專利名稱：用于治療動脈粥樣硬化的肽基被動免疫接種療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對載脂蛋白B的衍生物肽產(chǎn)生的新分離的人類抗體，尤其涉及用于免疫接種療法的抗體治療動脈粥樣硬化，它們的制備方法，以及用所述抗體進行被動免疫接種的方法。
本發(fā)明尤其包括對表1中列出的肽的氧化形式，特別是MDA-改性肽所產(chǎn)生的任何一種分離的抗體，優(yōu)選與合適的載體和佐劑配合使用，作為預(yù)防和治療局部缺血心血管性疾病的免疫療法或抗動脈粥樣硬化“疫苗”。
背景技術(shù)：
已知體液免疫的保護效果是通過結(jié)構(gòu)相關(guān)的糖蛋白一族稱為抗體來調(diào)節(jié)。抗體通過與抗原結(jié)合啟動它們的生物活性。抗體與抗原結(jié)合通常對一種抗原是特異的，并且這種結(jié)合通常有高的親和性?？贵w由B-淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。血液中含有很多不同的抗體，一種源于B-細(xì)胞克隆，一種具有獨特的結(jié)構(gòu)并對抗原有特異性。抗體存在于B-淋巴細(xì)胞表面上，血漿中，組織間質(zhì)液中，以及分泌液如唾液和黏膜表面上的黏液中。
所有抗體在整體結(jié)構(gòu)上是相似的，這解釋了物理化學(xué)特征如電荷和溶解度具有一定的相似性。所有抗體具有由兩個相同的輕鏈，每個約24千道爾頓，和兩個相同的重鏈，每個約55-70千道爾頓組成的共同的核結(jié)構(gòu)。一個輕鏈連在每個重鏈上，兩個重鏈相互連在一起。輕鏈和重鏈都包含一系列重復(fù)的同系單元，每個約有110個氨基酸殘基長，以普通的球型獨立折疊，叫做免疫球蛋白(Ig)域。兩個重鏈結(jié)合形成的抗體區(qū)是疏水性的。已知抗體，特別是單克隆抗體，當(dāng)它們處于相反的物理或化學(xué)條件時，輕鏈與重鏈的連接點處裂開。由于抗體含有許多半胱氨酸殘基，它們有很多半胱氨酸-半胱氨酸二硫鍵。所有免疫球蛋白(Ig)域都包含兩層具有三或四股反平行多肽鏈的β-折疊片。
盡管它們整體相似，根據(jù)物理化學(xué)特性如尺寸、電荷和溶解度以及它們與抗原結(jié)合的性能，抗體分子可分為少量的不同類和亞類。人類的抗體分子類別為IgA，IgD，IgE，IgG和IgM。每類中的個體稱作相同的同型。IgA和IgG同型進一步細(xì)分為亞型，稱作IgA1，IgA2及IgG1，IgG2，IgG3和IgG4。在一個同型中所有抗體的重鏈共用氨基酸序列單元的廣延區(qū)，但與屬于其它同型或亞型的抗體不同。重鏈用希臘字母表的字母對應(yīng)抗體全部的同型來命名，例如，IgA包含.α.，IgD包含.δ.(delta)，IgE包含.ε.(epsilon)，IgG包含.γ.(gamma)，及IgM包含.μ.(mu)重鏈。IgG，IgE和IgD以單體循環(huán)，而隱藏形式的IgA和IgM分別是二聚體或五聚體，并通過J鏈?zhǔn)蛊浞€(wěn)定。一些IgA分子以單體或三聚體存在。
在每個個體中有108至1010個結(jié)構(gòu)不同的抗體分子，每個在它們的抗原結(jié)合部位都有唯一的氨基酸序列?？贵w中的序列差異主要存在于重鏈和輕鏈的氨基末端區(qū)稱為可變(V)區(qū)以區(qū)別于更穩(wěn)定的恒定(C)區(qū)里的三次短伸縮中。
動脈粥樣硬化是一種慢性疾病，它引起大動脈和中等尺寸動脈的最內(nèi)層(內(nèi)膜)變厚。它使血流量降低，并能在含有受影響脈管的器官里引起局部缺血和組織損壞。動脈粥樣硬化是心血管性疾病包括心肌梗塞，中風(fēng)和末梢動脈疾病的主要原因。它在西方國家是導(dǎo)致死亡的主要原因，并預(yù)計在二十年內(nèi)將變成全世界范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡的原因。
脂蛋白，主要是低密度脂蛋白(LDL)在脈管的細(xì)胞外間質(zhì)中的積聚作用引起了疾病。這些低密度脂蛋白(LDL)顆粒聚集并受到氧化變性。氧化的低密度脂蛋白是有害的，并引起血管損傷。
動脈粥樣硬化在很多方面表現(xiàn)出對這種包括炎癥和纖維化在內(nèi)的損傷的應(yīng)答。
1989年P(guān)alinski與其合作者在人類中識別出對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的循環(huán)自身抗體。這一觀察表明動脈粥樣硬化可能是由對氧化的脂蛋白產(chǎn)生的免疫反應(yīng)所引起的一種自身免疫病。這時，一些實驗室開始研究對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的抗體滴定度與心血管性疾病之間的聯(lián)系。然而，這些研究中出現(xiàn)的圖片很不清楚。對氧化的低密度脂蛋白中大量不同的抗原決定部位存在抗體，但這些抗原決定部位的結(jié)構(gòu)并不知道。于是“氧化的低密度脂蛋白抗體”一詞是指不同抗體的未知混合物，而并非一個特定的抗體。T細(xì)胞-非依賴性IgM抗體比T-細(xì)胞依賴性IgG抗體更常見。
對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的抗體在患心血管性疾病的病人和健康對比者中均出現(xiàn)。雖然有一些早期研究報道了氧化的低密度脂蛋白抗體滴定度與心血管性疾病之間的聯(lián)系，其余的研究沒有找到這種關(guān)聯(lián)。這些研究的主要缺點是用于測定抗體滴定度的ELISA測試使用氧化的低密度脂蛋白顆粒作為配體。低密度脂蛋白組合物在不同個體中是不同的，氧化改性的程度很難控制與評估，并且不能測定對氧化的低密度脂蛋白顆粒中不同抗原決定部位產(chǎn)生的抗體的水平。某種程度上，由于技術(shù)問題，用現(xiàn)有的技術(shù)評價對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的抗體響應(yīng)作用迄今為止還是很困難的，然而，如果用完好的氧化的低密度脂蛋白顆粒不可能產(chǎn)生清晰的并可重現(xiàn)的疫苗成份。
另一方面研究對血管壁中氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的自身免疫反應(yīng)可能在動脈粥樣硬化發(fā)展方面起著重要作用，使動物對自身氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生免疫。支持這一方法的思想是如果利用傳統(tǒng)的免疫接種技術(shù)加強對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的自身免疫反應(yīng)，將導(dǎo)致血管炎癥加重且動脈粥樣硬化加重。為驗證這種假設(shè)，用同種氧化的低密度脂蛋白使兔子免疫，然后用高膽固醇食物喂養(yǎng)動物3個月而誘發(fā)動脈粥樣硬化。
然而，與原始的假設(shè)相反，用氧化的低密度脂蛋白的免疫接種具有減少了約50％的動脈粥樣硬化的保護效果。在隨后的高膽固醇膳食與血管囊狀損傷相結(jié)合產(chǎn)生更具攻擊性斑塊的研究中也獲得了類似的結(jié)果。與我們的研究同時，一些其它實驗室也報道了類似的觀察結(jié)果。匯集現(xiàn)有的數(shù)據(jù)清楚地表明，存在防止動脈粥樣硬化發(fā)展的免疫反應(yīng)，并且這些免疫反應(yīng)包括對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的自身免疫。
這些觀察也說明了開發(fā)一種免疫療法或“疫苗”用來治療人類基于動脈粥樣硬化的心血管性疾病的可能性。一種方法是自身的低密度脂蛋白通過暴露于例如銅中而被氧化之后，用其對個體進行免疫。然而，由于不知道在氧化的低密度脂蛋白中哪種結(jié)構(gòu)負(fù)責(zé)誘發(fā)保護性免疫，以及是否氧化的低密度脂蛋白也可以包含能導(dǎo)致相反免疫反應(yīng)的抗原決定部位，使這種方法變得復(fù)雜化。
識別氧化的低密度脂蛋白中的抗原決定部位在以下幾個方面很重要首先，一個或幾個這些抗原決定部位可能負(fù)責(zé)激活抗致動脈粥樣化免疫應(yīng)答，在用氧化的低密度脂蛋白進行免疫的動物身上可觀察到這一點。因此含有這些抗原決定部位的肽提供了開發(fā)出用于人類的免疫療法或“動脈粥樣硬化疫苗”的可能性。進而，可用它們來治療在人類中逐步擴展的動脈粥樣硬化。
其次，含有識別的抗原決定部位的肽可用于開發(fā)ELISAs，它能檢測出針對氧化的低密度脂蛋白中特定結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的抗體。這樣的ELISAs將比目前使用氧化的低密度脂蛋白顆粒作抗原的ELISAs更精確更可靠。它還可以分析對氧化的低密度脂蛋白中不同的抗原決定部位產(chǎn)生的免疫應(yīng)答與心血管性疾病之間的聯(lián)系。
美國專利5,972,890涉及用肽診斷動脈粥樣硬化。所述美國專利提供的技術(shù)原理上是一種放射物理診斷形式。肽序列被放射性標(biāo)記并被注入血流中。如果這個肽序列與在載脂蛋白B中存在的序列相同，它將連接到為載脂蛋白B存在的受體的組織上。在脈管中，這在所有動脈粥樣硬化斑塊的上面。于是可以測定脈管壁中的放射性濃度，例如，用γ照相方法。因此該技術(shù)是放射物理診斷方法，它基于被放射性標(biāo)記了的肽序列進入存在于動脈粥樣硬化斑塊中它們正常的組織受體中，并利用外部放射性分析對其進行檢測。它是識別動脈粥樣硬化斑塊直接的分析方法。它需要給病人施加放射性化合物。
公開的研究成果(Palinski等，1995，和George等，1998)表明對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的免疫接種作用削減了動脈粥樣硬化的發(fā)展。這表明對氧化的低密度脂蛋白產(chǎn)生的免疫反應(yīng)通常具有防護效果。然而，在此給出的結(jié)果令人吃驚的是并非總是這樣。例如，用肽#10，45，154，199和240的混合物進行免疫接種，導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)展加劇。用其它肽序列如肽序列#1，和30-34進行的免疫接種對動脈粥樣硬化的發(fā)展根本沒效果。結(jié)果令人吃驚是因為，它們?yōu)閷ρ趸牡兔芏戎鞍桩a(chǎn)生的免疫反應(yīng)是能防止發(fā)展，還是促進動脈粥樣硬化發(fā)展，還是根本沒有效果取決于它們針對于氧化的低密度脂蛋白中的哪種結(jié)構(gòu)這一事實提供了依據(jù)。這些發(fā)現(xiàn)使研發(fā)出能分離出保護的免疫反應(yīng)活性的免疫接種方法成為可能。而且，它們顯示如果所用顆粒含有能引起致動脈粥樣化免疫反應(yīng)的高水平結(jié)構(gòu)，用完整氧化的低密度脂蛋白進行的免疫接種可能具有有害的效果。
本發(fā)明的技術(shù)是基于完全不同的原理和方法。根據(jù)權(quán)利要求1，本發(fā)明涉及對載脂蛋白B氧化片斷產(chǎn)生的抗體，這種抗體用于對心血管性疾病的免疫接種。
作為主動免疫接種的替代，利用上述已識別的肽，用預(yù)先制備的針對相同的肽產(chǎn)生的抗體進行被動免疫接種是極有可能的。可以賦予這種抗體希望的特性，例如有關(guān)特異性和交叉反應(yīng)性，同型，親和性和血漿半衰期。隨著單克隆抗體技術(shù)(Milstein和Khler，1975 Nature，256495-7)的出現(xiàn)，開發(fā)具有預(yù)定特性抗體的可能性已變得很顯然。這一技術(shù)使用鼠雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生大量相同的，但是鼠的抗體。實際上，使用鼠單克隆抗體來治療例如癌癥開始了大量臨床前和臨床試驗。但是，由于抗體并非源自人類，病人的免疫系統(tǒng)將它們識別為外來物，并對它們產(chǎn)生抗體。因此，鼠抗體的功效和血漿半衰期降低，并經(jīng)常由外來抗體引起過敏性的副作用，從而阻礙了成功治療。
為解決這些問題，采用一些方法以減少特定的有治療潛能抗體的鼠成分。第一種方法包括制造所謂嵌合抗體的技術(shù)，其中抗體的鼠可變區(qū)轉(zhuǎn)化成人恒定區(qū)，產(chǎn)生主要是人類的抗體(Neuberger等，1985，Nature 314268-70)。進一步改良該方法，開發(fā)出人源化抗體，其中接觸抗原的鼠抗體區(qū)，即所說的互補性決定區(qū)(CDRs)轉(zhuǎn)化成人類抗體構(gòu)架。這種抗體幾乎完全是人類的，當(dāng)向病人給藥時，很少會引起有害的抗體反應(yīng)。一些嵌合或人源化抗體已經(jīng)注冊為治療藥物并且現(xiàn)在在各種指標(biāo)中廣泛使用(Borrebaeck和Carlsson，2001，Curr.Opin.Pharmacol.1404-408)。
如今也可用重組技術(shù)產(chǎn)生完全的人類抗體。使用包括十億不同抗體的典型大文庫。與以前使用嵌合或人源化的例如鼠抗體技術(shù)相反，本技術(shù)并不依賴于動物的免疫接種產(chǎn)生特定抗體。替代的，重組物文庫包含大量預(yù)先制備的抗體變異體，對于任何一種抗原文庫可能有至少一種特定的抗體。因而，使用這樣的文庫，問題變成了一個，尋找文庫中已經(jīng)存在的特定結(jié)合物，而并非通過免疫接種產(chǎn)生。為了在文庫中以有效的方式找到良好的結(jié)合物，已經(jīng)發(fā)明了各種系統(tǒng)，其中表型即抗體或抗體片斷被連接到它的基因型即編碼基因上。最常用的這樣的系統(tǒng)叫做噬菌體顯示系統(tǒng)，其中抗體片斷在絲狀噬菌體顆粒表面與噬菌體覆蓋蛋白融合時被表達，顯示，同時攜帶遺傳信息編碼顯示的分子(McCafferty等人，1990，Nature348552-554)?？梢酝ㄟ^與可懷疑的抗原結(jié)合，選擇能顯示對特殊抗原有特異性的抗體片斷的噬菌體。分離出的噬菌體可被放大，并且基因編碼選出抗體的可變區(qū)，可選擇性地轉(zhuǎn)化成其它抗體形式，如全長免疫球蛋白，并用現(xiàn)有技術(shù)中已知的合適的載體和宿主細(xì)胞以高量表達。
在噬菌體顆粒上表現(xiàn)出的抗體特異性形式可能不同。最常用的形式是Fab(Griffiths等人，1994.EMBO J.133245-3260)和單鏈(scFv)(Hoogenboom等人，1992，J Mol Biol.227381-388)，兩者都包括抗體的可變抗原結(jié)合區(qū)。單鏈形式由通過柔性接頭連接到輕鏈可變區(qū)(VL)上的重鏈可變區(qū)(VH)組成(US 4,946,778)。在用作分析試劑或治療劑之前，表現(xiàn)出的抗體特異性被轉(zhuǎn)化成可溶形式，如Fab或scFv及分析的那些。在后續(xù)步驟中，被識別出具有需要特征的抗體片斷還可以被轉(zhuǎn)化成其它形式如全長抗體。
最近出現(xiàn)了一種在抗體文庫中生成變體的新技術(shù)(WO98/32845，Soderlind等，2000，Nature Bio Technol.18852-856)。出自這個文庫的抗體片斷都有相同的構(gòu)架區(qū)，只是它們的CDRs不同。由于構(gòu)架區(qū)是生殖系序列，預(yù)計來自這個文庫或類似文庫的抗體用相同的技術(shù)產(chǎn)生的免疫原性特別低(Soderlind等人，2000，Nature BioTechnol.18852-856)。預(yù)計這種特性對于治療抗體，大大降低了病人對給藥抗體產(chǎn)生抗體的風(fēng)險，從而減少了過敏性，出現(xiàn)封閉性抗體和使抗體有較長血漿半衰期的風(fēng)險。來自重組物文庫的一些抗體現(xiàn)在已進入臨床，并預(yù)計未來將提供治療性藥物。
因而，當(dāng)遇到開發(fā)用于人類的治療抗體挑戰(zhàn)時，現(xiàn)有技術(shù)使人們認(rèn)識到不能使用以前的雜交瘤技術(shù)，而應(yīng)使用現(xiàn)代的重組物文庫技術(shù)(Soderlind等人，2001，Comb.Chem.&High Throughput Screen.4409-416)。實現(xiàn)將識別的肽(PCT/SE02/00679)，并且是本發(fā)明的整體，能用作抗原產(chǎn)生具有預(yù)定特性的完全人類抗體。與以前的技術(shù)(US 6,225,070)相反，抗原結(jié)構(gòu)即本發(fā)明使用的肽確定為與用于治療抗體的靶序列特別相關(guān)(PCT/SE02/00679)。本發(fā)明中，抗體來自抗體文庫，不需要免疫接種脂蛋白缺乏的老鼠以產(chǎn)生鼠抗體(US 6,225,070)。此外，產(chǎn)生的抗體完全是人類的，并且當(dāng)向病人給藥時，預(yù)計不會產(chǎn)生任何不希望的免疫學(xué)反應(yīng)。
使用的肽，且以前已識別(PCT/SE02/00679)如下表1A.高IgG，MDA-差異P11. FLDTVYGNCSTHFTVKTRKGP25. PQCSTHILQWLKRVHANPLLP74. VISIPRLQAEARSEILAHWSB.高IgM，無MDA-差異
P40. KLVKEALKESQLPTVMDFRKP68. LKFVTQAEGAKQTEATMTFKP94. DGSLRHKFLDSNIKFSHVEKP99. KGTYGLSCQRDPNTGRLNGEP100.RLNGESNLRFNSSYLQGTNQP102.SLTSTSDLQSGIIKNTASLKP103.TASLKYENYELTLKSDTNGKP105.DMTFSKQNALLRSEYQADYEP177.MKVKIIRTIDQMQNSELQWPC.高IgG，無MDA差異P143.IALDDAKINFNEKLSQLQTYP210.KTTKQSFDLSVKAQYKKNKHD.NHS/AHP，IgG-ak＞2，MDA-差異P1. EEEMLENVSLVCPKDATRFKP129.GSTSHHLVSRKSISAALEHKP148.IENIDFNKSGSSTASWIQNVP162.IREVTQRLNGEIQALELPQKP252.EVDVLTKYSQPEDSLIPFFEE.NHS/AHP，IgM-ak＞2，MDA-差異P301.HTFLIYITELLKKLQSTTVMP30. LLDIANYLMEQIQDDCTGDEP31. CTGDEDYTYKIKRVIGNMGQP32. GNMGQTMEQLTPELKSSILKP33. SSILKCVQSTKPSLMIQKAAP34. IQKAAIQALRKMEPKDKDQEP100.RLNGESNLRFNSSYLQGTNQP107.SLNSHGLELNADILGTDKINP149.WIQNVDTKYQIRIQIQEKLQP169.TYISDWWTLAAKNLTDFAEQP236.EATLQRIYSLWEHSTKNHLQF.NHS/AHP，IgG-ak＜0.5，無MDA-差異P10. ALLVPPETEEAKQVLFLDTVP45. IEIGLEGKGFEPTLEALFGKP111.SGASMKLTTNGRFREHNAKFP154.NLIGDFEVAEKINAFRAKVHP199.GHSVLTAKGMALFGEGKAEFP222.FKSSVITLNTNAELFNQSDIP240.FPDLGQEVALNANTKNQKIR或一種或多種這些肽的活性部位。
在上面的表1中，下面是適合的(A)片斷，對MDA-改性肽產(chǎn)生高水平的IgG抗體(n＝3)，(B)片斷，產(chǎn)生高水平的IgM抗體，但自然和MDA-改性肽之間無差異(n＝9)，(C)片斷，產(chǎn)生高水平的IgG抗體，但自然和MDA-改性肽之間無差異(n＝2)，(D)片斷，對MDA-改性肽產(chǎn)生高水平的IgG抗體，并且在NHP-pool中的抗體至少是AHP-pool的兩倍(n＝5)，(E)片斷，對MDA-改性肽產(chǎn)生高水平的IgM抗體，并且在NHP-pool中的抗體至少是AHP-pool的兩倍(n＝11)，以及(F)片斷，產(chǎn)生高水平的IgG抗體，但完整的與MDA-改性肽之間無差異，但在AHP-pool中的抗體至少是NHP-pool的兩倍(n＝7)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及使用針對至少一種載脂蛋白B的氧化片斷產(chǎn)生的至少一種分離的人類抗體或其抗體片斷制造藥物組合物，通過被動免疫接種方法治療或預(yù)防性治療動脈粥樣硬化。
另外，本發(fā)明涉及這些抗體的重組物制備，以及本發(fā)明涉及利用氧化的載脂蛋白B片斷，特別是上述的片斷作為抗原，產(chǎn)生這樣的抗體進行被動免疫接種的方法。
本發(fā)明利用分離的抗體片斷文庫生成對氧化的特別是Apo B100的MDA改性肽產(chǎn)生的特定人類抗體片斷。已識別的具有需要特性的抗體片斷于是可以復(fù)原成全長人類免疫球蛋白，為治療目的使用。
發(fā)明詳述下面以來自分離的抗體片斷文庫中的人類抗體并針對ApoB 100的兩個MDA改性肽為例，但并不僅限于此，對本發(fā)明進行詳細(xì)地描述。
實施例1對MDA改性肽IEIGL EGKGF EPTLE ALFGK(P45，表1)和KTTKQ SFDLSVKAQY KKNKH(P210，表1)產(chǎn)生的scFv進行選擇。
將靶抗原化學(xué)改性，在賴氨酸和組氨酸上攜帶丙二醛(MDA)(Malone-dialdehyde)集團。改性肽表示為IEI(P45)和KTT(P210)。
利用BioInvent’s n-CoDeRTMscFv文庫完成選擇，組成和產(chǎn)生的原則已在Soderlind等2000，Nature Bio Technology.18，852-856中有所描述。簡單的，CDRs從人類免疫球蛋白基因中分離出來，并被置于固定構(gòu)架中。因此，形成的免疫球蛋白可變區(qū)的變化是六個CDRs全部進入固定構(gòu)架重組的結(jié)果。構(gòu)架區(qū)是全部的生殖系并在所有的抗體中都相同。因此，變化只限于全是自然的且來自人類的互補性決定區(qū)(CDRs)。該文庫包括大約2×1010個獨立克隆并且超過2000倍的克隆作為每次選擇的輸入量。經(jīng)過三輪完成選擇。第1輪選擇，用在PBS(137mMNaCl，2.7mM KCl，4.3mM Na2HPO4，1.4mM KH2PO4)中濃度為20μg/ml的MDA-改性靶肽1.2ml覆蓋免疫試管(NUNC maxisorb 444202)，在+4℃顛倒攪動一夜。然后用TPBSB5％(5％BSA，0.05％Tween 20，在PBS中0.02％疊氮化鈉)封閉試管30分鐘，并在使用前用TPBSB3％(3％BSA，0.05％Tween 20，在PBS中0.02％疊氮化鈉)洗滌兩次。用來自n-CodeRTM文庫的約2×1013個CFU噬菌體在1.8ml TPBSB3％中在室溫下對每個靶試管溫育2小時，并顛倒性攪拌。然后，用15×3ml TPBSB3％和2×1ml PBS洗滌試管，之后用1ml/試管的2mg/ml胰蛋白胨(Roche，109819)在室溫將結(jié)合噬菌體洗脫30分鐘。這一過程利用了在scFv-融合蛋白中的特定胰蛋白胨部位，使噬菌體從靶中釋放出來。加入100μlA蛋白(0.2mg/ml，Roche，cat.236624)使反應(yīng)停止，并用300μl PBS，最終體積為1.4ml，洗滌免疫試管。
為擴增選出的噬菌體，E.Coli HB101F’細(xì)胞在10ml LB培養(yǎng)基(Merck，cat.1.10285)中按指數(shù)生長至OD600＝0.5，用選出并洗脫的噬菌體主要按Soderlind等人，2000，Nature BioTechnol.18，852-856所述使細(xì)胞感染。然后通過按1/4體積加入在2.5M Nacl中濃度為20％PEG6000，使得到的噬菌體上清液沉淀，并在+4℃培養(yǎng)5小時。通過13000×g離心沉淀30分鐘，使噬菌體成球狀，在500μlPBS中使噬菌體再懸浮，并在第2輪選擇中使用。
擴增的噬菌體原料用于第2輪選擇，最終體積為1.5ml的在PBS中5％BSA，0.05％Tween 20，0.02％疊氮化鈉。無MDA改性的肽(4×10-7M)也參與連接物連接到MDA-未改性靶肽上的競爭?；旌衔镌谟蒙鲜隹乖瓬?zhǔn)備好的免疫試管中培養(yǎng)，除了用1％酪蛋白代替TPBSB3％封住試管。如第1次選擇中描述的那樣，培養(yǎng)和洗滌免疫試管。然后用600μl 100mM Tris-甘氨酸緩沖液，pH2.2洗脫結(jié)合噬菌體30分鐘。另外用200μl甘氨酸緩沖液洗滌試管，收集洗脫物，然后用96μl 1M Tris-HCl，pH8.0中和洗脫物。在室溫下使樣本復(fù)性1小時，并用于第3輪選擇。
對于第3輪選擇，向已復(fù)性的噬菌體池中加入BSA，Tween 20和疊氮化鈉至最終濃度分別為3％，0.05％和0.02％。加入競爭肽，與MDA改性無關(guān)的肽，以及無改性的自然靶肽至濃度為1×10-7M。向覆蓋著如第1次選擇中描述的靶抗原的免疫試管中加入噬菌體混合物(1100μl)，并在4℃攪拌培養(yǎng)過夜。然后用3×3ml TPBSB 3％，5×3ml PBS洗滌試管，最后用如上述第1輪選擇中描述的胰蛋白胨洗脫結(jié)合噬菌體。在含100μg/ml氨芐青霉素，15μg/ml四環(huán)素，0.1％葡萄糖的LB中成指數(shù)生長的HB101F’10ml中放入每份洗脫物受感染，并在30℃在200rpm的振動恒溫箱中隔夜生長。
隔夜培養(yǎng)物用于使用Biorad微量制備試劑盒(Cat.732 6100)微量制備質(zhì)粒DNA。為了從表達載體上去除噬菌體基因III部分，在廠商推薦的緩沖液中使用2.5U Eag-1(New England Biolabs，cat.R050)在37℃切割0.25μg質(zhì)粒DNA兩小時。然后加熱樣本在65℃失活20分鐘，并在16℃用1U T4DNA連接酶在30μl1×連接酶緩沖液(Gibco/BRL)中連接樣本過夜。這一過程將位于噬菌體基因III片斷相反面上的兩個Eag-1部位連接起來，從而產(chǎn)生了末端為6xhis tag的游離scFv。經(jīng)過連接作用后，在37℃在含有30μl連接混合物，3.6μl 10×REACT3原料，0.4μl 1M NaCl，5μl H2O2的溶液中消化材料2小時，以便破壞再次連接的噬菌體基因III片斷的克隆。20ng最終產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成有化學(xué)反應(yīng)能力的Top10F’，并涂敷在500cm2Q-tray LA-盤上(100μg/ml Amp，1％葡萄糖)，以便能為進一步的篩選挑選單一菌落。
篩選n-CoDeRTMscFv文庫為尋找連接到載脂蛋白B-100的MDA改性肽上的特定抗體片斷。
為了識別能分別區(qū)分MDA改性IEI(P45)肽與自然的IEI，及MDA改性KTT(P210)與自然的KTT的scFv，在選出的scFv表達克隆的細(xì)菌上清液上完成篩選。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法，在BioInvent自動系統(tǒng)上完成菌落挑選單一克隆，表達scFv和對1號進行篩選。選出分別針對MDA改性IEI和KTT肽的1088和831單一克隆，并在100μl含100μg氨芐青霉素/ml的LB的微量滴定盤中培養(yǎng)并表達。
為對1號進行篩選，用在覆蓋緩沖液(0.1M碳酸鈉，pH9.5)中54pmol肽/孔，或用MDA改性肽充當(dāng)正靶，或用相應(yīng)的非改性肽充當(dāng)非靶涂覆在白色測定盤(Greiner 655074)上。在ELISA中，通過scFv上的C-端myc-tag使用1μg/ml抗-c-myc單克隆(9E10 Roche 1667 149)在清洗緩沖液中偵測表達的scFv。將羊抗鼠堿性磷酸酶結(jié)合體(Applied Biosystems Cat#AC32ML)稀釋25000倍使用，作為二級抗體。根據(jù)廠商的推薦使用CDP-Star Ready to use withEmerald II Tropix(Applied Biosystems Cat#MS100RY)進行發(fā)光偵測。
按上面描述的方法對結(jié)合MDA改性肽但非自然肽的scFv克隆再次表達，并在發(fā)光ELISA中再次篩選(表2和

圖1)。對直接涂敷的肽(108pmol/孔覆蓋著PBS)和更多生理靶進行試驗；包括有和無MDA改性的ApoB-100蛋白的低密度脂蛋白(LDL)顆粒(1μg/孔覆蓋在PBS+1mM EDTA中)當(dāng)作靶使用。陽性克隆是那些結(jié)合氧化的低密度脂蛋白和MDA改性肽而并非自然的低密度脂蛋白或肽。將抗-His抗體(MaB050RαD)用作偵測抗體，如上面所述的方法完成ELISA。發(fā)現(xiàn)12個IEI克隆和2個KTT克隆對于肽和低密度脂蛋白的MDA改性形式比它們的自然形式在700nm給出三倍以上高的發(fā)光信號。
為了評價scFv的劑量反應(yīng)，通過對固定量(1μg/孔)的MDA低密度脂蛋白和自然的低密度脂蛋白進行滴定，進一步檢測識別的克隆(圖2)。
表2.篩選結(jié)果。在每步篩選步驟中針對每個靶被檢驗克隆的號數(shù)。括號中顯示的是用百分?jǐn)?shù)表示的中靶次數(shù)。

為了找到特殊克隆，測定挑出的scFv克隆的序列。用使用引物(5’-CCC AGTCAC GAC GTT GTA AAA CG-3’)和(5’-GAA ACA GCT ATG AAA TAC CTATTG C-3’)的Boeringer Mannheim Expand Kit與GeneAmp PCR system 9700(PEApplied system)使用溫度循環(huán)程序94℃5分鐘；94℃30秒，52℃30秒和68℃2分鐘共循環(huán)30次；最后在68℃5分鐘，完成細(xì)菌性PCR。用細(xì)菌性PCR產(chǎn)物(稀釋5倍)作為模板，用購自PE Applied Biosystems的Big Dye Terminatormix和GeneAmp PCR system 9700(PE Applied system)和溫度循環(huán)程序96℃10秒，50℃5秒和60℃4分鐘循環(huán)25次，完成測序反應(yīng)。根據(jù)廠商的說明書對延伸產(chǎn)物進行純化，并用3100遺傳分析儀(PE Applied Biosystems)分離并偵測延伸產(chǎn)物。用內(nèi)部計算機程序?qū)π蛄羞M行分析。從序列信息中排除同源克隆和具有不相稱限制部位的克隆，剩下6個克隆用于IgG轉(zhuǎn)化。最終挑選的克隆的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的DNA序列在圖3中顯示。
實施例2基因編碼選出的scFv可變部分轉(zhuǎn)化成全長的人類IgG1載體。
含scFv克隆轉(zhuǎn)化成免疫球蛋白形式的細(xì)菌在補充100μg/ml氨芐青霉素的LB中隔夜生長。利用Quantum Prep，購自Biorad公司的質(zhì)粒微量制備試劑盒(#732-6100)從隔夜培養(yǎng)物中制備質(zhì)粒DNA。通過測量260nm處的吸光率來估算DNA濃度，并將DNA稀釋至濃度為2ng/μl。
PCR擴增來自不同scFv-質(zhì)粒的VH和VL，以便向這些片斷提供與表達載體一致的限制部位(見下面)。5’引物包含一個BsmI，3’引物包含一個BsiWI限制性內(nèi)切酶剪切部位(斜體所示)。3’引物還包含一個剪接供體部位(粗體所示)。
用于擴增VH-片斷的引物5′VH5′-GGTGTGCATTCCGAGGTGCAGCTGTTGGAG(SEQ.ID.NO13)3′VH5′-GACGTACGACTCACCTGAGCTCACGGTGACCAG(SEQ.ID.NO14)用于擴增VL-片斷的引物5′VL5′-GGTGTGCATTCCCAGTCTGTGCTGACTCAG(SEQ.ID.NO15)3′VL5′-GACGTACGTTCTACTCACCTAGGACCGTCAGCTT(SEQ.ID.NO16)在總體積為50μl，含10ng模板DNA，0.4μM 5’引物，0.4μM 3’引物和0.6mMdNTP(Roche，#1 969 064)中進行PCR。使用的聚合酶是Expand long templatePCR系統(tǒng)(Roche #1 759 060)，每次反應(yīng)3.5u，與3次單獨反應(yīng)中填補緩沖液之一一起使用。每次PCR擴增循環(huán)包括，變性步驟在94℃經(jīng)過30秒，退火步驟在55℃經(jīng)過30秒，和延伸步驟在68℃經(jīng)過1.5分鐘。這樣的擴增循環(huán)重復(fù)25次。每次反應(yīng)開始于單一的變性步驟在94℃經(jīng)過2分鐘，結(jié)束于單一的延伸步驟在68℃經(jīng)過10分鐘。通過瓊脂糖凝膠電泳檢查PCR產(chǎn)物是否存在，并收集含相同擴增材料(來自有不同緩沖液的反應(yīng))的反應(yīng)液。隨后通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech#27-5240-01)對PCR擴增產(chǎn)物進行純化。
根據(jù)制造商的推薦，每次收集的PCR產(chǎn)物4μl用于TOPO TA克隆(pCR 2.1TOPO，InVitrogen#K4550-01)。含具有插入片斷質(zhì)粒的細(xì)菌菌落在補充100μg/ml氨芐青霉素和20μg/ml卡那霉素的LB中隔夜生長。由隔夜培養(yǎng)物用QuantumPrep，購自Biorad公司的質(zhì)粒微量制備試劑盒(#732-6100)制備質(zhì)粒DNA。通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech#27-5240-01)對質(zhì)粒制備物進行純化。使用BigDye循環(huán)測序儀(Perkin Elmer Applied Biosystem，#4303150)對來自每次單獨的VH和VL克隆的三種質(zhì)粒進行序列分析。循環(huán)測序程序包括，變性步驟在96℃經(jīng)過10秒，退火步驟在50℃經(jīng)過15秒，和延伸步驟在60℃經(jīng)過4分鐘。這樣的循環(huán)重復(fù)25次。每次反應(yīng)開始于單一的變性步驟在94℃經(jīng)過1分鐘。在體積為10μl含1μM引物(5’-CAGGAAACAGCTATGAC)，3μl質(zhì)粒DNA和4μl Big Dye反應(yīng)混合物中完成反應(yīng)。根據(jù)制造商的推薦，使反應(yīng)物沉淀，并在ABI PRISM 3100基因分析儀上運行樣本。利用OMIGA序列分析軟件(Oxford Molecular Ltd)的對齊功能，序列與原始的scFv序列比較序列。
含有VH和VL片斷無突變的質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化。為了使pCR 2.1 TOPO載體斷裂，質(zhì)粒開始用DraI(Roche#1 417 983)在37℃消化2小時。消化液在70℃加熱失活20分鐘，并通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-PharmaciaBiotech # 27-5240-01)純化。純化后的DraI消化液隨后用BsmI(Roche # 1 292307)和BsiWI(Roche # 1 388 959)在55℃消化隔夜。消化液用酚提取并沉淀，以純化。沉淀的DNA溶解在10μl H2O中并用于連接作用。
從Lars Norderhaug(J.Immunol.Meth.204(1997)77-87)得到表達載體。經(jīng)過一些改性后，載體(圖4)包括一個CMV啟動子，一個Ig-前導(dǎo)肽，一個含BsmI和BsiWI限制部位的克隆接頭用于克隆VH/VL，IgG1(重鏈(HC)載體)或λ(輕鏈(LC)載體)，新霉素(HC載體)或氨甲蝶呤(LC載體)抗性基因的基因組恒定區(qū)用于在真核生物細(xì)胞中選擇，SV40和ColEI復(fù)制源，以及氨芐青霉素(HC載體)或卡那霉素(LC載體)抗性基因用于在細(xì)菌中選擇。
HC和LC載體用BsmI和BsiWI消化，經(jīng)過磷酸酶處理，并用酚提取并沉淀使其純化。在16℃在體積為10μl含100ng消化后的載體，2μl消化后的VH/VL-pCR 2.1 TOPO載體(見上面)，1U T4 DNA連接酶(Life Technologies，# 15224-025)和填補緩沖液中隔夜進行連接。之后，將2μl連接混合物轉(zhuǎn)化成50μl有化學(xué)性能的top10F’細(xì)菌，并涂覆在選擇性的(100μg/ml氨芐青霉素或20μg/ml卡那霉素)瓊脂板上。
含有帶VH/VL插入片斷的HC/LC質(zhì)粒的菌落通過菌落PCR識別正向引物5’-ATGGGTGACAATGACATC反向引物5’-AAGCTTGCTAGCGTACG在總體積為20μl含細(xì)菌，0.5μM正向引物，0.5μM反向引物和0.5mM dNTP(Roche，#1 969 064)的溶液中進行PCR。使用的聚合酶是Expand long templatePCR system(Roche # 1 759 060)，每次反應(yīng)0.7U，和填補緩沖液#3一起使用。每次PCR擴增循環(huán)包括，變性步驟在94℃經(jīng)過30秒，退火步驟在52℃經(jīng)過30秒，和延伸步驟在68℃經(jīng)過1.5分鐘。這樣的擴增循環(huán)重復(fù)30次。每次反應(yīng)開始于單一的變性步驟在94℃經(jīng)過2分鐘，結(jié)束于單一的延伸步驟在68℃經(jīng)過5分鐘。通過瓊脂糖凝膠電泳檢查PCR產(chǎn)物是否存在。含有帶VH/VL插入片斷的HC/LC質(zhì)粒的菌落在補充有100μg/ml氨芐青霉素或20μg/ml卡那霉素的LB中生長隔夜。由隔夜培養(yǎng)物用Quantum Prep，購自Biorad公司的質(zhì)粒微量制備試劑盒(#732-6100)制備質(zhì)粒DNA。通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech#27-5240-01)對質(zhì)粒制備物進行純化。為確定完整的DNA序列，使用BigDye循環(huán)測序儀(Perkin Elmer Applied Biosystem，#4303150)對來自每種單獨的VH和VL的三種質(zhì)粒進行序列分析。循環(huán)測序程序包括，變性步驟在96℃經(jīng)過10秒，退火步驟在50℃經(jīng)過15秒，和延伸步驟在60℃經(jīng)過4分鐘。這樣的循環(huán)重復(fù)25次。每次反應(yīng)開始于單一的變性步驟在94℃經(jīng)過1分鐘。在體積為10μl含1μM引物(5’-AGACCCAAGCTAGCTTGGTAC)，3μl質(zhì)粒DNA和4μl Big Dye反應(yīng)混合物中完成反應(yīng)。根據(jù)制造商的推薦，使反應(yīng)物沉淀，并在ABI PRISM 3100基因分析儀上運行樣本。利用OMIGA序列分析軟件(Oxford Molecular Ltd)，分析序列。質(zhì)粒DNA用于COS-7細(xì)胞的瞬間轉(zhuǎn)染(見下面)并被消化以產(chǎn)生在同一質(zhì)粒上含有重鏈和輕鏈基因的連接載體。
從同一scFv獲得的含VH和VL片斷的重鏈和輕鏈載體被限制性內(nèi)切酶剪切并連接HC-和LC-載體首先用MunI(Roche # 1 441 337)消化，之后在70℃消化液被加熱失活20分鐘，并通過自旋柱色譜法用S200-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech # 27-5120-01)對其進行純化。隨后用NruI(Roche# 776 769)對HC-載體消化液進行消化，用Bst1107I(Roche # 1 378 953)對LC-載體消化液進行消化。然后消化液在70℃被加熱失活20分鐘，并通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech # 27-5240-01)對其進行純化。每種消化后的質(zhì)粒5μl在總體積為20μl含2U T4 DNA連接酶(LifeTechnologies，#15224-025)和填補緩沖液中在16℃隔夜進行連接。之后，將2μl連接混合物轉(zhuǎn)化成50μl有化學(xué)性能的top10F’細(xì)菌，并涂覆在選擇性的(100μg/ml氨芐青霉素和20μg/ml卡那霉素)瓊脂板上。
細(xì)菌菌落在補充有100μg/ml氨芐青霉素和20μg/ml卡那霉素的LB中生長隔夜。由隔夜培養(yǎng)物用Quantum Prep，購自Biorad公司的質(zhì)粒微量制備試劑盒(# 732-6100)制備質(zhì)粒DNA。通過限制性內(nèi)切酶的消化作用并結(jié)合瓊脂糖凝膠-電泳對片斷尺寸的分析，識別出正確連接的載體。
質(zhì)粒制備物通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech #27-5240-01)進行純化，并用于COS-7細(xì)胞的瞬間轉(zhuǎn)染。
用5％CO2溶于Dulbeccos MEM，高葡萄糖+GlutamaxI(Invitrogen #31966021)，補充0.1mM非必需氨基酸(Invitrogen # 11140035)和10％胎牛血清(Invitrogen # 12476-024，batch # 1128016)在37℃培養(yǎng)COS-7細(xì)胞(ATCC #CRL-1651)。在轉(zhuǎn)染前一天，按每孔1.5×105個細(xì)胞的密度將細(xì)胞涂覆在12-孔培養(yǎng)盤(Nunc，# 150628)中。
轉(zhuǎn)染前，在70℃加熱質(zhì)粒DNA15分鐘。根據(jù)制造商的推薦使用Lipofectamine2000Reagent(Invitrogen，# 11668019)，細(xì)胞被每孔1μg HC-質(zhì)粒+1μg LC-質(zhì)粒，或2μg連接質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24小時，改變細(xì)胞培養(yǎng)基，并讓細(xì)胞生長5天。之后，收集培養(yǎng)基并用ELISA測定蛋白質(zhì)產(chǎn)物。
向96-孔培養(yǎng)盤(Costar # 9018，平底，高邊)加入用覆蓋緩沖液(0.1M碳酸鈉，pH9.5)稀釋了4000倍的兔抗-人源λ輕鏈抗體(DAKO，#A0193)100μl/孔，在4℃隔夜。在含0.05％Tween 20的PBS中洗滌培養(yǎng)盤4次，之后在室溫用100μl/孔PBS+3％ BSA(清蛋白，級分V，Roche # 735108)封閉培養(yǎng)盤1小時。經(jīng)過上述洗滌后，加入100μl/孔樣本，并在室溫培養(yǎng)1小時。使用人類純化IgG1(Sigma，# I5029)作為估測濃度的標(biāo)準(zhǔn)。用樣本緩沖液(1×PBS含2％BSA和0.5％兔血清(Sigma # R4505))稀釋樣本和標(biāo)準(zhǔn)。其后，如上述方法洗滌培養(yǎng)盤，加入用樣本緩沖液稀釋8000倍的兔抗人類IgG(γ-鏈)HARP-接合抗體(DAKO，# P214)100μl/孔，并在室溫培養(yǎng)1小時。用含0.05％Tween 20的PBS洗滌8次后，加入100μl/孔的底物溶液，其包括一片OPD片劑(10mg，Sigma # P8287)溶解于15ml檸檬酸緩沖液中和4.5μl H2O2(30％)。10分鐘后，加入150μl/孔的1M HCl結(jié)束反應(yīng)。在490-650nm處測量吸光率，并用Softmax軟件分析數(shù)據(jù)。
含正確連接的HC-和LC-載體的細(xì)菌在補充氨芐青霉素和卡那霉素的LB溶液500ml中隔夜生長。由隔夜培養(yǎng)物用Quantum Prep，購自Biorad公司的質(zhì)粒大量制備試劑盒(# 732-6130)制備質(zhì)粒DNA。用PvuI限制性內(nèi)切酶(Roche #650 129)使載體線性化。在轉(zhuǎn)染之前，通過自旋柱色譜法用S400-HR柱(Amersham-Pharmacia Biotech # 27-5240-01)對線性化的DNA進行純化，并在70℃加熱15分鐘。
實施例3對載脂蛋白B-100的MDA改性肽產(chǎn)生的抗體進行表達的NS0細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
在補充10％肽牛血清(cat no.12476-024，lot1128016，Invitrogen)和1×NEAA(非必需氨基酸，cat no.11140-053，Invitrogen)的DMEM(cat nr31966-021，Invitrogen)中培養(yǎng)NS0細(xì)胞(ECACC no.85110503)。細(xì)胞培養(yǎng)物在37℃ 5％ CO2的濕潤環(huán)境中保存。
被轉(zhuǎn)染的DNA構(gòu)造是四部分構(gòu)造，IEI特定抗體(IEI-A8，IEI-D8，IEI-E3，IEI-G8)，兩種KTT特定抗體(KTT-B8，KTT-D6)和一種對照抗體(JFPA12)。在轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞胰蛋白酶化并計數(shù)，之后將它們置于一個T-75型燒瓶中，12×106細(xì)胞/瓶。在轉(zhuǎn)染當(dāng)天，當(dāng)細(xì)胞有85-90％匯合時，將細(xì)胞放入15mlDMEM+1×NEAA+10％FBS(如上)中。對于每瓶被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，將35-40μg的DNA放入1.9ml的OPTI-MEM I Reduced Serum Medium(Cat no.51985-026，lot3062314，Invitrogen)無血清稀釋。對于每瓶細(xì)胞，114μl的Lipofectamine 2000Reagent(Cat nr. 11668-019，lot1116546，Invitrogen)放入另一試管中的1.9mlOPTI-MEM I Reduced Serum Medium中稀釋，并在室溫培養(yǎng)5分鐘。稀釋后的DNA與稀釋后的Lipofectamine 2000Reagent(在30分鐘內(nèi))合并，并在室溫培養(yǎng)20分鐘，以形成DNA-LF2000 Reagent復(fù)合物。
用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次，并加入11ml DMEM+1×NEAA+10％FBS。然后向每個瓶中直接加入DNA-LF2000 Reagent復(fù)合物(3.8ml)并來回晃動燒瓶使其輕輕混合。細(xì)胞在37℃于5％CO2恒溫箱培養(yǎng)24小時。
然后將細(xì)胞胰蛋白酶化并計數(shù)，然后將其涂覆在96-孔培養(yǎng)盤中，2×104細(xì)胞/孔，使用五個96-孔培養(yǎng)盤/構(gòu)造。將細(xì)胞置于100μl/孔的DMEM+1×NEAA+10％FBS(如上)含G418-硫酸鹽(cat nr.10131-027，lot3066651，Invitrogen)600μg/ml。選擇壓力保持不變直到采集細(xì)胞。
讓細(xì)胞生長12天，用ELISA檢測其抗體產(chǎn)量。選自含IgG最高量的24個孔中的每種構(gòu)造細(xì)胞被轉(zhuǎn)移到24-孔培養(yǎng)盤上，并讓其達到匯合。然后用ELISA測定這些孔中細(xì)胞的抗體產(chǎn)量并選擇5-21池/構(gòu)造用于再篩選(表3)。最終每種構(gòu)造挑選出最好的1-4孔的細(xì)胞。這些細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶中相繼擴展，最后將其移至有200ml(DMEM+1×NEAA+10％超低IgG FBS(cat.no.16250-078，lot.No.113466，Invitrogen)+G418(600μg/ml))的三層燒瓶(500cm2)中，用于抗體生產(chǎn)。培養(yǎng)細(xì)胞7-10天，通過ELISA測定上清夜，收集上清液并無菌過濾用于純化。
實施例4人類IgG1的生產(chǎn)與純化用不同的IgG1抗體轉(zhuǎn)染NS0細(xì)胞得到的上清液用0.22μm的濾器無菌過濾并用親和培養(yǎng)基MabSelectTM與重組蛋白A(Cat.No.17519901 AmershamBiosciences)純化。
結(jié)合人類IgG1用HCL-甘氨酸緩沖液pH2.8洗脫。收集洗脫物為0.5ml餾分，用OD280測定蛋白質(zhì)的存在。將峰值餾分匯集，并在280nm和320nm處測量吸光度。通過透析阻擋大體積的PBS，改變緩沖液。用LAL測試(QCL-1000R，cat.No.50-647U Bio Whittaker)檢測在純化的IgG-1制備物中是否存在內(nèi)毒素。樣本含有1-12EU/ml的內(nèi)毒素。用PAGE分析，制備物的純度估計超過98％。
表3人類IgG1的生產(chǎn)與純化總結(jié)

純化的IgG1制備物在ELISA中檢測對MDA改性和未改性肽的反應(yīng)性(圖5)，然后用于體內(nèi)和體外功能研究。
實施例5在實驗動物和細(xì)胞培養(yǎng)研究兩方面對抗體可能的抗致動脈粥樣化效果進行分析。
1.在載脂蛋白E剔除(apo E-)鼠中抗體在動脈粥樣硬化方面的效果。
五周大的apo E-小鼠用富含膽固醇的膳食喂食15周。已知經(jīng)過這樣處理，可在主動脈和頸動脈中產(chǎn)生大量的動脈粥樣斑。然后分別給小鼠腹膜內(nèi)注射含500μg的上述抗體。給對照鼠注射500μg不相關(guān)的對照抗體或單獨注射PBS。經(jīng)過1和2周后，重復(fù)進行這樣的處理。在開始注射抗體后的4周小鼠死亡。通過油紅O對扁平形成物染色，并測定瓣狀動脈粥樣斑的尺寸，來測定主動脈中動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度。通過Masson trichrome染色及細(xì)胞-特異免疫組織化學(xué)，測定瓣狀動脈粥樣斑含膠原蛋白，巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞量。利用計算機圖象分析對油紅O染色，瓣狀動脈粥樣斑的尺寸，trichrome染色及免疫組織化學(xué)染色進行量化。
在首次實驗中，分析喂食高膽固醇膳食的apo E-/-小鼠抗體在動脈粥樣硬化發(fā)展方面的效果。在小鼠21周大時開始隔周給小鼠腹膜內(nèi)注射0.5mg的抗體共三次，用PBS作為對照。最后一次抗體注射后兩周，它們死亡，用油紅O染色縮小的主動脈扁平形成物，評定動脈粥樣硬化的程度。用IEI-E3抗體處理過的小鼠觀察到了顯著的效果，與PBS組(P＝0.02)和接受人類IgG1抗體(FITC8)直接針對無關(guān)的熒光素異硫氰酸鹽(FITC)抗原的對照組(P＝0.03)相比，動脈粥樣硬化減少了50％以上(圖6)。鼠耐人類抗體對普通健康狀態(tài)的小鼠有無效果是很明顯的。
為檢驗IEI-E3抗體在動脈粥樣硬化發(fā)展方面的抑制效果，我們做了劑量-反應(yīng)研究。該表與開始的研究一樣。用IEI-E3抗體處理過的小鼠，與相應(yīng)FITC抗體處理過的組相比，在0.25mg組(n.s.)中動脈粥樣硬化減少了2％，在0.5mg組(n.s.)中減少了25％，在2.0mg組中減少了41％(P＝0.02)(圖7)。
2.在apo E-小鼠中抗體在頸動脈機械損傷后新內(nèi)膜的形成方面的效果。
動脈受到機械損傷在3周內(nèi)導(dǎo)致肌肉纖維化新內(nèi)膜斑塊的發(fā)展。這種斑塊形態(tài)上類似肌肉纖維化動脈粥樣斑，并已用作研究出現(xiàn)的損傷發(fā)展的一種模型。圍繞頸動脈放置塑料套圈引起機械損傷。五周大的apo E-小鼠用富含膽固醇的膳食喂食14周。然后分別用含500μg的抗體給小鼠進行腹膜內(nèi)注射。給對照鼠注射500μg不相關(guān)的對照抗體或單獨注射PBS。7天后重復(fù)這種處理并在1天后手術(shù)放置塑料套圈。手術(shù)后第6天進行最后一次注射抗體或PBS，動物15天后死亡。將受損的頸動脈包埋在石蠟中固定并進行切片。用計算機圖象分析測量新內(nèi)膜斑塊的尺寸。
3.抗體在培養(yǎng)的人類巨噬細(xì)胞中攝取氧化的低密度脂蛋白方面的效果。
在動脈巨噬細(xì)胞中攝取氧化的低密度脂蛋白導(dǎo)致形成膽固醇負(fù)載的巨噬細(xì)胞泡沫細(xì)胞是動脈粥樣斑最典型的特征之一。幾種證據(jù)表明在動脈巨噬細(xì)胞中抑制對氧化的低密度脂蛋白的攝取為治療動脈粥樣硬化提出了一個可能的目標(biāo)。為研究抗體在巨噬細(xì)胞攝取氧化的c方面的效果，用125I-標(biāo)記的人類氧化的低密度脂蛋白預(yù)溫育2小時。通過在Ficoll hypaque中的離心作用從供血者的血沉棕黃層中分離出人類巨噬細(xì)胞，隨后在含有10％的血清中培養(yǎng)6天。然后用含抗體/氧化的低密度脂蛋白復(fù)合物的培養(yǎng)基培育細(xì)胞6小時，洗滌細(xì)胞并在γ-計數(shù)器中對細(xì)胞進行細(xì)胞相關(guān)放射性測定。與FITC-8進入巨噬細(xì)胞中相比，加入IEI-E3抗體導(dǎo)致接合(P＝0.001)和攝取(P＝0.004)氧化的低密度脂蛋白增加五倍，但在結(jié)合或攝取自然的低密度脂蛋白方面無效果(圖8a和8b)。
4.抗體在氧化的低密度脂蛋白-依賴細(xì)胞毒性方面的效果。
氧化的低密度脂蛋白具有高細(xì)胞毒性。人們認(rèn)為動脈粥樣斑塊中的大量炎癥活性可通過由氧化的低密度脂蛋白引起的細(xì)胞損傷來解釋。因此抑制氧化的低密度脂蛋白的細(xì)胞毒性為治療動脈粥樣硬化提出了另一個可能的目標(biāo)。為了研究抗體在氧化的低密度脂蛋白細(xì)胞毒性方面的效果，將培養(yǎng)的人類動脈平滑肌細(xì)胞暴露于以遞增濃度存在的抗體(0-200ng/ml)的人類氧化的低密度脂蛋白100ng/ml中48小時。通過測量釋放的酶LDH，測定細(xì)胞的受損率。
上述實驗公開了對特殊肽產(chǎn)生的特殊抗體的效果，但對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，很顯然對公開的肽產(chǎn)生的所有其它抗體也以同樣的方式表現(xiàn)。
本發(fā)明的抗體用在被動免疫接種的藥物組合物中，其中藥物組合物主要計劃為注射用，包活單一抗體或本發(fā)明抗體混合物的溶液，懸液，或乳劑按一定劑量，在治療體中提供一治療或預(yù)防活性水平。組合物可以與通常使用的佐劑一起使用，以增強抗體或抗體混合物的吸收。給藥的其它途徑可以是鼻腔途徑，通過吸入抗體/抗體混合物與可吸入的賦形劑給藥。
這樣的藥物組合物可含活性抗體，其含量為0.5-99.5％(重量)，或5-90％(重量)，或10-90％(重量)，或25-80％(重量)，或40-90％(重量)。
通過被動免疫接種的方法，抗體的每日劑量或促升劑量在治療體中提供了治療或預(yù)防活性水平，以減少或防止動脈粥樣硬化的信號和癥狀。根據(jù)本發(fā)明抗體劑量可以是1μg-1mg每kg體重，或更多。
抗體組合物可補充以其它治療或防止動脈粥樣硬化或心血管疾病的藥物使用，如降低血壓的藥物，如β-受體阻斷藥，鈣拮抗劑，利尿劑和其它抗高血壓劑。
圖9顯示了分離的scFv結(jié)合到MDA改性ApoB100衍生肽上，以及結(jié)合到不相關(guān)序列的MDA改性對照肽上。也描述了scFv分別與MDA改性的和自然的ApoB100蛋白及人類低密度脂蛋白結(jié)合之間的比率。在右手欄內(nèi)用相應(yīng)的子圖形從上到下對圖中順序出現(xiàn)的條柱加以定義。
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序列表SEQ.ID.NO1IEIA8重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAATAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAGTAGGTACTACTACGGACCATCTTTCTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGCSEQ.ID.NO2IEIA8輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGGTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGTSEQ.ID.NO3IEI-E3重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCCGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTATCGGGTGTTAGTTGGAATGGCAGTAGGACGCACTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCGGCTAGGTACTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGCSEQ.ID.NO4IEI-E3輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGCTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGGAATGATCGGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCCGGGGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT
SEQ.ID.NO5IEI-G8重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGTAGTGGTCGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGCAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGATTGGTCTCCTATGGTTCGGGGAGTTTCGGTTTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGCSEQ.ID.NO6IEI-G8輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAAGTAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACTACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGTSEQ.ID.NO7IEI-D8重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGGTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTCTTGGTGGTAGTGGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAAGTTAGGGGGGCGATCCCGATATGGGCGGTGGCCCCGCCAATTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGCSEQ.ID.NO8IEI-D8輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGAAATAACTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTCATTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT
SEQ.ID.NO9KTT-D6重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGCCGTGGGGGTAGTTCCTACTACGCAGACTCCGTGAGGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTTTCCTACAGCTATGGTTACGAGGGGGCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGCSEQ.ID.NO10KTT-D6輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTTAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACCTGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGTSEQ.ID.NO11KTT-B8重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTGGTCGTTTCATTTACTACGCAGACTCAATGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTACGAGGCTCCGGAGAGGGAGCTACTTCTGGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGCSEQ.ID.NO12KTT-B8輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGCGGTGAGTCTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGTSEQ.ID.NO135′VH5′-GGTGTGCATTCCGAGGTGCAGCTGTTGGAG
SEQ.ID.NO143′VH5′-GACGTACGACTCACCTGAGCTCACGGTGACCAGSEQ.ID.NO155′VL5′-GGTGTGCATTCCCAGTCTGTGCTGACTCAGSEQ.ID.NO163′VL5′-GACGTACGTTCTACTCACCTAGGACCGTCAGCTTSEQ.ID.NO175′-ATGGGTGACAATGACATCSEQ.ID.NO185′-AAGCTTGCTAGCGTACG1-B12SEQ.ID.NO19重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGAACGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCTATTAGCAGTAGCAGTAATTACATATTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTCAGACGGAGCAGCTGGTACGGGGGGTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO20輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT
克隆1-C07SEQ.ID.NO21重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGCCGGTATAACTGGAAGACGGGGCATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO22輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGACCTACAACATTGGAAATAATTATGTATCGTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACATCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGTCAGGCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT克隆1-C12SEQ.ID.NO23重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCCGTGACTACTACGTGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGGTAGTGGGGGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGGAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCATGTATTACTGTGCCAGAGTATCCGCCCTTCGGAGACCCATGACTACAGTAACTACTTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO24輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGAGCTCCAACATTGGGAATAGTTATGTCTCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGGATGGGATGACACCCTGCGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT克隆1-G10SEQ.ID.NO25重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCCGCTATTAGTGGTAGTGGTAACACATACTATGCA
GACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCCTCCCACCGTATATTAGGTTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO26輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCCGCTCCAACATCGGGAGAAATGCTGTTAGTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGGCAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCC克隆2-D03SEQ.ID.NO27重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGTTGGTGGACATAGGACATATTATGCAGATTCCGTGAAGGGCCGGTCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCACGGATACGGGTGGGTCCGTCCGGCGGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO28輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAACACCAACATTGGGAAGAACTATGTATCTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAATAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCGTCATGGGATGCCAGCCTGAATGGTTGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT克隆2-F07SEQ.ID.NO29重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCTCACAAATATTTTGACTGGTTATTATACCTCAGGATATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO30輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCACCTCCAACATTGGGAAGAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTC
CCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGCCAGCCTCAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT克隆2-F09SEQ.ID.NO31重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTCTTGGATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGGAACTACGGTTTCTACCACTACATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO32輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAGGCAGCTCAAACATCGGAAAAAGAGGTGTAAATTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGAAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCTACATGGGATTACAGCCTCAATGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT克隆4-A02SEQ.ID.NO33重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAATTAAACGGTTACGATTCGGCTGGACCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO34輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTTCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGGTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGCGTGGTTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT
克隆.4-C03SEQ.ID.NO35重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAATAGCAAAAAGTGGTATGAGGGCTACTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO36輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGTCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT克隆4-D04SEQ.ID.NO37重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAAGAAGTATAGCAGTGGCTGGTACTCGAATTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCASEQ.ID.NO38輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAGCATTGGGAATAATTTTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT
權(quán)利要求
1.使用針對至少一種載脂蛋白B的氧化片斷產(chǎn)生的至少一種分離的人類抗體或抗體片斷制造藥物組合物，通過被動免疫接種方法治療或預(yù)防性治療動脈粥樣硬化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的使用，其中氧化片斷選自以下組中的一種或多種FLDTVYGNCSTHFTVKTRKGPQCSTHILQWLKRVHANPLLVISIPRLQAEARSEILAHWSKLVKEALKESQLPTVMDFRKLKFVTQAEGAKQTEATMTFKDGSLRHKFLDSNIKFSHVEKKGTYGLSCQRDPNTGRLNGERLNGESNLRFNSSYLQGTNQSLTSTSDLQSGIIKNTASLKTASLKYENYELTLKSDTNGKDMTFSKQNALLRSEYQADYEMKVKIIRTIDQMQNSELQWPIALDDAKINFNEKLSQLQTYKTTKQSFDLSVKAQYKKNKHEEEMLENVSLVCPKDATRFKGSTSHHLVSRKSISAALEHKIENIDFNKSGSSTASWIQNVIREVTQRLNGEIQALELPQKEVDVLTKYSQPEDSLIPFFEHTFLIYITELLKKLQSTTVMLLDIANYLMEQIQDDCTGDECTGDEDYTYKIKRVIGNMGQGNMGQTMEQLTPELKSSILKSSILKCVQSTKPSLMIQKAAIQKAAIQALRKMEPKDKDQERLNGESNLRFNSSYLQGTNQSLNSHGLELNADILGTDKINWIQNVDTKYQIRIQIQEKLQTYISDWWTLAAKNLTDFAEQEATLQRIYSLWEHSTKNHLQALLVPPETEEAKQVLFLDTVIEIGLEGKGFEPTLEALFGKSGASMKLTTNGRFREHNAKFNLIGDFEVAEKINAFRAKVHGHSVLTAKGMALFGEGKAEFFKSSVITLNTNAELFNQSDIFPDLGQEVALNANTKNQKIR，或其活性部位。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2的使用，其中用丙二醛氧化片斷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-2的使用，其中用銅氧化片斷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的使用，其中抗體特征在于，它包括選自下列核酸序列組中的重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAATAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAGTAGGTACTACTACGGACCATCTTTCTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.1)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCCGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTATCGGGTGTTAGTTGGAATGGCAGTAGGACGCACTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCGGCTAGGTACTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.3)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGTAGTGGTCGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGCAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGATTGGTCTCCTATGGTTCGGGGAGTTTCGGTTTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.5)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTCTTGGTGGTAGTGGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAAGTTAGGGGGGCGATCCCGATATGGGCGGTGGCCCCGCCAATTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.7)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGCCGTGGGGGTAGTTCCTACTACGCAGACTCCGTGAGGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTTTCCTACAGCTATGGTTACGAGGGGGCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.9)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTGGTCGTTTCATTTACTACGCAGACTCAATGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTACGAGGCTCCGGAGAGGGAGCTACTTCTGGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.11)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGAACGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCTATTAGCAGTAGCAGTAATTACATATTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTCAGACGGAGCAGCTGGTACGGGGGGTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.19)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGCCGGTATAACTGGAAGACGGGGCATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.21)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCCGTGACTACTACGTGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGGTAGTGGGGGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGGAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCATGTATTACTGTGCCAGAGTATCCGCCCTTCGGAGACCCATGACTACAGTAACTACTTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.23)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCCGCTATTAGTGGTAGTGGTAACACATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCCTCCCACCGTATATTAGGTTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.25)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGTTGGTGGACATAGGACATATTATGCAGATTCCGTGAAGGGCCGGTCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCACGGATACGGGTGGGTCCGTCCGGCGGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.27)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCTCACAAATATTTTGACTGGTTATTATACCTCAGGATATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.29)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTCTTGGATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGGAACTACGGTTTCTACCACTACATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.31)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAATTAAACGGTTACGATTCGGCTGGACCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.33)TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAATAGCAAAAAGTGGTATGAGGGCTACTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.35)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAAGAAGTATAGCAGTGGCTGGTACTCGAATTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.37).
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4的使用，其中抗體特征在于，它包括選自下列核酸序列組中的輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGGTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.2)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGCTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGGAATGATCGGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCCGGGGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.4)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCATATCGGAAGTAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACTACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.6)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGAAATAACTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTCATTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.8)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTTAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACCTGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.10)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGCGGTGAGTCTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.12)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.20)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGACCTACAACATTGGAAATAATTATGTATCGTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACATCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGTCAGGCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.22)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGAGCTCCAACATTGGGAATAGTTATGTCTCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGTCCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGGATGGGATGACACCCTGCGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.24)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCCGCTCCAACATCGGGAGAAATGCTGTTAGTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGGCAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCC(SEQ.ID.NO.26)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAACACCAACATTGGGAAGAACTATGTATCTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAATAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCGTCATGGGATGCCAGCCTGAATGGTTGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.28)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCACCTCCAACATTGGGAAGAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGCCAGCCTCAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.30)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAGGCAGCTCAAACATCGGAAAAAGAGGTGTAAATTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGAAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCTACATGGGATTACAGCCTCAATGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.32)CAGTCTGTTCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGGTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGCGTGGTTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.34)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGTCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.36)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAGCATTGGGAATAATTTTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.38)
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的使用，其中抗體特征在于，它包括選自下列核酸序列組中的重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAATAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAGTAGGTACTACTACGGACCATCTTTCTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.1)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCCGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTATCGGGTGTTAGTTGGAATGGCAGTAGGACGCACTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCGGCTAGGTACTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.3)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGTAGTGGTCGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGCAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGATTGGTCTCCTATGGTTCGGGGAGTTTCGGTTTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.5)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTCTTGGTGGTAGTGGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAAGTTAGGGGGGCGATCCCGATATGGGCGGTGGCCCCGCCAATTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.7)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGCCGTGGGGGTAGTTCCTACTACGCAGACTCCGTGAGGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTTTCCTACAGCTATGGTTACGAGGGGGCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.9)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTGGTCGTTTCATTTACTACGCAGACTCAATGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTACGAGGCTCCGGAGAGGGAGCTACTTCTGGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.11)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGAACGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCTATTAGCAGTAGCAGTAATTACATATTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTCAGACGGAGCAGCTGGTACGGGGGGTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.19)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGCCGGTATAACTGGAAGACGGGGCATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.21)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCCGTGACTACTACGTGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGGTAGTGGGGGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGGAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCATGTATTACTGTGCCAGAGTATCCGCCCTTCGGAGACCCATGACTACAGTAACTACTTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.23)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCCGCTATTAGTGGTAGTGGTAACACATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCCTCCCACCGTATATTAGGTTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.25)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGTTGGTGGACATAGGACATATTATGCAGATTCCGTGAAGGGCCGGTCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCACGGATACGGGTGGGTCCGTCCGGCGGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.27)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCTCACAAATATTTTGACTGGTTATTATACCTCAGGATATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.29)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTCTTGGATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGGAACTACGGTTTCTACCACTACATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.31)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAATTAAACGGTTACGATTCGGCTGGACCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.33)TCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAATAGCAAAAAGTGGTATGAGGGCTACTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.35)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAAGAAGTATAGCAGTGGCTGGTACTCGAATTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.37)與至少一種選自下列核酸序列組中的輕鏈可變區(qū)(VL)相結(jié)合CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGGTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.2)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGCTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGGAATGATCGGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCCGGGGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.4)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAAGTAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACTACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.6)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGAAATAACTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTCATTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.8)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTTAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACCTGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.10)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGCGGTGAGTCTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.12)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.20)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGACCTACAACATTGGAAATAATTATGTATCGTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACATCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGTCAGGCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.22)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGAGCTCCAACATTGGGAATAGTTATGTCTCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGGATGGGATGACACCCTGCGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.24)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCCGCTCCAACATCGGGAGAAATGCTGTTAGTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGGCAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCC(SEQ.ID.NO.26)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAACACCAACATTGGGAAGAACTATGTATCTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAATAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCGTCATGGGATGCCAGCCTGAATGGTTGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.28)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCACCTCCAACATTGGGAAGAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGCCAGCCTCAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.30)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAGGCAGCTCAAACATCGGAAAAAGAGGTGTAAATTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGAAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCTACATGGGATTACAGCCTCAATGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.32)CAGTCTGTTCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGGTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGCGTGGTTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.34)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGTCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.36)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCAGCATTGGGAATAATTTTGTATCCTGGTAATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.38)
8.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAATAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAGTAGGTACTACTACGGACCATCTTTCTACTTTGACTCCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.1)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGGTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.2).
9.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCCGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTATCGGGTGTTAGTTGGAATGGCAGTAGGACGCACTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCGGCTAGGTACTCCTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.3)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGCTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGGAATGATCGGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCCGGGGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.4)
10.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGTAGTGGTCGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGCAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGATTGGTCTCCTATGGTTCGGGGAGTTTCGGTTTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.5)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAAGTAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACTACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.6)
11.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTCTTGGTGGTAGTGGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAAGTTAGGGGGGCGATCCCGATATGGGCGGTGGCCCCGCCAATTTGACTACTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.7)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGAAATAACTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTCATTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.8)
12.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATCAGTGGCCGTGGGGGTAGTTCCTACTACGCAGACTCCGTGAGGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTTTCCTACAGCATGGTTACGAGGGGGCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.9)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTTAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACCTGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.10)
13.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTGGTCGTTTCATTTACTACGCAGACTCAATGAAGGGCCGCTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTACGAGGCTCCGGAGAGGGAGCTACTTCTGGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTAACACTGGTCACCGTGAGCAGC(SEQ.ID.NO.11)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGCGGTGAGTCTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.12)
14.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGAACGTATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCTATTAGCAGTAGCAGTAATTACATATTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTCAGACGGAGCAGCTGGTACGGGGGGTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA SEQ.ID.NO.19)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTCATTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.20)
15.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGCCGGTATAACTGGAAGACGGGGCATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.21)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGACCTACAACATTGGAAATAATTATGTATCGTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACATCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGTCAGGCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.22)
16.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCCGTGACTACTACGTGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGGTAGTGGGGGTAGGACATACTACGCAGACTCCGTGGAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCATGTATTACTGTGCCAGAGTATCCGCCCTTCGGAGACCCATGACTACAGTAACTACTTACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.23)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGGAGCTCCAACATTGGGAATAGTTATGTCTCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGGATGGGATGACACCCTGCGTGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.24)
17.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCCGCTATTAGTGGTAGTGGTAACACATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGCCTCCCACCGTATATTAGGTTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.25)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCCGCTCCAACATCGGGAGAAATGCTGTTAGTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGGCAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCC(SEQ.ID.NO.26)
18.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAAGTATTAGTGTTGGTGGACATAGGACATATTATGCAGATTCCGTGAAGGGCCGGTCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCACGGATACGGGTGGGTCCGTCCGGCGGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.27)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAACACCAACATTGGGAAGAACTATGTATCTTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGCTAATAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCGTCATGGGATGCCAGCCTGAATGGTTGGGTATTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.28)
19.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATCCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGGCTCACAAATATTTTGACTGGTTATTATACCTCAGGATATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.29)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCACCTCCAACATTGGGAAGAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGCCAGCCTCAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.30)
20.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTCTTGGATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTAGGGAACTACGGTTTCTACCACTACATGGACGTCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.31)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAGGCAGCTCAAACATCGGAAAAAGAGGTGTAAATTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGAAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCTACATGGGATTACAGCCTCAATGCTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.32)
21.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAATTAAACGGTTACGATTCGGCTGGACCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.33)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTTCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATGGTGTAAACTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGCGTGGTTGGCTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.34)
22.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAATAGCAAAAAGTGGTATGAGGGCTACTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.35)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGTCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.36)
23.根據(jù)權(quán)利要求7的使用，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACTGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTCAAGAAGTATAGCAGTGGCTGGTACTCGAATTATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGTACACTGGTCACCGTGAGCTCA(SEQ.ID.NO.37)和輕鏈可變區(qū)(VL)CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAGCATTGGGAATAATTTTGTATCCTGGTATCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGAACCAAGCTGACGGTCCTAGGT(SEQ.ID.NO.38)
24.對至少一種apo B100的氧化片斷產(chǎn)生的抗體，包括選自下列核酸序列組中的重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3，SEQ.ID.NO.5，SEQ.ID.NO.7，SEQ.ID.NO.9，SEQ.ID.NO.11，SEQ.ID.NO.19，SEQ.ID.NO.21，SEQ.ID.NO.23，SEQ.ID.NO.25，SEQ.ID.NO.27，SEQ.ID.NO.29，SEQ.ID.NO.31，SEQ.ID.NO.33，SEQ.ID.NO.35，SEQ.ID.NO.37
25.對至少一種apo B100的氧化片斷產(chǎn)生的抗體，包括選自下列核酸序列組中的輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.2，SEQ.ID.NO.4，SEQ.ID.NO.6，SEQ.ID.NO.8，SEQ.ID.NO.10，SEQ.ID.NO.12，SEQ.ID.NO.20，SEQ.ID.NO.22，SEQ.ID.NO.24，SEQ.ID.NO.26，SEQ.ID.NO.28，SEQ.ID.NO.30，SEQ.ID.NO.32，SEQ.ID.NO.34，SEQ.ID.NO.36，SEQ.ID.NO.38
26.對至少一種apo B100的氧化片斷產(chǎn)生的抗體，包括選自下列核酸序列組中的重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3，SEQ.ID.NO.5，SEQ.ID.NO.7，SEQ.ID.NO.9，SEQ.ID.NO.11，SEQ.ID.NO.19，SEQ.ID.NO.21，SEQ.ID.NO.23，SEQ.ID.NO.25，SEQ.ID.NO.27，SEQ.ID.NO.29，SEQ.ID.NO.31，SEQ.ID.NO.33，SEQ.ID.NO.35，SEQ.ID.NO.37與選自下列核酸序列組中的輕鏈可變區(qū)(VL)相結(jié)合SEQ.ID.NO.2，SEQ.ID.NO.4，SEQ.ID.NO.6，SEQ.ID.NO.8，SEQ.ID.NO.10，SEQ.ID.NO.12，SEQ.ID.NO.20，SEQ.ID.NO.22，SEQ.ID.NO.24，SEQ.ID.NO.26，SEQ.ID.NO.28，SEQ.ID.NO.30，SEQ.ID.NO.32，SEQ.ID.NO.34，SEQ.ID.NO.36，SEQ.ID.NO.38
27.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.1和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.2
28.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.3和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.4
29.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.5和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.6
30.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.7和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.8
31.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.9和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.10
32.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.11和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.12
33.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.19和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.20
34.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.21和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.22
35.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.23和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.24
36.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.25和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.26
37.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.27和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.28
38.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.29和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.30
39.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.31和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.32
40.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.33和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.34
41.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.35和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.36
42.根據(jù)權(quán)利要求26的抗體，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.37和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.38
43.制備根據(jù)權(quán)利要求24-42的分離抗體的方法，利用片斷文庫生成針對氧化的特別是Apo B100的MDA改性肽產(chǎn)生的特定人類抗體片斷，其中將識別出的具有要求特征的抗體片斷復(fù)原成全長的人類免疫球蛋白，為治療目的使用。
44.利用重組技術(shù)對根據(jù)權(quán)利要求22的分離人類抗體進行擴增的方法，包括利用PCR-擴增將基因編碼選出的scFv的可變部分轉(zhuǎn)變成全長的人類IgG1載體，其中使用的引物是用來擴增VH-片斷的引物5′VH5′-GGTGTGCATTCCGAGGTGCAGCTGTTGGAG(SEQ.ID.NO13)3′VH5′-GACGTACGACTCACCTGAGCTCACGGTGACCAG(SEQ.ID.NO14)和用來擴增VL-片斷的引物5′VL5′-GGTGTGCATTCCCAGTCTGTGCTGACTCAG(SEQ.ID.NO15)3′VL5′-GACGTACGTTCTACTCACCTAGGACCGTCAGCTT(SEQ.ID.NO16)
45.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中通過菌落PCR用下列引物識別含有帶重鏈可變區(qū)和可變輕鏈插入片斷的重鏈區(qū)和輕鏈區(qū)質(zhì)粒的菌落正向引物5′-ATGGGTGACAATGACATC(SEQ.ID.NO17)反向引物5′-AAGCTTGCAGCGTACG(SEQ.ID.NO18)
46.對哺乳動物優(yōu)選人類進行被動免疫接種的方法，其中給藥一治療或預(yù)防有效量的針對至少一種載脂蛋白B的氧化片斷產(chǎn)生的分離的人類抗體，治療動脈粥樣硬化。
47.根據(jù)權(quán)利要求46的方法，氧化片斷選自以下組中的一種或多種FLDTVYGNCSTHFTVKTRKGPQCSTHILQWLKRVHANPLLVISIPRLQAEARSEILAHWSKLVKEALKESQLPTVMDFRKLKFVTQAEGAKQTEATMTFKDGSLRHKFLDSNIKFSHVEKKGTYGLSCQRDPNTGRLNGERLNGESNLRFNSSYLQGTNQSLTSTSDLQSGIIKNTASLKTASLKYENYELTLKSDTNGKDMTFSKQNALLRSEYQADYEMKVKIIRTIDQMQNSELQWPIALDDAKINFNEKLSQLQTYKTTKQSFDLSVKAQYKKNKHEEEMLENVSLVCPKDATRFKGSTSHHLVSRKSISAALEHKIENIDFNKSGSSTASWIQNVIREVTQRLNGEIQALELPQKEVDVLTKYSQPEDSLIPFFEHTFLIYITELLKKLQSTTVMLLDIANYLMEQIQDDCTGDECTGDEDYTYKIKRVIGNMGQGNMGQTMEQLTPELKSSILKSSILKCVQSTKPSLMIQKAAIQKAAIQALRKMEPKDKDQERLNGESNLRFNSSYLQGTNQSLNSHGLELNADILGTDKINWIQNVDTKYQIRIQIQEKLQTYISDWWTLAAKNLTDFAEQEATLQRIYSLWEHSTKNHLQALLVPPETEEAKQVLFLDTVIEIGLEGKGFEPTLEALFGKSGASMKLTTNGRFREHNAKFNLIGDFEVAEKINAFRAKVHGHSVLTAKGMALFGEGKAEFFKSSVITLNTNAELFNQSDIFPDLGQEVALNANTKNQKIR，或其活性部位。
48.根據(jù)權(quán)利要求46-47的方法，其中抗體特征在于，它包括對apo B100的氧化片斷產(chǎn)生的抗體，含有選自下列核酸序列組中的重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3，SEQ.ID.NO.5，SEQ.ID.NO.7，SEQ.ID.NO.9，SEQ.ID.NO.11，SEQ.ID.NO.19，SEQ.ID.NO.21，SEQ.ID.NO.23，SEQ.ID.NO.25，SEQ.ID.NO.27，SEQ.ID.NO.29，SEQ.ID.NO.31，SEQ.ID.NO.33，SEQ.ID.NO.35，SEQ.ID.NO.37
49.根據(jù)權(quán)利要求36-37的方法，其中抗體特征在于，它包括對apo B100的氧化片斷產(chǎn)生的抗體，含有選自下列核酸序列組中的輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.2，SEQ.ID.NO.4，SEQ.ID.NO.6，SEQ.ID.NO.8，SEQ.ID.NO.10，SEQ.ID.NO.12，SEQ.ID.NO.20，SEQ.ID.NO.22，SEQ.ID.NO.24，SEQ.ID.NO.26，SEQ.ID.NO.28，SEQ.ID.NO.30，SEQ.ID.NO.32，SEQ.ID.NO.34，SEQ.ID.NO.36，SEQ.ID.NO.38
50.根據(jù)權(quán)利要求38-39的方法，其中抗體特征在于，它包括對apo B100的氧化片斷產(chǎn)生的抗體，含有選自下列核酸序列組中的重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.1，SEQ.ID.NO.3，SEQ.ID.NO.5，SEQ.ID.NO.7，SEQ.ID.NO.9，SEQ.ID.NO.11，SEQ.ID.NO.19，SEQ.ID.NO.21，SEQ.ID.NO.23，SEQ.ID.NO.25，SEQ.ID.NO.27，SEQ.ID.NO.29，SEQ.ID.NO.31，SEQ.ID.NO.33，SEQ.ID.NO.35，SEQ.ID.NO.37與選自下列核酸序列組中的輕鏈可變區(qū)(VL)相結(jié)合SEQ.ID.NO.2，SEQ.ID.NO.4，SEQ.ID.NO.6，SEQ.ID.NO.8，SEQ.ID.NO.10，SEQ.ID.NO.12，SEQ.ID.NO.20，SEQ.ID.NO.22，SEQ.ID.NO.24，SEQ.ID.NO.26，SEQ.ID.NO.28，SEQ.ID.NO.30，SEQ.ID.NO.32，SEQ.ID.NO.34，SEQ.ID.NO.36，SEQ.ID.NO.38
51.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.1和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.2
52.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.3和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.4
53.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.5和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.6
54.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.7和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.8
55.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.9和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.10
56.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.11和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.12
57.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.19和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.20
58.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.21和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.22
59.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.23和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.24
60.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.25和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.26
61.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.27和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.28
62.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.29和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.30
63.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.31和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.32
64.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.33和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.34
65.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.35和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.36
66.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中抗體特征在于，它包括重鏈可變區(qū)(VH)SEQ.ID.NO.37和輕鏈可變區(qū)(VL)SEQ.ID.NO.38
67.藥物組合物包括針對至少一種載脂蛋白B的氧化片斷產(chǎn)生的分離的人類抗體，通過被動免疫接種方法治療或預(yù)防性治療動脈粥樣硬化，其中抗體與藥物賦形劑結(jié)合存在。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防動脈粥樣硬化的被動免疫接種，利用針對至少一種載脂蛋白B的氧化片斷產(chǎn)生的分離人類抗體制造藥物組合物，通過被動免疫接種方式治療或預(yù)防性治療動脈粥樣硬化，以及制備這種抗體的方法，和用這種抗體為被動免疫接種做準(zhǔn)備，治療哺乳動物，優(yōu)選人類的方法。
文檔編號A61P9/10GK1717251SQ200380104103
公開日2006年1月4日 申請日期2003年10月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月4日
發(fā)明者揚·尼爾森, 羅蘭·卡爾松, 詹妮·本特松, 萊夫·斯特蘭德博格 申請人:南方佛斯卡專利公司