專利名稱：基于固定化細(xì)胞技術(shù)的菌種保藏方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用固定化細(xì)胞載體保藏生產(chǎn)菌種的方法。
技術(shù)背景 通常情況下，微生物很容易發(fā)生變異，其變異的速度與細(xì)胞新陳 代謝的速度有關(guān)， 一般當(dāng)微生物代謝旺盛時(shí)，菌種的變異速度就快；反之，代 謝活動(dòng)微弱，變異速度就慢。因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于 最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持其 活性。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，保藏方法 大致可分為以下幾種傳代保存法、液體石蠟保存法、載體保存法、懸液保存 法、冷凍保存法及冷凍干燥保藏法等，以上各種保藏方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。
在實(shí)際生產(chǎn)中，比較現(xiàn)實(shí)的做法是通過傳代進(jìn)行菌種的保藏，但這種方法 耗時(shí)，而且耗材多
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種基于固定化細(xì)胞技術(shù)的菌種保藏方法。 本發(fā)明包括下列步驟
a) 、混合將待保藏的菌種制成懸浮液，按照l:9的重量比加入到90mL上 述聚乙烯醇復(fù)合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入不銹鋼鋼盤中；
b) 、冷凍、切塊 在-2(TC下冷凍處理48h，成型后取出切成立方塊，外 形尺寸為4cmX4cmX4cm;
c) 、包埋菌種經(jīng)真空包裝后，保存溫度0 26"C。
本發(fā)明利用固定化載體將菌懸液固定后可在常溫條件下保藏，具有成本低 廉、操作方便、保藏時(shí)間比較靈活等優(yōu)點(diǎn)，適合于生產(chǎn)企業(yè)對(duì)生產(chǎn)用菌種的臨 時(shí)保藏。本發(fā)明方法特別適用于抗凍力強(qiáng)的微生物，這些微生物可在其菌體細(xì) 胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷。
具體實(shí)施方式
下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，
但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1
固定化細(xì)胞的載體——聚乙烯醇(PVA)復(fù)合凝膠的合成方法如下將9 克聚乙烯醇緩慢溶解到100毫升85。C 95。C的熱水中，邊加邊攪拌，待聚乙烯 醇完全溶解后，加入4毫升的丙三醇，攪拌均勻，然后在不斷攪拌的同時(shí)加入 已溶解好的1克的硼砂(用1:1的熱水溶解)，邊加邊攪拌，進(jìn)行凝膠化處理， 交聯(lián)時(shí)間為2 15分鐘，然后緩慢地加入1克的順丁烯二酸酐(用1:1的熱水溶解)，不斷攪拌，直至凝膠溶液中無絮狀凝固物為止，所得透明、略帶乳白色的 粘稠溶膠，即為聚乙烯醇復(fù)合凝膠。
然后將待保藏的菌種(如釀酒酵母)制成懸浮液，按照1:9的重量比加入 到90mL上述復(fù)合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入不銹鋼鋼盤中，在-2(TC下冷凍 處理48h,成型后取出切成立方塊，外形尺寸為4cmX4cmX4cm。而后用PVC 塑料袋真空包裝，于室溫下保藏3個(gè)月后檢測(cè)細(xì)胞活性和進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)。結(jié)果 顯示經(jīng)活化后增殖酵母細(xì)胞數(shù)為0. 9億個(gè)/mL，酒精產(chǎn)率為18.70% (v/v)。 實(shí)施例2
重復(fù)實(shí)施例l，有以下不同點(diǎn)包埋有菌種的載體經(jīng)PVC塑料袋真空包裝后 于0 4'C進(jìn)行保藏，1年后檢測(cè)細(xì)胞活性和進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)。結(jié)果顯示細(xì)胞數(shù) 為1. 02億個(gè)/mL，酒精產(chǎn)率為16. 90%(v/v)。
權(quán)利要求
1、 一種基于固定化細(xì)胞技術(shù)的菌種保藏方法，其特征在于它包括下列步驟a) 、混合將待保藏的菌種制成懸浮液，按照l:9的重量比加入到90mL上 述聚乙烯醇復(fù)合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入不銹鋼鋼盤中；b) 、冷凍、切塊 在-2(TC下冷凍處理48h，成型后取出切成立方塊，外 形尺寸為4cmX4cmX4cm;c) 、包埋菌種經(jīng)真空包裝后，保存溫度0 26'C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于固定化細(xì)胞技術(shù)的菌種保藏方法。它包括下列步驟a)混合，將待保藏的菌種制成懸浮液，按照1∶9的重量比加入到90mL上述聚乙烯醇復(fù)合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入不銹鋼鋼盤中；b)冷凍、切塊，在-20℃下冷凍處理48h，成型后取出切成立方塊，外形尺寸為4cm×4cm×4cm；c)包埋菌種經(jīng)真空包裝后，保存溫度0～26℃。本發(fā)明具有成本低廉、操作方便、保藏時(shí)間比較靈活等優(yōu)點(diǎn)，適合于生產(chǎn)企業(yè)對(duì)生產(chǎn)用菌種的臨時(shí)保藏。
文檔編號(hào)C12N11/04GK101311264SQ200710018010
公開日2008年11月26日 申請(qǐng)日期2007年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月25日
發(fā)明者周劍平, 暉 楊, 王治業(yè), 魏甲乾 申請(qǐng)人:周劍平