益生菌組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了益生菌組合物及其制備方法。本發(fā)明所公開的益生菌組合物，所述益生菌組合物主要由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成：嗜酸乳桿菌菌粉1％?3％、干酪乳桿菌菌粉0.5％?1.5％、乳雙歧桿菌菌粉1％?3％、甘露低聚糖5％?8％、圓苞車前子粉3％?5％、低聚果糖40％?60％、玉米低聚肽粉2％?5％、菊粉3％?5％、藍(lán)莓粉5％?8％和麥芽糊精10％?25％。本發(fā)明所制備的益生菌組合物不僅能有效調(diào)節(jié)腸道菌群，同時(shí)也能增強(qiáng)人體的免疫力。
【專利說明】
益生菌組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及食品領(lǐng)域，尤其涉及益生菌組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 益生菌(Probiotics)-字源自希臘語，原意味"對(duì)生命有益"的意思，益生菌多分 布于人體腸道，廣泛包含乳酸桿菌（LactobaciIIus species)、乳酸球菌（Lactococcus species)、腸球菌（Entrococcus species)、雙歧桿菌菌屬（Bifidobacterium species)部 分菌種及部分酵母菌(yeast)等多種菌類。
[0003] 甘露低聚糖又稱甘露寡聚糖，是從酵母培養(yǎng)細(xì)胞壁中提取的一類新型抗原活性物 質(zhì)，廣泛存在于魔芋粉、瓜爾豆膠、田箐膠及多種微生物細(xì)胞壁內(nèi)。它具有低熱、穩(wěn)定、安全 無毒等良好的理化性質(zhì)。
[0004] 圓苞車前子，Psyllium是Ginuceae科的一種草藥，原產(chǎn)于印度、伊朗，在地中海地 區(qū)國(guó)家，如法國(guó)、西班牙等國(guó)亦有栽培。圓苞車前草莖粗短，葉長(zhǎng)橢圓形，種子含珊瑚木苷 (Aucubine )、酵素、脂肪、黏膠質(zhì)(Muci Iage)等成分。圓荀車前草的種子外殼經(jīng)加工磨碎后， 稱為圓苞車前子殼粉，或洋車前子纖維(PsyIlium Husk Powder)。
[0005] 低聚果糖又稱蔗果低聚糖，是由1~3個(gè)果糖基通過β( 2-I)糖苷鍵與蔗糖中的果 糖基結(jié)合生成的蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖等的混合物。
[0006] 玉米低聚肽粉，拉丁文名稱為Cornoligopeptidespowder，其是以玉米蛋白粉為原 料，經(jīng)調(diào)漿、蛋白酶酶解、分離、過濾、噴霧干燥等工藝生產(chǎn)而成的。
[0007] 菊粉（Inulin)是一類天然果聚糖的混合物，來源于菊苣根(拉丁學(xué)名：Cichorium intybus var. sativum，Asteraceae)。以菊苣根為原料，去除蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)后，經(jīng)噴霧干 燥等步驟獲得菊粉。果聚糖是果糧單元通過(2-1)鏈聯(lián)接而成并以葡萄糖單元終止的碳水 化合物，通常商品化菊粉中果聚糖的平均聚合度為2 - 60,其中含有少量的低聚果糖。
[0008] 隨著現(xiàn)今社會(huì)生活節(jié)奏加快，加之人們飲食營(yíng)養(yǎng)失調(diào)、長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)不足，各種益生菌 制品不斷推陳出新，最普遍常見的便是添加有益生菌的飲料制品或食品組成物。但目前的 益生菌制品多為調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，功效較單一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 為了彌補(bǔ)以上領(lǐng)域的不足，本發(fā)明公開了一種益生菌組合物，該組合物不僅能有 效調(diào)節(jié)腸道菌群，同時(shí)也能增強(qiáng)人體的免疫力。
[0010] 本發(fā)明所提供的益生菌組合物，主要由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成：嗜酸乳 桿菌菌粉1%-3%、干酪乳桿菌菌粉0.5%-1.5%、乳雙歧桿菌菌粉1%-3%、甘露低聚糖 5%-8%、圓苞車前子粉3%-5%、低聚果糖40%-60%、玉米低聚肽粉2%-5%、菊粉3%-5%、藍(lán)莓粉5%-8%和麥芽糊精10%-25%。
[0011]優(yōu)選地，所述益生菌組合物由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成：嗜酸乳桿菌菌粉 2%-3%、干酪乳桿菌菌粉1 %-1.5%、乳雙歧桿菌菌粉2%-3%、甘露低聚糖7%-8%、圓苞 車前子粉3 %-5 %、低聚果糖40 %-60 %、玉米低聚肽粉2 %-5 %、菊粉3 %-5 %、藍(lán)莓粉5 %-8 %和麥芽糊精10 %-23 %。
[0012] 所述益生菌組合物由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉2%、干酪 乳桿菌菌粉1 %、乳雙歧桿菌菌粉2%、甘露低聚糖8%、圓苞車前子粉3%、低聚果糖50%、玉 米低聚肽粉2 %、菊粉5 %、藍(lán)莓粉5 %、麥芽糊精22 %。
[0013] 所述益生菌組合物由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉3%、干酪 乳桿菌菌粉1 %、乳雙歧桿菌菌粉3%、甘露低聚糖8%、圓苞車前子粉5%、低聚果糖60%、玉 米低聚肽粉2%、菊粉3%、藍(lán)莓粉5%、麥芽糊精10%。
[0014] 所述益生菌組合物由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉1%、干酪 乳桿菌菌粉0.5%、乳雙歧桿菌菌粉1.5%、甘露低聚糖5%、圓苞車前子粉3%、低聚果糖 50%、玉米低聚肽粉2%、菊粉3%、藍(lán)莓粉5%、麥芽糊精10%。
[0015] 所述益生菌組合物由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉3%、干酪 乳桿菌菌粉1.5 %、乳雙歧桿菌菌粉3%、甘露低聚糖7 %、圓苞車前子粉4.5 %、低聚果糖 40%、玉米低聚肽粉5 %、菊粉5 %、藍(lán)莓粉8 %、麥芽糊精23 %。
[0016] 所述益生菌組合物由下述重量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉2.5%、干 酪乳桿菌菌粉1.5%、乳雙歧桿菌菌粉1 %、甘露低聚糖5%、圓苞車前子粉5 %、低聚果糖 60%、玉米低聚肽粉5%、菊粉5%、藍(lán)莓粉5%、麥芽糊精10%。
[0017] 本發(fā)明還公開了一種制備所述益生菌組合物的方法。
[0018] 本發(fā)明所公開的制備所述益生菌組合物的方法，包括以下步驟：
[0019] (1)按重量百分比將嗜酸乳桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉和乳雙歧桿菌菌粉混合均 勻得到混合物A;
[0020] (2)按重量百分比將圓苞車前子粉和玉米低聚肽粉混合均勻得到混合物B;
[0021] (3)按重量百分比將所述混合物A與菊粉混合均勻得到混合物C，按重量百分比將 所述混合物B與藍(lán)莓粉混合均勻得到混合物D;
[0022] (4)按重量百分比將所述混合物C、所述混合物D與甘露低聚糖混合均勻得到混合 物E;
[0023] (5)按重量百分比將所述混合物E與麥芽糊精混合均勻得到混合物F;
[0024] (6)按重量百分比將所述混合物F與低聚果糖混合均勻即得本發(fā)明的益生菌組合 物。
[0025] 所述益生菌組合物在調(diào)節(jié)腸道菌群和/或增強(qiáng)人體的免疫力中的應(yīng)用也屬于本發(fā) 明的保護(hù)范圍。
[0026] 本發(fā)明所制備的益生菌組合物中所選用的原料均為食品原料或國(guó)家允許用于保 健食品的原料，用量上嚴(yán)格限制在一定范圍，所以安全有效，無毒副作用。
【申請(qǐng)人】在廣泛研 究以上采用的各原料對(duì)調(diào)節(jié)腸道菌群和增強(qiáng)人體免疫力的作用的基礎(chǔ)上，嘗試了大量的組 合，但只在以上組合中觀察到協(xié)同作用。本發(fā)明所制備的益生菌組合物不僅能有效調(diào)節(jié)腸 道菌群，同時(shí)也能增強(qiáng)人體的免疫力。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 實(shí)施例1、制備益生菌組合物
[0028] 該實(shí)施例中所用的原料嗜酸乳桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉、乳雙歧桿菌菌粉、甘露 低聚糖、圓苞車前子粉、低聚果糖、玉米低聚肽粉、菊粉、藍(lán)莓粉和麥芽糊精均可從商業(yè)途徑 購(gòu)買得到。
[0029] 制備益生菌組合物的方法，包括以下步驟：
[0030] (1)按重量百分比將嗜酸乳桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉和乳雙歧桿菌菌粉混合均 勻得到混合物A;
[0031] (2)按重量百分比將圓苞車前子粉和玉米低聚肽粉混合均勻得到混合物B;
[0032] (3)按重量百分比將所述混合物A與菊粉混合均勻得到混合物C，按重量百分比將 所述混合物B與藍(lán)莓粉混合均勻得到混合物D;
[0033] (4)按重量百分比將所述混合物C、所述混合物D與甘露低聚糖混合均勻得到混合 物E;
[0034] (5)按重量百分比將所述混合物E與麥芽糊精混合均勻得到混合物F;
[0035] (6)按重量百分比將所述混合物F與低聚果糖混合均勻即得本發(fā)明的益生菌組合 物。
[0036] 經(jīng)長(zhǎng)期實(shí)踐，得到具有協(xié)同作用配比（以重量百分比為單位）的益生菌組合物，如 表1所示。
[0037] 表1實(shí)施例1制備得到的益生菌組合物

[0040] 根據(jù)以上配比制備得到不同的益生菌組合物，對(duì)這些組合物進(jìn)行如下功能試驗(yàn)。 [0041 ] 一、益生菌組合物調(diào)節(jié)腸道菌群
[0042] ( - )益生菌組合物調(diào)節(jié)腸道菌群動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0043] 1材料和方法
[0044] 1.1樣品:本實(shí)施例所制備的益生菌組合物，人體口服推薦量為每日2次，每次1袋， 成人體重按60kg計(jì)算，折合劑量為0.0667g/kg · bw。
[0045] 1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件：SPF級(jí)ICR種雄性小鼠40只，體重18g~22g，由湖南 斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(湘)2011-0003,實(shí)驗(yàn)條 件為屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)期間環(huán)境溫度22°C~23°C，濕度52%~58%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為 SYXK(湘）2010-0010。
[0046] 1.3劑量選擇及樣品處理:根據(jù)人體口服推薦量，設(shè)益生菌組合物低、中、高劑量分 別為〇.333g/kg · bw、0.667g/kg · bw、2.000g/kg · bw(分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30 倍）。試驗(yàn)時(shí)，分別取益生菌組合物3.33g、6.67g、20.0 Og加蒸餾水定容至200ml，按0.2ml/ IOg · bw體積給小鼠灌胃，每天一次，連續(xù)14天。對(duì)照組灌胃予以等體積的蒸餾水。
[0047] 1.4主要儀器與試劑
[0048] 1.4.1主要儀器電子天平，CO2水套培養(yǎng)箱，厭氧培養(yǎng)箱。
[0049] 1.4.2主要試劑伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基、TSC培養(yǎng)基、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷培養(yǎng)基、LBS 培養(yǎng)基、改良BBL培養(yǎng)基、樣品稀釋液等。
[0050] 1.5實(shí)驗(yàn)方法
[0051]實(shí)驗(yàn)前無菌采集小鼠糞便適量，置已稱重的帶玻璃珠的干燥滅菌小試管中，再稱 重，計(jì)算出小鼠糞便的重量，加入無菌稀釋液，稀釋10倍，振蕩1分鐘，再依次進(jìn)行10倍系列 稀釋，選擇合適的稀釋度，分別接種在各培養(yǎng)基上，按要求進(jìn)行培養(yǎng)。據(jù)糞便中雙歧桿菌的 基礎(chǔ)水平將40只小鼠分入對(duì)照組和低、中、高劑量組，每組10只小鼠，按1.3中劑量設(shè)置灌胃 14天，最后一次灌胃后24h，再次無菌采集小鼠糞便，同上檢測(cè)腸道菌群。各腸道菌群的培養(yǎng) 基和培養(yǎng)條件為： 腸桿菌： 伊紅-美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基 37°C 24h需氧培養(yǎng) 腸球菌： 疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基 37Γ 48h需氧培養(yǎng)
[0052] 產(chǎn)氣莢膜梭菌：TSC瓊脂培養(yǎng)基 37Γ 24h厭氧培養(yǎng) 乳桿菌： LBS瓊脂培養(yǎng)基 37°C 48h 5%C02培養(yǎng) 雙歧桿菌: 改良BBL瓊脂培養(yǎng)基 37°C 48h厭氧培養(yǎng)
[0053] 1.6實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
[0054]用ExceKSpss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用Spss軟件比較各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組數(shù)據(jù)時(shí)，先 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊行檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用 Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn) 行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá) 到方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的 Tamhan^ sT2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。對(duì)照組及各劑量組實(shí)驗(yàn)前后自身菌數(shù)比較采用配對(duì)t檢 驗(yàn)。
[0055] 1.7結(jié)果判定
[0056]比較實(shí)驗(yàn)前后自身及組間雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的變 化情況，實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性，或?qū)嶒?yàn)后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較差異 有顯著性、且實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性，符合以下一項(xiàng)，可以判斷受試樣品動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。
[0057] 1.7.1糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿 菌、腸球菌無明顯變化。
[0058] 1.7.2糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿 菌和/或腸球菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌/乳桿菌增加的幅度。
[0059] 2.結(jié)果
[0060] 2.1益生菌組合物對(duì)小鼠體重的影響
[0061] 見表1-1。實(shí)驗(yàn)前后受試物組動(dòng)物體重及實(shí)驗(yàn)期間體重增長(zhǎng)與對(duì)照組比較，差異無 顯著性(P>0.05)。
[0062] 表1-1益生菌組合物對(duì)小鼠體重的影響（i±S,g)
[0065] 2.2益生菌組合物對(duì)小鼠腸桿菌數(shù)量的影響
[0066] 見表1-2。實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)后腸桿菌數(shù)各劑量組與對(duì)照組比較均無顯著性差異（P> 0.05)。對(duì)照組及各劑量組實(shí)驗(yàn)前后自身比較，腸桿菌數(shù)量均無顯著性差異(P>0.05)。
[0067]表1-2益生菌組合物對(duì)小鼠腸桿菌數(shù)量的影響
[0069] 2.3益生菌組合物對(duì)小鼠腸球菌數(shù)量的影響
[0070] 見表1-3。實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)后腸球菌數(shù)各劑量組與對(duì)照組比較均無顯著性差異（P> 0.05)。對(duì)照組及各劑量組實(shí)驗(yàn)前后自身比較，腸球菌數(shù)量均無顯著性差異(P>0.05)。
[0071 ]表1-3益生菌組合物對(duì)小鼠腸球菌數(shù)量的影響
[0073] 2.4益生菌組合物對(duì)小鼠腸道產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響
[0074] 見表1-4。實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)后產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量各劑量組與對(duì)照組比較均無顯著性差 異(P>0.05)。對(duì)照組及各劑量組實(shí)驗(yàn)前后自身比較，產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均無顯著性差異(P> 0.05)〇
[0075] 表1-4益生菌組合物對(duì)小鼠腸道產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響
[0077] 2.5益生菌組合物對(duì)小鼠腸道乳桿菌數(shù)量的影響
[0078]見表1-5。實(shí)驗(yàn)前各組腸道乳桿菌數(shù)比較無顯著性差異(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)后高劑量組 腸道乳桿菌數(shù)與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<〇.05)，中、高劑量組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異 有顯著性(P<0.05)，對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異無顯著性(P>0.05)。
[0079]表1-5益生菌組合物對(duì)小鼠腸道乳桿菌數(shù)量的影響
[0081 ] 2.6益生菌組合物對(duì)小鼠腸道雙歧桿菌數(shù)量的影響
[0082]見表1-6。實(shí)驗(yàn)前各組腸道雙歧桿菌數(shù)比較無顯著性差異(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)后高劑量 組腸道雙歧桿菌數(shù)與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<〇.05)，高劑量組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差 異有顯著性(P<〇.05)，對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異無顯著性(P>0.05)。
[0083]表1-6益生菌組合物對(duì)小鼠腸道雙歧桿菌數(shù)量的影響

[0086] 3 小結(jié)
[0087] 在本實(shí)驗(yàn)室條件下，經(jīng)口灌胃給予小鼠0.333g/kg · bw、0.667g/kg · bw、2.000g/ kg · bw劑量的益生菌組合物14天，實(shí)驗(yàn)前后自身比較及實(shí)驗(yàn)后組間比較，小鼠腸道腸球菌、 腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌均無顯著性差異（P>〇 . 05)。實(shí)驗(yàn)前后自身比較，0.667g/kg · bw、 2.000g/kg · bw劑量組小鼠腸道乳桿菌數(shù)及2.000g/kg · bw劑量組腸道雙歧桿菌數(shù)顯著增 加(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)后2.000g/kg · bw劑量組小鼠腸道乳桿菌數(shù)、雙歧桿菌數(shù)與對(duì)照組比較 顯著增加(P<〇.05)。提示本發(fā)明的益生菌組合物對(duì)動(dòng)物具有調(diào)節(jié)腸道菌群作用。
[0088] (二)益生菌組合物調(diào)節(jié)腸道菌群人體試食試驗(yàn)
[0089] 1材料和方法
[0090] 1.1樣品
[0091 ]本實(shí)施例所制備的益生菌組合物;安慰劑作為對(duì)照。人口服每日2次，每次2克。 [0092] 1.2受試對(duì)象：
[0093] 1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)體檢合格符合下列條件的自愿受試者。
[0094] 1.2.1.1-個(gè)月內(nèi)未患過胃腸疾病者。
[0095] 1 · 2 · 1 · 2-個(gè)月內(nèi)未服用過抗生素者。
[0096] 1.2.2受試者排除標(biāo)準(zhǔn):年齡在65歲以上者，妊娠或哺乳期婦女，過敏體質(zhì)及對(duì)本 品過敏者；合并有心血管、腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病及內(nèi)分泌疾病，精神病患 者;停服受試樣品或中途加服其它藥物，無法判斷功效或資料不全者;短期內(nèi)服用與受試功 能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者。
[0097] 1.3試驗(yàn)方法
[0098] 采用組間對(duì)照設(shè)計(jì)和自身對(duì)照設(shè)計(jì)。將符合納入標(biāo)準(zhǔn)并保證配合試驗(yàn)的自愿受試 者，按菌群狀況隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，并盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性 另IJ、飲食因素等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)。受試者按推薦劑量服用樣品或安慰劑，連續(xù)14天。試驗(yàn)期 間不改變?cè)瓉淼娘嬍沉?xí)慣，正常飲食。
[0099] 2觀察指標(biāo)
[0100] 各項(xiàng)觀察指標(biāo)于試食試驗(yàn)開始及結(jié)束時(shí)各測(cè)定一次。
[0101] 2.1安全性指標(biāo)
[0102] 2.1.1-般體格檢查:試驗(yàn)前詳細(xì)詢問受試者健康情況，了解受試者的精神、睡眠、 飲食、大小便等情況，并測(cè)量體重、血壓、心率，對(duì)所有受試者進(jìn)行常規(guī)體格檢查及必要的實(shí) 驗(yàn)室檢查。
[0103] 2.1.2血常規(guī):紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量測(cè)定等。
[0104] 2.1.3尿常規(guī):PH值、包細(xì)胞、尿糖等。
[0105] 2.1.4糞便常規(guī)。
[0106] 2.1.5血生化檢查(僅在試驗(yàn)開始前檢查一次）：血清總蛋白（TP)、白蛋白（ALB)、谷 丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽固醇(CH0L)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、 尿酸(UA)、血糖(GLU)測(cè)定。
[0107] 2.1.6心電圖、腹部B超、胸透等檢查(僅在試驗(yàn)開始前檢查一次）。
[0108] 2.1.7不良反應(yīng)觀察
[0109] 2.2功效指標(biāo)
[0110]于試食受試物前和連續(xù)服用受試物14天后，分別采集受試者糞便，進(jìn)行10倍系列 稀釋，選合適稀釋度，分別接種在各培養(yǎng)基上，按下列要求進(jìn)行培養(yǎng)，然后對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行菌 落計(jì)算。 腸桿菌： 伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基 37°C 24h需氧培養(yǎng) 腸球菌： 疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷培養(yǎng)基 37°C 48h需氧培養(yǎng) 產(chǎn)氣莢膜梭菌:TSC培養(yǎng)基 37°C 24h厭氧培養(yǎng)
[0111] 擬桿菌： 改良GAM培養(yǎng)基 37°C 48h厭氧培養(yǎng) 乳桿菌： LBS培養(yǎng)基 37°C 48h 5%C02培養(yǎng) 雙歧桿菌: 改良BBL培養(yǎng)基 37°C 48h厭氧培養(yǎng)
[0112] 3.結(jié)果判定
[0113] 符合以下任一項(xiàng)，且試食組試食前后自身比較及試食后試食組與對(duì)照組比較，差 異均有顯著性，可以判定該受試樣品具有調(diào)節(jié)腸道菌群功能的作用。
[0114] 3.1糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿菌 和/或腸球菌、擬桿菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌/乳桿菌增加的幅度。
[0115] 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0116] 資料結(jié)果用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，自身配對(duì)資料采用配對(duì)t檢驗(yàn)，試食組合對(duì)照組之 間在方差齊性的前提下，均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，否則進(jìn)行變量轉(zhuǎn)化后滿足方差齊性后采 用t檢驗(yàn)，如果方差仍然不齊，米用秩和檢驗(yàn)。
[0117] 5.結(jié)果
[0118] 雙盲法觀察結(jié)束揭曉:服食1號(hào)者為安慰劑，服食2號(hào)者為益生菌組合物。
[0119] 5.1-般情況:初始試驗(yàn)人群試食組52例，對(duì)照組52例，試食前后，受試者精神、睡 目民、飲食、大小便狀況未見異常。對(duì)照組：男/女為19/33,年齡為49.31 ±8.70歲;試食組:男/ 女為18/34,年齡為48.67±8.72歲。
[0120] 5.2安全性觀察
[0121] 5.2.1體重、血壓、心率、尿常規(guī)、大便常規(guī)、血常規(guī)指標(biāo)
[0122] 見表2-1。食用受試物14天后，試食組和對(duì)照組體重、血壓、心率均未見明顯異常改 變，尿常規(guī)、大便常規(guī)、血常規(guī)指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，提示樣品對(duì)機(jī)體健康無明顯損害。
[0123] 表2-1試食前后體重、血壓、心率、尿、大便、血常規(guī)變化情況（i±s) L0125J 5.2.2血生化指標(biāo)
[0126] 見表2-2。食用受試物前試食組和對(duì)照組血生化指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。
[0127] 表2-2試食前生化指標(biāo)(5士s):
[0130] 5.2.3腹部B超、心電圖、X線胸部透視檢測(cè)，均在正常范圍。
[0131] 5.2.4試食期間未見明顯不良反應(yīng)。
[0132] 5.3功效指標(biāo)：
[0133] 試食試驗(yàn)前后腸道菌群數(shù)量變化見表2-3。試食前，對(duì)照組和試食組腸道菌群數(shù)量 比較，P值均大于0.05,提示兩組之間具有可比性。試食后試食組乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量與 試食前及對(duì)照組試驗(yàn)后比較增加，差異皆有顯著性(P<〇.05);試食后產(chǎn)氣莢膜梭菌、腸桿 菌、腸球菌和擬桿菌數(shù)量無明顯變化(P > 0.05)。
[0134]表2-3試食前后腸道菌群數(shù)量變化(Cfu/g糞便，log X土 s)
[0136] 注:與試食前比較*P<0.05，與對(duì)照組比較*P<0.05
[0137] 5.4脫失率
[0138] 經(jīng)過14天試驗(yàn)后，試驗(yàn)組有0例受試者因間斷服用受試品無法判斷效果被篩除;對(duì) 照組有〇例受試者因間斷服用受試品無法判斷效果被篩除。最后有效試驗(yàn)人群試食組52例， 對(duì)照組52例。見表2-4。
[0139] 表2-4試驗(yàn)脫失率
[0141] 6 小結(jié)
[0142] 將受試者按菌群狀況隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，分別服用益生菌組合物或安慰 劑，14天后結(jié)果表明：試食組乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量與試食前比較增加，差異有顯著性(P< 0.05);試食后試食組乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05);試食后產(chǎn)氣莢膜 梭菌不增加，腸桿菌、腸球菌和擬桿菌數(shù)量無明顯變化。試食后，體重、血壓、心率、尿、大便、 血常規(guī)等各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均未見明顯異常改變，試食期間未觀察到明顯不良反應(yīng)。根據(jù)評(píng)價(jià) 標(biāo)準(zhǔn)，提示本實(shí)施例制備的益生菌組合物具有調(diào)節(jié)人體腸道菌群的作用。
[0143] 二、益生菌組合物增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)
[0144] 1材料和方法
[0145] 1.1樣品:本實(shí)施例制備的益生菌組合物，人體口服推薦量為每日2次，每次1袋，成 人體重按60kg計(jì)算，折合劑量為0.0667g/kg · bw。
[0146] 1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：ICR種雌性小鼠200只，體重18g~22g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK (湘）2011 -0003。每40只小鼠為一大 組，共五大組。免疫I組，進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn);免疫π組，進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)；免疫m組，進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；免疫IV組，進(jìn)行臟體比值測(cè)定、半數(shù)溶血值 (HC5q)的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定；免疫V組，進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí) 驗(yàn)、NK細(xì)胞的活性測(cè)定。每大組40只小鼠按體重隨機(jī)分為4小組，即對(duì)照組和低、中、高劑量 組，每組10只小鼠。
[0147] 1.3實(shí)驗(yàn)條件:為屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)期間環(huán)境溫度22°C~23°C，濕度52%~58%，實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK (湘)2010-0010。
[0148] 1.4劑量選擇及樣品處理:據(jù)人體口服推薦量，設(shè)本實(shí)施例益生菌組合物低、中、高 劑量分別為〇.333g/kg · bw、0.667g/kg · bw、2.000g/kg · bw(分別相當(dāng)于人體推薦劑量的 5、10、30倍）。試驗(yàn)時(shí)，分別取樣品3.338、6.678、20.0(^加蒸餾水定容至2001111，按0.21111/ IOg · bw體積給小鼠灌胃，對(duì)照組灌胃予以等體積的蒸餾水。每天一次，連續(xù)灌胃至少30天。
[0149] 1.5主要儀器與試劑:動(dòng)物臺(tái)秤、分析天平、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、 722分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、顯微鏡等。
[0150] 無菌手術(shù)器械、游標(biāo)卡尺、微量注射器、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、24孔和96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板， 96孔U型細(xì)胞培養(yǎng)板、玻璃器皿、紗布、試管、玻片架、200目篩網(wǎng)、計(jì)時(shí)器、血色素習(xí)慣、載玻 片等。
[0151] SRBC、生理鹽水、Hank ' s液、RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、青鏈霉素 、ConA、1 %冰醋 酸，lmo 1/L的HCL溶液，酸性異丙醇、MTT、PBS緩沖液(Ph7.2-7.4)、補(bǔ)體(豚鼠血清）、SA緩沖 液、瓊脂糖、都氏試劑、YAC-I細(xì)胞、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔 酶I、0.2mo 1/L的Tr i s-HCL緩沖液、2.5 % Tr i ton、印度墨汁、0.1 %的碳酸鈉、雞紅細(xì)胞、甲 醇、Giemsa染液等。
[0152] 1.6實(shí)驗(yàn)方法：
[0153] 1.6.1臟器/體重比值測(cè)定:稱重后處死小鼠，去除脾臟和胸腺，在電子分析天平上 稱重，計(jì)算臟/體比值。
[0154] 1.6.2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法）
[0155] 小鼠腹腔注射2% (v/v)SRBC(0.2ml/每鼠）致敏后4天，測(cè)量左后足跖部厚度，然后 再測(cè)量部位皮下注射20%(v/v)SRBC(0.2ml/每鼠），于注射后24h測(cè)量左后足跖部厚度，同 一部位測(cè)量三次，取平均值。以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來表示DTH的程度。
[0156] 1.6.3ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTIti)
[0157] 無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank' s液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng) 過濾。用Hank's液洗2次，每次離心10分鐘（1000r/min)。然后將細(xì)胞懸浮于ImL完全培養(yǎng)液 中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3 X IO6個(gè)/ml。再將細(xì)胞懸液分兩孔加 入24孔培養(yǎng)板中，每孔ImL，在其中一孔加75μΙΧοηΑ液(相當(dāng)于7.5yg/mL)，另一孔作為對(duì)照， 置5 %二氧化碳培養(yǎng)箱，37 °C培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入 0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5mg/mL) 50yL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng) 技術(shù)后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板 中，每個(gè)孔作3個(gè)平行孔，用酶標(biāo)儀，以570nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。淋巴細(xì)胞的增殖能力用加 ConA孔的光密度值減去不加 ConA孔的光密度值表示。
[0158] 1 · 6 · 4抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jerne改良玻片法）
[0159] 取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心（2000r/min) IOmin，將壓積SRBC用生理鹽 水配成2% (v/v)的細(xì)胞懸液，每鼠腹腔注射0.2ml。4天后將小鼠處死，取脾，輕輕磨碎，用 Hanks液制成細(xì)胞懸液，200目篩網(wǎng)過濾，洗滌、離心2次，最后將細(xì)胞懸浮在8ml Hanks液中， 計(jì)數(shù)細(xì)胞，并將細(xì)胞濃度調(diào)整為5 X IO6個(gè)/mL。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后與等量的PH7.4、2 倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加入用SA液配制的10 % SRBC50yL (V/v)、20yL脾細(xì)胞懸液(5\106個(gè)>〇，迅速混勻后傾倒于已刷薄層瓊脂糖的玻片上，待瓊 脂糖凝固后將玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后用SA液稀 釋的補(bǔ)體(1:8)加入到玻片凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1.5h后計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。
[0160] 1.6.5半數(shù)溶血值(HC5q)的測(cè)定
[0161] 取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2 % (v/v，用生理鹽水配制） SRBC0.2ml進(jìn)行免疫。4天后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置約lh，將凝固血與管壁剝離，使 血清充分析出，2000rpm離心10min，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為200倍，取ImL置試 管內(nèi)，依次加入10% (v/v，用SA緩沖液配制)SRBC 0.5mL，補(bǔ)體ImL(用SA緩沖液按1:8稀釋）。 另設(shè)不加血清的對(duì)照管（以SA緩沖液代替）。置37°C恒溫水浴中保溫30min后，冰浴終止反 應(yīng)。2000rpm離心10min，取上清lmL，加都氏試劑3mL。同時(shí)取10% (v/v，用SA緩沖液配制） SRBC 0.25mL，加都氏試劑至4mL于另一試管中，充分混勾，放置I Omiη后，于540nm處以對(duì)照 管作空白，分別測(cè)定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC5q)表示，按下式計(jì)算：
[0162] 半數(shù)溶血值(HC5q)=樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值X稀釋倍數(shù)
[0163] 1.6.6小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
[0164] 小鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射O.lmL，墨汁注入 后立即計(jì)時(shí)，于注入墨汁后第2、IOmin，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20yL，加入到2ml 0.1% Na2CO3溶液中，搖勻。以0.1 ^Na2CO3溶液作空白對(duì)照，用722型分光光度計(jì)在60nm波長(zhǎng)處比 色測(cè)光密度值(0D)。將小鼠處死，取肝、脾，稱重，計(jì)算吞噬指數(shù)a。
[0165] 1.6.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法）
[0166] 小鼠腹腔注射20 % (v/v，用生理鹽水配制）的雞紅細(xì)胞（2000rpmr，IOmin)懸液 ImL，間隔30min，頸椎脫臼處死，仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽 水2mL，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板lmin。取腹腔巨噬細(xì)胞洗液ImL，滴于載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒 內(nèi)，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗以除去未貼片細(xì)胞。晾干，以甲醇:丙酮 (1:1)固定，4% (VZV)Giemsa-磷酸緩沖液染色，用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下每片計(jì)數(shù)100個(gè) 巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)：
[0167] 吞噬率％ =吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100
[0168] 吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)
[0169] 1.6.8NK細(xì)胞活性的測(cè)定(乳酸脫氫酶測(cè)定法）
[0170]受試小鼠頸椎脫臼處死，無菌取脾，制成脾細(xì)胞懸液，用Hank's液洗2次，每次離心 IOmin(1000轉(zhuǎn)/min)，棄上清將細(xì)胞漿彈起，加入0.5ml滅菌水20秒，裂解紅細(xì)胞后再加入 0 · 5ml2倍Hank's液及8ml Hank's液，1000 rpm離心10min，用ImL含10 % 小牛血清的RPMI1640 完全培養(yǎng)液重懸，用1 %冰醋酸稀釋后計(jì)數(shù)，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)（活細(xì)胞數(shù)應(yīng)在 95%以上），調(diào)整細(xì)胞濃度為2 X IO7個(gè)/mL此為效應(yīng)細(xì)胞，取傳代后24h生長(zhǎng)良好的YAC-I細(xì) 胞用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為4 X IO5個(gè)/mL此為靶細(xì)胞；取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞 各100μLΧ效靶比50:1)，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 yL，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和2.5 % Triton各IOOyL;上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)平行孔，于37 °C，5 %二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清 IOOyL置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100yL，根據(jù)室溫反應(yīng)3-10min，每孔加入 lmol/L的HCL30yL，在酶標(biāo)儀490nm處測(cè)定光密度(0D)。
[0171 ] NK細(xì)胞活性=【（反應(yīng)孔OD-自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD-自然釋放孔OD)】X 100%
[0172] 1.7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：用Excel、Spss軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化和統(tǒng)計(jì)分析。用Spss軟件分析 時(shí)，先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異 再用Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)原始數(shù) 據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍 未達(dá)到方差齊，則改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的 Tamhane ' s檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。
[0173] 2 結(jié)果
[0174] 2.1受試物對(duì)小鼠體重的影響
[0175] 見表3-1~表3-5。各劑量組實(shí)驗(yàn)初期、實(shí)驗(yàn)中期、實(shí)驗(yàn)?zāi)┬∈篌w重及實(shí)驗(yàn)期間小鼠 體重增長(zhǎng)與對(duì)照組比較，差異均無顯著性(P>〇.05)。
[0176] 表3-1免疫I組小鼠體重($ 土s，g)
[0180]表3-3免疫ΙΠ 組小鼠體重(i±s，g)
[0187] 2.2受試物對(duì)小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響
[0188] 見表3-6。受試物各劑量對(duì)小鼠脾臟/體重比值和胸腺/體重比值無顯著影響（P> 0.05)〇
[0189] 表3-6受試物對(duì)小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響（[土s)
[0191 ] 2.3受試物對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響
[0192] 2.3.1受試物對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響
[0193] 見表3-7。中、高劑量組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力與對(duì)照組比較顯著提高（P< 0.05)〇
[0194] 表3-7受試物對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響（
[0196] 2.3.2受試物對(duì)小鼠 ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的影響
[0197] 見表3-8。高劑量組小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力與對(duì)照組比較顯著提高(P<0.05)。
[0198] 表3-8受試物對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的影響（孓土s:)
[0200] 2.4受試物對(duì)體液免疫的影響
[0201 ] 2.4.1受試物對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響
[0202] 見表3-9。中、高劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較顯著提高(P<0.05)。
[0203] 表3-9受試物對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響（
[0205] 2.4.2受試物對(duì)小鼠半數(shù)溶血值(HC5q)的影響
[0206] 見表3-10。高劑量組小鼠半數(shù)溶血值(HC5q)與對(duì)照組比較顯著提高(P<0.05)。
[0207] 表3-10受試物對(duì)小鼠半數(shù)溶血值(HC5q)的影響（[土s)
[0209] 2.5受試物對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
[0210] 2.5.1受試物對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清的影響
[0211]見表3-11。各劑量對(duì)單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力未見明顯影響(P>0.05)。
[0212]表3-11受試物對(duì)小鼠單核-巨細(xì)胞碳廓清的影響（X土
[0215] 2 · 5 · 2受試物對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響
[0216] 見表3-12-1、3-12_2。受試物各劑量對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力無顯著影 響（Ρ>0·05)。
[0217] 表3-12-1受試物對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬率的影響（^土s)
[0219]表3-12-2受試物對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞吞噬指數(shù)的影響（^土S)
[0221] 2.6受試物對(duì)小鼠 NK細(xì)胞活性的影響
[0222] 見表3-13。中、高劑量組小鼠 NK細(xì)胞活性與對(duì)照組比較顯著提高(P<0.05)。
[0223] 表3-13受試物對(duì)小鼠 NK細(xì)胞活性的影響（
[0225] 3結(jié)論
[0226] 在本實(shí)驗(yàn)室條件下，經(jīng)口灌胃給予小鼠 0.333g/kg · bw、0.667g/kg · bw、2.000g/ kg · bw劑量的受試物30天，2.000g/kg · bw劑量能增加 ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、血清 半數(shù)溶血值，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<〇.〇5) ;0.667g/kg · bw、2.000g/kg · bw劑量 能增加小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力、抗體生成細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞活性，與對(duì)照組比較差異有顯著 性(P<0.05);對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)、脾臟/體重比值、胸腺/體重比值、小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓 清能力及巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力無明顯影響(P>〇.05)。提示本實(shí)施例制備的益生菌 組合物具有增強(qiáng)免疫力的功能。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物主要由下述重量百分比的物質(zhì) 制備而成：嗜酸乳桿菌菌粉1 %-3%、干酪乳桿菌菌粉0.5%-1.5%、乳雙歧桿菌菌粉1 %-3%、甘露低聚糖5 %-8 %、圓苞車前子粉3 %-5 %、低聚果糖40 %-60 %、玉米低聚肽粉2 %-5%、菊粉3%-5%、藍(lán)莓粉5%-8%和麥芽糊精10%-25%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物由下述重量百 分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉2%-3%、干酪乳桿菌菌粉1%-1.5%、乳雙歧桿菌菌 粉2%-3%、甘露低聚糖7 %-8%、圓苞車前子粉3%-5 %、低聚果糖40%-60%、玉米低聚肽 粉2 %-5 %、菊粉3 %-5 %、藍(lán)莓粉5 %-8 %和麥芽糊精10 %-23 %。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物由下述重 量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉2%、干酪乳桿菌菌粉1%、乳雙歧桿菌菌粉2%、 甘露低聚糖8 %、圓苞車前子粉3%、低聚果糖50%、玉米低聚肽粉2 %、菊粉5%、藍(lán)莓粉5 %、 麥芽糊精22 %。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物由下述重 量百分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉3%、干酪乳桿菌菌粉1%、乳雙歧桿菌菌粉3%、 甘露低聚糖8 %、圓苞車前子粉5%、低聚果糖60%、玉米低聚肽粉2 %、菊粉3%、藍(lán)莓粉5 %、 麥芽糊精10 %。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物由下述重量百 分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉1 %、干酪乳桿菌菌粉0.5 %、乳雙歧桿菌菌粉1.5 %、 甘露低聚糖5 %、圓苞車前子粉3%、低聚果糖50%、玉米低聚肽粉2 %、菊粉3%、藍(lán)莓粉5 %、 麥芽糊精10 %。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物由下述重 量百分比的物質(zhì)制備而成：嗜酸乳桿菌菌粉3%、干酪乳桿菌菌粉1.5%、乳雙歧桿菌菌粉 3%、甘露低聚糖7%、圓苞車前子粉4.5%、低聚果糖40%、玉米低聚肽粉5%、菊粉5%、藍(lán)莓 粉8%、麥芽糊精23 %。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌組合物，其特征在于:所述益生菌組合物由下述重量百 分比的物質(zhì)制備而成:嗜酸乳桿菌菌粉2.5 %、干酪乳桿菌菌粉1.5 %、乳雙歧桿菌菌粉1 %、 甘露低聚糖5 %、圓苞車前子粉5%、低聚果糖60%、玉米低聚肽粉5 %、菊粉5%、藍(lán)莓粉5 %、 麥芽糊精10 %。8. -種制備權(quán)利要求1-7中任一所述的益生菌組合物的方法，包括以下步驟： (1) 按重量百分比將嗜酸乳桿菌菌粉、干酪乳桿菌菌粉和乳雙歧桿菌菌粉混合均勻得 到混合物A; (2) 按重量百分比將圓苞車前子粉和玉米低聚肽粉混合均勻得到混合物B; (3) 按重量百分比將所述混合物A與菊粉混合均勻得到混合物C，按重量百分比將所述 混合物B與藍(lán)莓粉混合均勻得到混合物D; (4) 按重量百分比將所述混合物C、所述混合物D與甘露低聚糖混合均勻得到混合物E; (5) 按重量百分比將所述混合物E與麥芽糊精混合均勻得到混合物F; (6) 按重量百分比將所述混合物F與低聚果糖混合均勻即得本發(fā)明的益生菌組合物。9. 權(quán)利要求1-7中任一所述的益生菌組合物在調(diào)節(jié)腸道菌群和/或增強(qiáng)人體的免疫力 中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23L33/135GK106072657SQ201610408040
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月8日
【發(fā)明人】曲明, 李文艷, 趙福健
【申請(qǐng)人】天津隆順榕發(fā)展制藥有限公司