適用于斷奶仔豬的生物活性伴侶顆粒飼料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種適用于斷奶仔豬的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，屬于飼料、酶制劑和微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明將低溫干燥后制得生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料按比例混合后制得生物活性伴侶顆粒飼料。該生物活性伴侶顆粒飼料富含復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑、益生菌、小肽等活性成分，不含抗生素，具有營養(yǎng)高、易消化、適口性好等特點(diǎn)。CGMCC No.814820130911CGMCC No.814920130911
【專利說明】
適用于斷奶仔豬的生物活性伴侶顆粒飼料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于飼料、酶制劑和微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物活性伴侶顆 粒飼料的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國是人口大國，也是養(yǎng)殖業(yè)大國。2013年，畜牧業(yè)產(chǎn)值達(dá)2. 5萬億元，肉類、禽 蛋、牛奶和水產(chǎn)品產(chǎn)量分別為8482萬噸、2832萬噸、3800萬噸和5873萬噸。伴隨著養(yǎng)殖業(yè) 的發(fā)展，飼料工業(yè)發(fā)展速度驚人，2013年全國商業(yè)飼料產(chǎn)量近1. 93億噸。預(yù)計(jì)到十二五末， 全國飼料產(chǎn)能將達(dá)到3. 5億噸，產(chǎn)量將達(dá)到2. 5億噸。我國生豬養(yǎng)殖大國。2013年我國生 豬出欄7. 19億頭，母豬存欄5000多萬頭，豬肉產(chǎn)量達(dá)到5335萬噸，實(shí)際年需要豬飼料近 2. 0億噸，其中幼齡畜禽飼料高達(dá)1500萬噸，乳仔豬飼料在600萬噸以上。
[0003] 眾所周知，飼料通過制粒后，不但可以使淀粉糊化，有利于動物更迅速地消化飼 料，提高飼料轉(zhuǎn)化效率；而且能減少飼料的浪費(fèi)，增加動物采食量，防止動物挑食，保證一個 良好營養(yǎng)配方，當(dāng)改變配方時，動物更易接受。相比于粉料，通過制粒，可以避免粉狀飼料在 采食過程中對豬的糊嘴現(xiàn)象，減少飼料粉塵，減少呼吸道疾病發(fā)生的機(jī)率，減緩高溫季節(jié)飼 料酸敗霉變。因此，飼料制粒技術(shù)得以普通推廣。但是，由于制粒過程中的高溫高壓作用， 飼料中的養(yǎng)分會受到不同程度的破壞，尤其是對熱敏性的飼料原料如維生素、酶制劑和益 生菌等生物活性物質(zhì)的破壞作用，制粒的高溫蒸汽通常會使生物活性物質(zhì)部分分解和滅活 失效。為了減少制粒高溫高壓對生物活性物質(zhì)破壞作用，人們試圖采用制粒后噴涂技術(shù)。但 是，實(shí)際上制粒后噴涂技術(shù)效果也不佳，在實(shí)際生產(chǎn)中受到很多限制，而且又引發(fā)一些新的 問題，如飼料更容易污染和生產(chǎn)成本增加。
[0004] 豆柏發(fā)酵技術(shù)是當(dāng)前飼料與動物營養(yǎng)界的研究和應(yīng)用熱點(diǎn)。豆柏中存在多種抗?fàn)I 養(yǎng)因子，如胰蛋白酶抑制因子、大豆抗原蛋白（致敏因子）及致甲狀腺腫素等。利用乳酸菌、 酵母菌和芽孢菌等多種益生菌發(fā)酵豆柏來改善豆柏的營養(yǎng)品質(zhì)，降低或消除上述抗?fàn)I養(yǎng)因 子含量，尤其是抗原蛋白水平。畜禽，特別是斷奶乳仔豬飼喂發(fā)酵豆柏后，采食量增加，日增 重提高了 8-15 %，腹瀉明顯減少，發(fā)酵豆柏的應(yīng)用越來越受到養(yǎng)殖和飼料企業(yè)重視。但是飼 料制粒時的高溫高壓對豆柏發(fā)酵過程中產(chǎn)生的維生素、酶制劑和益生菌等熱敏性生物活性 物質(zhì)破壞作用很大。
[0005] 低溫制粒技術(shù)近年來倍受關(guān)注。但是低溫制粒存在含水量高、顆粒容易破碎或不 容易成型等難題，制粒成本高，生產(chǎn)實(shí)際推廣難度很大。而小麥含有豐富的粘性多糖和黏性 蛋白，有利于飼料顆粒成型，使飼料顆粒破碎率大幅度降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對不同原料特性分別進(jìn)行低溫和高溫制粒，不僅降低了制粒成本，更克 服了高溫制粒會分解和滅活維生素、酶制劑和益生菌等熱敏性生物活性物質(zhì)，導(dǎo)致其失效 等難題。提供一種適用于斷奶仔豬的富含復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑、益生菌、小肽等活性成 分，不含抗生素，具有適口性好、易消化、營養(yǎng)高等特點(diǎn)的生物活性伴侶顆粒飼料。
[0007] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0008] -種適用于斷奶仔豬的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其包括如下步驟：
[0009] 1)將豆柏粉、小麥粉、糖蜜、7K、復(fù)合菌種液、復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑混合后固態(tài) 發(fā)酵酶解后，低溫制成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料低溫干燥后制得生物活性顆粒飼 料；
[0010] 2)將復(fù)合微量元素、復(fù)合氨基酸、磷酸氫鈣、甲酸鈣、氯化鈉、抗氧化劑、防霉劑混 合后制得添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料；
[0011] 3)將玉米、魚粉、豬血漿蛋白粉、低蛋白乳清粉、蔗糖、葡萄糖、豆油和添加劑復(fù)合 預(yù)混合飼料混合后，高溫制粒制得普通顆粒飼料；
[0012] 4)將生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料混合后制得生物活性伴侶顆粒飼料。
[0013] 在本發(fā)明一個實(shí)施方案中，將豆柏粉、小麥粉、糖蜜、水、復(fù)合菌種液、復(fù)合維生素、 復(fù)合酶制劑按重量比為100:10~80:0~200:40~200:5~50: 0· 01~0· 50: 0· 01~0· 50 混合后，10_50°C和pH自然的條件下，固態(tài)發(fā)酵酶解24-240小時后，10-50°C低溫條件下制 成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料在0-50°C低溫條件下干燥后制得生物活性顆粒飼料。
[0014] 優(yōu)選的，豆柏粉、小麥粉、糖蜜、水、復(fù)合菌種液、復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑的重量比 為：100:25~80:20~50:50~120:15~30: 0· 2~0· 30: 0· 2~0· 30,固態(tài)發(fā)酵酶解溫度 為：25-35°C ;固態(tài)發(fā)酵酶解時間為：48-96小時；低溫制粒溫度為：30-40°C ;低溫干燥溫度 為：25-35 °C。
[0015] 其中，所述的復(fù)合菌種液主要成分為乳酸菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌。
[0016] 優(yōu)選地，所述乳酸菌為干酪乳桿菌Lactobacillus casei CGMCC No. 8149,所述的 枯草芽抱桿菌為枯草芽抱桿菌Bacillus subtilis CGMCC No. 8148。
[0017] 其中，所述的枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌具有良好的耐胃酸、耐腸液、耐膽鹽（芽 孢桿菌耐高溫）等抗逆性能和產(chǎn)酸、產(chǎn)酶、抑制病原菌等益生功能，為
【申請人】從健康動物腸 道中分離、選育得到，并于2013年9月11日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中心，簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所， 保藏編號分別為：CGMCC No. 8148、CGMCC No. 8149。
[0018] 本發(fā)明選育的枯草芽孢桿菌CGMCC No. 8148在人工模擬胃液（pH2. 0~4. 0)中 處理3h，存活率在65. 8%以上；在人工模擬腸液中處理3h，存活率在74. 7 % ;在豬膽鹽溶 液（濃度0.3~38/1^)處理2411，存活率為51.2%以上；85~100°(：處理31^11，存活率為 11. 2%以上；對鏈霉素、多粘菌素 B、林可霉素3種抗生素有耐藥性；可以產(chǎn)生一定量的蛋白 酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶。
[0019] 本發(fā)明所選育的干酪乳桿菌CGMCC No. 8149在人工模擬胃液（pH2. 0~4. 0)中處 理3h，存活率在43. 1 %以上；在人工模擬腸液中處理3h，存活率在63. 5% ;在豬膽鹽溶液 (濃度0. 3~3g/kg)處理24h，存活率為8. 6%以上；對頭孢吡肟、慶大霉素、大觀霉素、鏈 霉素、多粘菌素 B、環(huán)丙沙星、萬古霉素7種抗生素有耐藥性；對大腸桿菌K88、K99均有很好 的抑制作用，抑菌圈直徑分別為16. 13mm、14. 09mm。
[0020] 本發(fā)明中所選育的枯草芽孢桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉在制備中采用液體深層高 密度發(fā)酵技術(shù)和噴霧干燥或者冷凍干燥一系列的后處理加工工藝技術(shù)制成菌粉，制劑中的 活菌含量高、水分含量低，具有耐胃液、耐腸液、耐膽鹽、耐高溫等抗逆性能和產(chǎn)酸、產(chǎn)酶及 抑制病原菌等益生功能。
[0021 ] 在本發(fā)明另一個實(shí)施方案中，將復(fù)合微量元素、復(fù)合氨基酸、磷酸氫鈣、甲酸鈣、氯 化鈉、抗氧化劑、防霉劑按重量比為100:50~500:100~500:100~500:50~200:5~ 20:5~20混合制得添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料。
[0022] 優(yōu)選地，復(fù)合微量元素、復(fù)合氨基酸、磷酸氫鈣、甲酸鈣、氯化鈉、抗氧化劑、防霉劑 的重量比為 100:100 ~250:150 ~300:200 ~400:100 ~200:10 ~15:10 ~15。
[0023] 在本發(fā)明另一個實(shí)施方案中，將玉米、魚粉、豬血漿蛋白粉、低蛋白乳清粉、蔗糖、 葡萄糖、豆油和添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料按重量比為100:0~15:0~15:0~30:0~ 15:0 ~15:0 ~15:2 ~20,優(yōu)選為：100:3 ~8:2 ~6:4 ~10:2 ~5:2 ~5:2 ~5:5 ~8 混合后，70-95 °C條件下高溫制粒制得普通顆粒飼料。
[0024] 其中，高溫制粒溫度更優(yōu)選為80-90°C。
[0025] 在本發(fā)明另一個實(shí)施方案中，將生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料按重量比為 100:100~1000,優(yōu)選為100:200~300混合后，制得生物活性伴侶顆粒飼料。
[0026] 進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供根據(jù)本發(fā)明所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法制 得的生物活性伴侶顆粒飼料。
[0027] 本發(fā)明采用豆柏發(fā)酵和生物活性物質(zhì)低溫制粒生產(chǎn)一體化技術(shù)、高溫制粒和低溫 制粒伴侶技術(shù)，巧妙利用小麥的粘黏性使用常規(guī)飼料制粒設(shè)備即可生產(chǎn)出合格的顆粒。同 時，將生物活性顆粒飼料和普通顆?？茖W(xué)混合配制，既避免了加水調(diào)質(zhì)，降低了成本，又可 以有效防止生物活性物質(zhì)分解和滅活失效。本發(fā)明制得的生物活性伴侶顆粒飼料富含復(fù)合 維生素、復(fù)合酶制劑、益生菌、小肽等活性成分，不含抗生素，具有營養(yǎng)高、易消化、適口性好 等特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 實(shí)施例1菌種的抗逆性和生物學(xué)性能測定
[0029] 2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCC No. 8148和干酪乳桿菌CGMCC No. 8149的生物學(xué) 性能和抗逆性能測定：
[0030] 1)枯草芽孢桿菌CGMCC No. 8148培養(yǎng)物的制備：將冰箱保藏的斜面菌種接種到LB 種子培養(yǎng)基中活化，37°C、IOOrpm培養(yǎng)16h，即得；
[0031] 2)干酪乳桿菌CGMCC No. 8149培養(yǎng)物的制備：將冰箱保藏的斜面菌種接種到MRS 種子培養(yǎng)基中活化，30°C、150rpm培養(yǎng)16h，即得；
[0032] 3)耐酸性測定：將上述制備的培養(yǎng)物按10%接種量分別接種于pH值2. 0、3. 0、 4. 0的人工模擬胃液中，重新調(diào)pH值為2. 0、3. 0、4. 0, Oh計(jì)數(shù)作對照，3h取樣用0. 85%生理 鹽水按10倍系列稀釋，進(jìn)行平板活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算存活率。
[0033] 本發(fā)明選育的2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCC No. 8148和干酪乳桿菌CGMCC No. 8149在胃酸中存活率結(jié)果見表1。
[0034] 人工模擬胃液的制備：量取9. 5%~10. 5%濃鹽酸16. 4毫升，加蒸餾水至1000毫 升，做基礎(chǔ)人工胃液，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值2. 0、3. 0、4. 0,121°C下蒸汽滅菌15分鐘，按 1 %添加量添加胃蛋白酶，通過0. 22 μ m無菌濾膜，制成人工胃液，取5mL (4. 5mL)分裝于試 管中。
[0035] 表1 2株菌種在人工模擬胃液中的存活率
[0037] 4)耐腸液測定：將上述制備的培養(yǎng)物按5%接種量分別接種于人工模擬腸液中， Oh計(jì)數(shù)作對照，3h取樣用0. 85 %的生理鹽水按10倍系列稀釋，進(jìn)行平板活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算存 活率。
[0038] 本發(fā)明選育的2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCC No. 8148、干酪乳桿菌CGMCC No. 8149在腸液中存活率結(jié)果見表2。
[0039] 人工模擬腸液的制備：稱取6. 8g，加蒸餾水至1000毫升，做基礎(chǔ)人工腸液，121°C 下蒸汽滅菌15分鐘，按1%添加量添加胰蛋白酶，通過0.22 μπι無菌濾膜，制成人工胃液，取 5mL(4. 5mL)分裝于試管中。
[0040] 表2 2株菌種在人工模擬腸液中的存活率
LWWJ ffil： 疋丄迎巾U食H、J z W困tT H、J市開切，K丄u 70汝竹里刀，別接種于 0. 03 %、0. 1 %、0. 2 %、0. 3 %不同濃度豬膽鹽的LB溶液中，Oh計(jì)數(shù)作對照，24h取樣用 0. 85%生理鹽水按10倍系列稀釋計(jì)數(shù)，進(jìn)行平板活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算存活率。
[0043] 本發(fā)明所選育的2株菌種：枯草芽孢桿菌CGMCC No. 8148、干酪乳桿菌CGMCC No. 8149在膽鹽中存活率結(jié)果見表3。
[0044] 膽鹽的制備：在配好的LB液體培養(yǎng)基中添加0.03%、0. 1 %、0. 2%、0. 3%不同濃 度的豬膽鹽，121°C下蒸汽滅菌30分鐘，在無菌條件下，分別取5mL 0. 03%、0. 1 %、0. 2%、 0. 3%不同濃度的豬膽鹽溶液分裝于試管中。
[0045] 表3 2株菌種在不同濃度豬膽鹽中處理24h的存活率
L0047」 6)芽抱什菌衂咼溫測足：將上還制爸的栢皁芽抱什菌菌柙的培弄物3500rpm離 心30min，去培養(yǎng)上清液，用0. 85%生理鹽水按10倍系列稀釋至一定的倍數(shù)，分別于85°C、 90°C、95°C、100°C水浴處理3min，流水冷卻，以室溫下未經(jīng)水浴的菌株培養(yǎng)作為對照，采用 平板計(jì)數(shù)法計(jì)算水浴后的存活率。
[0048] 表4枯草芽孢桿菌在不同高溫處理3min的存活率/ %
[0050] 7)耐藥性測定：采用藥敏紙片法。取適量被檢細(xì)菌的培養(yǎng)物，均勻涂布于營養(yǎng)瓊 脂表面，待菌液吸收后，貼上藥敏紙片，37培養(yǎng)18h，觀察結(jié)果，并用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直 徑，根據(jù)直徑大小判定細(xì)菌對藥物的敏感性。
[0051] 表5 2株菌種的耐藥性測定結(jié)果
[0052]

[0054] 8)芽孢桿菌的產(chǎn)酶測定：
[0055] 采用平板透明圈法。分別在纖維素酶培養(yǎng)基、蛋白酶培養(yǎng)基、淀粉酶培養(yǎng)基、木聚 糖酶培養(yǎng)基和脂肪酶培養(yǎng)基上點(diǎn)種分離的芽孢桿菌，每種處理設(shè)3個重復(fù)，37°C培養(yǎng)36h， 觀察平板透明圈的有無及大小，若在菌落周圍形成透明的菌落或者模糊圈，則證明芽孢桿 菌可以產(chǎn)生相應(yīng)的酶，用游標(biāo)卡尺分別測量透明圈直徑（H)和菌落直徑（C)，計(jì)算兩者比值 (H/C)〇
[0056] 表6枯草芽孢桿菌菌種的產(chǎn)酶測定結(jié)果
[0058] 9)產(chǎn)酸測定：
[0059] 采用溴甲酚紫平板對干酪乳桿菌CGMCC No. 8149進(jìn)行有機(jī)酸產(chǎn)量測定。菌體產(chǎn)酸 則在菌落周圍平板由紫變黃，用游標(biāo)卡尺分別測量黃色圈直徑（H)和菌落直徑（C)，計(jì)算 兩者比值（H/C)。
[0060] 表7干酪乳桿菌菌種的產(chǎn)酸測定結(jié)果
[0061]
[0062] 10)抑菌試驗(yàn)：采用瓊脂打孔擴(kuò)散法對常見致病菌進(jìn)行抑菌測定。
[0063] a、在裝有IOmL營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基的試管中活化兩株致病菌：K88、K99,37°C恒溫培 養(yǎng) 20h ;
[0064] b、取直徑90mm的平板，注入IOOuL濃度為l*10sCFU/ml指示菌菌液，然后注入溫 熱的LB固體培養(yǎng)基，混勻后，待瓊脂冷卻后，用打孔器在瓊脂上打四個直徑為3_的孔；
[0065] c、加樣品：在每個孔中加入20uL干酪乳桿菌的發(fā)酵液上清液，每個樣品2個重復(fù)。 將加完樣的平板置于37°C恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)16~18h后，取出測量抑菌圈大小。
[0066] 表8干酪乳桿菌對常見致病菌的抑菌結(jié)果
[0068] 實(shí)施例2干酪乳桿菌發(fā)酵液的制備
[0069] 1)平板培養(yǎng)復(fù)壯：將干酪乳桿菌菌種接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C培養(yǎng)16h， 使干酪乳桿菌菌復(fù)壯，并形成單菌落，挑取單菌落于接種培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)14h ;
[0070] 2) -級種子的制備：將步驟1)培養(yǎng)的干酪乳桿菌菌種轉(zhuǎn)接裝有300ml MRS液態(tài) 培養(yǎng)基2L搖瓶里，37°C靜置培養(yǎng)18h，至對數(shù)后期，得一級種子；
[0071] 3)二級種子的制備：將步驟2)制備的一級種子轉(zhuǎn)接到裝有75LMRS種子培養(yǎng)基的 100L種子罐中，溫度37°C，轉(zhuǎn)速80rpm，培養(yǎng)18h，得二級種子液。
[0072] 4)干酪乳桿菌發(fā)酵液的制備：將步驟3)制備的二級種子液按照1. 5%的接種量接 種到0. 75m3發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，溫度37°C，轉(zhuǎn)速80rpm，罐壓0. 05Mpa，通風(fēng)比：1 :0. 2， 培養(yǎng)18h，得到活菌數(shù)為4. 6X 109cfu/ml干酪乳桿菌發(fā)酵液。
[0073] 所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖2%，大豆蛋白胨1.8%，酵母膏1.5%，硫酸銨 0. 75 %，磷酸氫二鉀0. 4 %、氯化鈉0. 6 %，硫酸鎂0. 04 % ;
[0074] 實(shí)施例3枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備
[0075] 1)平板培養(yǎng)復(fù)壯：將枯草芽孢桿菌菌種接種于BPY平板培養(yǎng)基上，于37°C培養(yǎng) 18h，使枯草芽孢桿菌復(fù)壯，并形成單菌落，挑取單菌落于接種培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)30h ;
[0076] 2) -級種子的制備：將步驟1)培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌菌種轉(zhuǎn)接茄子瓶BPY斜面培 養(yǎng)基上，36°C培養(yǎng)14h，使處于對數(shù)后期，得一級種子；
[0077] 3)二級種子的制備：將步驟2)制備的一級種子用無菌水制成菌懸液，接種到裝 有60L BPY種子培養(yǎng)基的100L種子罐中，溫度37°C，轉(zhuǎn)速300rpm，罐壓0. 05MPa，通風(fēng)比： 1 : 0.8,培養(yǎng)12h，得二級種子液。
[0078] 4)枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備：將步驟3)制備的二級種子液按照1 %的接種 量接種到6m3發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，溫度30-40°C，轉(zhuǎn)速280rpm，罐壓0. 05Mpa，通風(fēng)比： 1 : 0. 8,培養(yǎng)24h，得到芽孢生成率90%以上，活菌數(shù)為5.48\109〇也/1111的枯草芽孢桿菌 發(fā)酵液；
[0079] 所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5%，大豆蛋白胨1.5%，豆柏1.5%，硫酸銨 0. 75%，氯化鈉0.6%，硫酸鎂0.05% ;pH自然。
[0080] 實(shí)施例3釀酒酵母CGMCC No. 6560發(fā)酵液的制備
[0081] 配制釀酒酵母CGMCC No. 6560(公開于專利CN 201210430095. 1)種子培養(yǎng)基： 1.0%酵母浸粉，2.0%蛋白胨，2.0%葡萄糖，100mL蒸餾水。121°C，15min滅菌。從培養(yǎng)好 的釀酒酵母Kl斜面上挑取一環(huán)接入到種子培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件：28°C，180rpm，36h。
[0082] 釀酒酵母發(fā)酵培養(yǎng)基：1. 5%酪蛋白胨，2. 5%酵母浸粉，3. 0%葡萄糖，0. 24%磷酸 二氫鉀，1. 6%磷酸氫二鉀，加入蒸餾水。121°C，15min滅菌。按5%接種量接入種子培養(yǎng)基。 培養(yǎng)條件：28°C，150rpm，72h。
[0083] 實(shí)施例4
[0084] 稱取市售豆柏粉200kg、市售小麥粉50kg、水150kg、復(fù)合菌種液（實(shí)施例1-3制備 的枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌和釀酒酵母發(fā)酵液按重量比1: 1:1的比例混合，下同）35kg、 市售乳仔豬用復(fù)合維生素〇. 5kg、市售乳仔豬用復(fù)合酶制劑0. 5kg(主要是淀粉酶、纖維素 酶、果膠酶、葡聚糖酶、木聚糖酶）混合后，在28-30°C和pH自然的條件下固態(tài)發(fā)酵酶解60 小時后，34-35Γ條件下低溫制成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料在35-36Γ條件下干燥， 制得235kg生物活性顆粒飼料（其它為固態(tài)發(fā)酵酶解和水分損耗）。
[0085] 稱取市售復(fù)合微量元素6kg(其中銅30g/kg,鐵28g/kg，鋅24g/kg，猛8g/kg，碘 120mg/kg，硒60mg/kg)、復(fù)合氨基酸9kg (含L-賴氨酸鹽酸鹽5kg、DL-蛋氨酸2kg、L-蘇氨 酸2kg)、市售磷酸氫鈣10kg、市售甲酸鈣（含鈣30% ) 12kg、市售氯化鈉3kg、市售抗氧化劑 1. 0kg、市售防霉劑0. 5kg混合后，制得41. 5kg添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料。
[0086] 稱取市售玉米553. 5kg、魚粉（超級蒸汽）30kg、豬血漿蛋白粉30kg、低蛋白乳清粉 50kg、鹿糖20kg、葡萄糖20kg、豆油20kg和添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料41. 5kg，在85-90°C條件 下高溫制粒制得普通顆粒飼料765kg。
[0087] 將235kg生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料765kg混合后，制得1000kg生物活性 伴侶顆粒飼料。
[0088] 實(shí)施例5
[0089] 稱取市售豆柏粉220kg、市售小麥粉100kg、糖蜜50kg、水120kg、復(fù)合菌種液（同 實(shí)施例4)60kg、市售乳仔豬用復(fù)合維生素0. 8kg、市售乳仔豬用復(fù)合酶制劑Ikg(主要是淀 粉酶、纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶、木聚糖酶）混合后，在26-28Γ和pH自然的條件下固態(tài) 發(fā)酵酶解72小時后，35-36Γ條件下低溫制成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料在36-38Γ 條件下干燥，制得330kg生物活性顆粒飼料（其它為固態(tài)發(fā)酵酶解和干燥水分損耗）。
[0090] 稱取復(fù)合市售微量元素5kg(其中銅30g/kg,鐵28g/kg，鋅24g/kg，猛8g/kg，碘 120mg/kg，硒60mg/kg)、復(fù)合氨基酸KX 5kg (含L-賴氨酸鹽酸鹽6kg、DL-蛋氨酸2kg、L-蘇 氨酸2. 5kg)、市售磷酸氫|丐10kg、甲酸|丐（含|丐30% ) 10kg、氯化鈉5kg、抗氧化劑lkg、防 霉劑0. 5kg混合后，制得42kg添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料。
[0091 ] 稱取市售玉米538kg、魚粉40kg、低蛋白乳清粉30、油脂20kg和添加劑復(fù)合預(yù)混合 飼料42kg，在8〇-85°C條件下高溫制粒，制得普通顆粒飼料670kg。
[0092] 將330kg生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料670kg混合后，制得1000kg生物活性 伴侶顆粒飼料。
[0093] 實(shí)施例6
[0094] 稱取市售豆柏粉210kg、市售小麥粉160kg、水160kg、復(fù)合菌種液（同實(shí)施例 4) 60kg、市售乳仔豬用復(fù)合維生素0. 2kg、市售乳仔豬用復(fù)合酶制劑0. 8kg(主要是淀粉酶、 纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶、木聚糖酶）混合后，在26-28Γ和pH自然的條件下固態(tài)發(fā)酵酶 解84小時后，32-35Γ條件下低溫制成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料在33-35Γ條件下 干燥，制得325. 5kg生物活性顆粒飼料（其它為固態(tài)發(fā)酵酶解和水分損耗）。
[0095] 稱取復(fù)合市售微量元素4kg(其中銅30g/kg,鐵28g/kg，鋅24g/kg，猛8g/kg，碘 120mg/kg，硒60mg/kg)、市售復(fù)合氨基酸IOkg (含L-賴氨酸鹽酸鹽6kg、DL-蛋氨酸I. 8kg、 L-蘇氨酸2. 2kg)、市售磷酸氫鈣11kg、市售甲酸鈣14kg、市售氯化鈉5kg、市售抗氧化劑 0. 5kg，混合后，制得44. 5kg添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料。
[0096] 稱取市售玉米550kg、魚粉20kg、豬血衆(zhòng)蛋白粉20、鹿糖30kg、豆油IOkg和添加劑 復(fù)合預(yù)混合飼料44. 5kg，在85-90°C條件下高溫制粒制得普通顆粒飼料674. 5kg。
[0097] 將325. 5kg生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料674. 5kg混合后，制得1000kg生物 活性伴侶顆粒飼料。
[0098] 試驗(yàn)例1生物活性伴侶顆粒飼料對斷奶仔豬飼喂效果試驗(yàn)
[0099] 1材料和方法
[0100] 1. 1試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼料
[0101] 采取對照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每個組設(shè)三個重復(fù)，每個重復(fù)8頭斷奶仔豬，試驗(yàn)期10天。試 驗(yàn)組斷奶仔豬飼喂本發(fā)明實(shí)施例1制備的生物活性伴侶顆粒飼料，對照組斷奶仔豬飼喂的 飼料經(jīng)85 - 90°C制粒，對照組飼喂的飼料所用的原料組成及比例基本與試驗(yàn)組一致，區(qū)別 主要在于所用豆柏及小麥粉未經(jīng)過發(fā)酵處理，試驗(yàn)組與對照組配方組成及營養(yǎng)水平如表1 所示。
[0102] 表1對照組及試驗(yàn)組配方組成及營養(yǎng)水平 [
[
[0105] I. 2動物選擇與飼養(yǎng)管理
[0106] 選擇23-25日齡斷奶的仔豬48頭，斷奶當(dāng)天趕母留仔，根據(jù)斷奶仔豬體重隨機(jī)分 組，每組3欄豬，每欄8頭仔豬，每欄中放入一個料槽，按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別放入試驗(yàn)飼料，試 驗(yàn)仔豬的具體情況如表2。按照常規(guī)程序和方法進(jìn)行編號、驅(qū)蟲、去勢和免疫等管理，各組飼 養(yǎng)密度相同，自由采食和自由飲水，試驗(yàn)期間注意保持欄舍清潔干燥和仔豬保溫，試驗(yàn)期間 記錄采食量和仔豬腹瀉情況，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天清晨空腹稱重。
[0107] 表2對照組與試驗(yàn)組仔豬初始情況
[0109] 1.3測定項(xiàng)目
[0110] 斷奶仔豬初始體重、期末體重、期間耗料總量，計(jì)算腹瀉率、平均日增重與料肉比。
[0111] 腹瀉率=腹瀉頭數(shù)/總試驗(yàn)仔豬頭數(shù)*100%
[0112] 平均日增重=(期末體重一初始體重）/飼喂天數(shù)
[0113] 料肉比=消耗飼料量八期末體重一初始體重）
[0114] 1. 4統(tǒng)計(jì)分析利用SPSS17. 0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0115] 2.試驗(yàn)結(jié)果
[0116] 表3本發(fā)明的生物活性伴侶顆粒飼料對斷奶仔豬的飼喂效果
[0117]
[0118] 3、試驗(yàn)結(jié)論
[0119] 如表3所示，本發(fā)明的生物活性伴侶顆粒飼料對斷奶仔豬的飼喂效果非常理想， 其適口性好，采食量高，日增重快。與對照組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬的平均日采食量達(dá)到 277. 1克，比對照組提高了 17. 5%，差異顯著（p〈0. 05);平均日增重為261. 7克/天，與對 照組相比，提高了 26%，差異顯著（p〈0. 05);雖然試驗(yàn)組和對照組之間腹瀉率、料肉比差異 不顯著，但相比對照組，也有明顯的改善，說明本發(fā)明的生物活性伴侶顆粒飼料明顯優(yōu)于對 照組飼料，完全達(dá)到了營養(yǎng)高、易消化、適口性好，生長快、不含抗生素、腹瀉率低的特點(diǎn)。
[0120] 以上內(nèi)容僅僅是對本發(fā)明所作的舉例和說明，所屬本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對所描 述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，只要不偏離發(fā)明的構(gòu)思 或者超越本權(quán)利要求書所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種適用于斷奶仔豬的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，包括如下 步驟： 1) 將豆柏粉、小麥粉、糖蜜、水、復(fù)合菌種液、復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑混合后固態(tài)發(fā)酵 酶解后，低溫制成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料低溫干燥后制得生物活性顆粒飼料； 2) 將復(fù)合微量元素、復(fù)合氨基酸、磷酸氫鈣、甲酸鈣、氯化鈉、抗氧化劑、防霉劑混合后 制得添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料； 3) 將玉米、魚粉、豬血漿蛋白粉、低蛋白乳清粉、鹿糖、葡萄糖、豆油和添加劑復(fù)合預(yù)混 合飼料混合后，高溫制粒制得普通顆粒飼料； 4) 將生物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料混合后制得生物活性伴侶顆粒飼料。2. 如權(quán)利要求1所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，將豆柏粉、 小麥粉、糖蜜、水、復(fù)合菌種液、復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑按重量比為100:10~80:0~ 200:40~200:5~50:0. 01~0· 50:0. 01~0· 50混合后，10-50°C和pH自然的條件下，固 態(tài)發(fā)酵酶解24-240小時后，10-50°C低溫條件下制成濕基顆粒飼料，再將濕基顆粒飼料在 0-50°C低溫條件下干燥后制得生物活性顆粒飼料。3. 如權(quán)利要求2所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，豆柏粉、 小麥粉、糖蜜、水、復(fù)合菌種液、復(fù)合維生素、復(fù)合酶制劑的重量比為：100:25~80:20~ 50:50~120:15~30:0. 2~(λ 30:0. 2~0· 30,固態(tài)發(fā)酵酶解溫度為：25-35°C ;固態(tài)發(fā)酵 酶解時間為：48-96小時；低溫制粒溫度為：30-40°C ;低溫干燥溫度為：25-35°C。4. 如權(quán)利要求2或3所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，所述的復(fù) 合菌種液主要成分為乳酸菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌。5. 如權(quán)利要求4所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，所述乳酸菌 為干酪乳桿菌（ZacioAaciWiA? caseiOCGMCC No. 8149,所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿 菌si/AiiJi^sOCGMCC Νο·8148〇6. 如權(quán)利要求1所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，將復(fù)合微 量元素、復(fù)合氨基酸、磷酸氫鈣、甲酸鈣、氯化鈉、抗氧化劑、防霉劑按重量比100:50~ 500:100 ~500:100 ~500:50 ~200:5 ~20:5 ~20,優(yōu)選 100:100 ~250:150 ~300:200 ~ 400:100~200:10~15:10~15混合制得添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料。7. 如權(quán)利要求1所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，將玉米、魚 粉、豬血漿蛋白粉、低蛋白乳清粉、蔗糖、葡萄糖、豆油和添加劑復(fù)合預(yù)混合飼料按重量比為 100:0 ~15:0 ~15:0 ~30:0 ~15:0 ~15:0 ~15:2 ~20,優(yōu)選為：100:3 ~8:2 ~6:4 ~ 10:2~5:2~5:2~5:5~8混合后，70-95°C條件下高溫制粒制得普通顆粒飼料。8. 如權(quán)利要求7所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，高溫制粒溫 度為 80-90 °C。9. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法，其特征在于，將生 物活性顆粒飼料和普通顆粒飼料按重量比為100:100~1000,優(yōu)選為100:200~300混合 后，制得生物活性伴侶顆粒飼料。10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的生物活性伴侶顆粒飼料的制備方法制得的生物活 性伴侶顆粒飼料。
【文檔編號】A23K1/18GK105981927SQ201510066897
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月9日
【發(fā)明人】徐新寅, 應(yīng)廣飛, 任建波, 孟柏金, 程茂基, 程勐萬里, 孟龍
【申請人】北京偉農(nóng)生物科技有限公司, 北京科高大北農(nóng)飼料有限責(zé)任公司, 安徽五糧泰生物工程股份有限公司, 北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司