專利名稱：一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種多糖提取工藝，尤其是一種從灰樹花子實體中提取多糖的方法。
背景技術：
灰樹花(Fructificatio Polypori Frondosi)，別名栗蘑、佛菌、蓮花菌，為擔子菌亞門層菌綱多孔菌目多孔菌科的一種大型真菌。子實體覆瓦狀叢生，菌蓋扇形或匙形，表面灰褐色，較光滑，孔面白色至淡黃色，密生延生的菌管，管口近圓形至多角形。體輕，質脆，斷面類白色，不平坦。氣腥，味微甘。營養(yǎng)價值及其豐富，富含大量蛋白、脂肪、粗纖維、碳水化合物及多種有益礦物質、維生素，被譽為"真菌之王，抗癌奇葩"?；覙浠ǘ嗵蔷哂锌鼓[瘤、增強免疫力、抗病毒、抗脂肪肝和高血脂等，其抗腫瘤抑制率可達86.5%，比國際認證的抗癌新藥"香燕多糖"抑制率高32 % 。 目前，灰樹花提取多糖，一般原料采用灰樹花子實體、菌絲或發(fā)酵液。中國專利CN1110566C采用斜面菌種進行一、二和三級種子培養(yǎng)，再進行發(fā)酵培養(yǎng)，將發(fā)酵液加熱、攪拌，經泵壓將發(fā)酵液放入料槽中經板框壓濾得到灰樹花多糖，該方法降低了成本，但蛋白質含量較高，得到的是粗多糖，含量較低。中國專利CN1322141C公開了一種酶解制備灰樹花多糖的方法，向發(fā)酵液中加入纖維素酶、P _葡聚糖酶、果膠酶及中性蛋白酶，酶解后經滅酶、過濾、濃縮、醇沉分離等步驟得到灰樹花多糖，但該法專業(yè)要求較高，不宜用于大規(guī)模的工業(yè)應用。史寶軍發(fā)表的"堿提灰樹花多糖的分離純化及其性質研究"，采用水提多次后堿提，酸中和離心多次，醇沉，沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，&02除色素，Sevag法除蛋白，透析3天再醇沉干燥，提取時間長，有機溶劑用量大，且除蛋白中所用三氯甲烷有致癌毒性，不宜用于食品、藥品和保健品等領域。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為了提供一種成本低，能源消耗少，純度高，保持原有活性，易于
實現工業(yè)化的多糖提取工藝。 本發(fā)明所提出的制備方法如下 1)超聲水提將灰樹花原料粉碎，加15-20倍量水室溫動態(tài)浸泡2-3小時，超聲提取2-3次，過濾，合并提取液； 2)除蛋白上述提取液加酸調pH，加入木瓜蛋白酶攪拌酶解，酶控反應結束后升溫滅酶5分鐘； 3)脫色上述酶解液加活性炭脫色，收集脫色液； 4)膜濃縮上述脫色液先通過超濾膜系統(tǒng)截留大分子物質，透過液再用納濾膜濃縮得濃縮液； 5)醇沉上述濃縮液加入3_5倍量95%乙醇，沉淀析出后離心，棄去上清液，用無
水乙醇洗滌沉淀2-4次，減壓濃縮至無醇，干燥即得產品。所述的水提條件每次超聲15-45分鐘，超聲功率200-500W。
所述調pH所用酸可選用乙酸、磷酸或鹽酸。 所述的木瓜蛋白酶酶底比為1. 2%，反應溫度6(TC，攪拌速度30-50r/min，酶控反應時間1-3小時；滅酶溫度90-100°C。 所述的活性炭為301或303活性炭，加入量為酶解液量的1_2%，脫色時間1_2小時。 所述的超濾膜為截留分子量為1000-3000的超濾膜；所述的納濾膜為HNF-4040系列納濾膜或ESNA系列納濾膜。納濾膜可截留分子量較大的多糖分子，除去小分子雜質，溶劑分離達到濃縮的目的，同時在一定程度上縮短了生產周期。 綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點超聲提取提率高且用時短，木瓜蛋白酶酶解除蛋白用量小、安全無毒，并能保持多糖活性；膜濃縮處理條件溫和，后處理后可重復利用。
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式
下述實施例中灰樹花多糖的檢測采用苯酚-硫酸法(參照宋玉良等"灰樹花中多
糖含量的測定"文獻)。
實施例1 : 將灰樹花子實體粉碎，取100g加1. 5L水，室溫動態(tài)浸泡3小時后超聲提取20分鐘(超聲功率為260W)，提取3次，合并得4L提取液，加5%鹽酸調pH至5. 5，加入48g木瓜蛋白酶，55t:下保溫，以50轉/分攪拌酶解2小時，反應結束后升溫到9(TC滅酶5分鐘，加入53g活性炭脫色1小時，將脫色液先通過截留分子量3000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除去大分子雜質，再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮，濃縮液加入4倍量95%乙醇，沉淀析出后開始離心，棄去上清液，再用無水乙醇洗滌沉淀3次，揮干乙醇，冷凍干燥，最終得到15. 5g含量為98.6%的多糖。
實施例2: 將灰樹花子實體粉碎，取200g加3. 6L水，室溫動態(tài)浸泡2小時后超聲提取38分鐘(超聲功率360W)，提取2次，合并得7L提取液，加乙酸調pH至5，加入84g木瓜蛋白酶，6(TC下保溫，以40轉/分攪拌酶解1. 5小時，反應結束后升溫到IO(TC滅酶5分鐘，加入90g活性炭脫色2小時，將脫色液先通過截留分子量2000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除去大分子雜質，再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮，濃縮液加入3倍量95%乙醇，沉淀析出后開始離心，棄去上清液，再用無水乙醇洗滌沉淀2次，揮干乙醇，減壓真空干燥，最終得到32g含量為98%的多糖。
實施例3 : 將灰樹花子實體粉碎，取500g加10L水，室溫動態(tài)浸泡2. 5小時后超聲提取40分鐘(超聲功率450W)，提取3次，合并得28L提取液，加1 %鹽酸調pH至6，加入336g木瓜蛋白酶，6(TC下保溫，以35轉/分攪拌酶解3小時，反應結束后升溫到9(TC滅酶5分鐘，加入360g活性炭脫色1. 5小時，將脫色液先通過截留分子量1000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除去大分子雜質，再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮，濃縮液加入5倍量95%乙醇，沉淀析出后開始離心，棄去上清液，再用無水乙醇洗滌沉淀3次，揮干乙醇，冷凍干燥，最終得到83g含量為98.3%的多糖。
實施例4 : 將灰樹花子實體粉碎，取lkg加17L水，室溫動態(tài)浸泡2. 5小時后超聲提取25分 鐘(超聲功率230W)，提取2次，合并得32L提取液，加0. 5%磷酸調pH至5. 5，加入384g木 瓜蛋白酶，6(TC下保溫，以30轉/分攪拌酶解2小時，反應結束后升溫到95t:滅酶5分鐘， 加入410g活性炭脫色2小時，將脫色液先通過截留分子量3000的中空纖維超濾膜系統(tǒng)除 去大分子雜質，再用截留分子量100的納濾膜系統(tǒng)濃縮，濃縮液加入4倍量95%乙醇，沉淀 析出后開始離心，棄去上清液，再用無水乙醇洗滌沉淀2次，揮干乙醇，減壓干燥，最終得到 169g含量為98.6%的多糖。
權利要求
一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝，其特征在于由以下步驟組成(1)超聲水提將灰樹花原料粉碎，加15-20倍量水室溫動態(tài)浸泡2-3小時，超聲提取2-3次，過濾，合并提取液；(2)除蛋白上述提取液加酸調pH，加入木瓜蛋白酶攪拌酶解，酶控反應結束后升溫滅酶5分鐘；(3)脫色上述酶解液加活性炭脫色，收集脫色液；(4)膜濃縮上述脫色液先通過超濾膜系統(tǒng)截留大分子物質，透過液再用納濾膜濃縮得濃縮液；(5)醇沉上述濃縮液加入3-5倍量95％乙醇，沉淀析出后離心，棄去上清液，用無水乙醇洗滌沉淀2-4次，減壓濃縮至無醇，干燥即得產品。
2. 根據權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝，其特征在于所述的水提條件每次超聲15-45分鐘，超聲功率200-500W。
3. 根據權利要求l所述提取灰樹花水溶性多糖工藝，其特征是所述調pH所用酸可選用乙酸、磷酸或鹽酸。
4. 根據權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝，其特征在于所述的木瓜蛋白酶酶底比為1.2X，反應溫度6(TC，攪拌速度30-50r/min，酶控反應時間1_3小時，；滅酶溫度90-100°C。
5. 根據權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝，其特征在于所述的活性炭為食品工業(yè)類301或303活性炭，加入量為酶解液量的1_2%，脫色時間1-2小時。
6. 根據權利要求1所述提取灰樹花水溶性多糖工藝，其特征是所述的超濾膜為截留分子量為1000-3000的超濾膜；所述的納濾膜為HNF-4040系列納濾膜或ESNA系列納濾膜。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提取灰樹花水溶性多糖的工藝，以灰樹花子實體為原料，水浸2-3小時，超聲提取2-4次，調pH，木瓜蛋白酶酶解法除蛋白后加活性炭脫色，脫色液過膜截留濃縮，乙醇沉淀，冷凍干燥即得成品。采用本法生產多糖，成本低，能源消耗少，純度高，保留了灰樹花多糖的活性。
文檔編號C12P19/04GK101736053SQ201010103130
公開日2010年6月16日 申請日期2010年2月1日 優(yōu)先權日2010年2月1日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司