專利名稱：新菌株紫色紅曲菌、紅曲菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新菌株及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
紅曲色素是純種發(fā)酵的天然色素，過去大多用乙醇浸提法獲得，或直接將紅曲粉碎應(yīng)用，這兩種方法前者成本高，獲率少；后者粗放，局限性大，通常只作豆腐乳之類。降脂散也是如此。
本發(fā)明的目的就是要克服上述缺陷，提取獲得新菌株紫色紅曲菌、紅曲菌來生產(chǎn)紅曲色素、降脂散。
本發(fā)明的技術(shù)方案是新菌株紫色紅曲菌N4Monascuspurpurus (AS3.4691)、紅曲菌N14Monascusanka(AS3.4692)，其特征在于1-1-1.紫色紅曲菌N4Monascus purpurus(AS 3.4691)在麥芽汁培養(yǎng)基和G25N培養(yǎng)基上生長，菌落局限，質(zhì)地緊密，表面有皺紋和氣生菌絲，菌絲體初橙色，老熟后橙紅色或葡萄紫色，菌落被面呈醬紅色。1-1-2.在MEA和土豆培養(yǎng)基上生長時菌落呈現(xiàn)放射狀皺紋，氣生菌絲稀疏而短小，質(zhì)地緊密，菌絲體初橙色，老熟后為醬紅色，菌落背面醬紅色。1-1-3.鏡檢形態(tài)為菌絲具橫隔、多核、不規(guī)則的分枝，含有橙色油滴，直徑2-7微米，分生孢子偶見，單生、梨形，810微米，被子器橙紅色、球形，直徑40-50(70)微米，子囊孢子卵形、光滑無色，6-7×4.5-5微米。1-2-1.紅曲菌N14Monascus auka(AS3.4692)，在MEA和G25N培養(yǎng)基上生長，菌落局限型，多褶皺紋形似瘡疤狀，無氣生菌絲，菌落溶巖色或葡萄醬紫色，背面深鐵棕色。1-2-2、鏡檢形態(tài)為菌絲分隔分枝，內(nèi)含大量橙紅色油滴，直徑3-7微米，分生孢子多，梨形8-11×6-10微米，被子器球形，橙紅色30--50微米，子囊孢子卵圓形、光滑、淺紅色，4-5×2-3微米。
2.生產(chǎn)紅曲色素的方法，其特征在于采用新菌株2-1.斜面培養(yǎng)接種后，在溫度30-32℃下培養(yǎng)13-16天備用；2-2.米試管或三角瓶培養(yǎng)，接種后在30-34℃條件下培養(yǎng)10--14天備用；2-3.曲池通風(fēng)培養(yǎng)或簾子曲培養(yǎng)，將大米(秈米)浸泡蒸飯、冷涼接種后，堆集發(fā)酵，待品溫升至50-51℃時入池(簾)通風(fēng)發(fā)酵4-5天，將曲低溫(45℃以下)烘干備用；2-4.將低溫干燥曲按投料量的25％用曲，并加入總投料量的75％溫開水(38-40℃)，拌勻后在28℃左右發(fā)酵7-10天，將發(fā)酵后的酒液壓榨蒸餾得粗液(蒸餾后殘液)，再經(jīng)精濾得濾渣干燥后得紅曲色素。
3.降脂散的生產(chǎn)方法，其特征在于采用新菌種3-1.同2-1、2-2、2-3所述；3-2.將3-1所述的低溫干燥曲按投料量的25％用曲，并加入總投料量的75％溫開水(38-40℃)，拌勻后在室溫28℃左右發(fā)酵7-10天，將發(fā)酵后的酒液壓榨蒸餾得粗液(蒸餾后殘液)，其壓榨后的粗渣高溫烘干粉碎后配以相關(guān)功能物質(zhì)精制而成。
本發(fā)明的新菌株紫色紅曲菌、紅曲菌其生化、理化特性極為穩(wěn)定，其代謝產(chǎn)物效率高且穩(wěn)定，對培養(yǎng)基要求條件寬，對環(huán)境無特殊要求；產(chǎn)物功能多，綜合利用率高，無廢棄物質(zhì)；成本低，工藝簡單，節(jié)簡勞力；其發(fā)酵生產(chǎn)的紅曲色素、降脂散(生物降脂素)，性能安全且功能多，可開發(fā)多種保健食品(藥品)，對甘油三脂降率可達(dá)30-60％，并見效快，還具有降壓、降血糖和防癌等功效，有利于人體健康、減少環(huán)境污染。
實(shí)施例1紫色紅曲菌N4Mornascus purpureus(AS3.4691)、紅曲菌N14Monascus auka(AS3.4692)，均為真菌，已于1996年8月8日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊編號為CGMCC NO.0269-1，CGMCC NO.0269-2。
菌種來源本發(fā)明菌株來源于江蘇省軍區(qū)運(yùn)西農(nóng)場所屬江蘇華威保健品廠紅曲生產(chǎn)菌。經(jīng)分離以AS3.978曲菌保藏菌中為參照，選育出相對一致的三組27株，即N4Monascua purpureus(AS3.4691)和紅曲菌N14Monascus auka(AS3.4692)。
菌源樣品制備與純化從紅曲發(fā)酵池中采集曲樣9份，將9份曲樣分別分成三份，再將每份取出一小勺，加入盛有10毫升含乳酸0.7％、酒精10％的飴糖液(10Be)的試管中，30-32℃靜置培養(yǎng)13天左右，于無菌條件下將浮于液面菌團(tuán)挑入盛有30毫升無菌水的三角瓶中，瓶內(nèi)放有若干滅菌玻璃珠，搖動5分鐘，打碎菌團(tuán)，用鋪有一薄層棉花的滅菌漏斗過濾，將濾液稀釋至適當(dāng)濃度，涂平板，于35℃培養(yǎng)6天，挑選色深、淺、淡，菌落大、中、小相應(yīng)的菌落，移入飴糖面培養(yǎng)供篩選用。
初篩將以上分離菌株27株，保藏菌株6株，進(jìn)行色價、米曲糖化發(fā)酵對比試驗(yàn)供試菌斜面——三角瓶(50g/500ml)
色價、糖化發(fā)酵檢測。結(jié)果顯示，色價在1500以上3株，色價在1000-1500之間的6株，其它均在1000以下。糖化力在700以上的7株，低于250的5株，其它均在500左右。
復(fù)篩將糖化力在700以上的菌株和色價在1500以上的菌株進(jìn)行純化后再進(jìn)行生產(chǎn)、復(fù)篩、對比試驗(yàn)三年，最終得到新菌株N4Monascuspurpureus紫色紅曲菌(AS3.4691)，色價穩(wěn)定在1200-2000(液態(tài)發(fā)酵高于固態(tài)發(fā)酵)，糖化力在600-800。N14Mon-ascus auka紅曲菌(AS3.4692)，其色價穩(wěn)定在1000-1500(液態(tài)發(fā)酵優(yōu)于固態(tài)發(fā)酵)，糖化力在700-850。上述兩株菌水溶性較一般對照菌有明顯優(yōu)勢，為食品加工提供了方便。
基本培養(yǎng)基的組成(％)(1)可溶性淀粉5，蛋白棟3，瓊脂3，6-8Be飴糖液定溶100毫升；(2)NaNO30.3，K2HPO40.1，KCL0.05，MgSO4.7H2O0.05，F(xiàn)eSO4.7H2OFe0.01，酵母膏0.5，瓊脂1.5，甘油23，PH值6.5-6.7。
三角瓶種培養(yǎng)基取1000g秈米，浸泡24小時后瀝干，蒸飯(熟而不粘，內(nèi)無硬芯)，冷涼后分裝于20只500ml三角瓶中，50g/瓶，經(jīng)滅菌后即可在無菌條件下接種。
接種用直形管吸取0.2％稀醋酸溶液(0.3％的冰醋酸溶液)5-10毫升，注入AS3.4691或AS3.4692于斜面試管中，用玻璃棒或接種針在無菌條件下攪拌菌苔，再用經(jīng)滅菌的粗口吸管取0.5-1毫升紅曲菌液，接入大米三角瓶中搖勻，放置于30-34℃恒溫箱中，期間應(yīng)經(jīng)常搖動，使米飯分散，不使之產(chǎn)生結(jié)團(tuán)及生長不勻現(xiàn)象，培養(yǎng)10-13天備用。
紅曲用料配比取100kg秈米加冷開水7kg，冰醋酸120--150kg，紅曲米三角瓶種三瓶(150g)，使用前將紅曲米種研細(xì)，并與冷開水及冰醋酸混合均勻。
浸泡、蒸飯、接種采用上等秈米放置于大缸中，加水浸泡120分鐘后，撈起放入竹籮內(nèi)少淘洗，把米泔水洗去，瀝干，然后倒入蒸桶內(nèi)周圍全部冒氣后，加蓋再蒸三分鐘；蒸好后的米飯移入木盤內(nèi)，搓散結(jié)塊，并散熱冷卻到42-44分鐘，接入已混合冰醋酸液的研細(xì)紅曲種子，充分拌合后裝入滅菌麻袋，封口進(jìn)入曲室培養(yǎng)。
培養(yǎng)進(jìn)入曲室時，品溫開始由原來的36℃下降到34℃，而后上升至39℃，約需17-19小時；后每小時升溫約一度，最后半小時升溫一度，待曲溫達(dá)50-51℃時，開包移至曲池發(fā)酵，室溫25-30℃、曲溫35℃條件下培養(yǎng)4-5天，成熟后低溫干燥備用。
紅曲色素的生產(chǎn)方法將大米或秈米浸泡24小時后瀝干、蒸煮，無夾心，熟而不粘即可，冷涼到40℃后，投放到壇中，并按投放量25％加入紅曲，再加入占投料總量75％的40℃溫開水，攪勻后按0.25％加入干酵母，攪勻后封壇發(fā)酵7-10天，發(fā)酵結(jié)束，開壇壓榨，榨液蒸餾得白酒和余液，將余液過濾得粗渣液和清液，將粗濾液濃縮、烘干、粉碎后即為紅曲色素精品。
降脂散的生產(chǎn)方法將生產(chǎn)紅曲色素過程中的壓榨酒糟，烘干、粉碎，再將與之相關(guān)物質(zhì)配伍精制而成降脂散。
AS3.4691和AS3.4692富含洛伐它丁(C24H36O5)，一種HMG—COA還原酶抑制劑(抑制膽固醇的合成)和紅曲霉素活性物質(zhì)Monacilink，具有降低血脂作用，其中紅曲橙色素的Monas——corubin及Rubuopunctatin具有活潑的羰基，很容易與氨基起作用，因此不但可以治療胺血癥(Ammoniemia)，還可有效地防癌。
實(shí)施例2基本培養(yǎng)基同實(shí)施例1。
紅曲色素生產(chǎn)方法取大米或秈米100kg，浸泡、瀝干蒸飯后，投放到容積為500kg大壇中，在加飯24小時前，應(yīng)取25kg低溫干燥的紅曲米加75kg40℃溫開水入壇浸曲，待投入米飯后，加入0.25kg干酵母，攪勻后封口發(fā)酵，前三天每天攪拌一次，發(fā)酵室溫應(yīng)保持28℃左右，7至10天發(fā)酵完畢。
將發(fā)酵液壓榨后得酒液和酒糟，將酒液蒸得白酒和蒸餾余液，再將蒸餾余液過濾得粗濾液與清液，再將粗濾液濃縮、烘干、粉碎即為紅曲色素粉劑精品，也可制備液體紅曲色素。
降脂散生產(chǎn)方法將壓榨后的酒糟進(jìn)行高溫(100-120℃)烘干、粉碎后，再與相關(guān)降脂物質(zhì)配伍制成降脂散或降脂丹、降脂膠囊等。精制后的降脂散，每克含洛伐它丁(C24H36O5)8毫克以上。
附1、紅曲色素、降脂散工藝流程圖。
2、菌種鑒定書；3、菌種存活性報(bào)告書。
權(quán)利要求
1.新菌株紫色紅曲菌N4Monascus purpurus(AS3.4691)、紅曲菌N14Monascus anka(AS3.4692)，其特征在于1-1-1.紫色紅曲菌N4Monascus purpurus (AS3.4691)在麥芽汁培養(yǎng)基和G25N培養(yǎng)基上生長，菌落局限，質(zhì)地緊密，表面有皺紋和氣生菌絲，菌絲體初橙色，老熟后橙紅色或葡萄紫色，菌落被面呈醬紅色。1-1-2.在MEA和土豆培養(yǎng)基上生長時菌落呈現(xiàn)放射狀皺紋，氣生菌絲稀疏而短小，質(zhì)地緊密，菌絲體初橙色，老熟后為醬紅色，菌落背面醬紅色。1-1-3.鏡檢形態(tài)為菌絲具橫隔、多核、不規(guī)則的分枝，含有橙色油滴，直徑2-7微米，分生孢子偶見，單生、梨形，810微米，被子器橙紅色、球形，直徑40-50(70)微米，子囊孢子卵形、光滑無色，6-7×4.5-5微米。1-2-1.紅曲菌N14Monascus auka(AS3.4692)，在MEA和G25N培養(yǎng)基上生長，菌落局限型，多褶皺紋形似瘡疤狀，無氣生菌絲，菌落溶巖色或葡萄醬紫色，背面深鐵棕色。1-2-2、鏡檢形態(tài)為菌絲分隔分枝，內(nèi)含大量橙紅色油滴，直徑3-7微米，分生孢子多，梨形8-11×6-10微米，被子器球形，橙紅色30--50微米，子囊孢子卵圓形、光滑、淺紅色，4-5×2-3微米。
2.生產(chǎn)紅曲色素的方法，其特征在于采用權(quán)利要求1所述的新菌株2-1.斜面培養(yǎng)接種后，在溫度30-32℃下培養(yǎng)13-16天備用；2-2.米試管或三角瓶培養(yǎng)，接種后在30-34℃條件下培養(yǎng)10-14天備用；2-3.曲池通風(fēng)培養(yǎng)或簾子曲培養(yǎng)，將大米(秈米)浸泡蒸飯、冷涼接種后，堆集發(fā)酵，待品溫升至50-51℃時入池(簾)通風(fēng)發(fā)酵4-5天，將曲低溫(45℃以下)烘干備用；2-4.將低溫干燥曲按投料量的25％用曲，并加入總投料量的75％溫開水(38-40℃)，拌勻后在28℃左右發(fā)酵7-10天，將發(fā)酵后的酒液壓榨蒸餾得粗液(蒸餾后殘液)，再經(jīng)精濾得濾渣干燥后得紅曲色素。
3.降脂散的生產(chǎn)方法，其特征在于采用權(quán)利要求1所述的新菌種3-1.同2-1、2-2、2-3所述；3-2.將3-1所述的低溫干燥曲按投料量的25％用曲，并加入總投料量的75％溫開水(38-40℃)，拌勻后在室溫28℃左右發(fā)酵7-10天，將發(fā)酵后的酒液壓榨蒸餾得粗液(蒸餾后殘液)，其壓榨后的粗渣高溫烘干粉碎后配以相關(guān)功能物質(zhì)精制而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2、3所述紅曲色素、降脂散的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的斜面培養(yǎng)基包括4-1.MEA麥芽提取物2％，蛋白胨0.1％，葡萄糖2％，瓊脂1.5％，PH值5.1-5.4。4-2.G25NNaNO30.3％，K2HPO40.1％，KCL0.05％，MgSO4.7H2O 0.05％，F(xiàn)eSO4.7H2O0.01％，酵母提取物0.5％，瓊脂1.5％，甘油23％，PH值6.5-6.7。
全文摘要
本發(fā)明的新菌株紫色紅曲菌、紅曲菌其生化、理化特性極為穩(wěn)定，其代謝產(chǎn)物效率高且穩(wěn)定，對培養(yǎng)基要求條件寬，對環(huán)境無特殊要求；產(chǎn)物功能多，綜合利用率高，無廢棄物質(zhì)；成本低，工藝簡單，節(jié)簡勞力；其發(fā)酵生產(chǎn)的紅曲色素、降脂散(生物降脂素)，性能安全且功能多，可開發(fā)多種保健食品(藥品)，對甘油三脂降率可達(dá)30-60％，并見效快，還具有降壓、降血糖和防癌等功效，有利于人體健康、減少環(huán)境污染。
文檔編號C12G3/02GK1162640SQ9710024
公開日1997年10月22日 申請日期1997年1月13日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月13日
發(fā)明者丁前勝 申請人:丁前勝