專利名稱：馬蘭在制備降血脂藥物或功能性食品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明專利涉及功能性食品和植物化學(xué)領(lǐng)域，天然活性因子的分離制備及功能性食品的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
心腦血管類疾病已成為當(dāng)今危害人類生命健康的第一大殺手，且世界上由于心腦血管類疾病導(dǎo)致的死亡高居第一位。血漿中膽固醇濃度過高是引起心腦血管類疾病的一個主要病因。目前，降血脂類藥物均具有不同程度毒副作用，如胃腸道反應(yīng)、肝、腎損傷等，大多數(shù)降脂西藥可使血脂更集中于肝臟代謝，使得脂質(zhì)更加堆積在肝臟而加重肝細胞脂肪變性和肝功能損害，使患者在治療中降脂護肝難兩全。另外，多數(shù)化學(xué)合成藥因其單一靶點的作用機制，在治療病因復(fù)雜的高脂血癥方面難以達到滿意的效果，尤其是對于那些處于高 血脂邊緣尚未需要藥物治療的亞健康人群。而天然功能性食品因其多靶點和多成分協(xié)同作用，安全性高，無毒副作用的特點，廣泛引起了人們的關(guān)注，尤其適宜那些血脂偏高但尚未達到醫(yī)藥治療程度的群體。因此，開發(fā)天然食源性活性降血脂組分成為日益迫切的研究熱點?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，馬蘭性涼、味辛，有涼血、清熱、利濕、解毒等功效。目前有文獻報道馬蘭三萜類化合物的分離精致，但其降血脂活性及其提取的文尚未見報道。關(guān)于馬蘭的報道均為選用不同種層析擔(dān)體，通過多次反復(fù)柱層析鑒定所得單體化合物及部分物質(zhì)的功能活性，包括抑菌、保護CCl4誘導(dǎo)的肝損傷等。例如2006年，林材報道了馬蘭中分離得到三萜類化合物。采用馬蘭干燥全草，用體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇冷浸3次，每次2 d，合并濾液，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取并濃縮。石油醚部分經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，得到6個單體化合物。2010年，王剛采用80%乙醇提取馬蘭，分別用石油醚、水飽和的正丁醇萃取，石油醚萃取部分分別采用硅膠柱色譜和凝膠柱色譜Sephadex LH-20進行分離純化，結(jié)構(gòu)鑒定了9個化合物。實驗表明化合物大黃酚和香草醛對CCl4誘導(dǎo)的肝損傷有一定的保護作用。2010年，劉勁松采用80%乙醇提取馬蘭，分別用石油醚、水飽和的正丁醇萃取，石油醚萃取部分采用硅膠柱色譜和凝膠柱色譜S印hadex LH-20進行純化，鑒定了 5個三萜類化合物。活性表明化合物V對CCl4誘導(dǎo)的肝損傷有一定的保護作用。2010年，許文清采用80%工業(yè)乙醇回流提取，分別用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇進行萃取。對石油醚萃取部分進行硅膠柱色譜分離得到14個脂肪類化合物。2008年，許文清采用80%工業(yè)乙醇回流提取馬蘭，分別用乙酸乙酯、正丁醇進行萃取。對乙酸乙酯萃取部分進行硅膠柱色譜分離，對正丁醇萃取部分先用硅膠柱色譜分離，再用Sephadex LH-20柱子分離，最終鑒定得到8個化合物抑菌活性篩選表明琥珀酸(I)和丁香酸(5)對枯草芽孢桿菌有抑制作用。2008年，林彬彬采用80%乙醇提取馬蘭，分別用石油醚、水飽和的正丁醇萃取，對正丁醇萃取部分進行硅膠柱色譜和S印hadex LH-20色譜柱分離，得β-谷甾醇。
2010年，龔小見報道80%乙醇分別提取3次，分別用別石油醚、醋酸乙酯和正丁醇進行萃取，并對醋酸乙酯萃取部分進行柱色譜分離從馬蘭中分離得到11個化合物。以上提取方法均為化合物精制手段，目的明晰馬蘭中存在的活性化合物。而這些方法過程過于繁瑣，樣品損失也較大(造成產(chǎn)量過低)；另外大量的溶劑洗脫也會大幅度提高成本；且硅膠柱色譜和Sephadex LH-20色譜柱分離純化難以工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
為了有效利用馬蘭中活性三萜類成分，本發(fā)明提供了馬蘭的新用途，確定了其降血脂生物活性。本發(fā)明公開了馬蘭在制備降血脂藥物或功能性食品中的應(yīng)用。具體地，所述馬蘭具體是指通過下述方法得到的提取物馬蘭全株干燥、粉碎，過20目篩分，80%乙醇提取，料液比lg:12mL，60°C水浴，攪拌提取2次，過濾，殘渣以同樣方法 重復(fù)提取I次，將合并的提取液減壓濃縮除去乙醇，依次用3倍體積的石油醚和乙酸乙酯萃取兩次，合并乙酸乙酯萃取部分，濃縮得膏狀物；膏狀物用柱層析方法進行分離，柱層析以大孔吸附樹脂為固定相，先用水和10%乙醇淋洗去除雜質(zhì)，后采用20%和40-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫物減壓濃縮，真空干燥，及得到馬蘭提取物。通過動物模型對比試驗測定，本發(fā)明中降血脂馬蘭提取物對高血脂小鼠的血清總膽固醇含量較對照組平均下降了 20%以上，血清甘油三酯含量下降最高達56%，高密度脂蛋白含量升高最高達68%，低密度脂蛋白含量降低最高達65%，綜上表明具有較為顯著的降血脂功效。通過動物模型對比試驗測定，本發(fā)明降血脂馬蘭提取物可有效調(diào)控血漿甘油三酯(TG)的兩種酶，脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性，從而有效降低了血清中甘油三酯的含量。通過動物模型對比試驗測定，本發(fā)明降血脂馬蘭提取物可有效調(diào)控血漿中膽固醇代謝的關(guān)鍵酶(HMG-CoA、CYP7al、ACAT)的活性，減少膽固醇的自體合成，同時阻止膽固醇酯化，并能夠促使更多的膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，從而達到降低血膽固醇的目的。通過動物模型對比試驗測定，本發(fā)明降血脂馬蘭提取物可以有效調(diào)控小鼠體內(nèi)(血清和肝臟)MDA、SOD、GSH-PX等濃度的變化，減少高血脂小鼠體內(nèi)活性氧的堆積，能迅速分解脂質(zhì)過氧化物，防御自由基損傷作用。以上試驗結(jié)果表明，本發(fā)明馬蘭的提取物可以通過多種途徑，達到降血脂功效。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在提供了一種以馬蘭為原料制備的，其中大孔吸附樹脂20%組分中黃酮類化合物和大孔吸附樹脂60%組分中的三萜類化合物總質(zhì)量含量均在50%以上，且都具有良好降血脂功效的植物提取物。該提取物與國內(nèi)現(xiàn)有產(chǎn)品血脂康比較，對需求預(yù)防高血脂和恢復(fù)正常血脂效果更理想。


下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步說明。圖I是馬蘭組分對高脂血癥小鼠血清TC、TG、HDLC, LDLC的影響。圖2是馬蘭組分對小鼠HL的影響。
圖3是馬蘭組分對小鼠LPL的影響。圖4是馬蘭組分對糞便中甾醇和膽汁酸含量的影響。圖5是馬蘭組分對小鼠MDA的影響。圖6是馬蘭組分對小鼠SOD的影響。圖7是馬蘭組分對小鼠GSH-PX的影響。
具體實施例方式 本發(fā)明中乙醇的濃度為體積百分濃度。實施例I :馬蘭全株干燥、粉碎，過20目篩分，稱取500g于反應(yīng)器中，加入80%乙醇7000ml，水浴加熱60°C，攪拌提取(回流提取，或者浸潰提取，或者滲漉提取)60min，過濾， 收集提取液，殘渣同樣條件下再提取一次，合并兩次提取液，減壓濃縮除去乙醇。依次用3倍體積的石油醚和乙酸乙酯萃取兩次，合并乙酸乙酯萃取部分，濃縮得膏狀物；膏狀物采用大孔吸附樹脂柱分離，首先依次用水和20%乙醇淋洗，除去雜質(zhì)，后采用40%-60%乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫物，并減壓濃縮，冷凍干燥，及得到馬蘭提取物T。 提取物含量測定以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色方法測定，產(chǎn)物三萜類物質(zhì)含量不得低于50%。馬蘭三萜類提取物T測定總?cè)祁惢衔锖繛?2. 5%,主要含有木栓酮，表木栓醇，谷留醇，豆留醇，波菜留醇，菠菜留酮等物質(zhì)。實施例2 :馬蘭全株干燥、粉碎，過20目篩分，稱取500g于反應(yīng)器中，加入80%乙醇7000ml，水浴加熱60°C，攪拌提取(回流提取，或者浸潰提取，或者滲漉提取)60min，過濾，收集提取液，殘渣同樣條件下再提取一次，合并兩次提取液，減壓濃縮除去乙醇。依次用3倍體積的石油醚和乙酸乙酯萃取兩次，合并乙酸乙酯萃取部分，濃縮得膏狀物；膏狀物采用大孔吸附樹脂柱分離，首先依次用水和20%乙醇淋洗，收集乙醇洗脫物，并減壓濃縮，冷凍干燥，及得到馬蘭提取物F。提取物含量測定以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色方法測定，產(chǎn)物三萜類物質(zhì)含量20. 6%;以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用顯色方法或者紫外方法測定，產(chǎn)物黃酮類化合物含量62. 3%。實施例3 :實施例3:降血脂功效試驗
3.I試驗動物及飼料配方
3.I. I試驗動物
健康清潔級雄性小鼠(⑶-I)，四周齡，體重為18 22g，共72只，由南京醫(yī)科大學(xué)試驗動物中心提供，合格證號=SYXK (蘇)2008-2007，小鼠飼養(yǎng)于南京醫(yī)科大學(xué)動物中心無菌空調(diào)室，室溫19 21°C，相對濕度50 60%，自動調(diào)控晝夜各12h，自由飲水。3. I. 2飼料配方
基礎(chǔ)飼料符合國家動物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，由南京醫(yī)科大學(xué)試驗動物中心提供，其主要營養(yǎng)成分如表I，高脂飼料由試驗室自行配置，配方如表I。
權(quán)利要求
1.馬蘭在制備降血脂藥物或功能性食品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述的馬蘭是通過下述方法得到的馬蘭提取物取馬蘭葉或馬蘭莖或者馬蘭帶根全草干燥，粉碎，用80%體積濃度的乙醇溶液提取，料液比為lg:12mL，于60°C水浴攪拌，提取60min過濾，殘渣以同樣方法重復(fù)提取I次，將合并的提取液減壓濃縮去除乙醇，依次用3倍體積的石油醚和乙酸乙酯萃取兩次，合并乙酸乙酯萃取部分，濃縮得膏狀物；膏狀物上大孔吸附樹脂柱，先用蒸餾水淋洗，而后以10%體積濃度的乙醇溶液洗脫，除去雜質(zhì)后，采用20%和40-60%乙醇溶液洗脫，將洗脫物減壓濃縮，真空干燥。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于采用20%和40-60%乙醇溶液洗脫大孔樹月旨，洗脫體積為4_6倍，流速為2_4 mL/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于取大孔吸附樹脂以95%乙醇浸泡24h，用去離子水洗至樹脂沒有醇味為止，以I. O 3. Og浸膏物取IL大孔吸附樹脂的量裝柱，膏狀物上大孔吸附樹脂柱，先以大孔吸附樹脂3倍體積的蒸餾水淋洗，去除雜質(zhì)，再以大孔吸附樹脂4 6倍體積的10% 80%體積濃度的乙醇水溶液洗脫，收集流出液，合并減壓濃縮，冷凍干燥；取20%、40-60%組分得所述降血脂植物提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種馬蘭中三萜類化合物的制備方法和其降血脂功能。提供了從馬蘭中提取、制備三萜類化合物的方法，及該法所得三萜類化合物的降血脂功能和用途。馬蘭中三萜制備方法馬蘭全株為原料，采用80%乙醇回流提取，或者浸漬提取，或者滲漉提取，過濾，濾液減壓濃縮，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取部分濃縮液上大孔吸附樹脂層析柱，依次水洗、20%乙醇洗脫除雜后，采用40-60%乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮冷凍干燥，得到馬蘭三萜類提取物。通過本發(fā)明方法得到的馬蘭提取物三萜類總含量不低于50%，主要成分為木栓酮，表木栓醇，谷甾醇，豆甾醇，波菜甾醇，菠菜甾酮，胡蘿卜苷；具有顯著的降血脂功效。
文檔編號A23L1/29GK102824391SQ20121033624
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者呂麗爽, 劉躍鈞, 劉新明 申請人:南京師范大學(xué)