本發(fā)明屬于腸菌類抑制物，尤其是涉及一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽及測定工藝。

背景技術：

1、目前，當今全球水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)正快速發(fā)展，高效、低成本和健康可持續(xù)也成為眾多企業(yè)的最高追求。腸道微生物區(qū)系被認為是一個重要的器官，在機體的生長發(fā)育過程中起著不可或缺的作用，例如參與消化和免疫調(diào)節(jié)；腸道菌群的動態(tài)平衡會受到動物飲食的較大影響。但是，從不同種水產(chǎn)動物的研究中不難看出低魚粉飼料無法抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長。

2、為此，本發(fā)明提供一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽及測定工藝。

技術實現(xiàn)思路

1、鑒于現(xiàn)有技術存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長。

2、本發(fā)明的目的可通過下列技術方案來實現(xiàn)：

3、抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，由以下成分的重量百分比組成：粗蛋白30-40％、粗纖維8-10％、粗脂肪10-15％、酸溶蛋白30-50％、水蘇糖0.1-0.5％、棉子糖0.1-0.5％、ph3.5％-4.5％。

4、作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，由以下成分的重量百分比組成：包括粗蛋白40％、粗纖維10％、粗脂肪15％、酸溶蛋白30％、水蘇糖0.5％、棉子糖0.5％、ph4％。

5、作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。

6、本發(fā)明申請還提供應用于如上所述抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽的測定工藝，包括以下步驟

7、(1)第一步、喂養(yǎng)：取適量的水產(chǎn)動物分六組養(yǎng)殖桶分別構成參照組、對比例、實施例1、實施例2、實施例3以及實施例4，在實施例1、實施例2、實施例3以及實施例4中添加飼料中不同含量的含有生長活性肽喂養(yǎng)水產(chǎn)動物；

8、(2)第二步、樣品采集及處理：養(yǎng)殖試驗結束后，每組試驗均經(jīng)過禁食24h，采集完水產(chǎn)動物的血淋巴和肝胰腺樣本后，在參照組、對比例和實施例1的每個養(yǎng)殖桶中隨機取等量的水產(chǎn)動物的腸道作為混合樣本，即每組取4管腸道樣本，解剖過程中快速取出水產(chǎn)動物的腸道組織放入凍存管中并在-20℃保存以供后續(xù)測定；

9、(3)第三步、使用土壤dna試劑盒從每組4份腸道混合樣本中直接提取微生物總dna；

10、然后用通用引物338f(5‘-actcctacgggaggcagcag-3’)和806r(5‘-ggactachvgggtwtctaat-3’)通過聚合酶鏈式反應擴增微生物16s?rrna基因的v3-v4區(qū)；在對產(chǎn)物進行定量、組合和純化后，使用i?l?l?umina?m?i?seq平臺構建純化的文庫并測定序列內(nèi)容。

11、作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，對步驟(3)測序后的原始數(shù)據(jù)通過flash合并；

12、然后使用vsearch檢測并移除嵌合序列以獲得高質(zhì)量的干凈標簽；用于將高質(zhì)量的序列聚類成擴增子序列變異體(asv)，基于97％的序列相似性水平進行生物信息學分析；根據(jù)核糖體數(shù)據(jù)庫項目，在選擇具有代表性的asv序列并篩選每個asv后，對分類進行注釋。

13、作為本發(fā)明優(yōu)選的技術方案，在步驟(3)中采用q?i?i?me測定各樣品腸道微生物群落的α多樣性指數(shù)、觀測物種數(shù)、chao1多樣性指數(shù)、香農(nóng)多樣性指數(shù)；用維恩圖和百分比堆積柱狀圖分別顯示每個樣本共有的和獨特的門或屬以及每個樣本的菌群物種組成；通過主坐標分析(pcoa)評價不同組間物種復雜性的差異；應用線性判別分析(lefse)對不同組別的特定類群微生物進行鑒定。

14、如上所述，本發(fā)明涉及抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽及測定工藝，具有以下有益效果：

15、(1)大豆生物活性肽抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長，促進潛在益生菌生長性能和餌料利用率，促進蛋白沉積和脂肪分解，緩解氧化應激，增強機體免疫力。

16、(2)大豆生物活性肽能促進腸道內(nèi)豐度增加、抑制假單胞菌生長，進而導致肝胰腺sod和gpx活性增加、tg和mda含量減少，肝胰腺抗氧化水平增加，從而緩解氧化應激。

17、下面結合具體實施方式對本發(fā)明作進一步的說明。

技術特征：

1.抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，由以下成分的重量百分比組成：粗蛋白30-40％、粗纖維8-10％、粗脂肪10-15％、酸溶蛋白30-50％、水蘇糖0.1-0.5％、棉子糖0.1-0.5％、ph3.5％-4.5％。

2.如權利要求1所述的抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，由以下成分的重量百分比組成：包括粗蛋白40％、粗纖維10％、粗脂肪15％、酸溶蛋白30％、水蘇糖0.5％、棉子糖0.5％、ph4％。

3.如權利要求1所述的抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。

4.應用于權利要求1-3任一項所述抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽的測定工藝，其特征在于，包括以下步驟

5.如權利要求4所述的測定工藝，其特征在于：對步驟(3)測序后的原始數(shù)據(jù)通過flash合并；

6.如權利要求4所述的測定工藝，其特征在于：在步驟(3)中采用qiime測定各樣品腸道微生物群落的α多樣性指數(shù)率、觀測物種數(shù)、chao1多樣性指數(shù)、香農(nóng)多樣性指數(shù)；用維恩圖和百分比堆積柱狀圖分別顯示每個樣本共有的和獨特的門或屬以及每個樣本的菌群物種組成；通過主坐標分析(pcoa)評價不同組間物種復雜性的差異；應用線性判別分析(lefse)對不同組別的特定類群微生物進行鑒定。

技術總結
本發(fā)明屬于腸菌類抑制物技術領域，現(xiàn)提供一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽；該生長活性肽由以下成分的重量百分比組成：粗蛋白30?40％、粗纖維8?10％、粗脂肪10?15％、酸溶蛋白30?50％、水蘇糖0.1?0.5％、棉子糖0.1?0.5％、pH3.5％?4.5％。本發(fā)明申請與現(xiàn)有技術相比，該大豆生物活性肽抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長，促進潛在益生菌生長性能和餌料利用率，促進蛋白沉積和脂肪分解，緩解氧化應激，增強機體免疫力。本發(fā)明申請還提供應用于抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽的測定方法。

技術研發(fā)人員：胡賀,劉茂
受保護的技術使用者：江蘇福潤德科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21