專利名稱：一種提高煙葉質(zhì)量的生物菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高煙葉質(zhì)量的生物菌劑，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
煙葉糖含量偏高、鉀含量偏低是影響云南煙葉質(zhì)量的主要原因之一。降低煙葉糖含 量、增加鉀含量是煙草科學(xué)研究中最受關(guān)注的領(lǐng)域之一。煙葉糖含量除受遺傳因素、生 態(tài)因素影響外，應(yīng)用特殊的施肥(施銨態(tài)氮肥、施充足的磷鉀肥)、烘烤調(diào)制(提高濕 度)技術(shù)是降低煙葉糖含量的主要途徑；增施鉀肥是提高煙葉含鉀量的主要途徑。
隨著人們對(duì)吸煙與健康問(wèn)題的廣泛關(guān)注及減少公害、保護(hù)環(huán)境運(yùn)動(dòng)的興起，煙草業(yè) 如何在既能滿足消費(fèi)者的需求，又能減少公害、保護(hù)環(huán)境上面臨嚴(yán)重挑戰(zhàn)。目前，提高 煙葉質(zhì)量，必須適當(dāng)降低煙葉糖含量、增加含鉀量。研究丌發(fā)具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的微生 物技術(shù)來(lái)提高煙葉鉀含量、適當(dāng)降低糖含量，從而提高煙葉質(zhì)量，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義 和廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供一種能提高煙葉質(zhì)量生物菌劑，為生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)煙葉提供技 術(shù)支持。
本發(fā)明采用的真菌是臭曲霉J^wg/Z/^/oe//^^ G01菌株，保藏單位中國(guó)微生物 菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；地址中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路l號(hào)院；保 藏日期2009年1月8日；保藏登記入冊(cè)的編號(hào)CGMCCN0.2851。
G01菌株屬于土壤真菌，系本發(fā)明人從大量土壤細(xì)菌菌株中篩選出來(lái)的，具有顯著 提高煙葉質(zhì)量的能力，經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ACCC) 進(jìn)行鑒定，G01菌株為臭曲霉y^/ erg/〃iw /oe/Wus 。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的G01菌株的試管種子培養(yǎng)，搖床擴(kuò)大培養(yǎng)制備為生物制劑， 將制劑應(yīng)用于大田植煙土壤中，煙葉成熟調(diào)制后測(cè)定煙葉含鉀量。
本發(fā)明細(xì)菌G01菌株的培養(yǎng)方法(以下為重量百分比)
1、試管種子培養(yǎng)
試管斜面培養(yǎng)基配方為葡萄糖1%、蛋白胨0.5°/。、 KH2P04 1%、 MgS04.7H200.5%、瓊脂2%、氯霉素0.1%、虎紅鈉鹽0.03%， pH7.0。
將G01菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基上，3(TC恒溫培養(yǎng)2天，獲得試管種子。 2、液體發(fā)酵培養(yǎng)
液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.7 1%、蛋白胨0.3 0.5%、 KH2P04 0.5~1%、 MgS04.7H20 0.5%、氯霉素0.1%、虎紅鈉鹽0.03%， pH7.0。
將試管種接種子到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，于30 32。C搖床培 養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3 5天，轉(zhuǎn)速為150-200 r/min，培養(yǎng)液下?lián)u床后用稀釋平板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌 懸液濃度，菌濃度為每ml活菌數(shù)^107。即得具有提高煙葉含鉀量功能的生物制劑。
本發(fā)明生物制劑提高煙葉含鉀量功能試驗(yàn)
1、 制備生物制劑按前述GOl菌株的培養(yǎng)方法制備試驗(yàn)用制劑；以未接種G01菌 株的液體培養(yǎng)基處理作為對(duì)照。
2、 生物制劑對(duì)煙草處理方法
烤煙K326品種(純氮施用量7克/株，N:P205:K20=1:1:3)，煙苗大田移栽后15天， 將供試菌劑每株澆施100毫升，其余按優(yōu)質(zhì)煙生產(chǎn)技術(shù)常規(guī)管理，煙葉成熟后分葉位采 摘按常規(guī)烘烤調(diào)制。
3、 煙葉鉀含量測(cè)定方法
總糖和還原糖按《煙草及煙草制品水溶性糖的測(cè)定連續(xù)流動(dòng)法》YC/T 159-2002 方法測(cè)定?？偺?還原糖)含量降低百分率的計(jì)算方法為
總糖(還原糖)含量降低百分率％=(對(duì)照處理煙葉糖含量-制劑處理煙葉糖含量) /對(duì)照處理煙葉糖含量xl00
煙葉鉀含量按《煙草及煙草制品鉀的測(cè)定火焰光度法》YC/T173 2003方法測(cè)定。 煙葉鉀含量提高百分率的計(jì)算方法為
鉀含量提高百分率％=(制劑處理煙葉鉀含量-對(duì)照處理煙葉鉀含量)/對(duì)照處理煙葉 鉀含量x100
4、 試驗(yàn)結(jié)果
表1生物制劑處理煙葉糖和鉀含量測(cè)定結(jié)果
葉位處理總糖 (%)還原糖 (%)總氮 (%)煙堿 (%)磷 (%)鉀 (%)總糖降低 百分率 %還原糖降 低百分率 %鉀提高 百分率％
G01菌株 對(duì)照14.68 20.24U.35 15.592.53 2.151.54 1.490.217 0.1864.73 4.4227.4725.917.01
10G01菌株 對(duì)照24.29 31.1721.35 26.802.25 1.951.98 1.670.209 0.1794.40 3.6622.0720.3420.22
14G01菌株 對(duì)照31.84 35.1825.99 28.142.19 1.931.91 2.070.2U 0.1973.39 2.749.497.6423.72
4葉位從煙株第一片腳葉往上計(jì)數(shù)編號(hào)。注數(shù)據(jù)由云南省煙草科學(xué)研究所分析測(cè)試中心分析。
結(jié)果表明，生物制劑處理的第5、 10、 14葉位煙葉總糖含量分別比對(duì)照降低27.47%、 22.07%、 9.49%，還原糖含量分別比對(duì)照降低25.91%、 20.34%、 7.64%，鉀含量分別比 對(duì)照提高7.01%、 20.22%、 23.72 %，表明本發(fā)明生物制劑具有降低煙葉糖含量、提高煙 葉鉀含量，從而提高煙葉質(zhì)量。
本發(fā)明的生物制劑具有降低煙葉糖含量、提高煙葉鉀含量，從而提高煙葉質(zhì)量的優(yōu) 點(diǎn)，能廣泛應(yīng)用于煙葉的種植。
具體實(shí)施例方式
下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳述本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。 實(shí)施例h
將Apergi/to/oefWw G01菌株接種到試管瓊脂斜面上，培養(yǎng)基配方為葡萄糖1%、 蛋白胨0.5%、KH2PO4 l%、MgS04.7H20 0.5%、瓊脂2%、氯霉素0.1%、虎紅鈉鹽0.03%、 pH7.0， 3(TC培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)2天，獲得試管種。
將試管種接種到500ml三角瓶(每瓶裝200ml)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方為葡
萄糖1%、蛋白胨0.5%、KH2PO4 l%、MgS04.7H20 0.5%、氯霉素0.1%、虎紅鈉鹽0.03% ， pH7.0。將接好種的三角瓶于3(TC下?lián)u床(轉(zhuǎn)速為150r/min)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3天，待 菌濃度為達(dá)到每ml活菌數(shù)^10、寸、，即得具有提高煙葉質(zhì)量功能的生物制劑。將該生物 菌劑按每株100毫升澆施煙葉，能夠降低煙葉糖含量、提高煙葉鉀含量，從而提高煙葉 質(zhì)量。
實(shí)施例2:
基本同實(shí)施例一，不同之處在于液體培養(yǎng)基配方，其配方為葡萄糖0.7%、蛋白
胨0.3%、 KH2P04 0.5%。將接好種的三角瓶于32。C下?lián)u床(轉(zhuǎn)速為200 r/min)培養(yǎng)， 培養(yǎng)時(shí)間5天。
實(shí)施例3:
基本同實(shí)施例一，不同之處在于液體培養(yǎng)基配方，其配方為葡萄糖0.8%、蛋白
月東0.4%、 KH2P04 0.8%。將接好種的三角瓶于3rC下?lián)u床(轉(zhuǎn)速為180 r/min)培養(yǎng)， 培養(yǎng)時(shí)間4天。
權(quán)利要求
1、一種提高煙葉質(zhì)量的生物菌劑，其特征在于該生物菌劑由生產(chǎn)菌株經(jīng)試管種子培養(yǎng)、搖床擴(kuò)大培養(yǎng)工序制備，其特征在于a. 生產(chǎn)菌株為臭曲霉(Aspergillus foetidus)G01，CGMCC N0.2851；b. 試管種子培養(yǎng)將G01菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為葡萄糖1％、蛋白胨0.5％、KH2PO4 1％、MgSO4.7H2O 0.5％、瓊脂2％、氯霉素0.1％、虎紅鈉鹽0.03％，pH 7.0，配方的比例為重量百分比，30℃恒溫培養(yǎng)2天，獲得試管種子；c. 搖床擴(kuò)大培養(yǎng)將試管種子接種到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.7～1％、蛋白胨0.3～0.5％、KH2PO4 0.5～1％、MgSO4·7H2O0.5％、氯霉素0.1％、虎紅鈉鹽0.03％、pH7.0，配方的比例為重量百分比，于30～32℃搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3～5天，轉(zhuǎn)速為150～200rpm，當(dāng)菌濃度為每ml活菌數(shù)≥107得到生物制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高煙葉質(zhì)量的生物菌劑，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。該生物菌劑由如下工序制備a.生產(chǎn)菌株為臭曲霉(Aspergillus foetidus)G01，CGMCC N0.2851；b.將G01菌株接種到試管斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方為葡萄糖1％、蛋白胨0.5％、KH₂PO₄ 1％、MgSO₄·7H₂O 0.5％、瓊脂2％、氯霉素0.1％、虎紅鈉鹽0.03％、pH 7.0，30℃恒溫培養(yǎng)2天，獲得試管種子；c.將試管種子接種到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.7～1％、蛋白胨0.3～0.5％、KH₂PO₄ 0.5～1％、MgSO₄·7H₂O0.5％、氯霉素0.1％、虎紅鈉鹽0.03％、pH 7.0，于30～32℃搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間3～5天，轉(zhuǎn)速為150～200r/min，當(dāng)菌濃度為每ml活菌數(shù)≥10⁷得到液體生物制劑。本發(fā)明的生物制劑具有能降低煙葉糖含量、提高鉀含量，從而提高煙葉質(zhì)量的優(yōu)點(diǎn)，能廣泛應(yīng)用于煙葉的種植。
文檔編號(hào)C12R1/66GK101497864SQ200910094138
公開(kāi)日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2009年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月27日
發(fā)明者張樹(shù)鐸, 艷 晉, 李梅云, 高家合 申請(qǐng)人:云南省煙草科學(xué)研究所