生物技術2-羥基異丁酸生產的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細菌或產乙酸細菌，用于生產2-羥基異丁酸的方法，包括在水性介質中使氫氧細菌或產乙酸細菌與包含氫氣和二氧化碳的混合氣體混合物接觸，以及氫氧細菌或產乙酸細菌在2-羥基異丁酸生產中的應用。
【專利說明】生物技術2-羥基異丁酸生產
[0001] 本發(fā)明涉及表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細菌（knallgas bacterium)或產乙酸細菌，用于生產2-羥基異丁酸的方法，包括在水性介質中使氫氧細菌 或產乙酸細菌與包含氫氣和二氧化碳的混合氣體混合物接觸，以及氫氧細菌或產乙酸細菌 在2-羥基異丁酸生產中的用途。
[0002] 日漸增長的全球人口和全世界提高的生活標準不可避免地加強了人們一方面對 于商品和服務的需求和另一方面對可持續(xù)發(fā)展以及對自然和地球資源的慎重處置的需要 之間的沖突。未來不僅僅是化石碳源會變得有限，而且目前被處置和勘探的地點的可及性 也會越來越受到阻礙。已知的事故極大地證明了這種危險，例如最近在墨西哥灣的石油災 難。白色生物科技提供了一種優(yōu)雅的方式來提供替代物，這不僅僅是因為微生物或細胞組 分的應用，還因為廣譜的新一代可再生基質的應用。
[0003] 很久以來，化學工業(yè)已在生物技術工藝中批量規(guī)模生產，例如醇類和有機酸，主要 是用作化學品，尤其是作為能源載體。其中生物乙醇是構成現(xiàn)代機動車輛燃料的近期要素， 并且生物丁醇也在考慮范圍內。基于批量規(guī)模能源載體生產的知識，最近意圖設想將平臺 化學品延伸至更廣泛的應用。特別嘗試合成化學品如1，3-丙二醇，琥珀酸鹽，葡萄糖酸或 檸檬酸。同樣地，2-羥基異丁酸（2-HIB)也很適合該方案，因為它正發(fā)展成為平臺化學品。 特別是，由于2-HIB可被用作甲基丙烯酸(一種重要產品如Plexiglas?的合成所需要的單 體化合物）的前體，并且可被用作涂層材料，涂料和粘合劑的重要組分。
[0004] 通常，傳統(tǒng)的生物技術工藝，例如用于生物乙醇生產的工藝，是基于所謂的第一代 的碳源，即直接來源于植物的碳水化合物如糖或淀粉。但事實證明，這種資源是有限的，它 們似乎更適合于生產食品而不是化工產品。
[0005] 現(xiàn)有技術教導了 2-HIB生產的生物技術路線。例如，PCT/EP2009/055089教導了 已被基因修飾，以致于與其野生型相比能夠生產更多2-羥基異丁酸或更多含有2-羥基異 丁酸單體單元的聚羥基脂肪酸酯的細胞，其特征在于2-羥基異丁酸或含有2-羥基異丁 酸單體單元的聚羥基脂肪酸酯的生產以乙酰乙?；?輔酶A作為中間產物并以3-羥基 丁酰-輔酶A作為前體。但是，2-HIB的生產工藝考慮使用含碳水化合物的碳水化合物 (carbohydrate-containing carbohydrates)或其衍生物，例如葡萄糖酸鈉，從環(huán)境的角度 來說這應當被避免。而且，在所述碳水化合物的生產中所消耗的二氧化碳的很大比例并不 被轉化為所需的產物2-HIB，而是在通向2-HIB的過程中的各種代謝途徑中喪失了。
[0006] 因此，本發(fā)明所基于的問題是發(fā)明一種生產2-HIB的工藝，其能在缺少高能有機 化合物的條件下進行。而且，本發(fā)明所基于的問題是發(fā)明一種2-HIB生產的生物技術路線。 而且，本發(fā)明所基于的問題是發(fā)明一種用于2-HIB生產的生物技術方法，其與現(xiàn)有技術工 藝相比的優(yōu)越之處在于所獲得的2-HIB中有更多的碳原子來源于二氧化碳分子，S卩，來自 于二氧化碳，而不是來自于其它任何有機分子(例如醇類或碳水化合物）的碳原子的比例更 商。
[0007] 本發(fā)明所基于的問題由所附權利要求的主題解決。
[0008] 在第一方面，本發(fā)明所基于的問題由表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細 菌或產乙酸細菌解決。
[0009] 在第一方面的第一實施方案中，細菌被基因修飾以使得它與各自的野生型菌株相 t匕，具有降低的合成聚羥基丁酸酯的能力。
[0010] 在第一方面的第二實施方案中，其也是第一實施方案的一個實施方案，細菌具有 聚羥基丁酸酯合成酶基因敲除。
[0011] 在第一方面的第三實施方案中，其也是第一至第二實施方案的一個實施方案，細 菌不能合成聚羥基丁酸酯。
[0012] 在第一方面的第四實施方案中，其也是第一至第三實施方案的一個實施方 案，細菌是選自包含甲燒細菌（ifeiAafloAacteritt?)、醋酸桿菌、 脫硫弧菌（ZfesWfbFiArio)、脫硫單胞菌、副球菌（Zkracoccw1S)、 無色桿菌 ier)、產喊桿菌 、假單胞菌 O01SeworOfflma1S)、 諾卡氏菌OVocart/ia)和貪銅菌（Copriariofe)的組的氫氧細菌，且優(yōu)選是貪銅菌 (Copriariofe)菌株，最優(yōu)選是鉤蟲貪銅菌（Copriariofe flecaior) H16,或者是選自 包含梭菌irit/ia?)、穆爾氏菌（IfooreBa)和厭氧醋菌OceioaflaeroAitt?)、醋 酸桿菌 、古球菌 、丁 酸桿菌（及/ijriAacteria?)、 Carboxydibrachium、CarboxydocelIa、一 氧化碳嗜熱菌（CkrAiorjOrO iAe/SMAs)、朽1 樣酸桿 菌（CYirc^acier)、脫硫腸狀菌（ZfesW/bioffiacWtt?)、真細菌甲燒八疊球 菌（IfeiAaflo 1Sarcifla)、甲燒嗜熱桿菌（IfeiAafloiAerffioAacier)、產醋桿菌（AroAacier)、 消化鏈球菌 Oc^iosire/?iOCOCC^AS)、紅假單胞菌 0?Ο￡/〇/75·<9?￡/6_/7<35·)、紅螺菌 {JihodospirilIum)、反反兔魯（Mubrivivax)、Thermincola、散豫魯 iThermococcus)、散石 妖麗（Jhermolithobacter)、蹲紙厭氧妖麗{Thermoanaerobacter、私 Thermosyntrophicum 的組的產乙酸細菌。
[0013] 在第一方面的第5實施方案中，其也是第一至第四實施方案的一個實施方案，細 菌表達包含SEQ ID NO 1的核酸或其變體或由所述核酸編碼的多肽或所述多肽的變體，并 且表達包含SEQ ID NO 2的核酸或其變體或由后一種核酸編碼的多肽或后一種多肽的變 體。
[0014] 在第一方面的第6實施方案中，其也是第一至第5實施方案的一個實施方案，細菌 除了表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶外，還表達MeaB蛋白，由SEQ ID NO 3編碼的多肽 或其變體。
[0015] 在第一方面的第7實施方案中，其也是第一至第6實施方案的一個實施方案，細菌 表達，細菌能夠合成3-羥基丁酰-輔酶A。
[0016] 在第一方面的第8實施方案中，其也是第一至第7實施方案的一個實施方案，細菌 表達，細菌表達β -酮硫酶和乙酰乙?；?CoA還原酶。
[0017] 在第二方面，本發(fā)明所基于的問題由2-羥基異丁酸的生產方法解決，該方法包括 a)在水性介質中使根據權利要求1-9任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌與包含氫氣和 二氧化碳的氣體混合物接觸。
[0018] 在第二方面的第一實施方案中，氣體混合物中氫氣的分壓為0. 1-100巴，更優(yōu)選 0. 2-10巴，最優(yōu)選0. 5-4巴，而二氧化碳分壓為0. 03-100巴，更優(yōu)選0, 05-1巴，最優(yōu)選 0. 05-0. 3 巴。
[0019] 在第二方面的第二實施方案中，其也是第一實施方案的一個實施方案，細菌耐受 氧的存在，且水溶液是有氧的。
[0020] 在第二方面的第三實施方案中，其也是第一至第二實施方案的一個實施方案，細 菌耐受氧的存在，且氣體混合物除了氫氣和二氧化碳之外，還包含氧氣，并且氣體混合物中 氧氣的分壓優(yōu)選是〇. 03-10巴，更優(yōu)選0. 04-1巴，最優(yōu)選0. 04-0. 5巴。
[0021] 在第二方面的第四實施方案中，其也是第一至第三實施方案的一個實施方案，水 性介質不包含碳水化合物，或優(yōu)選不包含除二氧化碳之外的任何碳源。
[0022] 在第二方面的第5實施方案中，其也是第一至第四實施方案的一個實施方案，步 驟a)在缺乏除碳以外的其它生長限制營養(yǎng)素的條件下進行。
[0023] 在第二方面的第6實施方案中，其也是第一至第5實施方案的一個實施方案，步驟 a)在20-37 °C，更優(yōu)選25-35 °C，最優(yōu)選在28-32 °C進行。
[0024] 在第三方面，本發(fā)明所基于的問題由根據本發(fā)明的任意方面或實施方案的氫氧細 菌或產乙酸細菌在生產2-羥基異丁酸中的用途解決。
[0025] 本發(fā)明是基于這樣的令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧 細菌或產乙酸細菌可被用于生產2-HIB。
[0026] 而且，本發(fā)明是基于這樣的令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：可以通過這種方式增加這種工藝的 產量：對于2-HIB的生產，使用表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細菌或產乙酸細 菌，其與各自的野生型菌株相比，具有降低的合成聚羥基丁酸酯的能力。
[0027] 而且，本發(fā)明基于這樣的令人驚訝的發(fā)現(xiàn)：可以通過這種方式增加這種工藝的產 量：對于2-HIB的生產，使用表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細菌或產乙酸細菌， 并經受除了缺乏碳源之外的生長限制條件。
[0028] 本發(fā)明集中于表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細菌或產乙酸細菌的用 途。這些細菌通常具有代謝包含氫氣和二氧化碳的混合物以生成有機化合物的能力。
[0029] 本發(fā)明考慮野生型和基因修飾的產乙酸細菌或氫氧細菌的用途。在優(yōu)選的實施 方案中，本文使用的術語"產乙酸細菌"指能夠利用Wood-Ljungdahl途徑，即將一氧化碳， 二氧化碳和氫氣轉化為乙酸鹽的途徑的細菌。在優(yōu)選的實施方案中，Wood-Ljungdahl途 徑中涉及的至少一種酶的活性相對于野生型細胞來說被增強。在優(yōu)選的實施方案中，如本 文使用的，術語"Wood-Ljungdahl途徑中涉及的酶"包含與所述途徑的一種底物，優(yōu)選一 氧化碳，二氧化碳或氫氣結合，或與隨著底物被轉化為乙酸鹽或其衍生物的過程，在由這 些底物中的任一種開始的途徑中形成的任何中間產物結合的，或者接受其為底物的任何 酶。在另一個優(yōu)選的實施方案中，如本文所使用的，術語"Wood-Ljungdahl途徑中涉及的 酶"指來自包含CO脫氫酶和乙酰-CoA合成酶的組的酶。在優(yōu)選的實施方案中，產乙酸細 菌選自包含梭菌（C/osirii/itt?)、穆爾氏菌（IfooreBa)和厭氧醋菌、 醋酸桿菌 、古球菌 、丁 酸桿菌（及/ijriAacteria?)、 Carboxydibrachium、CarboxydocelIa、一 氧化碳嗜熱菌（CkrAiorjOrO iAe/SMAs)、朽1 樣 酸桿菌、脫硫腸狀菌、真細菌、 甲燒八疊球菌CifeiAaflo1Sarcifla)、甲燒嗜熱桿菌（IfeiAafloiAerffioAacier)、產醋桿菌 (AroAacier)、消化鏈球菌、紅假單胞菌 0?Ο￡/〇/75·<9?￡/6_9/7<35·)、 紅螺菌 紅長命菌 Oft/AriKiFar)、?6?r?i/7co/a、熱球菌 {Thermococcus')、散石:舊（Jhermolithobacter)、蹲散厭梟紙舊（Jhermoanaerobacter) 和?<9r避的組。示例性的產乙酸細菌包括，但不限于潮濕厭氧醋菌 /?<9tera)、伍氏醋酸桿菌 r<9(9i/ii)、閃爍古球菌 iArchaeoglobus fulgidus)、食 ψ^~Χ豫妖儀 iButyribacterium methylotrophicuni)、食 ψ 基了驗妖儀、Butyribacterium methyl trophicuni)，Carboxydibrachium pad ficus ^ Carboxydocella sporoproducens^ Carboxydocella thermoautotrophica、H -策也 碳嗜熱菌避as* AjWra沢/?<9/b_r艦/76* )、梓樣酸桿菌 179 (CY tro/?況 ter 6/7. 7_/6〇、醋酸梭菌、丙酮丁醇梭菌、 自產乙醇梭菌，{Clostridium autoethanogenuni)、食一氧么敬敬儀{Clostridium ca_r/?(9uWirara/?6〇、楊氏梭菌（C/iOsirii/i? 、食一氧化碳脫硫腸狀 M {Desulfotomaculum carboxydivorans) Λ 庫氏脫硫腸狀菌 C^esi/J/bto應ei/J· kuznetsovif)、紙 m傲漁、歇{Desulfotomacuhim thermobenzoicum subsp·)、 、粘液真桿菌的/如c 7i避λ^--)、食乙酸甲焼八疊球菌62? (Methanosarcina acetivorans CM)、E 氏 ψ 像J\疊豫舊（Methanosarcina barkerf)、 熱自養(yǎng)甲焼嗜熱桿菌CifeiAa/? 況ter iAa/舊扮"? <9 ir 、穆爾氏菌 CM9〇r<977a 、熱醋穆爾氏菌（M9〇r<977a 、熱自養(yǎng)穆爾氏菌 Cifoordh 、普氏產醋桿菌（flro如cter 、產生消化鏈球菌 iPeptostreptococcus productus) {Peptostreptococcus productus) ^ 沿\每怒麗P4 {Rhodopseudomonas palustris P4)、類忽^￡爆黨{Rhodospirillum rubrum) λ 1? ^ ^ ^ {Rubrivivax gelatinosus) Λ Thermincola carboxydiphiIaΛ 、熱球菌 、食一氧化碳熱石桿菌 (Jhermolithobacter carboxydivorans)私令久板鴻紙沃氧妖儀 ijhermoanaerobacter kivui). 在另一個優(yōu)選的實施方案中，產乙酸細菌是通常被基因修飾以產乙酸的細菌，而相應 的野生型菌株不產乙酸。在這種情況下，細菌可以是任何可進行這種修飾的生物體，例如大 腸桿菌。
[0030] 在優(yōu)選的實施方案中，如本文使用的，術語"氫氧細菌"指任何能夠使用氧作為 最終電子受體來氧化氫，并能夠在好氧條件下固定二氧化碳的細菌。在優(yōu)選的實施方 案中，氫氧細菌選自包含甲焼細菌醋酸桿菌 脫硫弧菌（Zfes^//bKi/?ri(9)、脫硫單胞菌（Zfe6*〃7/bffi(9/?a6〇、副球菌（^_raec^〃6〇、無色 桿菌C^Arc?(9如eter)、產喊桿菌、假單胞菌、諾卡氏菌 和貪銅菌（i7w/7riaKii*6〇的組，并且優(yōu)選是貪銅菌（i7w/7riaKii*6〇菌株，更優(yōu) 選是鉤蟲貪銅菌H16。示例性的氫氧細菌包括，但不限于敏捷食 酸菌 raraz Z^i7i6〇、食酸菌 raraz 6/7.)、真養(yǎng)產喊桿菌 沢/?<96* )、慢生型大豆根瘤菌（Ara辦 japonicuni)、燒後'瘤舊{Bradyrhizobium sp.)、鉤蟲貪銅菌5?7 (Cupriavidus /?6^ior ZAW 5?7)、螺桿菌 〇76*7i(9^cter 6/λ )、產氧桿菌(你 --^6*/?(9如cter 6/λ )、嗜熱 產董奸舊 Qfydrogenobacter thermophiIus)、真氧董單觀舊 Qfydrogencmonas eutropha)、 泛氧氫單胞菌 氫單胞菌 6/7.)、敏捷 氫單胞菌 )、氫嗤胞菌 O^Fi/re^/76/7.)、海洋氫弧菌 Qiydrogenovibrio marinus) (MH-1W 株）、m舊 Qfydrogenovibrio sp、、氧集i'傲生A% {Oxyhydrogen microorganism) {Pseudomonas hydrogenothermophila) ^ 食氫假單胞菌AjWro沢/?(9rara)、假單胞菌6/7.)、真養(yǎng) 青枯菌 Ofehi、青枯菌6/7.)、大豆根瘤菌 、根瘤菌 6/7.)、混池紅球菌 (9/7況"6〇、紅球菌 6/7.)、嗤酸紅假單胞菌（/^(9^/(9/76^(3^(9/7^5* adW(9/7Ai7a)、生芽紅假單胞菌 {Rhodopseudomonas blasticd)、賽·怒{Rhodopseudomonas capsulatd)、沿釋 假單胞菌（7^(9^/(9/76^饑/6_9/?狀 7^(9^/(9/76^饑/6_9/?狀 iaroitfes*、綠硫紅假單胞 M {Rhodopseudomonas sulfoviridis) λ {Rhodopseudomonas viridis) Λ 紅假單胞菌5/7.)、深紅紅螺菌ττ/Δ/γ/ffi)、紅螺菌 {Rhodospirillum sp. {Thiocapsa roseopersicina) {Thiocapsus 6/7.)、爭論貪嗤菌（KarioraravT /7arai/(ara6〇、貪嗤菌（KarioraravT 6/7.)、黃色桿菌 {Xanthobacter sp.)、海洋嗜熱解氫桿菌沢/?<9iAa/皿as* 、真養(yǎng)青枯菌 (9"tn9/7Aa)、鉤蟲貪銅菌、真養(yǎng)產喊桿菌 <9"tro/7to6〇、爭論產喊桿菌（^7ca7i沢/7(96* /7arat/(〇?s〇、脫氮副球菌 、敏捷假單胞菌（/?^饑Z^i7i6〇、黃假單胞菌（/?^饑/c_9/?a6* /!Zara)、帕氏假單胞菌/7a77aro/?ii)、嗤糖假單胞菌 saccharophila)，取趙爲黨{Rhodococcus sp·)(不透明諾卡氏菌（Nocardia opaca))、類 黃假單胞菌0--〃心?。在另一個優(yōu)選的實施方案中，氫氧細菌被基因修 飾成為氫氧細菌，而相應的野生型菌株不是氫氧細菌。在這種情況下，細菌可以是任何可進 行這種修飾的生物體，例如大腸桿菌。
[0031] 可用于解決本發(fā)明所基于問題的許多細菌能夠合成聚羥基丁酸酯，一種被用于儲 存細胞攝取的碳的化合物。這種細菌利用一種或多種聚羥基丁酸酯合成酶。在優(yōu)選的實施 方案中，如本文使用的，術語"聚羥基丁酸酯合成酶"指能夠通過催化鏈長度為3-14個碳原 子的中鏈?；?CoA，優(yōu)選羥基丁酸CoA的聚合來合成聚羥基脂肪酸酯的酶。
[0032] 在優(yōu)選的實施方案中，所發(fā)明的細菌被基因修飾以使得它與各自的野生型菌株相 t匕，具有降低的合成聚羥基丁酸酯的能力，或者合成聚羥基丁酸酯的能力降低以使得細胞 不再能夠合成可檢測量的聚羥基丁酸酯。在優(yōu)選的實施方案中，編碼聚羥基丁酸酯合成酶 的至少一個基因，優(yōu)選所有基因被敲除，例如通過向閱讀框中引入終止子以達到表達不完 整的無活性的蛋白的效果。
[0033] 在優(yōu)選的實施方案中，如本文使用的，術語"2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶"指能 夠催化形成2-羥基異丁酰-輔酶A的酶，優(yōu)選通過將3-羥基丁酸輔酶A轉化為2-羥基異 丁酰-輔酶A來實現(xiàn)：
【權利要求】
1. 表達2-羥基異丁酰-輔酶A變位酶的氫氧細菌或產乙酸細菌。
2. 根據權利要求1的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌被基因修飾以使得其與各 自的野生型菌株相比，具有降低的合成聚羥基丁酸酯的能力。
3. 根據權利要求2的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌具有聚羥基丁酸酯合成酶 基因敲除。
4. 根據權利要求1-3任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌不能合成聚羥基 丁酸酯。
5. 根據權利要求1-4任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌是選自包含甲 燒細菌（IfetAafloAac)、醋酸桿菌 )、脫硫弧菌FiArio)、 脫硫單胞菌、副球菌、無色桿菌 、產 喊桿菌、假單胞菌、諾卡氏菌（Abcart/ia)和貪銅菌 (Copriarit/ys)的組的氫氧細菌，且優(yōu)選是貪銅菌菌株，最優(yōu)選是鉤蟲貪銅菌 flecator) H16,或者是選自包含梭菌（C/iostrit/itt?)、穆爾氏菌（ifoore^a)和厭氧醋 菌 、醋酸桿菌 、古球菌 、丁 後第：魯 Q^utyribacterium')、Carboxydibrachium、Carboxydocella、一 氧化碳嗜熱菌 (CkrAiorj^/o 從<9/?皿5〇、朽1 樣酸桿菌（CYtroAacter)、脫硫腸狀菌、 真細菌、甲燒八疊球菌（Ifez^aflosarcifla)、甲燒嗜熱桿菌 (M9Z^a/7(9 從6?r?o辦aeter)、產醋桿菌（ftro辦aeter)、消化鏈球菌（/fe/^ostre/Voecieetts)、 紅假單胞菌 0?、紅螺菌、紅長命菌 Oft/Ari Fi Far)、 ?<9r?i/7co/a、熱球菌（Serffiococc^s)、熱石桿菌、嗜熱厭氧桿菌 (?6?r?oa/7a6?ro辦acter)和?的組的產乙酸細菌。
6. 根據權利要求1-5任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌表達包含SEQ ID NO 1的核酸或其變體或由所述核酸編碼的多肽或所述多肽的變體，并且表達包含SEQ ID NO 2的核酸或其變體或由后一種核酸編碼的多肽或后一種多肽的變體。
7. 根據權利要求1-6任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌表達，除了 2-羥 基異丁酰-輔酶A變位酶外，還有MeaB蛋白，優(yōu)選由SEQ ID NO 3編碼的多肽或其變體。
8. 根據權利要求1-7任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌能夠合成3-羥基 丁酰-輔酶A。
9. 根據權利要求1-8任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌，其中所述細菌表達￠-酮硫酶 和乙酰乙?；?CoA還原酶。
10. 生產2-羥基異丁酸的方法，包括 c)在水性介質中使根據權利要求1-9任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌與包含氫氣和 二氧化碳的氣體混合物接觸。
11. 根據權利要求10的方法，其中所述氣體混合物中氫氣的分壓為〇. 1-100巴，更優(yōu) 選0. 2-10巴，最優(yōu)選0. 5-4巴，而二氧化碳分壓為0. 03-100巴，更優(yōu)選0. 05-1巴，最優(yōu)選 0. 05-0. 3 巴。
12. 根據權利要求10-11任一項的方法，其中所述細菌耐受氧的存在，且水溶液是有氧 的。
13. 根據權利要求10-12任一項的方法，其中所述細菌耐受氧的存在，且氣體混合物除 了氫氣和二氧化碳之外，還包含氧氣，并且氣體混合物中氧氣的分壓優(yōu)選是0. 03-10巴，更 優(yōu)選0. 04-1巴，最優(yōu)選0. 04-0. 5巴。
14. 根據權利要求10-13任一項的方法，其中所述水性介質不包含碳水化合物，或優(yōu)選 不包含除二氧化碳之外的任何碳源。
15. 根據權利要求10-14任一項的方法，其中步驟a)在缺乏除碳以外的生長限制營養(yǎng) 素的條件下進行。
16. 根據權利要求10-15任一項的方法，其中步驟a)在20-37°C，更優(yōu)選25-35°C，最優(yōu) 選在28-32 °C進行。
17. 根據權利要求1-9任一項的氫氧細菌或產乙酸細菌在生產2-羥基異丁酸中的用 途。
【文檔編號】C12N9/90GK104364373SQ201380031378
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2013年6月14日 優(yōu)先權日:2012年6月15日
【發(fā)明者】T.哈斯, Y.席曼, D.普里拜爾斯基, T.羅維德爾, R.H.米勒, H.哈姆斯 申請人:贏創(chuàng)工業(yè)集團股份有限公司