專利名稱：卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及卡介菌多糖核酸的用途，具體地說(shuō)，是卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
慢性支氣管炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)性鼻炎、變態(tài)反應(yīng)性皮膚病均為春季常見(jiàn)多發(fā)疾病。臨床上抗菌、抗組織胺、激素類(lèi)藥物較多，對(duì)這些疾病發(fā)作時(shí)癥狀控制已不是難題，但無(wú)法控制其反復(fù)發(fā)作?？ń榫嗵呛怂岬膽?yīng)用推廣，又多了一種可控制這些疾病復(fù)發(fā)的有效方法。但是，臨床上傳統(tǒng)應(yīng)用卡介菌多糖核酸的施藥手段是肌肉注射方式，雖然其注射途徑療效是肯定的，但存在以下幾個(gè)缺點(diǎn)一是臨床上注射途徑用藥不方便，二是卡介菌多糖核酸臨床用藥療程較長(zhǎng)，如患者中途放棄治療，將貽誤病情?？ń榫嗵呛怂嶙⑸湟褐委熉灾夤苎?、感冒、哮喘，采用肌肉注射給藥難以達(dá)到直接作用于病灶部位的目的，不能滿足局部給藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供卡介菌多糖核酸的新的給藥途徑，具體的說(shuō)，是提供其在制備口腔局部給藥的藥物中的用途。
本發(fā)明的另一目的是提供這種新的藥物制劑的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案本發(fā)明提供卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能的藥物的用途。
具體的是卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物中的用途。
同時(shí)，本發(fā)明還提供有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學(xué)上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能的藥物組合物。
進(jìn)一步的是，有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學(xué)上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物組合物。
所述藥物組合物為口腔局部用藥的固體制劑或液體制劑，具體的說(shuō)所述固體制劑是口含片、口腔粘附片或膜劑，更具體地說(shuō)這種口含片、口腔粘附片或膜劑，含有卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/片，所述的液體制劑是噴霧劑，其中，含卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/撳。
本發(fā)明還提供了所述藥物組合物的制備方法，包括a、液體浮膜培養(yǎng)或固體培養(yǎng)制備卡介菌菌體；b、熱酚乙醇提取卡介菌多糖核酸；c、在b步驟中制備的有效量卡介菌多糖核酸與藥學(xué)上可接受的輔料混合，制成口腔局部給藥的藥物制劑。
卡介菌多糖核酸可通過(guò)口腔粘膜吸收而發(fā)揮其雙向免疫調(diào)節(jié)功能，一方面通過(guò)增強(qiáng)單核——巨噬細(xì)胞功能，增強(qiáng)人體血液中T細(xì)胞總數(shù)，提高NK細(xì)胞的活性，提高IgG及C3含量等機(jī)制，增強(qiáng)免疫功能低下患者的免疫功能，故對(duì)免疫功能低下所致的疾病如呼吸道反復(fù)感染；流感有很好的療效；另一方面，通過(guò)提高TH1/TH2的比值穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜，產(chǎn)生抗體封閉作用等，對(duì)免疫功能過(guò)強(qiáng)所致的疾病如哮喘，過(guò)敏性鼻炎，過(guò)敏性皮炎等也有很好的療效。除此機(jī)理之外，本發(fā)明中卡介菌多糖核酸是采用口腔粘膜用藥而引發(fā)的粘膜免疫反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)的TH1型細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生r-干擾素等免疫刺激細(xì)胞因子以及激活免疫效應(yīng)機(jī)制，因此，本發(fā)明的卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的制劑主要用于預(yù)防和治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘等疾病。
卡介菌多糖核酸采用口腔局部用藥具有療效佳，毒性小，副作用少，安全性高，服藥方便等優(yōu)點(diǎn)。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了卡介菌多糖核酸的新的給藥途徑，同時(shí)提供了這種新的藥物制劑的制備方法，具體實(shí)施方式
為實(shí)施例1 卡介菌多糖核酸口含片制備a.液體浮膜培養(yǎng)技術(shù)及固體培養(yǎng)技術(shù)制備卡介菌菌體涉及特定的蘇通氏培養(yǎng)基配制處方(1000ml)MgSO40.5gK2HPO40.5g檸檬酸 2g味精8g甘油60ml檸檬酸鐵銨 0.05g1‰硫酸鋅 1ml方法加熱水溶，氨水調(diào)節(jié)PH為7.5，0.1Mpa30分鐘滅菌?？ń榫w培養(yǎng)技術(shù)將保存于蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基的卡介菌菌種接種于上述特定的蘇通氏培養(yǎng)基，在38±0.5℃條件下培養(yǎng)7天后為S1菌膜，將S1菌膜接種于蘇通氏培養(yǎng)基內(nèi)連續(xù)培養(yǎng)10-12天即為SII菌膜，用SII菌膜再繼續(xù)接種上述含味精蘇通氏培養(yǎng)基21天制備沙膜，收取沙膜用于卡介菌多糖核酸的制備。b.卡介菌菌體經(jīng)熱酚法提取制備卡介菌多糖核酸粉末取破碎菌懸液與等量熱酚混勻，以靜止法或離心沉淀菌體，吸取上清液以透析法或其它適宜方法除酚，加入適量乙醇沉淀多糖核酸，搜集沉淀物。分別以乙醇、乙醚混勻洗滌，離心后干燥即得精制多糖核酸。c.輔料(乳糖)混合制備濕軟材，將濕軟材過(guò)篩，干燥，制備成空白顆粒。d.將卡介菌多糖核酸粉末與空白顆粒充分混合，在常溫條件下直接壓片，每片含卡介菌多糖核酸0.5mg。
通過(guò)上述的方法，可制得每片含卡介菌多糖核酸6mg、2mg。實(shí)施例2 卡介菌多糖核酸粘附片制備步驟a和b同實(shí)施例1，c、將輔料、卡介菌多糖核酸分三層下層用HPC/CP作基質(zhì)，中層為卡介菌多糖核酸，上層為乳糖，直接壓片，每片含卡介菌多糖核酸2mg。實(shí)施例3 卡介菌多糖核酸膜劑制備步驟a和b同實(shí)施例1，c、用聚乙烯作基質(zhì)，用膜壓機(jī)直接壓片成膜劑，每片含卡介菌多糖核酸6mg。實(shí)施例4卡介菌多糖核酸噴霧劑步驟a和b同實(shí)施例1，c、用常規(guī)的噴霧劑輔料與卡介菌多糖核酸混合，制備成卡介菌多糖核酸噴霧劑，規(guī)格3mg/撳。
以下通過(guò)試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，包括藥效試驗(yàn)和毒理試驗(yàn)。試驗(yàn)例一本發(fā)明藥物抗喘作用試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料1.1引喘裝置由空氣壓縮機(jī)、氣霧噴頭(噴出的粒直徑約5u)、水銀檢壓計(jì)、底座和4L的玻璃鐘罩構(gòu)成噴霧室。1.2試劑本發(fā)明藥物實(shí)施例1制得的卡介菌多糖核酸口含片；卡介菌多糖核酸肌肉注射液(卡舒寧注射液)，由成都生物制品研究所提供，批號(hào)20020206；氨茶堿，天津津躍氨基酸有限公司，批號(hào)0208191。2％氯化乙酰膽堿和0.1％磷酸組織胺等容積混合液。1.3豚鼠(體重＜200g)由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。豚鼠、小鼠試驗(yàn)中的高、中、低三種試驗(yàn)劑量(卡介菌多糖核酸粉劑含量)均為2mg/只、1mg/只、0.5mg/只，而人用劑量為2mg/50Kg(人)，因此，以高劑量組(2mg卡介菌多糖核酸粉劑含量/只)豚鼠(平均體重為200g)試驗(yàn)劑量計(jì)算豚鼠的試驗(yàn)劑量為人用劑量的250倍。而高劑量組(2mg卡介菌多糖核酸粉劑含量/只)小鼠(平均體重為20g)試驗(yàn)劑量計(jì)算小鼠的試驗(yàn)劑量為人用劑量的2500倍。2、實(shí)驗(yàn)方法豚鼠(體重180-220g)，分別放入玻璃鐘罩中，以400mmHg壓力噴入2％氯化乙酰膽堿和0.1％磷酸組織胺等容積混合液15秒鐘。噴霧停止后，觀察豚鼠的引喘潛伏期(即從噴霧開(kāi)始到哮喘發(fā)作、呼吸極度困難，直至抽搐跌倒的時(shí)間)。引喘潛伏期＞120秒者，不予選用。取經(jīng)測(cè)定引喘潛伏期合格的豚鼠，雌雄各半，隨機(jī)分成對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組10只。試驗(yàn)組連續(xù)口含給藥10天，于第10天給藥后1小時(shí)，按上述方法測(cè)豚鼠的引喘潛伏期，并作方差分析。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)分組 給藥劑量 動(dòng)物數(shù)量體重 引喘時(shí)間(秒)(mg/kg) (只)(g)卡介菌多糖核酸口含片高劑量組 1010 204.13±6.95 99.29±30.61***中劑量組 5 10 205.45±8.15 76.88±27.12***低劑量組 2.5 10 207.04±7.17 62.86±28.70卡介菌多糖核酸肌注組2.5 10 204.3±9.22 107.50±17.53氨茶堿對(duì)照組25 10 207.89±11.23115.00±14.14陰性對(duì)照組 NS 10 206.34±8.13 43.33±5.0*p＜0.05，***p＜0.001 NS生理鹽水結(jié)果提示卡介菌多糖核酸口含片給予高、中劑量均可明顯延長(zhǎng)引喘潛伏期(p＜0.001)，且卡介菌多糖核酸口含片高劑量組與卡介菌多糖核酸肌注組無(wú)顯著性差異，卡介菌多糖核酸口含片低劑量組無(wú)明顯效果，與陰性對(duì)照組之間比較無(wú)顯著差異。(p＞0.05)4、實(shí)驗(yàn)結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下，本發(fā)明藥物高、中劑量組有明顯延長(zhǎng)引喘潛伏期的作用，說(shuō)明本發(fā)明藥物具有與肌注有相同的療效。試驗(yàn)例二 本發(fā)明藥物對(duì)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)作用試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料藥品本發(fā)明藥物實(shí)施例1制得的卡介菌多糖核酸口含片；卡介菌多糖核酸肌肉注射液(卡舒寧注射液)，由成都生物制品研究所提供，批號(hào)20020206。二硝基氟苯(DNFB)配制成1％的溶液備用。地塞米松，西南藥業(yè)公司出品，批號(hào)020406。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Balb/c小鼠60只(體重20g左右)，雌雄各半，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。一級(jí)動(dòng)物(合格證川實(shí)動(dòng)質(zhì)管第97號(hào))2、實(shí)驗(yàn)方法2.1隨機(jī)分為陰性對(duì)照組，給藥組和陽(yáng)性藥物組，卡介菌多糖核酸口含片連續(xù)給藥15天，卡介菌多糖核酸注射劑隔天一次，給藥7天，地塞米松致敏前30分鐘給藥。2.2致敏除抗原攻擊的對(duì)照組外，每組腹部去毛，范圍2×3平方cm大小，并將1％DNFB溶液均勻涂抹上。2.3攻擊并測(cè)定結(jié)果致敏后第5天，將1％DNTB溶液10u1均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進(jìn)行攻擊，對(duì)照組同樣涂耳但未致敏。攻擊后24h，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm的耳片，稱重。同時(shí)取小鼠胸腺及脾臟稱重，以左右耳片重量之差為腫脹度，分別以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)，觀察各組的差別。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1)記錄每只動(dòng)物的耳重，(腫脹度)2)脾指數(shù)，10g小鼠的脾重(mg)3)胸腺指數(shù)，10g小鼠的胸腺重(mg)實(shí)驗(yàn)分組 給藥劑量 動(dòng)物數(shù)量體重耳腫脹度 脾指數(shù)(mg/kg) (只)(g) (左右耳重量之差值)卡介菌多糖核酸口含片高劑量組 100 10 20.10±1.1 Δ0.80±0.42*0.055±0.005中劑量組 50 10 20.55±1.17Δ1.0±0.66* 0.058±0.002低劑量組 25 10 20.83±0.75Δ1.78±1.48 0.056±0.003卡介菌多糖核酸肌注組25 10 20.23±1.44Δ0.70±0.82 0.059±0.006地塞米松對(duì)照組 0.1 10 20.50±1.43Δ0.10±0.74 0.024±0.001陰性對(duì)照組 N.S 10 21.10±1.20Δ2.10±0.62 0.046±0.007p＜0.05，***p＜0.001結(jié)果提示卡介菌多糖核酸口含片給予高、中、低劑量均可明顯增加脾指數(shù)(p＜0.001)。耳腫脹度經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，顯示卡介菌多糖核酸口含片高、中劑量組與陰性對(duì)照組有顯著差異(p＜0.05)，說(shuō)明卡介菌多糖核酸口含片高、中劑量有顯著降低耳腫脹作用，減輕遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)水腫，且口含片高劑量組與肌注組無(wú)明顯差異(p＞0.05)。有關(guān)胸腺指數(shù)的測(cè)定，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，卡介菌多糖核酸口含片各劑量組及卡介菌多糖核酸肌注組的動(dòng)物胸腺大多數(shù)已消失，無(wú)法測(cè)定其重量，該現(xiàn)象與使用卡介菌多糖核酸口含片后促進(jìn)小鼠胸腺迅速成熟有關(guān)。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下，本發(fā)明藥物高、中劑量組均有明顯降低耳腫脹的作用，減輕遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的水腫，促進(jìn)胸腺成熟的作用，且與肌注組有相同的療效。實(shí)驗(yàn)例三 本發(fā)明藥物對(duì)小鼠溶血素影響試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料(1)藥品本發(fā)明藥物實(shí)施例1制得的卡介菌多糖核酸口含片；卡介菌多糖核酸肌肉注射液(卡舒寧注射液)，由成都生物制品研究所提供，批號(hào)20020206。(2)綿羊紅細(xì)胞(SRBC)保存液(Alsever)葡萄糖2.05g，氯化鈉0.428g，檸檬酸鈉0.8g，蒸餾水100ml，無(wú)菌過(guò)濾后備用。(3)都氏液(測(cè)血紅蛋白用)碳酸氫鈉1.09，高鐵氰化鉀0.2g，氰化鉀0.05g，蒸餾水1000ml。(4)補(bǔ)體新鮮豚鼠3只，混合血清經(jīng)SRBC(10∶1)于4℃吸收30分鐘后置于-20℃以下備用。(5)羊紅細(xì)胞(SRBC)的分離在無(wú)菌條件下，白健康成年綿羊頸外靜脈取血，置血液于有玻璃珠的三角燒瓶中輕搖10分鐘以除去纖維蛋白，加入2倍量的保存液，置4℃冰箱備用。臨用時(shí)用生理鹽水洗滌3次，再稀釋為20％SRBC懸液。(6)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠70只(體重18~20g)，雌雄各半，由四川大學(xué)動(dòng)物中心提供，一級(jí)動(dòng)物(合格證川實(shí)動(dòng)質(zhì)管第67號(hào))。2、實(shí)驗(yàn)方法(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組，按以下方法給藥卡介菌多糖核酸口含片高、中、低三個(gè)劑量組，連續(xù)10天口含給藥，卡介菌多糖核酸注射劑組，隔天一次給藥，連續(xù)5天，PHA組(植物血凝素組)免疫前半小時(shí)給藥。(2)免疫小鼠腹腔注射20％SRBC 0.2ml/天，免疫后第一天去眼球取血，分離血清，將血清稀釋后供測(cè)定。(3)樣品的吸光度值測(cè)定反應(yīng)管內(nèi)依次加入經(jīng)稀釋的血清1ml，5％SRBC0.5ml，10％補(bǔ)體1ml，置37℃恒溫水浴中保溫30分鐘，然后移至冰浴中終止反應(yīng)，1500rpm離心5分鐘，取上清液1ml加都氏試劑3ml，搖勻放置10分鐘，用7230分光光度計(jì)(上海分析儀器總廠制造)于540nm波長(zhǎng)比色讀取吸光度。(4)SRBC半數(shù)溶血時(shí)的吸光度值取5％SRBC 0.25ml加都氏液至4ml，讀取吸光度值，即為實(shí)驗(yàn)中所用SRBC半數(shù)溶血時(shí)的吸光度值。(5)計(jì)算樣品管半數(shù)溶血值HC50按下式計(jì)算 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)分組 給藥劑量(mg/kg) 動(dòng)物數(shù)量(只) 體重(g)小鼠HC50卡介菌多糖核酸口含片高劑量組 100 10 20.72±1.82290.91±101.50***中劑量組 5010 20.50±1.76287.3±53.67***低劑量組 2510 20.30±1.32223.10±78.53***卡介菌多糖核酸肌注組25 10 19.80±1.18320.5±66.99PHA對(duì)照組 10 19.70±1.30317.8±71.48陰性對(duì)照組N.S 10 19.74±0.9452±25.27***p＜0.0014、實(shí)驗(yàn)結(jié)論經(jīng)方差分析，結(jié)果提示本發(fā)明藥物高、中、低劑量均可明顯增加小鼠半數(shù)溶血值HC50(p＜0.001)，且高、中劑量組的結(jié)果與陽(yáng)性對(duì)照組(卡介菌多糖核酸肌注組與PHA對(duì)照組)無(wú)明顯差異，說(shuō)明與肌注卡介菌多糖核酸有相同的療效。實(shí)驗(yàn)例四 本發(fā)明藥物脫敏作用實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料試劑本發(fā)明藥物實(shí)施例1制得的卡介菌多糖核酸口含片；卡介菌多糖核酸肌肉注射液(卡舒寧注射液)，由成都生物制品研究所提供，批號(hào)20020206。
動(dòng)物豚鼠60只，雌雄各半，體重250～300g，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2、實(shí)驗(yàn)方法(1)選合格豚鼠60只隨機(jī)分成6組，每組10只，分別每只肌注小牛血清0.5mg/ml/只，隔日1次，共3次進(jìn)行致敏。
(2)各組動(dòng)物分別按以下方法給藥20天(口含片組每天給藥，卡舒寧注射隔日1次)(3)BSA攻擊卡介菌多糖核酸口含片各劑量組、卡介菌多糖核酸肌注組及陰性對(duì)照組1均通過(guò)后肢靜脈注射小牛血清10mg/ml/只進(jìn)行攻擊，陰性對(duì)照組2則通過(guò)后肢靜脈注射生理鹽水1ml/只。
(4)觀察并記錄各組動(dòng)物的反應(yīng)情況，按照以下標(biāo)準(zhǔn)打分反應(yīng)級(jí)數(shù)反應(yīng)癥狀0 無(wú)明顯反應(yīng)1 有抓鼻、顫抖或豎毛2 有幾次咳嗽、抓鼻、顫抖或豎毛3 多次或連續(xù)咳嗽，伴有呼吸困難、痙攣4 痙攣、抽搐、休克死亡3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)分組 給藥劑量動(dòng)物數(shù)量(只)動(dòng)物反應(yīng)級(jí)別(只)(mg/kg) 0 1234卡介菌多糖核酸口含片高劑量組 10 102 2321中劑量組 5 100 2332低劑量組 2.5 100 0244卡介菌多糖核酸肌注組 2.5 103 1312陰性對(duì)照組1(致敏組)100 0046陰性對(duì)照組2(非致敏組) 10100000經(jīng)方差分析，結(jié)果提示卡介菌多糖核酸口含片高劑量組，其動(dòng)物的反應(yīng)級(jí)別與陰性對(duì)照組1之間有明顯差異(p＜0.01)，且卡介菌多糖核酸口含片高劑量組與卡舒寧肌注組之間比較無(wú)明顯差異(p＞0.05)；但卡介菌多糖核酸口含片中、低劑量組與陰性對(duì)照組1之間比較無(wú)明顯差異(p＞0.05)。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下，卡介菌多糖核酸口含片在高劑量時(shí)對(duì)豚鼠有脫敏作用，且與肌注無(wú)明顯差異。
通過(guò)上述試驗(yàn)表明口腔噴含卡介菌多糖核酸，其藥效與肌注方式近似，且服用比肌注方便。實(shí)驗(yàn)例五 卡介菌多糖核酸的幾種服藥方案的藥效狀況的比較1、材料1.1試驗(yàn)動(dòng)物豚鼠300-450g雌雄各半，共計(jì)80只1.2試劑小牛血清、卡介菌多糖核酸(半成品粉劑)、蔗糖、淀粉、生理鹽水、卡舒寧(卡介菌多糖核酸針劑)。1.3試驗(yàn)器材燒杯、三角瓶、注射器及針頭、量筒、電子天平、醫(yī)用剪刀、醫(yī)用鑷子等。2、步驟2.1配置小牛血清(10mg/ml，1mg/ml)，輔形劑(比例為蔗糖1∶1淀粉)2.2將80只豚鼠分別稱重并按隨機(jī)分組法分成五組，每組12只且雌雄各半，每只豚鼠分別肌肉注射小牛血清(0.5mg/ml/只)進(jìn)行致敏，隔日一次，共計(jì)3次，末次注射后，各組分別做以下處理第一組分別肌肉注射卡舒寧，隔日一次，共計(jì)10次；第二組分別灌胃卡舒寧(1支/只)，隔日一次，共計(jì)10次；第三組分別口腔噴含卡介菌多糖核酸(0.5mg/只)+輔形劑，隔日一次，共計(jì)10次；第四、五組分別口腔噴含等量的輔形劑，隔日一次，共計(jì)10次；各組做完以上處理后，末次次日，第一、二、三、四各組選10只健康豚鼠分別后肢靜脈注射小牛血清(10mg/ml/只)進(jìn)行攻擊，第五組用生理鹽水(1ml/只)后肢靜脈攻擊。每只動(dòng)物在攻擊后觀察其30分鐘內(nèi)的反應(yīng)情況，各組按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行打分，并通過(guò)計(jì)算各組間的P值來(lái)判斷差異。3、反應(yīng)打分標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)級(jí)數(shù)反應(yīng)癥狀0 無(wú)明顯反應(yīng)1 有抓鼻、顫抖或豎毛2 有幾次咳嗽有抓鼻、顫抖或豎毛3 多次或連續(xù)咳嗽，伴有呼吸困難，痙攣4 痙攣、抽搐、休克死亡4、結(jié)果見(jiàn)下表
表1卡介菌多糖核酸的幾種服藥方案的藥效狀況 5、分析與討論以上結(jié)果中第一組作為試驗(yàn)的脫敏陽(yáng)性對(duì)照，二、三組為不同給藥途徑及方案的試驗(yàn)組，第四組為脫敏陰性對(duì)照，第五組為整個(gè)試驗(yàn)的致敏系統(tǒng)的陰性對(duì)照。
計(jì)算各試驗(yàn)組分別與脫敏陰性和陽(yáng)性組間的P值，以及陰陽(yáng)組間的P值。得到以下結(jié)果1組、3組分別與4組間的P值均為＜0.051組分別與3組間的P值均為 ＞0.052組與4組間的P值為 ＞0.05根據(jù)以上P值結(jié)果可以說(shuō)明本次脫敏試驗(yàn)設(shè)立的陰陽(yáng)性對(duì)照(4組與1組)是成立的，即二者間存在顯著差異，同樣試驗(yàn)組中第3組與陰性對(duì)照組存在顯著差異，并與陽(yáng)性對(duì)照組間無(wú)顯著差異。2組與4組的P值＞0.05第2組是口服胃、腸壁吸收途徑，第4組是指口腔局部用輔形劑，而二者的P值＞0.5說(shuō)明第2組口服胃、腸壁吸收途徑無(wú)脫敏作用。
第二組卡介菌多糖核酸(灌服卡舒寧)與第三組噴含卡介菌多糖核酸兩組試驗(yàn)結(jié)果為反應(yīng)級(jí)別零 一 二 三 四灌服組各級(jí)別動(dòng)物數(shù)(C1) 11133口腔噴含組各級(jí)別動(dòng)物數(shù)(C2) 243-1
經(jīng)計(jì)算兩種結(jié)果之間統(tǒng)計(jì)學(xué)P值為0.034，且小于0.05，從而說(shuō)明二者間存在顯著性差異。
上述試驗(yàn)表明口腔噴含卡介菌多糖核酸的脫敏效果與肌注方式近似，而優(yōu)于口服卡介菌多糖核酸。試驗(yàn)例六 卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的急毒性試驗(yàn)1、試驗(yàn)材料1.1試劑和器材卡舒寧、輔形劑(蔗糖與淀粉1∶1配制)、電子分析天平、微量進(jìn)樣器、乳缽、燒杯等。
1.2選用25±2g健康昆明種小鼠，每一實(shí)驗(yàn)組16只，雌雄各半。2、試驗(yàn)方法2.1劑量試驗(yàn)組卡介菌多糖核酸口含采用3個(gè)劑量，分別為介菌多糖核酸1mg+輔形劑9mg/只、卡介菌多糖核酸2mg+輔形劑8mg/只、卡介菌多糖核酸4mg+輔形劑6mg/只；對(duì)照組口含輔形劑10mg/只。2.2分組與觀察小鼠按性別隨機(jī)分成8組，其中雌性4組，雄性4組；三個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別按上述劑量一次給予小鼠，對(duì)照組只給予等量輔形劑，小鼠給藥后連續(xù)10天觀察動(dòng)物死亡情況，10天后各組進(jìn)行稱重。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1小鼠給藥后觀察和稱重結(jié)果如表2所示表2 卡介菌多糖核酸口含片急毒性試驗(yàn)劑量卡介菌多途徑動(dòng)物 觀察日/ 動(dòng)物健康存活數(shù)及糖核酸 口腔性別 情況 (死亡率)+輔形劑 噴含1 2 3 4 5 6 7 8 9 101mg 口 雄8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)+9mg/只 含 雌8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)2mg 口 雄8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)+8mg/只 含 雌8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)4mg 口 雄8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)+6mg/只 含 雌8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)0mg 口 雄8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)+10mg/只含 雌8只 - - - - - - - - - - 8(0.0％)注口含日期 “-”表示動(dòng)物健康3.2 10日后動(dòng)物稱重情況第一組(口含卡介菌多糖核酸1mg+9mg輔形劑)雄性平均體重32.6g雌性平均體重31.4g第二組(口含卡介菌多糖核酸2mg+8mg輔形劑)雄性平均體重33.3g雌性平均體重31.5g第三組(口含卡介菌多糖核酸4mg+6mg輔形劑)雄性平均體重31.9g雌性平均體重31.2g第四組(口含輔形劑10mg即對(duì)照組)雄性平均體重32.4g雌性平均體重32.1g4、結(jié)論以上三組中不同劑量的卡介菌多糖核酸口含給小鼠后均未引起動(dòng)物死亡。根據(jù)人用劑量以2mg/50kg來(lái)計(jì)算，試驗(yàn)的三組劑量分別為人用劑量的1000倍，2000倍，4000倍，且各組動(dòng)物體重均未出現(xiàn)明顯減輕，反而是表現(xiàn)為正常生長(zhǎng)的增重現(xiàn)象，這些均表明口含卡介菌多糖核酸人用劑量是安全的、低毒的。
改變給藥途徑是否能夠保持原有的藥效并具備自身特點(diǎn)，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員并非現(xiàn)而易見(jiàn)，但通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)可以表明本發(fā)明提供的卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的藥物制劑在抗喘作用，降低耳腫脹，減輕遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，促進(jìn)胸腺成熟，雙向免疫調(diào)節(jié)，對(duì)小鼠溶血素等方面藥效與肌注方式基本相同，但是使用時(shí)較注射制劑更方便、安全；另一方面，卡介菌多糖核酸口腔局部給藥的藥物制劑的脫敏效果與口服卡介菌多糖核酸比較，有顯著的優(yōu)越性，充分說(shuō)明本發(fā)明提供的卡介菌多糖核酸口腔局部給藥途徑是一種安全、有效的用藥途徑，為卡介菌多糖核酸提供了一種新的用藥方式。
權(quán)利要求
1.卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能的藥物中的用途。
2.卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物中的用途。
3.有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學(xué)上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能的藥物組合物。
4.有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學(xué)上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘的藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3，4所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為口腔局部用藥的固體制劑或液體制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述固體制劑是口含片、口腔粘附片或膜劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述口含片、口腔粘附片或膜劑，含有卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/片。
8.根據(jù)權(quán)利要求5述的藥物組合物，其特征在于所述液體制劑是噴霧劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征是所述的噴霧劑含卡介菌多糖核酸0.5mg～6mg/撳。
10.要求3所述的藥物組合物的制備方法，其特征是a、液體浮膜培養(yǎng)或固體培養(yǎng)制備卡介菌菌體；b、熱酚乙醇提取卡介菌多糖核酸；c、在b步驟中制備的有效量卡介菌多糖核酸與藥學(xué)上可接受的輔料混合，制成口腔局部給藥的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及卡介菌多糖核酸在制備口腔局部給藥的藥物中的新用途，通過(guò)口腔局部給藥可以達(dá)到雙向免疫調(diào)節(jié)，以治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘。本發(fā)明還提供了有效量的卡介菌多糖核酸加上藥學(xué)上可接受的輔料制備成口腔局部給藥的具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能的藥物組合物，該組合物具有治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘等功能。采用卡介菌多糖核酸的口腔局部用藥具有療效佳，毒性小，副作用少，安全性高，服藥方便等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1475225SQ0314922
公開(kāi)日2004年2月18日 申請(qǐng)日期2003年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月21日
發(fā)明者晏子厚, 屈戈, 周如嬌, 何菊, 曹慧, 徐永革, 吳先勇, 楊永芳 申請(qǐng)人:成都生物制品研究所