專利名稱：治療免疫疾病的新的1,2－二苯基乙烯衍生物的制作方法
背景技術(shù)：
1，2-二苯乙烯衍生物具有很廣泛的活性，且以植物的天然成分廣泛地分布在自然界中。人們對1，2-二苯乙烯衍生物一直很感興趣，因?yàn)槿藗円呀?jīng)在一些天然存在的以及一些合成的1，2-二苯乙烯中觀測到廣泛的活性?；钚园咕?Hu，K.，等人，Canadian Journal of Microbiology，1998，44，1072)，抗白血病的(Mannila等人，Phytochemistry，1993，33，813)，制癌的(EP 641，767)，以及蛋白-酪氨酸激酶抑制活性(Thakkar，K.等人，J.Med.Chem.，1993，36，2950)。隨著5-(2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚從發(fā)光桿菌(Photorhabdus)中的分離，人們已經(jīng)設(shè)計并合成了它的一系列類似物，用作治療炎癥和牛皮癬以及干預(yù)蛋白激酶的有用試劑或組分。(Webster等人，WO 01/42231)。
眾所周知，T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起重要作用。T細(xì)胞與多種細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素(IL)，腫瘤壞死因子(TNF)，干擾素(IFN)以及粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞群體具有密切的聯(lián)系。T細(xì)胞的活化和增殖以及與它們相聯(lián)系的細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中以及致病的炎癥中各種各樣的生理學(xué)活動。例如，某些ILs抑制劑對于Th2支配的疾病可能有好處，而IFN-γ和TNF-α抑制劑對于治療Th1誘導(dǎo)的免疫疾病是有用的。
巨噬細(xì)胞是宿主防御體系的十分重要的組分，但它們也涉及在有些人類疾病的免疫期間組織損傷的形成。有效的拮抗劑可以阻斷隨后的炎癥癥狀(皮膚變紅，浮腫，疼痛以及功能不良)。CD86表達(dá)，一氧化氮以及TNF-α產(chǎn)物是體內(nèi)巨噬細(xì)胞功能的試驗(yàn)指針。通過抗原遞呈細(xì)胞，包括樹狀細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和活化的B細(xì)胞的CD86表達(dá)是與T細(xì)胞CD28相互作用所必須的，這種相互作用是T細(xì)胞充分活化所必須的。一氧化氮是一種有效微生物的巨噬細(xì)胞產(chǎn)物。TNF-α是一種在炎性細(xì)胞的補(bǔ)充和激化中十分重要的促炎細(xì)胞因子。
嗜中性白細(xì)胞在許多急性的和慢性的炎癥性病癥中對其它細(xì)胞型起支配作用。IL-8是一種由嗜中性白細(xì)胞產(chǎn)生的趨化因子，它除了對于單核細(xì)胞及其它白細(xì)胞是趨化性的，還可活化嗜中性白細(xì)胞。嗜中性的IL-8的負(fù)調(diào)節(jié)可以通過防止進(jìn)一步的嗜中性補(bǔ)充和活化，表現(xiàn)為有助于控制嗜中性的炎性活動的負(fù)反饋機(jī)制。
有些細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)廣泛的炎性和免疫反應(yīng)，這些反應(yīng)是感染或損傷和/或其它因素的結(jié)果。其它細(xì)胞因子具有更多特殊的功能。這些許多不同的細(xì)胞因子的功能與免疫細(xì)胞的復(fù)雜相互作用對適當(dāng)?shù)暮妥罴训拿庖吖δ鼙夭豢缮?。T細(xì)胞的活化經(jīng)常引發(fā)許多免疫的，炎性的和自身免疫疾病過程。相應(yīng)地，可有效地干預(yù)細(xì)胞因子形成的化合物具有預(yù)防和治療相關(guān)的病癥的應(yīng)用。
IL-2，一種15-kDa蛋白，是通過T細(xì)胞在抗原的刺激作用下分泌的，是正常的免疫響應(yīng)性所必需的。IL-2刺激B細(xì)胞和T細(xì)胞的增殖和活化，是一種可以導(dǎo)致細(xì)胞活化和增殖的有效細(xì)胞因子。IL-2受體是在活化B細(xì)胞，脂糖處理的單核細(xì)胞以及許多T細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的。臨床的研究表明IL-2活性的干涉可有效地抑制體內(nèi)免疫反應(yīng)[T.A.Waldmann，Immunol.Today，14，270(1993)]。
另一個細(xì)胞因子是白細(xì)胞介素-8(IL-8)，已經(jīng)證明其為一種引發(fā)和持續(xù)炎癥反應(yīng)的有力物質(zhì)。IL-8也是已知的屬于名稱為嗜中性的活化肽或單核細(xì)胞衍生的嗜中性活化肽。它通過趨化作用吸引嗜中性白細(xì)胞并觸發(fā)髓過氧物酶的釋放。IL-8被認(rèn)為與例如牛皮癬，過敏性反應(yīng)，風(fēng)濕病以及皮膚和肺的炎癥等疾病有關(guān)。
IFN-γ是一種干擾素系列的成員，最初是在淋巴細(xì)胞的促有絲分裂誘導(dǎo)下產(chǎn)生的。IFN-γ是由CD4+Th1細(xì)胞，CD8細(xì)胞，γ/ΔT細(xì)胞以及活化的天然殺傷細(xì)胞分泌的。它起到活化淋巴細(xì)胞以提高抗微生物和抗癌效果的作用。另外，它還起到調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞亞型的增殖，分化和響應(yīng)的作用。IFN-γ是通過淋巴細(xì)胞促細(xì)胞分裂素的響應(yīng)合成的，且可誘導(dǎo)主要組織兼容性復(fù)合體(MHC)第II類抗原的表達(dá)。IFN-γ可促進(jìn)包括MHC上調(diào)的許多免疫反應(yīng)的促炎方面。對于許多自身免疫疾病，與疾病結(jié)合的炎性過程都與提高的IFN-γ利用度有關(guān)。IFN-γ可能對自身免疫病的進(jìn)展或消退具有強(qiáng)的影響，該作用對特定的病癥是專一性的。
調(diào)節(jié)這些細(xì)胞活性以及結(jié)合的細(xì)胞因子活性的試劑對于科學(xué)研究和醫(yī)藥是十分有用的。我們現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多新的1，2-二苯乙烯化合物，且已經(jīng)表明這些新的化合物對T淋巴細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，嗜中性白細(xì)胞以及肥大細(xì)胞有影響，且可調(diào)節(jié)各種免疫的和炎癥的活性。相應(yīng)地，本發(fā)明提供了新型化合物，它們的用途，藥物組合物以及制備這些化合物的方法。
在第二方面，本發(fā)明提供式I的化合物作為T細(xì)胞，嗜中性白細(xì)胞，巨噬細(xì)胞以及它們的結(jié)合細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)劑，以及尤其是作為治療炎性的和自身免疫性疾病的試劑的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及包括本發(fā)明的化合物和/或其鹽的藥物組合物。另外，本發(fā)明涉及制備式I化合物的方法。發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供上述的通式I的化合物。R1的例子是選自下面的基團(tuán)a).H，b).未取代或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基，c).鹵素，d).CN，e).COOR6，f).NR7R8，g).S(O)2NR7R8，h).COR9，i).OR10，j).S(O)nR11，n＝0-2，及k).取代或未取代的環(huán)狀或雜環(huán)基團(tuán)。R2和R3取代基的例子獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組a).H，b).未取代或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基，c).鹵素，d).CN，e).COOR6，f).NR7R8，g).S(O)2NR7R8，h).COR9，i).OR10，j).S(O)nR11，n＝0-2，及k).取代或未取代的環(huán)狀或雜環(huán)基團(tuán)。R4和R5的取代基的例子獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組a).H，b).未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基，及c).?；?。R6的取代基的例子選自a).H，b).未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基。R7和R8獨(dú)立地選自由下面的基團(tuán)組成的組a).H，b).未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基。R9的取代基的例子選自a).H，b).未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基，以及c).NR7R8。R10的取代基的例子選自a).H，b).未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基，以及c).酰基。R11的取代基的例子選自a).H和b).未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基。Ar選自a).未取代的，單或多取代的苯基，條件是R2和R3不能同時為H，b).含有O，S和/或N的未取代的，單或多取代的五元雜環(huán)，以及c)。含有O，S和/或N的未取代的，單或多取代的六元雜環(huán)。Ar上取代基的例子選自a).H，b).未取代或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基，c).鹵素，d).CN，e).COOR6，f).NR7R8，g).S(O)2NR7R8，h).COR9，i).OR10，j).S(O)nR11，n＝0-2，及k).取代或未取代的環(huán)狀或雜環(huán)基團(tuán)。
本發(fā)明的化合物具有反式和順式(E和Z)異構(gòu)體。本發(fā)明包括化合物的全部立體異構(gòu)體，例如包括以反式、順式的形式存在那些立體異構(gòu)體。本發(fā)明化合物的單獨(dú)的立體異構(gòu)體可以基本上無其它異構(gòu)體，或可能為混合異構(gòu)體。
優(yōu)選的化合物為其中R4和R5為氫，甲基和乙?；幕衔?。
特別優(yōu)選的化合物為其中R1為氫或烷基，R4和R5為氫，甲基和乙?；幕衔?。非常優(yōu)選的化合物為下面的化合物5-(1-芐基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(1)；5-[1-(4-甲基芐基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(2)；5-[1-(3-氟芐基)-2-(3-氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(3)；5-[1-(3，5-二氟芐基)-2-(3，5-二氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(4)；5-(1-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(5)；2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈(6)；2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈(7)；5-(2，2-二苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(8)；3-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(9)；3-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(10)；1-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯(11)；5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(12)；1-(3，5-二甲氧基苯基)-2-苯基丙烯(13)；5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-1，3-苯二酚(14)；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶(15)；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶鹽酸鹽(16)；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]噻吩(17)；2-異丙基-5-(2-噻吩-2-基乙烯基)-1，3-苯二酚(18)；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]呋喃(19)；5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚二乙酸酯(20)；2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙酸(21)；3-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙酸(22)。
本發(fā)明的化合物可形成鹽。因此，本發(fā)明的化合物包括鹽。在此使用的術(shù)語“鹽”，表示與無機(jī)和/或有機(jī)酸和堿形成的酸性和/或堿性鹽。適宜的酸包括藥學(xué)上可接受的酸，例如，鹽酸，硫酸，硝酸，苯磺酸，乙酸，馬來酸，酒石酸等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的是，可根據(jù)物理和化學(xué)穩(wěn)定性，流動性，吸水性和溶解度選擇適當(dāng)?shù)柠}。雖然藥學(xué)可接受的鹽為優(yōu)選的，特別是當(dāng)使用本發(fā)明的化合物作為藥劑時，但其它的鹽也得到應(yīng)用，例如，在制備這些化合物中，或當(dāng)預(yù)期使用非藥劑類型時。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的式I的化合物可用作T細(xì)胞，嗜中性白細(xì)胞，巨噬細(xì)胞以及與它們有關(guān)的細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)劑，可用于由這些細(xì)胞和細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的病癥。本發(fā)明的化合物可用于包括特定的自身免疫和炎癥性的病癥以及與移植排斥有關(guān)的或引起移植排斥的狀況。本發(fā)明的化合物的應(yīng)用包括治療(包括改善，降低，消除或治愈病源或癥狀)和/或預(yù)防(包括實(shí)質(zhì)上的或完全限制，預(yù)防或避免)與上述活性有關(guān)的病癥。這樣的應(yīng)用通過以下的例子說明，但不局限于治療和/或預(yù)防以下范圍的病癥，例如移植[如器官移植，急性移植或異種移植或同種移植(如用于燒傷治療)]排斥；缺血性或再灌注損傷的保護(hù)作用，如在器官移植期間，心肌梗塞，中風(fēng)或其它原因引起的缺血性或再灌注損傷的保護(hù)作用；移植耐受誘導(dǎo)；關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，干癬性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎)；多發(fā)性硬化；炎癥性腸病，包括潰瘍性大腸炎和克羅恩氏??；狼瘡(全身性紅斑狼瘡)；與寄主移植的疾??；T細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)疾病，包括接觸超敏反應(yīng)，延遲型超敏反應(yīng)，和谷蛋白敏感的腸道病(腹腔疾病)；牛皮癬；接觸性皮炎(包括那些由于毒葉藤導(dǎo)致的)；橋本氏甲狀腺炎；絲耶格倫氏綜合癥；自身免疫甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)，例如格雷夫斯氏?。话⒌疑喜?腎上腺的自身免疫性疾病)；自身免疫多腺疾病(亦稱自身免疫多腺綜合癥)；自身免疫禿頭癥；惡性貧血；白癲風(fēng)；自身免疫垂體功能減退癥；吉-巴氏綜合癥；其它自身免疫疾?。谎芮蛐阅I炎，血清??；蕁麻疹(uticaria)；過敏性疾病例如呼吸性過敏癥(哮喘，枯草熱，過敏性鼻炎)或皮膚過敏癥；scleracierma；蕈樣真菌病；急性炎癥性反應(yīng)(例如急性呼吸困難綜合癥和局部缺血/再灌注損傷)；皮肌炎；局限性禿頭；慢性光化性皮炎；濕疹；貝切特氏??；膿皰病palmoplanteris；膿皮病壞疽；塞查賴氏綜合癥；特異性皮炎；系統(tǒng)性硬化；硬斑病和糖尿病，再狹窄，外科粘連，肺結(jié)核，和慢性炎癥性肺病(例如，哮喘，肺塵埃沉著病，慢性阻塞性肺病，鼻息肉和肺纖維化)。
本發(fā)明還提供發(fā)明的化合物用于治療和預(yù)防上述的病癥，例如特應(yīng)性的病癥的應(yīng)用。另外，本發(fā)明的化合物可有效用于在哮喘，過敏性鼻炎及其它過敏性疾病中起重要作用的肥大細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的脫粒作用。本發(fā)明的化合物可阻斷嗜中性的活化作用，例如可用于治療局部缺血和再灌注損傷。
本發(fā)明的化合物抑制誘導(dǎo)脫粒作用，而這種能力導(dǎo)致這些化合物除它們在T細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞上的作用以外的其它抗炎活性。優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物可有效用于治療哮喘，過敏性鼻炎及其它過敏性疾病的情況。本發(fā)明的化合物對巨噬細(xì)胞，嗜中性白細(xì)胞和T細(xì)胞的結(jié)合活性可能在上述任何病癥的治療中具有價值。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于治療上述典型的病癥，而不管它們的病源，例如，用于治療移植排斥，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，炎癥性腸病，狼瘡，全身性紅斑狼瘡，對寄主移植的疾病，T細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)疾病，牛皮癬，再狹窄，外科粘連，肺結(jié)核，和慢性炎癥性肺病(例如哮喘，肺塵埃沉著病，慢性阻塞性肺病，鼻息肉和肺纖維化)。橋本氏甲狀腺炎，吉-巴氏綜合癥，癌癥，接觸性皮炎，過敏性疾病例如過敏性鼻炎，哮喘，缺血性或再灌注損傷，或特異性皮炎。
本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物與其它治療劑結(jié)合的應(yīng)用?？蓪楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員所知的其它治療劑，例如環(huán)孢菌素A，F(xiàn)K506和雷帕霉素與本發(fā)明的化合物一起在本發(fā)明中使用。在使用本發(fā)明時，這樣的其它治療劑可能在本發(fā)明化合物給藥之前，給藥同時或在給藥之后給藥。
本發(fā)明還提供包括至少一種能夠以有效量治療上述病癥的式I化合物和一種藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。本發(fā)明的組合物可以含有其它為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的試劑，可能通過使用常規(guī)的固體或液體載體或稀釋劑，以及一類適合于所需要的給藥方式的藥物添加劑(例如，賦形劑，粘合劑，防腐劑，穩(wěn)定劑，調(diào)味劑等等)根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域眾所周知的工藝加以配制。
含有活性組分的本發(fā)明的藥物組合物可能為以適合于全身性，口服和/或局部使用的形式。例如，藥物組合物可能以無菌注射水溶液或油脂性懸浮液的形式。該懸浮液可能根據(jù)已知的技術(shù)使用適宜的分散劑或潤濕劑和如上所述的懸浮劑配制。無菌注射制劑還可以是一種在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的賦形劑和溶劑中可以是水，林格溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌的，固定油類通常作為溶劑或懸浮介質(zhì)使用。為此目的可以使用任何溫和的固定油，包括合成的甘油單酯或二酯。另外，脂肪酸例如油酸可以應(yīng)用于注射制劑。
對于直腸給藥的藥物也可以將通式I的化合物以栓劑的形式配制。這些組合物可以通過將藥物與一種適宜的無刺激性的賦形劑混合制備，該賦形劑在常規(guī)溫度下為固體但在直腸溫度下為液體，因此在直腸中融化釋放出藥物。這樣的材料為可可脂和聚乙二醇。
對于口服的制劑可為片劑，錠劑，糖錠，水溶液或油狀懸浮液，可分散性粉劑或粒劑，乳劑，硬的或軟的膠囊，或糖漿劑或酏劑?？诜猛镜慕M合物可以根據(jù)任何本領(lǐng)域已知的制備藥物組合物的方法制備。片劑中含有活性組分與適合于制造片劑的無毒藥學(xué)可接受的賦形劑的混合物。這些賦形劑可以是例如惰性的稀釋劑，如碳酸鈣，碳酸鈉，乳糖，磷酸鈣或磷酸鈉；造粒和崩解劑，如玉米淀粉或海藻酸；粘合劑，如淀粉，凝膠或阿拉伯膠，以及潤滑劑，如硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石粉。片劑可能是無包覆的或可能是為了延遲解體和在胃腸道吸收通過已知的技術(shù)包衣的，且由此提供比較長的持續(xù)作用時間。例如，可以使用一種時間延遲材料例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
本發(fā)明的藥物組合物還可以是水包油乳化劑的形式。油相可以是一種植物油，例如橄欖油或花生油，或一種礦物油例如液體石蠟或這些的混合物。適宜的乳化劑可以是天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂，和來源于脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或偏酯，例如單油酸山梨醇酯，和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧化乙烯單油酸山梨醇酯。乳劑還可能含有甜味劑和調(diào)味劑。糖漿劑和酏劑可以與甜味劑例如甘油，丙二醇，山梨糖醇或蔗糖一起制備。這種制劑還可能含有緩和劑，防腐劑和調(diào)味劑和著色劑。
對于局部使用，可使用含有式I化合物的乳膏，油膏，凝膠物，溶液或懸浮液，等等(對此用藥目的，局部用藥將包括洗口藥以及含漱劑)。這樣的局部制劑的制備已經(jīng)在本領(lǐng)域的藥物制劑中較好的描述，例如在Remington′sPharmaceutical Science，第17版，Mack出版社，Easton，PA中。對于局部用藥，這些化合物也可以以粉末或噴霧劑給藥，特別是以氣霧劑形式。
劑量水平在每天約0.01毫克-約140毫克/千克體重，可有效用于治療上述指明的病癥，或者每個患者可以每天約0.5毫克至約7克劑量給藥。例如，以每天每公斤體重約0.01至50毫克，或者每患者每天約0.5毫克至約3.5克，優(yōu)選每患者每天2.5毫克至1克給予本化合物可以有效地治療炎癥。然而可以理解，對于特殊病人的特定劑量水平將取決于許多因素，包括年齡，體重，通常的健康狀態(tài)，性別，飲食，給藥時間，給藥途徑，排泄速度，藥物結(jié)合和受到治療的特定疾病的嚴(yán)重程度。
與載體材料相結(jié)合以制備單一劑型的活性組分的量將隨治療的主體的改變和特別的給藥方式而不同。例如，人的口服制劑可以含有活性劑0.5毫克至5克，并與占組合物總量約百分之5至約95的適當(dāng)量的載體混合。劑量單元形式通常將含有約1毫克至約500毫克的一活性組分，典型地含有25毫克，50毫克，100毫克，200毫克，300毫克，400毫克，500毫克，600毫克，800毫克，或1000毫克。
本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明化合物的方法。本發(fā)明的化合物可以通過Webster等人在WO 01/42231中及在其它相關(guān)文獻(xiàn)(Treadwell等人J.Org.Chem.1999(64)，8718-8723；Hashimoto等人，WO 1994/020456)中所描述的合成方法合成，這些方法可以容易地推廣。此外，可以使用替換的方法或改良的方法。在此給出的實(shí)施例僅僅是用于說明的目的，不被認(rèn)為是對本發(fā)明的限制。一般說來，本發(fā)明化合物的1，2-二苯乙烯結(jié)構(gòu)可以借助于由下列反應(yīng)路線1-3所列出的反應(yīng)合成Wittig烯化作用(反應(yīng)路線1)，格氏反應(yīng)(反應(yīng)路線2)和縮合反應(yīng)(反應(yīng)路線3)。
反應(yīng)路線1Wittig烯化作用
反應(yīng)路線2格氏反應(yīng) 反應(yīng)路線3醇醛縮合 本發(fā)明將參考下列非限制性的實(shí)施例進(jìn)行更詳細(xì)的描述。對原料和方法許多改進(jìn)對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，可以在不脫離本公開的目的和意圖下加以實(shí)踐。實(shí)施例1本發(fā)明化合物的生物學(xué)試驗(yàn)對于下列生物學(xué)活性的測定這些試驗(yàn)是本領(lǐng)域已經(jīng)建立好的和已知的，為清楚起見在此僅僅提供簡略的描述。1.本發(fā)明的化合物對T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)功能的作用T細(xì)胞測定通常用作測試許多疾病中調(diào)節(jié)免疫和炎性活動的活性的基本平臺。非特異性的T細(xì)胞增殖和特異的抗原增殖測定經(jīng)常使用在該測試中。
為確定本發(fā)明的化合物在非特異性的和特異的抗原誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖的作用，將化合物以如下列規(guī)程所列出的濃度范圍測試無菌除去鼠科動物的淋巴結(jié)，并在RPMI-1640中制備細(xì)胞懸浮液。在淋巴細(xì)胞-M上通過離心分離，對于1800g，在22℃下分離15分鐘，然后洗滌三次(對于500g，在22℃分離5分鐘)，則分離出單個的淋巴細(xì)胞。通過與纖維連接蛋白-涂覆的塑料培養(yǎng)皿的細(xì)胞粘連除去粘附細(xì)胞(在37℃進(jìn)行兩次，45分鐘)。通過在尼龍羊毛柱中培養(yǎng)細(xì)胞懸液分離T細(xì)胞，在37℃進(jìn)行2小時，然后用于隨后的實(shí)驗(yàn)，通過錐藍(lán)排除法確定能存活的T細(xì)胞大于95％。用絲裂霉素C(50μg/ml，在37℃進(jìn)行20分鐘)處理BALB/C脾細(xì)胞，而后用大量的Hank′s溶液洗滌五次，制備喂養(yǎng)細(xì)胞。用絲裂霉素C處理的BALB/C喂養(yǎng)細(xì)胞(2×105)在96孔圓底的微量滴定平皿(Costar Laboratories，Worcester，MA)中，用完全培養(yǎng)基(每100毫升介質(zhì)具有25mM Hepes和L-谷酰胺補(bǔ)充以5×105M 2-氫硫基-乙醇的RPMI1640，10％胎牛血清(FCS)，10,000單元青霉素，和10毫克鏈霉素)在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)一式兩份C57BL/6響應(yīng)器(2×105)。96小時后，向培養(yǎng)物孔加入[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]TdR；1μCi/孔)，然后在16小時時，通過在玻璃纖維濾紙上收獲細(xì)胞并在β-計數(shù)器中測量增殖。
如下列表1所示，本發(fā)明的化合物對與許多如上所述的病癥相聯(lián)系的T細(xì)胞增殖具有很強(qiáng)的抑制活性，且這些化合物可有效用于治療這些病癥。
表1. 對T細(xì)胞增殖提供50％抑制的濃度
2.本發(fā)明的化合物對細(xì)胞因子(IL-2，IL-4和IFN-γ)產(chǎn)物的作用為了測定本發(fā)明的化合物對從活化的T細(xì)胞生成的IL-2，IL-4和IFN-γ的作用，使用上述對于T細(xì)胞所列規(guī)程進(jìn)行下面的測定。通過伴刀豆球蛋白A(Con A)將T細(xì)胞活化，并進(jìn)行培養(yǎng)，用商用的與免疫的聯(lián)系的免疫吸收劑檢定(ELISA)試劑盒測定在上清液中的細(xì)胞因子。
表2和3的數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物對IL-2和IL-4產(chǎn)物具有很強(qiáng)的活性，可有效用于多種免疫和炎性病癥的治療。
表2 對IL-2產(chǎn)物的抑制活性
表3對IL-4產(chǎn)物的抑制活性(在10μM的濃度下測試化合物，數(shù)據(jù)以對照物的％表示)
類似地，本發(fā)明的化合物對IFN-γ具有很強(qiáng)的活性。
表4 對于IFN-γ的50％抑制濃度
3.對巨噬細(xì)胞和相關(guān)活性的作用巨噬細(xì)胞是宿主防御體系的十分重要的組分，但它們也涉及在某些人類疾病的炎癥期間組織損傷的形成。有效的拮抗劑可以阻斷隨后的炎癥癥狀(皮膚變紅，浮腫，疼痛以及功能不良)。CD86表達(dá)，一氧化氮和TNF-α產(chǎn)品是巨噬細(xì)胞體內(nèi)功能的實(shí)驗(yàn)指針。通過抗原遞呈細(xì)胞包括樹狀細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和活化B細(xì)胞的CD86表達(dá)是與T細(xì)胞CD28相互作用所必須的，這種相互作用是T細(xì)胞充分活化所必須的。一氧化氮是一種有效的微生物巨噬細(xì)胞產(chǎn)物。TNF-α是一種在炎性細(xì)胞的補(bǔ)充和激化中很重要的促炎細(xì)胞因子。本發(fā)明的化合物通過巨噬細(xì)胞對TNF-α產(chǎn)物的作用使用下面的規(guī)程測試將鼠科動物巨噬細(xì)胞從貼壁培養(yǎng)上移走并再次懸浮在10％FCS的DMEM溶液中。將細(xì)胞(5×104/孔)等分在平底組織培養(yǎng)-處理的微量滴定平皿中，加入脂糖，N-乙酰半胱氨酸，測試化合物或載體對照物。在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞24小時，從TNF-αELISA中除去培養(yǎng)物上清液，在流式細(xì)胞儀上通過FACS分析測定CD86表達(dá)。
如以下表5和6所示，當(dāng)上述測試實(shí)驗(yàn)中本發(fā)明的化合物濃度為1μM時對TNF-α產(chǎn)物和CDB6表達(dá)具有作用。
表5 化合物對TNF-α產(chǎn)物的作用(化合物在10μm的濃度下測試，且數(shù)據(jù)以對照物的％表示)
表6 本發(fā)明的化合物對鼠科動物巨噬細(xì)胞的CD86表達(dá)的作用(化合物為10μM濃度下測試，且數(shù)據(jù)以對照物的％表示)
4.在嗜中性白細(xì)胞上的作用嗜中性白細(xì)胞在許多急性的和慢性的炎性病癥的變體中對其它細(xì)胞型起支配作用。本發(fā)明的化合物對人類嗜中性白細(xì)胞活性的作用是通過化學(xué)引誘物[N-甲酰基-甲二磺?；?亮氨酰-苯丙氨酸(FMPL)]和結(jié)晶(焦磷酸鈣二水合物)，使用已確立的規(guī)程測試的(Crudan，C.1999.Biochem.Pharmacol 581869-1880)測定的。
嗜中性白細(xì)胞由新鮮收集的人類含檸檬酸鹽的全血制備。簡要地，將400毫升血液與80毫升4％右旋糖酐的pH值7.4的Hank5緩沖鹽水溶液(HBSS)混合，允許放置1小時。連續(xù)地收集血漿，然后將5毫升血漿加到15毫升聚丙烯管中的5毫升Ficoll Paque(Pharmacia)中。在500g離心分離30分鐘后，通過20秒的低滲震擾將嗜中性白細(xì)胞小粒洗滌至沒有紅細(xì)胞。將嗜中性白細(xì)胞在HBSS中再懸浮，在冰上保存并在3小時之內(nèi)用于實(shí)驗(yàn)。嗜中性白細(xì)胞存活性和純度總是大于90％。在輕微渦流下將測試化合物的溶液以5,000,000細(xì)胞每毫升加入到嗜中性白細(xì)胞中。在加入到用于嗜中性白細(xì)胞活化作用的結(jié)晶或化學(xué)引誘物之前，將細(xì)胞在33℃培養(yǎng)20分鐘，然后在37℃培養(yǎng)10分鐘。用光度計在37℃下監(jiān)測化學(xué)發(fā)光。
結(jié)果表明該化合物在以微摩爾級濃度的測試中顯示十分強(qiáng)的活性(表7)。類似地，此化合物對通過化學(xué)引誘物，N-甲?；?甲二磺酰-亮氨酰-苯丙氨酸誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞活化作用具有強(qiáng)的抑制活性(表8)。
表7. 5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(25μM)對結(jié)晶誘導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞活性的作用(通過化學(xué)發(fā)光(mV)測定，且數(shù)據(jù)以對照物的％表示)
表8. 25μM 5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚對FMLP誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞活性的作用(通過化學(xué)發(fā)光測定)
5.在源于鼠骨髓的肥大細(xì)胞中的調(diào)節(jié)劑釋放的作用組胺是一種重要的調(diào)節(jié)劑，與許多包括炎癥和變態(tài)反應(yīng)的生物學(xué)活性有關(guān)。用標(biāo)準(zhǔn)肥大細(xì)胞檢定法測試代表性化合物對組胺釋放的活性。(Arquardt，C.等人1986.Am Rev Respir Dis 1331105-1109)。肥大細(xì)胞來源于鼠骨髓。通過氨基己糖苷酶活化測定組胺釋放。表9概括了2-異丙基-5-(2-噻吩-2-基乙烯基)-1，3-苯二酚的活性。
表9. 測試化合物對通過肥大細(xì)胞的組胺釋放的作用
6.體內(nèi)抗炎活性體內(nèi)抗炎活性是用標(biāo)準(zhǔn)鼠浮腫動物模型證明的。簡要地，向每個鼠的右耳加入20μl 0.01％(w/v)佛波醇-12-豆蔻酸-13-乙酸酯(TPA)，誘導(dǎo)Balb/c鼠的耳浮腫。當(dāng)分別向每個鼠的右耳施加TPA時將每個測試化合物溶于相同的載體(乙醇)中。將每種測試化合物的鼠耳浮腫與TPA的鼠耳浮腫相比較，并以抑制的％表示。如以下的表10所概括，2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈在動物模型中具有十分強(qiáng)的抗炎活性。表10.在單獨(dú)局部給藥后2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈以及一種商用的抗炎化合物(骨化三醇)在誘導(dǎo)Balb/c鼠的浮腫中的體內(nèi)抗炎效果(數(shù)據(jù)以浮腫的抑制％表示)
化合物的合成合成實(shí)施例15-(1-芐基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(1)a).3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯白色結(jié)晶可根據(jù)WO 01/42231A2(Chen等人)所報道的方法得到。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.2Hz，6H)，3.66(七重峰，J＝7.2Hz，1H)，3.82(s，6H)，3.95(s，3H)，7.25(s，2H)。
b).2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1，3-二苯基丙-2-醇在回流下向在干醚(5ml)中的Mg(0.252g，10.4mmol)中滴加加入在干醚(3ml)中的芐基溴(1ml，8.41ml)。加料完成后，將反應(yīng)混合物進(jìn)一步回流1小時。加入在乙醚(15ml)中的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯(1.00g，4.20mmol)。酯完全消失后，將反應(yīng)混合物冷卻到室溫。加入水(10ml)，而后加入2N HCl(10mL)以溶解沉淀。分出有機(jī)層，并用乙醚(3×50ml)提取水層。將提取物用無水Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑而后用乙酸乙酯∶己烷(1∶9)快速色譜分離得到2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1，3-二苯基丙-2-醇(1.29g，79％)白色固體。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.28(d，J＝7.2Hz，6H)，3.08(d，J＝13.3Hz，2H)，3.35(d，J＝13.3Hz，2H)，3.6(m，1H)，3.95(s，6H)，6.44(s，2H)，6.9-7.5(m，10H)。
c).5-(1-芐基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(1)在-78℃，N2保護(hù)下向2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1，3-二苯基丙-2-醇(0.63g，1.6mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中滴加加入BBr3(1M CH2Cl2溶液，5.0ml，5.0mmol)。在-78℃攪拌反應(yīng)1小時后，溫度可上升到室溫，然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入水(50ml)，而后加入20％NaOH調(diào)節(jié)pH＞12。除去有機(jī)層，并用己烷(2×10ml)洗滌水層。將水層用6N HCl酸化至pH值為1，并用乙醚(3×50ml)提取。用水(10ml)和鹽水(10ml)洗滌萃取液，并用無水Na2SO4干燥。蒸發(fā)乙醚，而后用乙酸乙酯∶己烷(1∶9)快速色譜分離得到5-(1-芐基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(1)(0.26g，47％)液體，其在0℃靜置時固化。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.38(d，J＝7.1Hz，6H)，3.52(七重峰，J＝7.1Hz，1H)，4.08(s，2H)，6.51(s，2H)，7.13(s，1H)，7.2-7.4(m，10H)。
合成實(shí)施例25-[1-(4-甲基苯基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(2)a).1，3-雙(4-甲基苯甲基)-2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)丙-2-醇此物質(zhì)可以由3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯和4-甲基芐基溴用與實(shí)施例1(b)中所述相同的方法制備，收率20％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.30(d，J＝7.1Hz，6H)，2.31(s，6H)，3.02(d，J＝13.5Hz，2H)，3.25(d，J＝13.5Hz，2H)，3.52(m，1H)，3.71(s，6H)，6.45(s，2H)，6.8-7.2(m，8H)。
b).5-[1-(4-甲基苯甲基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(2)將上述得到的2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1，3-雙(4-甲基苯基)丙-2-醇(0.173g，0.41mmol)和鹽酸吡啶(0.432g，3.72mmol)在200℃在氬氣流下加熱3小時。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫。加入2N HCl(10ml)和乙醚(15ml)。分離有機(jī)層并用乙醚(2×15ml)提取水溶液。用無水Na2SO4干燥提取物。蒸發(fā)乙醚，而后用乙酸乙酯∶己烷(1∶9)快速色譜分離得到純的5-[1(Z)-1-(4-甲基芐基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]2-異丙基-1，3-苯二酚(17.7mg)，Z/E混合物(79.4mg)和純的5-[1(E)-1-(4-甲基芐基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(20.2mg)，總收率77％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ 5-[1(Z)-1-(4-甲基芐基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚1.38(d，J＝7.1Hz，6H)，2.28(s，3H)，2.36(s，3H)，3.5-3.8(m，1H)，3.67(s，2H)，4.69(s，2H)，6.07(s，2H)，6.31(s，1H)，6.94(s，4H)，7.13(s，4H)。5-[1(E)-1-(4-甲基芐基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚1.36(d，J＝7.1Hz，6H)，2.35(s，6H)，3.48(m，1H)，4.02(s，2H)，4.74(s，2H)，6.50(s，2H)，7.1-7.3(m，9H)。
合成實(shí)施例35-[1-(3-氟芐基)-2-(3-氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(3)a).1，3-雙(3-氟苯基)-2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)丙-2-醇此物質(zhì)是由3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯和3-氟芐基溴用與實(shí)施例1(b)中所述相同的方法制備的，收率70％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.29(d，J＝7.1Hz，6H)，1.85(s，1H)，3.07(d，J＝13.3Hz，2H)，3.29(d，J＝13.3Hz，2H)，3.56(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.72(s，6H)，6.42(s，2H)，6.7-7.2(m，8H)。
b).5-[1-(3-氟芐基)-2-(3-氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(3)此物質(zhì)由1，3-雙(3-氟苯基)-2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)丙-2-醇和吡啶鹽酸鹽用與實(shí)施例2(b)所述相同的方法制備，總收率73％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ5-[1(Z)-1-(3-氟芐基)-2-(3-氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚1.38(d，J＝7.1Hz，6H)，3.44(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.72(s，2H)，4.8(b，2H)，6.04(s，2H)，6.33(s，1H)，6.6-7.3(m，8H)。5-[1(E)-1-(3-氟芐基)-2-(3-氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚1.38(d，J＝7.1Hz，6H)，3.45(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，4.03(s，2H)，5.00(s，2H)，6.49(s，2H)，6.8-7.3(m，9H)。
合成實(shí)施例45-[1-(3，5-二氟芐基)-2-(3，5-二氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(4)a).1，3-雙(3-氟芐基)-2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)丙-2-醇此物質(zhì)是由1，3-二氟芐基溴和3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯用與實(shí)施例1(b)中所述相同的方法定量制備的。1HNMR(CDCl3，ppm)δ 1.28(d，J＝7.0Hz，6H)，1.83(s，1H)，3.04(d，J＝13.5Hz，2H)，3.26(d，J＝13.5Hz，2H)，3.56(五重峰，J＝7.0Hz，1H)，3.74(s，6H)，6.40(s，2H)，6.5-6.8(m，6H)。
b).5-[1-(3，5-二氟芐基)-2-(3，5-二氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚(4)此物質(zhì)由1，3-雙(3，5-二氟芐基)-2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)丙-2-醇和吡啶鹽酸鹽用與實(shí)施例2(b)所述相同的方法制備得到Z/E混合物，收率73％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.38(d，J＝7.1Hz，6H)，3.4(m，1H)，3.69，3.99(s，2H)，6.04，6.47(s，2H)，6.28，6.98(s，1H)，6.49-6.78(m，6H)。
合成實(shí)施例55-(1-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(5)a).1-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙醇向Mg(2g，82.2mmol)的干醚(100ml)懸浮液中加入在干醚(100ml)中的CH3I(5ml，80.4mmol)。加入完成后，將反應(yīng)混合物回流1小時，而后冷卻到0℃。加入LiBH4(2.0M在THF中，25ml，50mmol)，而后加入在干醚(300ml)中的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯(10.0g，42.0mmol)。將反應(yīng)在0℃下攪拌過夜。滴加水(50ml)，而后加入2N HCl(100ml)。分離有機(jī)層并用乙醚(4×200ml)提取水溶液。用無水硫酸鈉干燥提取物。蒸發(fā)溶液得到一種液體混合物。將此混合物不經(jīng)提純直接用于下一步。
b).甲基3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基酮將以上得到的醇混合物和氯鉻酸吡啶(22.64g，105.0mmol)在CH2Cl2(80ml)中在K2CO3(2.3g)的存在下攪拌1小時。反應(yīng)通過TLC監(jiān)測。反應(yīng)完成后(～1小時)，將反應(yīng)混合物倒入600ml乙醚中。將此混合物通過一短的硅酸鎂載體濾墊。將濾墊用乙醚徹底地洗滌，同時洗滌通過TLC監(jiān)測。蒸發(fā)溶劑，而后用乙酸乙酯∶己烷(2∶98到1∶9)快速色譜分離，得到純的3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基甲酮(3.65g，兩步收率39％)白色固體。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.31(d，J＝7.1Hz，6H)，2.62(s，3H)，3.67(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.90(s，6H)，7.16(s，2H)。
c).2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1-苯基丙-2-醇此化合物是由以上得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基甲基酮與一當(dāng)量的PhCH2MgBr用與實(shí)施例1(b)中所述相同的方法反應(yīng)制備的，收率78％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.1Hz，6H)，1.59(s，3H)，3.02(d，J＝13.9Hz，2H)，3.18(d，J＝13.9Hz，2H)，3.61(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.81(s，6H)，6.60(s，2H)，7.0-7.4(m，6H)。
d).5-(1-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(5)此化合物是由以上得到的2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1-苯基丙-2-醇和BBr3通過與實(shí)施例1(d)中所述相同的方法合成的，收率39％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.22(d，J＝7.0Hz，6H)，2.12(s，3H)，3.4(m，1H)，6.44(s，2H)，6.69(s，1H)，7.3-7.6(m，5H)，9.03(s，2H)。
合成實(shí)施例62-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈(6)a).3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醇在0℃，N2保護(hù)下向LiAlH4(95％)(5.00g，125mmol)的干醚(100ml)懸浮液中加入實(shí)施例1(b)中得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲酸甲酯(17.67g，90.1mmol)的乙醚(300ml)溶液。將懸浮液在0℃下攪拌一小時，然后在室溫下再攪拌一小時。通過在0℃下慢慢的加入飽和Na2SO4水溶液(10ml)猝滅反應(yīng)。將反應(yīng)混合物攪拌過夜。濾出固體，然后將濾液蒸干，得到3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醇(13.76g，收率88.3％)白色結(jié)晶。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.34(d，J＝7.2Hz，6H)，3.65(七重峰，J＝7.2Hz，1H)，3.88(s，6H)，4.70(s，2H)，6.62(s，2H)。
b).3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基溴在0℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)下向以上得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醇(12.57g，59.8mmol)的干醚(100ml)溶液中滴加加入PBr3(3.0ml，31.2mmol)。反應(yīng)通過TLC監(jiān)測。反應(yīng)完成后(～4小時)，加入水(180ml)。分離有機(jī)層并用乙醚(3×50ml)提取水層。用水(20ml)，飽和Na2CO3(20ml)，水(20ml)和鹽水(20ml)洗滌提取物，并用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶液得到此純的溴化物(14.93g，91.4％)白色固體。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.29(d，J＝7.1Hz，6H)，3.64(七重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.34(s，6H)，4.50(s，2H)，6.60(s，2H)。
c).3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基腈將以上得到的溴化物(4.81g，17.6mmol)和NaCN(1.64，33.5mmol)在DMF(30ml)中的懸浮液在50℃下攪拌2小時。TLC指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫并倒入水(200ml)中。過濾收集白色沉淀。用水(2×50ml)洗滌固體并在空氣中干燥，得到3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基腈(3.74g，97％)。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.29(d，J＝7.1Hz，6H)，3.60(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.74(s，2H)，3.84(s，6H)，6.51(s，2H)。
d).2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈(6)將3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基腈(1.00g，4.56mmol)，苯甲醛(0.49g，4.62mmol)和20％NaOH(15滴)溶液的混合物在乙醇(20ml)中回流約5小時。反應(yīng)完成后，將溶液冷卻到室溫。得到丙烯腈6的黃色針狀結(jié)晶(1.21g，86％)。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.1Hz，6H)，3.65(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.91(s，6H)，6.85(s，2H)，7.4-7.6(m，4H)，7.8-8.0(m，2H)。
合成實(shí)施例72-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈(7)此化合物由6和BBr3通過與實(shí)施例1(c)所述相同的方法制備。1HNMR(DMSO，ppm)δ1.23(d，J＝6.8Hz，6H)，3.3-3.4(m，1H)，6.27(s，1H)，6.63(s，2H)，7.38(s，1H)，7.5-7.6(m，2H)，7.65(s，1H)，7.3-7.9(m，1H)，9.39(s，2H)。
合成實(shí)施例85-(2，2-二苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(8)a).2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1，1-二苯基乙醇此化合物是由實(shí)施例6(b)中得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基溴，Mg和二苯甲酮用與實(shí)施例1(b)中所述相同的方法制備。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.24(d，J＝7.1Hz，6H)，3.3-3.5(m，1H)，3.56(s，6H)，3.72(d，J＝15.4Hz，2H)，6.04(s，2H)，7.2-7.7(m，10H)。
b).5-(2，2-二苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(8)此化合物是由以上得到的2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-1，1-二苯基乙醇和BBr3通過與實(shí)施例1(c)中所述相同的方法制備的。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.41(d，J＝7.0Hz，6H)，3.39(m，J＝7.0Hz，1H)，6.00(s，2H)，6.78(s，1H)，7.2-7.5(m，10H)。
合成實(shí)施例93-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(9)a).3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醛將實(shí)施例6(a)中得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醇(13.05g，62.1mmol)和氯鉻酸吡啶(33.92g，157mmol)的混合物于CH2Cl2(100ml)中，在K2CO3(4.18g，30mmol)的存在下攪拌30分鐘。加入乙醚(300ml)以猝滅反應(yīng)。將混合物通過一種薄的硅酸鎂載體濾墊，并將此濾墊用乙醚徹底洗滌。蒸發(fā)溶劑，得到3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醛(11.89g，收率92％)淺黃色結(jié)晶。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.2Hz，6H)，3.68(七重峰，J＝7.2Hz，1H)，3.92(s，6H)，7.12(s，2H)9.96(s，1H)。
b).3-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(9)此化合物是由以上得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醛，和芐基腈用與實(shí)施例6(d)中所述相同的方法制備的。1HNMR(CDCl3，ppm)1.33(d，J＝7.1Hz，6H)，3.73(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.91(s，6H)，7.15(s，2H)，7.4-7.5(m，4H)，7.6-7.8(m，2H)。
合成實(shí)施例103-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(10)此化合物是由3-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(9)和吡啶鹽酸鹽通過與實(shí)施例2(b)中所述相同的方法制備的。1HNMR(CDCl3，ppm)1.34(d，J＝7.0Hz，6H)，3.48(五重峰，J＝7.0Hz，1H)，6.95(s，2H)，7.2-7.5(m，5H)，7.6-7.7(m，1H)。
合成實(shí)施例111-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯(11)在0℃，N2保護(hù)下向(1-苯乙基)膦酸二乙酯(8.72g，36.0mmol)的THF(100ml)溶液中加入NaH(60％的礦物油溶液)(2.95g，73.8mmol)。加入完成后，將懸浮液在0℃下攪拌1小時，然后加入實(shí)施例9(a)中得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基苯甲醛(7.24g，34.8mmol)的THF(100ml)溶液。保持在0℃反應(yīng)1小時，而后在45-50℃下反應(yīng)10小時。將反應(yīng)冷卻到0℃。慢慢地加入水(50ml)以猝滅反應(yīng)，而后加入2N HCl(200mL)。將混合物用乙醚(3×200ml)提取。用無水Na2S04干燥提取物。蒸發(fā)乙醚，得到粗產(chǎn)品1-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯。將少量粗產(chǎn)品用10％乙酸乙酯的己烷溶液快速色譜分離純化，得到純的產(chǎn)物。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.33(d，3 7.1Hz，6H)，2.37(d，J＝1.3Hz，3H)，3.64(七重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.86(s，6H)，6.59(s，2H)，6.32(m，1H)，7.30-7.61(m，5H)。
合成實(shí)施例125-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(12)此化合物是由1-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯(11)和BBr3用與實(shí)施例1(c)中所述相同的方法制備的，收率63％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.42(d，J＝7.0Hz，6H)，2.32(d，J＝1.4Hz，3H)，3.49(七重峰，J＝7.0Hz，1H)，4.71(s，2H)，6.39(s，2H)，6.67(m，1H)，7.58-7.33(m，5H)。
合成實(shí)施例131-(3，5-二甲氧基苯基)-2-苯基丙烯(13)此物質(zhì)是由3，5-二甲氧基苯甲醛和(1-苯乙基)膦酸二乙酯用與實(shí)施例11中所述相同的方法合成的，收率73％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ2.33(d，J＝1.2Hz，3H)，3.85(s，6H)，6.43(t，J＝2.2Hz，1H)，6.56(d，J＝2.2Hz，2H)，6.81(d，J＝1.2Hz，1H)，7.3-7.7(m，5H)。
合成實(shí)施例145-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-1，3-苯二酚(14)此化合物是由1-(3，5-二甲氧基苯基)-2-苯基丙烯(13)和BBr3用與實(shí)施例1(c)中所述相同的方法制備的，收率63％。1HNMR(CD3C(O)CD3，ppm)δ2.21(d，J＝1.5Hz，3H)，6.23(t，J＝2.2Hz，1H)，6.36(d，J＝2.2Hz，2H)，6.68(m，1H)，7.2-7.6(m，5H)。
合成實(shí)施例152-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶(15)a).(3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基)膦酸二乙酯將實(shí)施例6(b)中得到的3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基溴(5.01g，18.3mmol)和亞磷酸三乙酯(4.7ml，27.4mmol)在Bu4NI(0.05g)的存在下在110-130℃加熱過夜。在110℃下減壓除去過量的亞磷酸三乙酯，得到目標(biāo)膦酸酯(5.58g，92％)。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.27(d，J＝7.1Hz，6H)，1.29(t，J＝7.0Hz，6H)，3.12(d，J＝21.5Hz，2H)，3.4-3.7(m，1H)，3.80(s，6H)，4.06(dt，J＝7.1，7.1Hz，4H)，6.50(d，J＝2.6Hz，2H)。
b).2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶(15)該物質(zhì)是由以上制備的膦酸酯和吡啶甲醛用和實(shí)施例11所述一樣的方法制備的，收率41％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.1Hz，6H)，3.65(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.88(s，，6H)，6.81(s，2H)，7.15(d，J＝16Hz，1H)，7.1-7.2(m，1H)，7.4-7.5(m，1H)，7.60(d，J＝16Hz，1H)，7.70(ddd，J＝7.9，7.9，1.8Hz，1H)，8.60-8.66(m，1H)。
合成實(shí)施例162-[2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶鹽酸鹽(16)除了將6N HCl加入到乙醚提取物中以鹽酸鹽形式沉淀出16以外，該物質(zhì)是由實(shí)施例15(b)中得到15和BBr3用和實(shí)施例1(d)所述相似的方法制備的，收率27％。1HNMR(DMSO，ppm)δ1.22(d，J＝7.0Hz，6H)，3.51(五重峰，J＝7.0Hz，1H)，6.59(s，2H)，7.13(d，J＝16.4，1H)，7.6-7.9(m，2H)，8.3-8.5(m，2H)，8.72(d，J＝6.4Hz，1H)。
合成實(shí)施例172-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]噻吩(17)此物質(zhì)是由實(shí)施例15(a)中得到的(3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基)膦酸二乙酯與噻吩甲醛用與實(shí)施例15(b)中所述相同的方法制備的，收率78％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.1Hz，6H)，3.70(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.89(s，6H)，6.69(s，2H)，6.90(d，J＝16Hz，1H)，7.0-7.3(m，4H)。
合成實(shí)施例182-異丙基-5-(2-噻吩-2-基乙烯基)-1，3-苯二酚(18)此物質(zhì)是由實(shí)施例17中得到的2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]噻吩和吡啶鹽酸鹽用與實(shí)施例2(b)中所述相同的方法制備的，收率24％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.40(d，J＝7.1Hz)，3.47(五重峰，J＝7.1Hz，1H)，4.8(b，2H)，6.48(s，2H)，6.74(d，J＝16Hz，1H)，7.0-7.1(m，3H)，7.2-7.3(m，1H)。
合成實(shí)施例192-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]呋喃(19)此物質(zhì)是由實(shí)施例15(a)中得到的(3，5-二甲氧基-4-異丙基芐基)膦酸二乙酯和2-糠醛用與實(shí)施例15(b)中所述相同的方法制備的，收率56％。1HNMR(CDCl3，ppm)δ1.32(d，J＝7.1Hz，6H)，3.62(七重峰，J＝7.1Hz，1H)，3.89(s，6H)，6.4-6.5(m，2H)，6.68(s，2H)，6.g5(d，J＝16.2Hz，1H)，7.06(d，J＝16.2Hz，1H)，7.45(b，1H)。
合成實(shí)施例205-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚雙乙酸酯(20)在0℃下向5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚(12)(3.93mmol)和三乙胺(10.8mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中滴加乙酰氯。反應(yīng)通過TLC監(jiān)測。反應(yīng)完成后(～30分鐘)，加入水(50ml)。分離有機(jī)層，并用2N HCl(30ml)，水(50ml)，飽和NaHCO3(50ml)，水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶液，而后用5％乙酸乙酯的己烷溶液快速色譜分離，得到5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚雙乙酸酯(20)。
合成實(shí)施例212-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯酸(21)將化合物2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈(7)在40％KOH中回流，直到原料(7)消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，加入2N HCl以調(diào)節(jié)pH值到1。用乙醚提取三次。用無水Na2SO4干燥提取物。蒸發(fā)溶劑，而后快速色譜分離得到化合物(21)。
合成實(shí)施例223-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯酸(22)將化合物3-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈(10)在40％KOH中回流，直到原料(10)消失。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，加入2N HCl以調(diào)節(jié)pH值到1。用乙醚提取三次。用無水Na2SO4干燥提取物。蒸發(fā)溶劑，而后快速色譜分離得到化合物(22)。
權(quán)利要求
1.式I的化合物，或其鹽 其中R1選自a)H，b)未取代或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基，c)鹵素，d)CN，e)COOR6，f)NR7R8，g)S(O)2NR7R8，h)COR9，i)OR10，j)S(O)nR11，n＝0-2，k)取代或未取代的環(huán)狀的或雜環(huán)基團(tuán)；R2和R3獨(dú)立地選自由下面的基團(tuán)組成的組a)H，b)未取代或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基，c)鹵素，d)CN，e)COOR6，f)NR7R8，g)S(O)2NR7R8，h)COR9，i)OR10，j)S(O)nR11，n＝0-2，k)取代或未取代的環(huán)狀的或雜環(huán)基團(tuán)；R4和R5各自獨(dú)立地選自由下面的基團(tuán)組成的組a)H，b)未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基，c)酰基；R6選自a)H，b)未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基；R7和R8獨(dú)立地選自由下面的基團(tuán)組成的組a)H，b)未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基；R9選自a)H，b)未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基，c)NR7R8；R10選自a)H，b)未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基，c)?；籖11選自a)H，b)未取代或取代的烷基，環(huán)烷基，芳基或芳烷基；Ar選自a)未取代的，單或多取代的苯基，條件是R2和R3不能同時為H，b)含有O，S和/或N的未取代的，單或多取代的五元雜環(huán)，c)含有O，S和/或N的未取代的，單或多取代的六元雜環(huán)；雙鍵的構(gòu)型為Z或E式。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自未取代的或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R2和R3獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組a).H，b).未取代的或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R1選自未取代的或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R2和R3獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組a).CN，b).COOR6，c).COR9。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中R1選自未取代的或取代的烷基，烯基，炔基，芳基或芳烷基。
7.權(quán)利要求2，4或6的化合物，其中R1選自未取代的或取代的烷基。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中R1為異丙基。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中Ar選自a).含有O，S和/或N的未取代的，單或多取代的五元雜環(huán)，b).含有O，S和/或N的未取代的，單或多取代的六元雜環(huán)。
10.權(quán)利要求13的化合物，其中Ar選自噻吩或呋喃。
11.式I的化合物，選自5-(1-芐基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚；5-[1-(4-甲基芐基)-2-(4-甲基苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚；5-[1-(3-氟芐基)-2-(3-氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚；5-[1-(3，5-二氟芐基)-2-(3，5-二氟苯基)乙烯基]-2-異丙基-1，3-苯二酚；5-(1-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚；2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈；2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙烯腈；5-(2，2-二苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚；3-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈；3-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯腈；1-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙烯；5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]吡啶鹽酸鹽；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]噻吩；2-異丙基-5-(2-噻吩-2-基乙烯基)-1，3-苯二酚；2-[2-(3，5-二甲氧基-4-異丙基苯基)乙烯基]呋喃；5-(2-甲基-2-苯基乙烯基)-2-異丙基-1，3-苯二酚二乙酸酯；2-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-3-苯基丙酸；3-(3，5-二羥基-4-異丙基苯基)-2-苯基丙酸。
12.一種藥物組合物，包含如權(quán)利要求1所定義的式I化合物或其鹽，以及一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
13.一種藥物組合物，包含如權(quán)利要求11所定義的化合物或其鹽，以及一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
14.權(quán)利要求1中定義的式I化合物用于治療。
15.權(quán)利要求11的化合物用于治療。
16.權(quán)利要求1或權(quán)利要求11的式I化合物在制備治療包括T細(xì)胞，嗜中性白細(xì)胞，巨噬細(xì)胞以及與它們有關(guān)的細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)的病癥的藥物中的應(yīng)用。
17.權(quán)利要求16的應(yīng)用，用于治療包括免疫的，炎性的和自身免疫的病癥。
18.治療哺乳動物的免疫的，炎性的或自身免疫的病癥的方法，包括給予患病的哺乳動物有效量的權(quán)利要求1或權(quán)利要求11的式I化合物或其鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的1，2－二苯基乙烯衍生物及其藥學(xué)可接受的鹽，制備這些化合物的方法，它們的藥物組合物，以及這些化合物作為T細(xì)胞，嗜中性白細(xì)胞，巨噬細(xì)胞以及與它們有關(guān)的細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)劑，在治療免疫的，炎性的和自身免疫的疾病中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/05GK1455766SQ02800121
公開日2003年11月12日 申請日期2002年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月18日
發(fā)明者陳庚輝, 劉衛(wèi), 李建雄, 麥爾康姆·約翰·韋伯斯特 申請人:維理生物技術(shù)公司