專利名稱：降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(hdl)和低密度脂蛋白(ldl ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療或者預(yù)防動(dòng)物，尤其是人的心血管疾病及其基礎(chǔ)病(underlying condition)的方法，所述心血管疾病及其基礎(chǔ)病包括動(dòng)脈粥樣硬化，脂血異常疾病或者失調(diào)。
背景技術(shù)：
雖然近年來科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步促進(jìn)了人生命質(zhì)量的提高和人壽命的延長(zhǎng)，但是動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防還是沒有充分解決，所述動(dòng)脈粥樣硬化是心血管疾病(“CVD”)的根本原因。動(dòng)脈粥樣硬化是一種衰退過程，源于遺傳(基因)因素和諸如飲食和生活方式的環(huán)境因素的相互影響。到目前為止的研究顯示，通過在血管中形成動(dòng)脈粥樣斑塊，根據(jù)斑塊在動(dòng)脈樹中的位置，最終阻斷對(duì)心肌的血液供應(yīng)或者對(duì)腦或四肢的血液供應(yīng)，膽固醇可能在動(dòng)脈粥樣硬化中起作用(1，2)。有關(guān)綜述顯示個(gè)體總血清膽固醇降低1％使冠狀動(dòng)脈事件的危險(xiǎn)性降低2％(3)。統(tǒng)計(jì)上，在美國，平均血清膽固醇減少10％(例如，從6.0mmol/L到5.3mmol/L)每年可以防止100,000人的死亡(4)。因此，與總膽固醇和低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的高濃度相關(guān)的高脂血癥是重要的危險(xiǎn)因素。
研究也顯示高密度脂蛋白(HDL)膽固醇的低血漿濃度是動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的重要危險(xiǎn)因素(5)，而高水平具有保護(hù)性。
脂蛋白是脂類和蛋白的復(fù)合物，由非共價(jià)鍵保持彼此結(jié)合。每種類型的脂蛋白具有特征性的質(zhì)量，化學(xué)組成，密度和生理作用。不管密度或顆粒大小是多少，循環(huán)脂類由膽固醇酯和甘油三酯的核心與磷脂、游離膽固醇和載脂蛋白的包膜組成。載脂蛋白參與脂蛋白的裝配和分泌，提供結(jié)構(gòu)完整性，激活脂蛋白修飾的酶，并且是大量受體和膜蛋白的配體。在血漿中發(fā)現(xiàn)的脂蛋白類型包括HDL、LDL、中密度脂蛋白(IDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)。
每種類型的脂蛋白具有特征性的載脂蛋白的組成或比例。HDL中最主要的載脂蛋白是載脂蛋白-AI(apo-AI)，其占蛋白質(zhì)量的大約70％，apo-AII占另外的20％。apo-AI和apo-AII的比例可以確定HDL的功能和抗粥樣化的特征。循環(huán)HDL顆粒由具有200到400千道爾頓分子量和7到10nm直徑的盤狀和球形顆粒的非均勻組合物組成。
HDL是一種主要類型的脂蛋白，所述脂蛋白用于轉(zhuǎn)運(yùn)血漿中的脂類，而且HDL在機(jī)體內(nèi)具有多種功能，包括膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)、提供膽汁酸合成的膽固醇分子底物、轉(zhuǎn)運(yùn)凝集素(clusterin)、轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)氧磷酶(paraoxonase)、防止脂蛋白氧化以及由腎上腺細(xì)胞選擇性攝取膽固醇。與HDL相關(guān)的主要脂類包括膽固醇，膽固醇酯，甘油三酯，磷脂和脂肪酸。
為了更好地理解HDL是如何抗粥樣化的，簡(jiǎn)要解釋一下動(dòng)脈粥樣硬化的過程是必要的。動(dòng)脈粥樣硬化的過程開始于LDL被捕捉在血管壁內(nèi)。這種LDL的氧化引起單核細(xì)胞和被覆血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合。這些單核細(xì)胞被激活并且遷移到內(nèi)皮間隙，在內(nèi)皮間隙單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化成巨噬細(xì)胞從而導(dǎo)致LDL的進(jìn)一步氧化。氧化的LDL被在巨噬細(xì)胞上的清道夫受體吸收，引起泡沫細(xì)胞的形成。通過動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移產(chǎn)生纖維帽(fibrou cap)，因此產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。
HDL對(duì)于轉(zhuǎn)運(yùn)肝以外組織的膽固醇到肝是非常重要的，在肝中膽固醇以游離膽固醇的形式或者以膽汁酸的形式分泌到膽汁中，所述膽汁酸是由膽固醇形成的。這個(gè)過程需要幾個(gè)步驟。第一步是在肝臟和腸中形成新生的或者前-βHDL顆粒。多余的膽固醇經(jīng)由ABCAI轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的作用遷移穿過細(xì)胞膜進(jìn)入新生的HDL中。卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽固醇酯，隨后將新生的HDL轉(zhuǎn)化為成熟的HDL。然后，酯化的膽固醇由膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)從HDL轉(zhuǎn)移到含有載脂蛋白-B的脂蛋白，所述脂蛋白被肝臟中的大量受體吸收。1新生的HDL由肝甘油三酯脂肪酶和磷脂轉(zhuǎn)移蛋白再生，并且繼續(xù)這個(gè)循環(huán)。除了從周圍細(xì)胞除去的膽固醇，HDL還接受來自LDL和紅細(xì)胞膜的膽固醇。其它膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制可以包括在缺乏膽固醇的膜和HDL或者其它受體分子之間被動(dòng)擴(kuò)散膽固醇。
HDL不僅通過其膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的作用還可能通過阻止LDL氧化的方式預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。幾種HDL-相關(guān)的酶參與這個(gè)過程。對(duì)氧磷酶(PON1)，LCAT和血小板活化因子乙酰水解酶(PAFAH)都通過水解在LDL氧化過程中生成的磷脂氫過氧化物參與這個(gè)過程，并且協(xié)同作用以預(yù)防氧化的脂類在LDL中的聚集。這些酶使HDL具有抗氧化和抗炎特性。
CETP是由肝臟和脂肪組織分泌的一種血漿脂轉(zhuǎn)移蛋白，其介導(dǎo)中性脂類和磷脂的轉(zhuǎn)移和交換(6)。CETP與VLDL、IDL和LDL的甘油三酯交換HDL的膽固醇酯。因?yàn)檫@些脂蛋白的分解代謝比HDL快，所以CETP促進(jìn)了HDL膽固醇酯的清除。這個(gè)過程引起HDL大小和蛋白含量的降低。因此，通過將膽固醇從外周移動(dòng)回到肝進(jìn)行處理，CETP無疑在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)中具有重要作用。
已證明，CETP的抑制可有效地調(diào)整血漿HDL/LDL的比例(7)，因?yàn)槟懝檀减腍DL到LDL的移動(dòng)具有降低HDL的作用。這些作用的證據(jù)由本領(lǐng)域的很多技術(shù)人員描述(8，9，10)。其它的CETP抑制劑由研究者們?cè)敿?xì)描述(11-19)。
此外，有很多專利和公布的申請(qǐng)公開了多種據(jù)說可用于抑制CETP作用的化合物。這些文獻(xiàn)包括美國專利5,519,001，其描述了一種來自狒狒Apo C-1的36個(gè)氨基酸的肽；WO公開物98/35937；歐洲專利申請(qǐng)796,846，其描述了2-芳基取代的吡啶；歐洲專利申請(qǐng)818,448，其描述了四氫哇啉衍生物；歐洲專利申請(qǐng)818,197，其描述了具有稠雜環(huán)的吡啶；PCT/US99/27946(公開物WO 00/38725)描述了一種包括已知的CETP抑制劑與回腸膽汁酸轉(zhuǎn)移抑制劑的聯(lián)合治療；美國專利5,932,587，其描述了雜環(huán)稠合的吡啶；美國專利5,948,435描述了大的脂質(zhì)體。
上述的參考文獻(xiàn)顯示了目的在于發(fā)展安全有效的脂類調(diào)節(jié)化合物的持續(xù)的和正在進(jìn)行的工作。本發(fā)明的一個(gè)目的就是消除或者緩解本領(lǐng)域已知的安全和有效性方面的缺點(diǎn)和不足。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種用于降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL通過這種給藥方式進(jìn)行控制。
本發(fā)明進(jìn)一步包括用于降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白和低密度脂蛋白之間轉(zhuǎn)移的組合物，所述組合物包括一種或者多種具有下式的化合物
其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及這些結(jié)構(gòu)的所有的鹽；以及藥用的或者食品級(jí)的載體。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種用于治療或者預(yù)防動(dòng)物心血管疾病及其基礎(chǔ)病，包括動(dòng)脈粥樣硬化，高血脂病，低α-脂蛋白血癥和高膽固醇血癥的方法，所述方法包括降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間的轉(zhuǎn)移，所述降低通過給動(dòng)物施用一種或者多種具有上述式的甾醇和/或甾烷醇(stanol)衍生物得以實(shí)現(xiàn)。
人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物可以令人驚奇地有效降低膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在HDL和LDL之間的轉(zhuǎn)移。尤其是，這樣引起血清HDL水平的升高。直到目前為止，還沒有人認(rèn)識(shí)到這些化合物對(duì)于CETP-介導(dǎo)的膽固醇轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)效果。本發(fā)明的目的就是提供一種優(yōu)良的方法以在體內(nèi)控制和調(diào)節(jié)周圍組織，細(xì)胞，膜和細(xì)胞外區(qū)域的脂類含量和組成。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于這種方法的化合物。
下面將更詳細(xì)地描述這些效果和其它主要優(yōu)點(diǎn)。


本發(fā)明通過下列非限制性附圖進(jìn)行說明，其中圖1是本發(fā)明的一種優(yōu)選化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)植物甾烷醇(phytostanol)-磷?；?抗壞血酸(也指FM-VP4)及其鈉鹽；圖2顯示了在脫氧膽酸鹽，TP2或者FM-VP4(本發(fā)明的一種化合物)存在或者不存在的條件下，CETP介導(dǎo)的[3H]CE從LDL向HDL的轉(zhuǎn)移，其中CETP是純化的。數(shù)據(jù)顯示為平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝4)；與對(duì)照值相比，*p＞0.05；ND＝低于分析的可檢測(cè)范圍；圖3顯示了在脫氧膽酸鹽，TP2或者FM-VP4(本發(fā)明的一種化合物)存在或者不存在的條件下，CETP介導(dǎo)的[3H]CE從LDL向HDL的轉(zhuǎn)移，其中CETP來自人血漿來源。數(shù)據(jù)顯示為平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝4)；與對(duì)照值相比，*p＞0.05；ND＝低于分析的可檢測(cè)范圍；和圖4顯示了在高濃度的本發(fā)明的化合物(FM-VP4)存在的條件下，CETP介導(dǎo)的[3H]CE從LDL向HDL的轉(zhuǎn)移，并且比較了純化的和人血漿來源的CETP。數(shù)據(jù)顯示為平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝4)；與FM-VP4相比，*p＞0.05。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案下列詳細(xì)描述的提供是為了幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí)施本發(fā)明。然而，這種詳細(xì)描述不應(yīng)該理解為過度的限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以進(jìn)行此處描述的這些實(shí)施方案的修改和改變，只要不背離本發(fā)明的精神和范圍。
根據(jù)本發(fā)明，提供了一種方法用于降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間的轉(zhuǎn)移，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL通過這種給藥方式進(jìn)行控制。
術(shù)語“治療有效的”目的在于鑒定化合物的給藥量，從而實(shí)現(xiàn)如下目的a)抑制CETP-介導(dǎo)的CE在HDL和LDL之間的轉(zhuǎn)移；以及因此b)提高HDL的水平；以及c)預(yù)防，降低，消除或者改善血脂異常癥或者失調(diào)；或者d)預(yù)防，降低，消除或者改善高膽固醇血癥，低α-脂蛋白血癥，中毒性休克綜合征或者動(dòng)脈粥樣硬化損傷的發(fā)展；或者e)預(yù)防，降低，消除或者改善具有下列特征的任意狀況、疾病或者失調(diào)它們以血漿中缺乏HDL或者具有過量的LDL，VLDL，Lp(a)，β-VLDL，IDL或者剩余脂蛋白作為其基礎(chǔ)，或者因此而惡化。
在一種優(yōu)選的方式中，所述方法進(jìn)一步包括周期性分析血漿LDL水平(通過本領(lǐng)域已知的和廣泛采用的技術(shù)進(jìn)行)以及調(diào)整待給藥化合物的量和/或濃度、或如果需要調(diào)整給藥方法的步驟。
利用本文描述的方法，血清HDL的水平得以提高，選自LDL，VLDL和IDL的致動(dòng)脈粥樣化的脂蛋白的水平被有效控制。血漿脂蛋白的調(diào)解和控制可用于預(yù)防，降低，消除或者改善大量疾病和失調(diào)，所述疾病和失調(diào)包括但不限于心血管疾病及其基礎(chǔ)病，包括動(dòng)脈粥樣硬化，血脂異常病或者失調(diào)，高膽固醇血癥，和低α-脂蛋白血癥，動(dòng)脈粥樣硬化損傷和中毒性休克綜合征的發(fā)展。很多其它疾病也可通過本發(fā)明的方法得以改進(jìn)，所述其它疾病以血漿中缺乏HDL或者具有過量的LDL，VLDL或者IDL作為其基礎(chǔ)，或者因此而惡化。
下面將更加詳細(xì)的描述化合物的成分。應(yīng)該注意到，在整個(gè)公開中，術(shù)語“化合物”、“衍生物”、“結(jié)構(gòu)”和“類似物”可以彼此互換應(yīng)用以描述上述結(jié)構(gòu)，所述結(jié)構(gòu)與甾醇或者甾烷醇(stanol)以及抗壞血酸相連，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以有效抑制CETP-介導(dǎo)的CE在HDL和LDL之間的轉(zhuǎn)移。
甾醇/甾烷醇(stanol)此處所用的術(shù)語“甾醇”包括所有沒有限制的甾醇，例如谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇(包括二氫菜子甾醇)，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇(chalinosterol)，多孔甾醇(poriferasterol)，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經(jīng)甾醇(nervisterol)，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇(stellasterol)，菠菜甾醇，軟骨甾醇(chondrillasterol)，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇(fecosterol)，pollinastasterol，膽固醇和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。術(shù)語“甾烷醇(stanol)”是指飽和的或者氫化的甾醇，包括所有的天然或者合成的形式及其衍生物，以及異構(gòu)體。應(yīng)該理解對(duì)于甾醇和甾烷醇(stanol)的修飾，即包括側(cè)鏈的修飾，也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，本發(fā)明的范圍無疑包括24β-乙基膽甾烷醇(ethylchlostanol)，24-α-乙基-22-脫氫膽甾烷醇(dehydrochol)。也應(yīng)該理解，當(dāng)在整個(gè)說明書中出現(xiàn)疑問時(shí)，除非另有說明，術(shù)語“甾醇”包括甾醇及甾烷醇(stanol)。
根據(jù)本發(fā)明，用于形成衍生物的甾醇和甾烷醇(stanol)可以自多種天然來源。例如，它們可以得自植物(包括水生植物)油的加工過程，諸如玉米油和其它的植物油，麥芽油，大豆提取物，水稻提取物，米糠，菜籽油，向日葵油，芝麻油和魚(以及其它海產(chǎn)來源)油。它們也可來自真菌，例如麥角甾醇，或者動(dòng)物，例如膽固醇。因此，本發(fā)明不限于任何一種甾醇來源。美國專利4,420,427講述了利用諸如甲醇的溶劑從植物油殘?jiān)苽溏薮肌；蛘?，植物甾醇和植物甾烷?phytostanol)可以得自描述在美國專利5,770,749的松漿油瀝青或者松漿油皂、森林開發(fā)的副產(chǎn)物，所述文獻(xiàn)引入本文作為參考。
在一種優(yōu)選的形式中，本發(fā)明的衍生物以天然來源或者合成的β-谷甾醇，菜油甾烷醇(campestanol)，谷甾烷醇(sitostanol)和菜油甾醇的形式形成，并且這樣形成的每種衍生物可以在以不同比例運(yùn)送之前混合成組合物。在另一種優(yōu)選的形式中，本發(fā)明的衍生物以天然來源的或者合成的谷甾烷醇(sitostanol)的形式或者以天然來源的或者合成的谷甾烷醇(sitostanol)的形式或者以天然來源的或者合成的菜油甾烷醇(campestanol)或者其混合物的形式形成。
在一種最優(yōu)選的形式中，甾醇為其飽和的形式并且為谷甾烷醇(sitostanol)。
R2R2包括抗壞血酸或者其任意的衍生物。在本發(fā)明的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)的是制備一種新的結(jié)構(gòu)或者化合物，其中甾醇或者甾烷醇(stanol)部分化學(xué)連接到抗壞血酸上。這種結(jié)合有益于并且加強(qiáng)了這種新的結(jié)構(gòu)的兩個(gè)部分。原來溶解性較差的植物甾醇部分作為新衍生物的一部分，變得非常容易溶于水和非水介質(zhì)，諸如油和脂肪中。因此，甾醇的給藥無需任何進(jìn)一步改進(jìn)以調(diào)整其運(yùn)送就可進(jìn)行。
R3R3可以是氫原子或者可以將母體化合物轉(zhuǎn)化為鹽。在選擇合適的鹽中最重要的考慮是，它們是可藥用的、保健的，或者可用于食品，飲料中。這樣的鹽必須具有可接受的陰離子或者陽離子。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，合適的酸加成鹽包括那些物質(zhì)，其來自無機(jī)酸，諸如氫氯酸，氫溴酸，磷酸，偏磷酸，硝酸，磺酸和硫酸；以及有機(jī)酸，諸如乙酸，苯磺酸，苯甲酸，檸檬酸，乙磺酸，富馬酸，葡糖酸，醛糖酸(glyconic)，羥基乙酸，異硫羰酸，乳酸，乳糖酸，馬來酸，蘋果酸，甲磺酸，琥珀酸，甲苯磺酸和酒石酸。
合適的堿鹽包括銨鹽，或者任意的金屬鹽，堿土金屬鹽或者堿金屬鹽。優(yōu)選地，R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。最優(yōu)選地，R3為鈉。
在本發(fā)明的一種最優(yōu)選的形式中，化合物為上述的結(jié)構(gòu)1，甾烷醇(stanol)為谷甾烷醇(sitostanol)并且R3為鈉。
衍生物的形成本發(fā)明的酯及其鹽的形成描述于PCT/CA00/00730中，其全文引入本文作為參考。
與膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)劑的組合在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的衍生物與一種或者多種調(diào)節(jié)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的藥劑或者化合物可以在給藥前混合、共給藥或者在一個(gè)時(shí)間間隔內(nèi)分別給藥。這種組合的原則依據(jù)如下的事實(shí)隨著CETP提高HDL的水平，從周圍組織轉(zhuǎn)移到肝臟中的膽固醇的量可以提高。這可能引起肝臟中LDL受體的下調(diào)和含apo B的顆粒的產(chǎn)量的提高。本發(fā)明的CETP-抑制劑和抑制腸再吸收膽固醇的化合物的組合通過保持遠(yuǎn)離肝臟的的化學(xué)組分梯度解決了這個(gè)問題，從而阻止肝脂蛋白的合成增加。調(diào)節(jié)膽固醇吸收的合適的化合物包括但不限于膽汁酸螯合物，膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑，植物甾醇，植物甾烷醇(phytostanol)，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的調(diào)節(jié)劑，PPAR(α和γ)的調(diào)節(jié)劑和依替米貝(ezetimibe)。
這些膽固醇吸收抑制劑和本發(fā)明的甾醇衍生物的組合是協(xié)同起作用的，產(chǎn)生并維持了調(diào)節(jié)脂類的有益效果。
作用機(jī)制雖然本發(fā)明的化合物對(duì)于CETP的精確的作用機(jī)制還不確定，但是存在兩種可能的解釋。這些化合物可能生理上阻斷CETP和脂蛋白的結(jié)合從而防止CE的轉(zhuǎn)移?；蛘撸景l(fā)明的化合物可以與CE競(jìng)爭(zhēng)接近-COOH末端的26個(gè)氨基酸的疏水結(jié)合位點(diǎn)，所述的競(jìng)爭(zhēng)方式類似于TP2單克隆抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。對(duì)任何一種方式而言，效果都是相同的。
使用方法可以多種不同的方式實(shí)現(xiàn)抑制CETP介導(dǎo)的CE在HDL和LDL之間轉(zhuǎn)移的需要效果。這些化合物可以利用任何適用于藥物，保健食品，食品，飲料等的常規(guī)方式進(jìn)行給藥。
不限制上述的一般性，本發(fā)明的衍生物可與多種載體或者佐劑混合，有助于直接給藥或者有助于將本發(fā)明的組合物摻入食品，飲料，保健食品或者藥物中。為了了解遞送衍生物的各種可能的載體，提供了如下的例舉。為了獲得需要的CETP抑制效果所必需的化合物的量或者劑量當(dāng)然將依據(jù)多種因素進(jìn)行確定，諸如，選擇的具體化合物、給藥方式、和預(yù)防，降低，消除或者改善血脂異常疾病或者失調(diào)的方式。
1)藥用劑型在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以設(shè)想本發(fā)明的化合物可以包含在多種常規(guī)藥物制劑和劑型內(nèi)，諸如用于口腔含服(bucally)或者舌下含服的片劑(普通的和包衣的)，膠囊(硬的和軟的，明膠，帶有或者不帶有其它的包衣)，粉末，顆粒(包括泡騰顆粒)，丸劑，微顆粒，溶液(諸如膠束，糖漿，酏劑和滴劑)，錠劑，軟錠劑，針劑，乳劑，微乳劑，軟膏劑，乳膏，栓劑，凝膠劑，經(jīng)皮貼劑和改良的釋放劑型連同常規(guī)賦形劑和/或稀釋劑和穩(wěn)定劑。
適合于上述合適劑型的本發(fā)明衍生物可以給藥給包括人類的動(dòng)物，給藥方式可以為口服，通過注射(靜脈內(nèi)，皮下，腹膜內(nèi)，皮內(nèi)，或者肌內(nèi))，局部或者其它方式。
優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物以磷脂系統(tǒng)，諸如脂質(zhì)體和其它水合脂類相的形式由生理包含轉(zhuǎn)運(yùn)。這種包含是指不必形成共價(jià)鍵而捕捉分子，廣泛用于提高活性成分的溶解性和隨后的分解。
包括脂質(zhì)體的水合脂類系統(tǒng)可利用多種脂類和脂類混合物進(jìn)行制備，所述脂類和脂類混合物包括磷脂，諸如磷脂酰膽堿(卵磷脂)，磷酸甘油二酯和鞘脂類，糖脂等等。脂類可以優(yōu)選與帶電荷物質(zhì)聯(lián)合使用，所述帶電荷物質(zhì)為，諸如帶電荷的磷脂，脂肪酸，及其鉀鹽和鈉鹽，目的在于穩(wěn)定產(chǎn)生的脂類系統(tǒng)。形成脂質(zhì)體的典型加工過程如下所述1)將本發(fā)明的脂類以及化合物分散在有機(jī)溶劑中(諸如，氯仿，二氯甲烷，醚，乙醇或者其它的醇，或者其混合物中)?？梢约尤霂щ姷姆N類以減少隨后在脂質(zhì)體形成過程中的聚集。也可加入抗氧化劑(諸如，棕櫚酸抗壞血酸酯，α-生育酚，丁基化羥基甲苯和丁基化羥基甲苯醚)以保護(hù)任何可能存在的不飽和脂類；2)過濾混合物去除少量的不溶性組分；3)在保證不出現(xiàn)組分分相的條件下(壓力，溫度)去除溶劑；4)通過暴露于含溶解的溶質(zhì)的水相介質(zhì)對(duì)“干燥的”脂類混合物進(jìn)行水合作用，所述溶解的溶質(zhì)包括緩沖鹽，鰲合劑，冷凍保護(hù)劑等等；和5)通過合適的技術(shù)，諸如均勻化，擠壓等，降低脂質(zhì)體的粒度并且改良形成片層的狀態(tài)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的用活性成分產(chǎn)生和負(fù)載水合脂類的任何方法都可以用于本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，制備脂質(zhì)體的合適方法描述在參考文獻(xiàn)20和21中，這兩個(gè)參考文獻(xiàn)都引入本文作為參考。這些方法的變體描述在美國專利5,096,629中，該文獻(xiàn)也引入本文作為參考。
美國專利4,508,703(也引入本文作為參考)描述了一種制備脂質(zhì)體的方法，通過將兩性的脂類組分和疏水的組分溶解形成溶液，并隨后在氣流中霧化溶液產(chǎn)生粉末狀混合物，由此制得脂質(zhì)體。
在其它的優(yōu)選形式中，本發(fā)明的化合物可以環(huán)糊精復(fù)合物的形式給藥。環(huán)糊精是一類環(huán)狀寡糖分子，包括吡喃型葡萄糖亞基并且具有環(huán)形圓柱體立體構(gòu)型。常用的這類分子包括含有六個(gè)(α-環(huán)糊精)，七個(gè)(β-環(huán)糊精)和八個(gè)(γ-環(huán)糊精)吡喃型葡萄糖分子的分子，其中極性(親水)的羥基朝向結(jié)構(gòu)的外側(cè)，并且非極性(親脂)骨架碳原子和醚的氧原子排列在環(huán)形的內(nèi)腔內(nèi)。這個(gè)空腔能夠通過以非共價(jià)方式的結(jié)合來容納(裝下)活性成分(客體分子，這里指本發(fā)明的衍生物)的親脂部分從而形成包含復(fù)合物。
環(huán)糊精分子的外部羥基取代基可被修飾從而形成具有對(duì)于水介質(zhì)的改良溶解性及其它需要的改良特征的衍生物，所述其它需要的改良特征為諸如降低的毒性等。這種衍生物的例子為烷基化衍生物，諸如，2，6-二甲基-β-環(huán)糊精；羥烷基化衍生物，諸如羥基丙基-β-環(huán)糊精；分支的衍生物，諸如二葡糖基-β-環(huán)糊精；磺烷基衍生物，諸如磺基丁基醚-β-環(huán)糊精；以及羧甲基化衍生物，諸如羧甲基-β-環(huán)糊精。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它類型的化學(xué)修飾也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
環(huán)糊精復(fù)合物通常賦予客體分子(這里指本發(fā)明的衍生物)改良的溶解性，分散性，穩(wěn)定性(化學(xué)的，物理的和微生物的)，生物利用率和降低的毒性的特性。
本領(lǐng)域中有多種已知的方式產(chǎn)生環(huán)糊精復(fù)合物。例如可通過使用如下的基本方法產(chǎn)生復(fù)合物在加熱或者不加熱的條件下，將一種或者多種衍生物攪拌到環(huán)糊精水溶液或者混合的水-有機(jī)溶液中；將環(huán)糊精與本發(fā)明組合物在合適的裝置中在添加合適量的水、有機(jī)液體或者混合水-有機(jī)液體，加熱或者不加熱的條件下進(jìn)行捏合，調(diào)漿或者混合；或者利用合適的混合裝置將環(huán)糊精和本發(fā)明的組合物進(jìn)行物理混合。這樣形成的包含復(fù)合物的分離可以通過如下過程實(shí)現(xiàn)共沉淀，過濾和干燥；擠出/球化和干燥；濕物質(zhì)的細(xì)分和干燥；噴霧干燥；冷凍干燥或者根據(jù)用于形成環(huán)糊精復(fù)合物的方法通過其他合適的技術(shù)進(jìn)行?？梢圆捎眠M(jìn)一步的機(jī)械研磨分離的固體復(fù)合物的任選步驟。
這些環(huán)糊精復(fù)合物進(jìn)一步提高了溶解性和溶解速率，并且提高了衍生物的穩(wěn)定性。
最優(yōu)選的是，本發(fā)明的化合物可以通過口服和靜脈內(nèi)治療聯(lián)合的方式進(jìn)行給藥。但是，每種情況下的精確輸送方式將依賴于給藥方案的目的，即所述輸送方式是否可以預(yù)防，降低，消除或者改善血脂異常病或者失調(diào)。在出現(xiàn)疾病和失調(diào)的情況下，輸送方式將依賴于失調(diào)的嚴(yán)重性，以及如上所述的個(gè)體的年齡，大小和性別。
2)食物/飲料/保健食品在本發(fā)明的另一個(gè)形式中，本發(fā)明的衍生物可以摻入食物，飲料和保健食品中，其包括但不限于下列物質(zhì)1)乳制品-諸如，干酪，黃油，牛奶和其他的乳制飲料，涂抹食品和乳制混合物，冰激淋和酸奶；2)基于脂肪的產(chǎn)品-諸如，人造奶油，涂抹食品，蛋黃醬，起酥油，烹飪和油炸油和調(diào)味品；3)基于谷物的產(chǎn)物-包括谷粒(例如，面包和意大利面)而不管這些食物是否被烹飪，烘烤或者進(jìn)行了其他的加工；4)甜食-諸如巧克力，糖果，口香糖，餐后甜點(diǎn)，非乳制澆頭(toppings)(例如，Cool WhipTM)，果汁冰糕，糖衣和其他的添加物；5)飲料-不管是酒精或者非酒精的，包括可樂和其它軟飲料，果汁飲料，食物添加劑和膳食替代飲料，諸如那些以商品名BoostTM和EnsureTM市售的飲料；和6)其它產(chǎn)品-包括蛋和蛋產(chǎn)品，加工的食物，諸如湯，預(yù)制備的意大利面醬，預(yù)制的食物等等。
本發(fā)明的衍生物可以通過諸如混合，灌輸，注射，摻合，分散，乳化，浸漬，噴灑和捏合的技術(shù)直接而不用進(jìn)一步的修飾地?fù)饺胧澄铮＝∈称坊蛘唢嬃现?。或者，在吸入前消費(fèi)者可以將衍生物直接應(yīng)用到食物上或者飲料中。這些是簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的遞送方式。
實(shí)施例本發(fā)明通過下列非限制性實(shí)施例進(jìn)行描述實(shí)施例1目的確定本發(fā)明的一種化合物是否能夠改良CETP-介導(dǎo)的膽固醇酯(CE)在HDL和LDL之間的轉(zhuǎn)移，所述化合物為水溶性的植物甾烷醇抗壞血酸酯(植物甾烷醇(phytostanol)-磷酰基-抗壞血酸)，也稱為FM-VP4。
脂蛋白的分離利用密度梯度超速離心法將血漿分離成HDL和LDL，用溴化鈉調(diào)整血漿密度。
血漿脂類和蛋白的定量來自SigmaTM的酶分析試劑盒被用于確定總的脂蛋白甘油三酯，膽固醇和蛋白的濃度。
試驗(yàn)設(shè)計(jì)包括補(bǔ)充和抑制CETP的試驗(yàn)策略被用于顯示通過本發(fā)明的一種化合物抑制CETP-介導(dǎo)的CE在脂蛋白之間的轉(zhuǎn)移。為了確定植物甾烷醇(phytostanol)-磷?；?抗壞血酸是否改進(jìn)了CE的轉(zhuǎn)移，富含[3H]膽固醇油酸酯([3H]CE)的LDL與高濃度的植物甾烷醇(phytostanol)-磷?；?抗壞血酸(10-100μM)在pH7.4的T150緩沖液中(50μMTris-HCl，150mM NaCl，0.02％疊氮化鈉，0.01％二鈉EDTA)共培養(yǎng)，所述緩沖液含有未標(biāo)記的HDL+/-純化的(即純化的或者人血漿來源)CETP(1-2μg蛋白/ml)，在37℃培養(yǎng)90分鐘。培養(yǎng)后，LDL進(jìn)行沉淀，確定在90分鐘的時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)移的CE的百分比。直接針對(duì)CETP的一種單克隆抗體-TP2(4μg蛋白/ml)，以及一種已知的表面活性劑-脫氧膽酸鹽(50μm)是與放射性標(biāo)記的LDL共培養(yǎng)的附加處理組。TP2被用于保證CE轉(zhuǎn)移的測(cè)定是由CETP-介導(dǎo)的，并且脫氧膽酸鹽被用于闡明上述觀察到的植物甾烷醇(phytostanol)-磷?；?抗壞血酸的效果不是非特異性的表面活性現(xiàn)象。
統(tǒng)計(jì)分析在存在不同處理組的條件下，CETP-介導(dǎo)的CE轉(zhuǎn)移活性的差別通過一種方式方差分析(PCANOAV；Human Systems Dynamics)進(jìn)行確定。臨界差別由Neuman-Keuls posthoc試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。如果p＜0.05差別被認(rèn)為是顯著的。所有的數(shù)據(jù)表示為+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差。
結(jié)果圖2清楚地顯示兩種試驗(yàn)濃度的植物甾烷醇(phytostanol)-磷?；?抗壞血酸對(duì)于抑制純化的CETP-介導(dǎo)的CE在LDL和HDL之間轉(zhuǎn)移的效力。在100μM，化合物將CE的轉(zhuǎn)移減少至低于某個(gè)水平，所述水平利用所述分析方法是可以檢測(cè)到的。圖3證實(shí)利用人血漿的這些結(jié)果與純化的CETP相反。類似地，圖4證實(shí)了FM-VP4的效果是通過CETP調(diào)節(jié)機(jī)制，而不是由其它一些方式產(chǎn)生。
結(jié)論很明顯，化合物抑制了CETP-介導(dǎo)的CE在LDL到HDL之間的轉(zhuǎn)移。膽固醇酯在LDL和HDL之間的轉(zhuǎn)移僅在由CETP介導(dǎo)的時(shí)候才能發(fā)生。CE相反的轉(zhuǎn)移，即從HDL向LDL的轉(zhuǎn)移可以是CETP介導(dǎo)的或者由擴(kuò)散的轉(zhuǎn)移產(chǎn)生。由于這個(gè)原因，這個(gè)研究只評(píng)估了從LDL向HDL的單向轉(zhuǎn)移以及對(duì)其抑制CETP活性，以保證結(jié)果確實(shí)反映了化合物對(duì)CETP的效果，即擴(kuò)散變量被去除了。但是，CETP介導(dǎo)的CE從HDL(抗-動(dòng)脈粥狀樣的脂蛋白)向LDL(動(dòng)脈粥狀樣的脂蛋白)的轉(zhuǎn)移可通過施用本發(fā)明的化合物被合適的抑制。已知TP2可特異性地結(jié)合到CETP的與CE結(jié)合位點(diǎn)相同的位置，并且這些結(jié)果證實(shí)了CETP-介導(dǎo)的CE轉(zhuǎn)移的阻斷和抑制。
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1.一種用于降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬、堿土金屬或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL由于這種給藥方式得以控制。
2.權(quán)利要求1的方法，其中甾醇選自谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇，多孔甾醇，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經(jīng)甾醇，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇，菠菜甾醇，軟骨甾醇，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇，pollinastasterol，膽固醇和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。
3.權(quán)利要求1的方法，其中甾烷醇選自所有飽和的或者氫化的甾醇，以及所有的天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。
4.權(quán)利要求1的方法，其中甾烷醇為谷甾烷醇。
5.權(quán)利要求1的方法，其中R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。
6.權(quán)利要求1的方法，其中血清HDL的水平由于這種給藥方式而得以提高。
7.權(quán)利要求1的方法，其中選自LDL，VLDL和IDL的致動(dòng)脈粥樣化的脂蛋白得以控制。
8.權(quán)利要求1的方法，如果需要，所述方法另外包括周期性分析血漿LDL水平和調(diào)整待給藥的化合物的量的步驟。
9.權(quán)利要求1的方法，其中化合物通過口服給藥。
10.權(quán)利要求1的方法，其中化合物通過靜脈內(nèi)給藥。
11.權(quán)利要求1的方法，其中化合物與一種或者多種調(diào)節(jié)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的藥劑可以在給藥前混合、共給藥或者在一個(gè)時(shí)間間隔內(nèi)分別給藥。
12.權(quán)利要求11的方法，其中藥劑選自膽汁酸鰲合物，膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑，植物甾醇，植物甾烷醇，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的調(diào)節(jié)劑，PPAR的調(diào)節(jié)劑(α和γ)以及依替米貝。
13.一種用于降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白和低密度脂蛋白之間轉(zhuǎn)移的組合物，所述組合物包括一種或者多種具有下式結(jié)構(gòu)的化合物 其中R為甾醇或者甾烷醇部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬、堿土金屬或者堿金屬；及其所有這些結(jié)構(gòu)的鹽；以及一種藥用載體。
14.權(quán)利要求13的組合物，其中甾醇選自谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇，多孔甾醇，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經(jīng)甾醇，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇，菠菜甾醇，軟骨甾醇，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇，pollinastasterol，膽固醇和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。
15.權(quán)利要求13的組合物，其中甾烷醇選自所有飽和的或者氫化的甾醇，以及所有的天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。
16.權(quán)利要求13的組合物，其中甾烷醇為谷甾烷醇。
17.權(quán)利要求13的組合物，其中R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。
18.權(quán)利要求13的組合物，其中化合物為結(jié)構(gòu)1，甾烷醇為谷甾烷醇。
19.權(quán)利要求13的組合物，所述組合物另外包括一種或者多種調(diào)節(jié)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的藥劑或者化合物。
20.權(quán)利要求13的組合物，其中藥劑選自膽汁酸鰲合物，膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑，植物甾醇，植物甾烷醇，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的調(diào)節(jié)劑，PPAR的調(diào)節(jié)劑(α和γ)以及依替米貝。
21.一種用于治療或者預(yù)防動(dòng)物心血管疾病及其基礎(chǔ)病，包括動(dòng)脈粥樣硬化，異常脂血癥或者失調(diào)，高膽固醇血癥，和低α-脂蛋白血癥的方法，所述方法包括降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間的轉(zhuǎn)移，所述降低通過給動(dòng)物施用一種或者多種具有下式的甾醇和/或甾烷醇衍生物得以實(shí)現(xiàn) 其中R為甾醇和/或甾烷醇部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬、堿土金屬或者堿金屬；及其所有的鹽。
22.權(quán)利要求21的方法，其中動(dòng)物為人。
23.權(quán)利要求21的方法，其中甾醇選自谷甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，菜子甾醇，24-脫氫膽固醇，海綿甾醇，多孔甾醇，穿貝海綿甾醇，麥角甾醇，coprosterol，codisterol，異巖藻甾醇，巖藻甾醇，桐甾醇，神經(jīng)甾醇，7-烯膽甾烷醇，星魚甾醇，菠菜甾醇，軟骨甾醇，peposterol，燕麥甾醇，異燕麥甾醇，糞甾醇，pollinastasterol，膽固醇的組和所有天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。
24.權(quán)利要求21的方法，其中甾烷醇選自所有飽和的或者氫化的甾醇，以及所有的天然或者合成的形式及其衍生物，包括異構(gòu)體。
25.權(quán)利要求21的方法，其中甾烷醇為谷甾烷醇。
26.權(quán)利要求21的方法，其中R3選自鈣，鎂，錳，銅，鋅，鈉，鉀和鋰。
27.權(quán)利要求21的方法，其中化合物為結(jié)構(gòu)1，甾烷醇為谷甾烷醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于降低體內(nèi)膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白介導(dǎo)的膽固醇酯在高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)之間轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括施用治療有效量的一種或者多種下述化合物其中R為甾醇或者甾烷醇(stanol)部分，R2源于抗壞血酸，R3為氫或者任意的金屬，堿土金屬，或者堿金屬；及其所有的鹽，因此血漿HDL和LDL由于這種給藥方式得以控制。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1558766SQ02818943
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2002年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月26日
發(fā)明者海頓·P·普里查德, 基肖爾·M·瓦桑, M 瓦桑, 海頓 P 普里查德 申請(qǐng)人:福布斯梅迪泰克公司