一種或多種IgG、一種或多種IgM、TGF/31或TGF/32或其混合物組成，并且根據(jù)權(quán)利要求1至76中任一權(quán)利要求所述的方法對所述組合物進行處理。91.權(quán)利要求77至90中任一權(quán)利要求所述的組合物在制備食品、飲料、食品添加劑、飲料添加劑、膳食補充劑、營養(yǎng)品、醫(yī)療食品、營養(yǎng)藥品、藥劑或藥物中的用途。92.權(quán)利要求77至90中任一權(quán)利要求所述的組合物在制備用于治療有需要的個體的食品、飲料、食品添加劑、飲料添加劑、膳食補充劑、營養(yǎng)品、醫(yī)療食品、營養(yǎng)藥品、藥劑或藥物中的用途。93.權(quán)利要求77至90中任一權(quán)利要求所述的組合物在制備用于刺激有需要的個體的免疫系統(tǒng)的食品、飲料、食品添加劑、飲料添加劑、膳食補充劑、營養(yǎng)品、醫(yī)療食品、營養(yǎng)藥品、藥劑或藥物中的用途。94.刺激有需要的個體的免疫系統(tǒng)的方法，其包括將權(quán)利要求77至90中任一權(quán)利要求所述的組合物給予所述個體。95.壓力處理的組合物，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。96.壓力處理的果凍，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。97.壓力處理的酸乳酪，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。98.壓力處理的々欠料，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。99.壓力處理的組合物，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。100.壓力處理的果凍，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。101.壓力處理的酸乳酪，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的微生物。102.壓力處理的飲料，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的乳鐵蛋白和小于約50,000cfu/ml的樣i生物。103.壓力處理的組合物，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物。104.壓力處理的果凍，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物。105.壓力處理的酸乳酪，其包含約O.lmg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的微生物。106.壓力處理的々大料，其包含約0.1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的纟敖生物。107.壓力處理的組合物，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的樣史生物。108.壓力處理的果凍，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的樣￡生物。109.壓力處理的酸乳酪，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的《效生物。110.壓力處理的飲料，其包含約1mg/ml至1000mg/ml的IgG和小于約50,000cfu/ml的孩i生物。111.壓力處理的組合物，其包含一種或多種非存活的益生微生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物。112.壓力處理的組合物，其包含一種或多種非存活的益生微生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfU/ml的-微生物，所述非存活的益生纟敖生物培養(yǎng)物選自一種或多種嗜酸乳桿菌菌抹(a"oZjac〃/wsaczW叩/n7w"、一種或多種德氏乳桿菌寸呆力口利亞種菌才朱(丄a"oZacz7/iwcfe/Z)n/ecA:"^Zw;.5w/gan'ciw)、一種或多種干酪乳桿菌菌才朱(丄a"o6ac"/wowez〕、一種或多種巻曲乳桿菌菌抹(Za"oZw"7/wscn^Ww勻、一種或多種約氏乳桿菌菌才朱(丄a"o6acz7/1^yoAwsom7)、一種或多種才直物享L桿菌菌才朱(丄a"oZac/〃1^//awtonwz)、一種或多種羅4尹氏乳桿菌菌才朱(丄ac《o6acz7/Ms/^M化n〕、一種或多種鼠李并唐乳才亍菌菌才朱(丄a"oZ^d〃W51r/wwwosM力、一種或多種唾液乳桿菌菌抹(Z^"o^"7/m^//rar/w力、一種或多種兩歧雙歧桿菌菌抹(5(/^'o^"en'wm^y^/wm)、一種或多種短雙歧桿菌菌抹(^y^/o6a"en'Mm6"ve)、一種或多種嬰兒雙岐桿菌菌林(5zykfoZac化n'Mmz'"/a"""、一種或多種動物雙歧桿菌亞種菌林(^y^/oZ^"e/7'ww"w/附"fewZw/.丄""/力、一種或多種長雙山支才干菌菌才朱CS(/ko6a"eWi/m/owgw附)、或一種或多種嗜熱鏈球菌菌才朱(5^印^coco/51/^附o//n7—或其混合物。113.壓力處理的組合物，其包含一種或多種非存活的益生微生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物，所述非存活的益生微生物培養(yǎng)物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄ac"^c〃/MWam"osMSHN001)、動物只又歧牙干菌丄ac"s亞種HN019(5i[/dz'oZ)ac^en.i/mawz.ma/z'ssi/6s/./ac"sHN019)、嗜酸乳桿菌HN017(丄a"o6a"7/iwac^o//n7wHN017)、鼠李糖乳桿菌H畫7(丄a"由"7to由m"o愿H廳7)、約氏乳桿菌NCC533(丄a"o6ac"/wsj'o/mso""NCC533)(Lal)、鼠李糖乳^f菌GG(丄acfo6a".〃M51rAamwosi/sGG)、養(yǎng)樂多代田菌(Za"o6ac7'〃^S//ra&)、嗜酸乳桿菌NCFM(丄fl"o6a"-〃i/sa"Wo;/n7iwNCFM)、植物乳桿菌299v(丄a"oZac"/ws;/朋ton/m299v)、干酪乳桿菌DN114001禱dDN114001)、唾液乳桿菌UCC4331(丄a"ote〃/ws■sa/h^n'iwUCC4331)、動物雙歧4干菌亞種BB12(5(/kf/oZ)a"en'Mmam'ma/z'sswZwp./ac"sBB12)、或嬰JL，又山支4干菌35624(5(/ko6ac化n'ww/"/a她35624)或其混合物。114.壓力處理的組合物，其包含一種或多種非存活的益生微生物培養(yǎng)物和小于約50,000cfu/ml的微生物，所述非存活的益生微生物培養(yǎng)物選自鼠李糖乳桿菌HN001(丄a"oZ^c"/wsAcwmosi^HN001)、動物又又歧才干菌丄ac^s亞種HN019(5zyc//oZjacten'w2aw/ma/^swZs/./ac"sHN019)、嗜酸乳桿菌HN017CLa"o^"7/i^aczV/o;/n7wsHN017)、或鼠李#唐乳桿菌HN067(Za"o6fl"'〃1^Wmwwoy^HN067)或其混合物。115.壓力處理的組合物，其包含非存活的鼠李糖乳桿菌HN001(丄fl"o6ac/〃MAamwaswsHN001)和小于約50,000cfu/ml的孩i生物。116.如權(quán)利要求95至115中任一權(quán)利要求所述的組合物，在約350MPa至850MPa的壓力下對其進4亍壓力處理。117.如權(quán)利要求95至115中任一權(quán)利要求所述的組合物，其pH為約3.0至8.0。118.如權(quán)利要求95至115中任一權(quán)利要求所述的組合物，其中所述乳鐵蛋白、IgG或非存活的益生微生物所保持的活性至少是未處理對照的約35%。119.如權(quán)利要求95至115中任一權(quán)利要求所述的組合物，其中所述乳鐵蛋白、IgG或非存活的益生微生物所保持的活性至少是未處理對照的約70%。全文摘要本發(fā)明涉及壓力處理包含至少一種生物活性組分的生物活性組合物，以防止至少一種不想要的微生物的生長，同時使至少一種生物活性組分保持在期望的活性水平的方法。所述生物活性組分選自一種或多種蛋白或蛋白水解物、一種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)水解物、一種或多種碳水化合物、一種或多種益生因子或其混合物。壓力處理是在約350MPa至1000MPa的預(yù)定壓力下進行。文檔編號A23L3/015GK101170918SQ200680015799公開日2008年4月30日申請日期2006年3月8日優(yōu)先權(quán)日2005年3月8日發(fā)明者哈斯穆克·安巴拉爾·帕特爾,米格爾·亞歷杭德羅·岡薩雷斯-馬丁,蒂莫西·約瑟夫·卡羅爾,詹姆士·威廉·德克爾,邁克爾·安東尼·科利特,馬克·威廉·柳伯斯申請人:方塔拉合作集團有限公司