專利名稱：治療自身免疫疾病和炎性疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明通常涉及利用CD3調(diào)節(jié)劑如抗CD3抗體來誘導(dǎo)免疫耐受以及調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，來治療自身免疫疾病和/或炎性疾病。
背景技術(shù)：
免疫系統(tǒng)高度復(fù)雜，被嚴緊調(diào)控，具有許多替代途徑能夠彌補系統(tǒng)其它部分的缺陷。然而有時如果活化，免疫反應(yīng)也成為一些疾病或其它不良狀態(tài)的病因。這種疾病或不良狀態(tài)例如為自身免疫疾病、移植后的排斥反應(yīng)、對無害抗原的過敏反應(yīng)、牛皮癬、慢性炎性疾病如動脈粥樣硬化和普通炎癥。在這些情況和其它涉及不當(dāng)或不希望的免疫反應(yīng)的情況下，臨床上需要進行免疫抑制。
因此，需要可用于治療免疫相關(guān)疾病和/或病癥的組合物。
發(fā)明概述本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)，即CD3表達或活性的調(diào)節(jié)導(dǎo)致臨床眼色素層炎大鼠模型中炎癥的抑制和臨床動脈粥樣硬化小鼠模型中粥樣硬化斑塊發(fā)展的降低。因此，本發(fā)明描述了預(yù)防或抑制身體組織中炎癥的方法。發(fā)炎組織的特征是組織發(fā)紅、疼痛和腫脹。眼色素層炎的特征為視敏度下降、玻璃體(眼的后部)及前房中有細胞和渾濁物(纖維蛋白、變性蛋白質(zhì))。這些組織包括眼組織如眼色素層，心臟組織如靜脈、動脈或毛細血管。
通過將細胞或組織暴露于導(dǎo)致促炎細胞因子生成減少、抗炎細胞因子增加的量或?qū)е旅庖吣褪艿牧康腃D3調(diào)節(jié)劑，抑制炎癥反應(yīng)。
本發(fā)明提供了通過將CD3表達細胞暴露于與CD3調(diào)節(jié)劑來抑制動脈粥樣硬化斑塊形成的方法。與暴露于CD3調(diào)節(jié)劑前相比，暴露于CD3調(diào)節(jié)劑后動脈粥樣硬塊受到抑制，與動脈壁相連的斑塊量減少。
這種細胞可以是任何能夠表達CD3的細胞，例如淋巴細胞如T-細胞。該T-細胞是循環(huán)T-細胞，即在血液和淋巴中?；蛘?，該T-細胞也存在于組織中，如淋巴結(jié)、淋巴導(dǎo)管、淋巴管和脾臟。該組織是發(fā)炎組織(或者是有發(fā)炎風(fēng)險的組織)。暴露是指將細胞或組織與CD3調(diào)節(jié)劑接觸。組織細胞可以直接或間接(即全身性)與之接觸。細胞可以在體內(nèi)、體外或試管中接觸。
本發(fā)明同時也描述了預(yù)防和減緩炎性疾病癥狀的方法，該方法是通過鑒別患有或有風(fēng)險患炎性疾病的對象，并給予該對象CD3調(diào)節(jié)劑。
CD3調(diào)節(jié)劑是能夠降低CD3表達或活性的化合物。CD3的活性包括T-細胞活化。T-細胞活化的檢測方法在本領(lǐng)域是熟知的。CD3調(diào)節(jié)劑包括例如抗CD3抗體。單獨給予或與另一種抗炎劑或免疫抑制藥聯(lián)合給予CD3調(diào)節(jié)劑，用來治療炎性疾病。例如，CD3調(diào)節(jié)劑可與皮質(zhì)類固醇、抑制素、β干擾素、非甾體抗炎藥(NSAID)、氨甲喋呤、環(huán)孢霉素A或改變病情的抗風(fēng)濕藥物(DMARD)一起給予。
對象是哺乳動物，如人、小鼠、大鼠、狗、貓、牛、馬和豬。對象患有或有風(fēng)險患炎性疾病。炎性疾病包括心血管炎癥、眼炎癥、胃腸炎癥、肝炎癥、肺炎癥、自身免疫疾病或肌肉炎癥。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，如組織的肉眼檢查、結(jié)合組織或血液的炎癥檢測，可以鑒別患有或有風(fēng)險患炎性疾病的對象。炎癥癥狀包括受影響組織的疼痛、發(fā)紅和腫脹。
除非另有定義，本文使用的所有科技和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。雖然與本文所述類似或相同的方法和材料可以用于實施或測試本發(fā)明，但適當(dāng)?shù)姆椒ê筒牧显谙旅鏀⑹?。本文提到的所有出版物、專利申請、專利和其它參考文獻通過引用整體結(jié)合到本文中。如有沖突，以本說明書(包括定義)為準。另外，材料、方法和實施例僅僅是說明性的，并不具有限制性。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點從下述發(fā)明詳述和權(quán)利要求書來看是顯而易見的。
附圖簡述

圖1是描述大鼠眼色素層炎模型中抗CD3治療的臨床和組織學(xué)效果的圖。
圖2是描述抗CD3治療對小鼠主動脈根部粥樣硬化斑塊發(fā)展的抑制作用的圖。
圖3是描述抗CD3治療對小鼠已有粥樣硬化損傷進展的抑制作用的圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明部分基于以下發(fā)現(xiàn)，即調(diào)節(jié)CD3表達或其活性導(dǎo)致免疫反應(yīng)下降和抗炎效果。更具體地說，給予抗CD3抗體導(dǎo)致與眼色素層炎有關(guān)的指征和癥狀的緩解和動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展的降低。
CD3是成熟T-淋巴細胞內(nèi)至少五種膜結(jié)合多肽的復(fù)合物，相互之間和與T-細胞受體非共價結(jié)合。CD3復(fù)合物包括γ、δ、ε、ζ和η鏈(也稱為亞基)。當(dāng)抗原與T-細胞受體結(jié)合時，CD3復(fù)合物轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號到T-細胞的細胞質(zhì)。
CD3調(diào)節(jié)劑CD3調(diào)節(jié)劑指調(diào)節(jié)CD3表達或活性的物質(zhì)。調(diào)節(jié)意味著該物質(zhì)增強、提高、降低或中和CD3的表達或活性。CD3的活性包括，例如轉(zhuǎn)導(dǎo)T-細胞活化信號。T-細胞的活化由鈣介導(dǎo)的細胞內(nèi)cGMP增加或細胞表面IL-2受體增加來定義。例如，T-細胞活化增加的特征是與化合物不存在時相比，該化合物存在時鈣介導(dǎo)的細胞內(nèi)cGMP和/或IL-2受體減少。例如利用市售的檢測試劑盒，通過競爭性免疫測定或閃爍親合測定可以測定細胞內(nèi)cGMP。例如通過測定與IL-2受體抗體如PC61抗體的結(jié)合，可以測定細胞表面IL-2受體。
CD3調(diào)節(jié)劑包括例如抗CD3抗體或其片段。任選抗CD3抗體是單鏈抗CD3抗體、雙功能抗CD3抗體或雜合(heteroconjugate)抗CD3抗體。抗體是活化性抗CD3抗體，那么它誘導(dǎo)CD3活性。或者，抗體是中和性抗CD3抗體，那么它降低CD3活性。
抗CD3抗體是本領(lǐng)域熟知的。示例性抗CD3抗體包括但不限于OKT3、G4.18、145-2C11、Leu4、HIT3a、BC3、SK7、SP34、RIV-9和UCHT1。優(yōu)選抗CD3抗體結(jié)合與OKT3、G4.18、145-2C11、Leu4、HIT3a、BC3、SK7、SP34、RIV-9和UCHT1相同的表位?？贵w優(yōu)選已經(jīng)過人源化或馬源化，以降低宿主對抗體的免疫反應(yīng)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可理解，通過確定抗體是否阻止抗CD3抗體OKT3、G4.18、145-2C11、Leu4、HIT3a、BC3、SK7、SP34、RIV-9和UCHT1與CD3抗原多肽或其它T細胞表面抗原多肽的結(jié)合，有可能無需過多試驗便可測定前者與后者是否具有相同的表位。CD3抗原多肽例如是與另一個CD3亞基(如γ、δ、ε、ζ和η鏈)復(fù)合的CD3ε多肽。如果被測試的抗體與本發(fā)明抗體競爭，如本發(fā)明抗體的結(jié)合降低所示，則這兩種抗體結(jié)合相同或密切相關(guān)的表位。測定抗體是否具有本發(fā)明抗體的特異性的另一種方法是，將本發(fā)明抗體與CD3抗原多肽或T細胞表面抗原多肽(通常與本發(fā)明多肽反應(yīng))一起進行預(yù)培養(yǎng)，然后加入待測試抗體，測定待測定抗體結(jié)合CD3或T細胞表面抗原多肽的能力是否受到抑制。如果待測試抗體的結(jié)合受到抑制，很有可能該待測試抗體與本發(fā)明抗體有同樣的或功能等同的表位特異性。
本文所用術(shù)語“抗體”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即該分子含有能與抗原特異性結(jié)合(發(fā)生免疫反應(yīng))的抗原結(jié)合部位。這種抗體包括多克隆、單克隆、嵌合體、單鏈、Fab、Fab′和F(ab′)2片段和Fab表達文庫。這種抗體優(yōu)選是完全人抗體?！疤禺愋越Y(jié)合”或“免疫反應(yīng)”指抗體與一個或多個期望抗原的抗原決定簇反應(yīng)，并且與其它多肽不反應(yīng)(即結(jié)合)或以低得多的親合力結(jié)合(Kd＞10-6)。
本文使用的術(shù)語“表位”包括任何能特異性結(jié)合免疫球蛋白、scFv或T-細胞受體的蛋白決定簇。術(shù)語“表位”包括任何能夠特異性結(jié)合免疫球蛋白或T-細胞受體的蛋白質(zhì)決定簇。表位決定簇通常由分子如氨基酸或糖側(cè)鏈的化學(xué)活性表面組群組成，通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征和特定的電荷特征。認為當(dāng)解離常數(shù)≤1μM時抗體特異性地與抗原結(jié)合，優(yōu)選≤100nM，最優(yōu)選≤10nM。
本文所用的術(shù)語“免疫結(jié)合”和“免疫結(jié)合性質(zhì)”指發(fā)生在免疫球蛋白分子和其特異性抗原之間的非共價相互作用類型。免疫結(jié)合相互作用的強度或親合力可用相互作用的解離常數(shù)(Kd)來表示，其中Kd越小，親合力越大。用本領(lǐng)域中所熟知的方法可定量所選多肽的免疫結(jié)合特性。一種這樣的方法包括測定抗原結(jié)合位點/抗原復(fù)合物形成和分解的速率，這些速率取決于同樣影響兩方向速率的復(fù)合物配偶體的濃度、相互作用的親合力和幾何參數(shù)。因此可通過計算濃度及解離和結(jié)合的實際速率來測定“締合速率常數(shù)”(Kon)和“解離速率常數(shù)”(Koff)(參見Nature 361186-87(1993))。Koff/Kon的比例能消除所有與親合力無關(guān)的參數(shù)，等于解離常數(shù)Kd(參見Davies et al.(1990)Annual Rev Biochem 59439-473)。當(dāng)平衡結(jié)合常數(shù)(Kd)≤1μM、優(yōu)選≤100nM、更優(yōu)選≤10nM、最優(yōu)選≤100pM至約1pM時，認為本發(fā)明抗體特異性結(jié)合CD3表位，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的放射配體結(jié)合實驗或類似實驗的測定。
為了提高抗體在治療免疫相關(guān)疾病中的有效性，對本發(fā)明抗體的效應(yīng)子功能進行修飾是合乎需要的。例如，可以將半胱氨酸殘基導(dǎo)入Fc區(qū)域，從而允許該區(qū)域中鏈間二硫鍵的形成。這樣產(chǎn)生的同二聚抗體可具有提高的內(nèi)化能力和/或提高的補體介導(dǎo)細胞殺傷作用和抗體依賴性細胞毒作用(ADCC)(參見Caron et al.，J.Exp Med.1761191-1195(1992)和Shopes，J.Immunol.，1482918-2922(1992))?；蛘撸筛脑炜贵w使其具有兩個Fc區(qū)域，從而可具有提高的補體溶解和ADCC能力(參見Stevenson et al.，Anti-Cancer Drug Design，3219-230(1989))。
抗體通過熟知的技術(shù)純化，如利用A蛋白或G蛋白(主要提供免疫血清的IgG級分)的親合色譜法。隨后或作為替代，可將特異性抗原(為免疫球蛋白識別的靶)或其表位抗原固定在柱上，以通過免疫親合層析法來純化免疫特異性抗體。對免疫球蛋白純化的討論參見例如D.Wilkinson(The Scientist，The Scientist，Inc.出版，PhiladelphiaPA，Vol.14，No.8(April 17，2000)，pp.25-28)。
治療方法通過暴露，例如將組織或CD3表達細胞與CD3調(diào)節(jié)劑(如抗CD3抗體)接觸，來抑制炎癥。CD3表達細胞例如是淋巴細胞例如T-細胞。T-細胞包括T細胞毒性細胞，T輔助細胞(例如Th1和Th2)和自然殺傷T-細胞。待治療的組織包括胃腸組織(如腸組織)、心臟組織(如靜脈、動脈或毛細血管)、肺組織、皮膚組織、眼組織(例如虹膜、睫狀體或脈絡(luò)膜)或肝組織。
炎性抑制的特征是與未接觸CD3調(diào)節(jié)劑的組織相比，治療組織的發(fā)紅、疼痛和腫脹降低?；蛘撸瑢ρ凵貙友锥?，炎癥抑制的特征在于視敏度增強，眼玻璃體(即眼后部)和前房中的細胞和混濁度(纖維蛋白、變形蛋白)減少。組織或細胞直接與CD3調(diào)節(jié)劑接觸。或者，全身性給予CD3調(diào)節(jié)劑。給予足量的CD3調(diào)節(jié)劑，以降低(例如抑制)促炎細胞因子的產(chǎn)生。促炎細胞因子是誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的細胞因子。促炎細胞因子包括例如白介素(IL)-1、腫瘤壞死因子(TNF)、IL-17、IL-8和巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-Iα)?；蛘?，給予足量CD3調(diào)節(jié)劑，以增加(例如促進)抗炎細胞因子的產(chǎn)生?？寡准毎蜃邮菧p少炎癥反應(yīng)的細胞因子。更具體地說，抗炎細胞因子控制促炎細胞因子反應(yīng)來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。抗炎細胞因子包括如白介素(IL)-1受體拮抗劑、TGFβ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-11和IL-13。在如血清、血漿或組織中檢測細胞因子。通過本領(lǐng)域所熟知的方法來檢測細胞因子的生成。例如，用對促炎細胞因子或抗炎細胞因子有特異性的免疫分析法測定細胞因子的生成。
通過觀察組織損傷、局部發(fā)紅、受影響部位的腫脹、眼玻璃體和前房中的細胞和混濁，來形態(tài)學(xué)評定炎癥反應(yīng)?；蛘?，通過測定組織、血清或血漿中的C反應(yīng)性蛋白或IL-1來測定炎癥反應(yīng)。白細胞計數(shù)返回基線也表明炎癥的減輕。
或者，通過將組織或CD3表達細胞暴露于一定量的CD3調(diào)節(jié)劑，以重新分布和/或清除細胞(如淋巴細胞)表面上的CD3-T細胞受體復(fù)合物或CD3復(fù)合物，來減輕炎癥。例如，將CD3表達細胞暴露于一定量的CD3調(diào)節(jié)劑，以調(diào)節(jié)(即減少)CD3表達細胞-細胞的接觸。細胞上TcR的細胞表面表達或活性水平的降低意味著TcR數(shù)量或功能降低。調(diào)節(jié)CD3的細胞表面表達或活性水平意味著改變，例如降低，細胞表面上的CD3數(shù)量或其功能。例如通過細胞與CD3調(diào)節(jié)劑接觸時CD3或TcR的內(nèi)化作用，使細胞質(zhì)膜上表達的CD3或TcR的量降低。或者，細胞與CD3調(diào)節(jié)劑接觸時CD3被封閉。重新分布和/或消除細胞表面上的CD3-T細胞受體復(fù)合物導(dǎo)致免疫抑制或免疫耐受。免疫抑制是對所有抗原都不能產(chǎn)生常規(guī)免疫應(yīng)答，致使一種或多種自身免疫疾病的癥狀得到緩解或炎癥反應(yīng)減輕。一旦停止用CD3調(diào)節(jié)劑進行治療，免疫抑制是可逆的。因此，免疫抑制尤其用于治療或緩解急性炎性疾病的癥狀。相反，免疫耐受是對特定抗原不能產(chǎn)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致一種或多種自身免疫疾病的癥狀得到緩解或炎癥反應(yīng)降低，這在治療終止時仍能長期維持。治療終止后免疫耐受可維持至少1周、1個月、3個月、6個月、1年、2年、5年或更多年。因此免疫耐受尤其用于治療或減輕慢性炎性疾病的癥狀。長期的免疫耐受可通過可溶機制如細胞因子獲得，或者可通過直接細胞-細胞接觸獲得，后者涉及但不限于粒酶A、粒酶B和/或穿孔蛋白。
通過給予對象CD3調(diào)節(jié)劑，減少或阻止動脈粥樣硬化斑塊在動脈即動脈壁上的形成。斑塊是膽固醇、其它脂肪物質(zhì)、鈣以及血液成分的復(fù)合物，累積在動脈壁襯層內(nèi)。粥樣硬化斑塊減少定義為腔狹窄減輕，即腔變寬。腔寬度通過本領(lǐng)域中所熟知的方法測定，例如血管造影術(shù)和多普勒速度波形分析。
這種方法用于減輕多種炎性疾病或自身免疫疾病的癥狀。炎性疾病為急性或慢性。炎性疾病包括心血管炎癥(例如動脈粥樣硬化、中風(fēng))、胃腸炎癥、肝臟炎性疾病、肺炎癥(例如哮喘、空調(diào)引發(fā)的肺損傷)、腎炎癥、眼炎癥(例如眼色素層炎)、胰臟炎癥、生殖泌尿炎癥、神經(jīng)炎性疾病(例如多發(fā)性硬化癥、阿爾茨海默病)、變態(tài)反應(yīng)(例如過敏性鼻炎/竇炎、皮膚過敏疾病(例如蕁麻疹、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬)、食物過敏、藥物過敏、昆蟲過敏、肥大細胞增生病)、骨炎癥(例如關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脊椎關(guān)節(jié)病)、感染(例如細菌感染或病毒感染)、口腔炎性疾病(例如perodontis、齦炎或口炎)和移植(例如同種異體移植物或異種移植物排斥反應(yīng)或母親-胎兒耐受)。
自身免疫疾病包括例如獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS，為帶有自身免疫成分的病毒病)、斑禿、關(guān)節(jié)強直性脊椎炎、抗磷脂綜合癥、自身免疫阿狄森病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性內(nèi)耳病(AIED)、自身免疫淋巴細胞增生綜合征(ALPS)、自身免疫血小板減少性紫癜(ATP)、貝切特病、心肌病、腹腔口炎性腹瀉-皰疹樣皮炎、慢性疲勞免疫異常綜合征(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病(CIPD)、瘢痕性天皰瘡、冷凝集素病、crest綜合征、節(jié)段性回腸炎、惡性丘疹病、少年皮肌炎、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷沉淀球蛋白血癥、纖維肌炎、甲狀腺機能異常、急性特發(fā)性多神經(jīng)炎、橋本甲狀腺炎、原發(fā)性肺纖維化、原發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA腎病、胰島素依賴型糖尿病、青少年慢性關(guān)節(jié)炎(斯提耳病)、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、Meniere病、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征、風(fēng)濕性多肌病、多發(fā)性肌炎和皮膚肌炎、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、牛皮癬、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、Raynaud現(xiàn)象、Reiter綜合癥、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病(進行性全身性硬化癥(PSS)，也稱為全身性硬化癥(SS))、Sjogren綜合征、僵體綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、無脈病、顳動脈炎/巨細胞動脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎、眼色素層炎、白癲風(fēng)和Wegener肉芽腫病。
本文描述的方法導(dǎo)致本文所述炎性疾病或自身免疫疾病的一種或多種癥狀的嚴重性減輕或緩解。結(jié)合任何診斷或治療具體炎性疾病的已知方法確定療效。炎性疾病或自身免疫疾病的一種或多種癥狀的減輕表明該化合物具有臨床價值。炎性疾病和自身免疫疾病通常由醫(yī)生或獸醫(yī)使用標準方法來進行診斷和/或監(jiān)測。
眼色素層炎眼色素層炎定義為眼色素層的炎癥。眼色素層由三種結(jié)構(gòu)組成虹膜、睫狀體和脈絡(luò)膜。虹膜是瞳孔周圍的有色結(jié)構(gòu)，可見于眼前部。睫狀體是包含肌肉的結(jié)構(gòu)，位于虹膜后，使晶狀體聚焦。脈絡(luò)膜是位于眼后部的含血管的層，位于視網(wǎng)膜與鞏膜之間。眼色素層炎的癥狀包括視敏度下降、眼玻璃體和前房中的細胞和混濁(纖維蛋白、變性蛋白質(zhì))以及視網(wǎng)膜血管炎。虹膜可附著在晶狀體囊上(虹膜后粘連)，或較少情況下附著在周圍的角膜上(虹膜前粘連)。另外，虹膜基質(zhì)內(nèi)肉芽腫性結(jié)節(jié)可明顯存在。受影響眼中的眼內(nèi)壓在開始時降低，原因是睫狀體的分泌張力減退。然而，隨著反應(yīng)的持續(xù)，炎性副產(chǎn)物可在小梁中累積。如果這些碎片明顯累積，同時如果睫狀體恢復(fù)正常的分泌量，眼內(nèi)壓可急劇增加，導(dǎo)致繼發(fā)性眼色素層炎青光眼。
醫(yī)師或獸醫(yī)通過眼科學(xué)檢查來診斷眼色素層炎。
血管炎血管炎是血管的炎癥。炎癥是進入組織的血細胞破壞組織的病癥。這些血細胞大多數(shù)為白細胞，其循環(huán)并用作抵御感染的主要防線。正常情況下，白細胞摧毀細菌和病毒。然而，如果它們侵入正常的組織也能產(chǎn)生破壞作用。血管炎可影響非常小的血管(毛細血管)、中等大小的血管(小動脈或小靜脈)或大血管(動脈和靜脈)。
血管炎可引起許多不同的癥狀，這主要取決于受影響的組織及組織損傷的嚴重性。有些病人沒有發(fā)病，只是皮膚上偶爾出現(xiàn)斑點。其它人則非常嚴重，具有全身性癥狀及主要器官損傷。癥狀包括發(fā)熱、總體感覺差(“不適”)、肌肉及關(guān)節(jié)疼痛、食欲不振、體重減輕、疲勞、瘀點、紫癜、壞死皮膚區(qū)域可出現(xiàn)潰瘍(特別在踝關(guān)節(jié)周圍)、關(guān)節(jié)痛和伴有疼痛的frank關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)發(fā)熱與腫脹、頭痛、行為紊亂、精神錯亂、癲癇發(fā)作、中風(fēng)、麻木及麻刺感。血管炎的診斷基于個人病史、主要癥狀、全面的體格檢查和專業(yè)實驗室試驗的結(jié)果。存在血管炎時經(jīng)常出現(xiàn)血液異常，包括血沉速率升高、貧血、高白細胞計數(shù)及血小板計數(shù)。驗血也可用于鑒別在循環(huán)系統(tǒng)中引起血管炎的免疫復(fù)合物或抗體，以及測定補體水平是否異常。
動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化導(dǎo)致動脈內(nèi)層中脂肪物質(zhì)、膽固醇、細胞廢物及鈣的沉積物(即斑塊)積累，具有明顯的炎性成分。最終這種脂肪組織可侵蝕動脈壁，使其彈性(伸縮性)降低并妨礙血液流動。斑塊也可能破裂，導(dǎo)致碎片移動到動脈下游。這是心臟病發(fā)作和中風(fēng)的常見原因。斑塊沉積物周圍也可形成凝塊，進一步妨礙血流，如果它們脫落并移向心臟、肺或腦，則帶來更大的危險。
動脈粥樣硬化通常不表現(xiàn)出癥狀，直到血管內(nèi)血流嚴重受阻。動脈粥樣硬化的典型癥狀包括涉及冠狀動脈時的胸痛或涉及腿動脈時的腿痛。有時癥狀僅僅在運動時才會出現(xiàn)。然而，有些人休息時也會出現(xiàn)癥狀。
危險因素包括吸煙、糖尿病、肥胖、高血膽固醇、高脂肪飲食以及有個人或家族心臟病史。腦血管病、外周血管病、高血壓和涉及透析的腎臟疾病都是與動脈粥樣硬化相關(guān)的疾病。
治療性給藥本發(fā)明包括給予對象(如人或馬)含有CD3調(diào)節(jié)劑(本發(fā)明稱為“治療性化合物”)的組合物。
治療性化合物的有效量優(yōu)選為約0.1mg/kg至約150mg/kg。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公認的，有效劑量根據(jù)給藥途徑、賦形劑的使用以及與其它治療的共同給予而變化，所述治療包括使用治療、抑制或緩解具體炎性疾病癥狀的其它抗炎劑或治療劑。通過用標準方法鑒別患有(或有風(fēng)險患)炎性疾病或自身免疫疾病的哺乳動物(例如人患者或馬)，進行治療性給藥方案。
使用本領(lǐng)域已知的方法給予這種個體藥物組合物。優(yōu)選口服、直腸、鼻、局部或胃腸外(如皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))給予所述化合物。該化合物可預(yù)防性給藥，或者在檢查到炎性結(jié)果如哮喘發(fā)作或過敏反應(yīng)后給予。該化合物任選配制為治療藥物混合物的成分，以治療炎性疾病。適合胃腸外給藥的制劑實例包括活性物質(zhì)在等滲鹽溶液、5％葡萄糖溶液或另一種標準藥物可接受賦形劑中的水溶液。也可用標準增溶劑如PVP或環(huán)糊精作為藥物賦形劑來傳遞治療性化合物。
本文所述治療性化合物利用常規(guī)方法配制為用于其它給藥途徑的組合物。例如，治療性化合物抑制劑配制成膠囊或片劑用于口服給藥。膠囊可含有任何標準的藥物可接受材料，如凝膠或纖維素。片劑可根據(jù)常規(guī)方法，通過將治療性化合物與固體載體及潤滑劑的混合物壓制而成。固體載體的實例包括淀粉和糖、膨潤土。該化合物以硬殼片劑或膠囊形式給藥，其含有粘合劑如乳糖或甘露醇、常規(guī)填充劑和壓片劑。其它劑型包括軟膏劑、栓劑、糊劑、噴霧劑、貼劑、霜劑、凝膠劑、可吸收海綿或泡沫?？捎帽绢I(lǐng)域中的已知方法生產(chǎn)這種劑型。
治療性化合物與受影響組織直接接觸時生效。因此，局部給藥該化合物。例如，為治療接觸性皮炎，將化合物施用于受影響皮膚區(qū)域。或者，全身給予治療性化合物。除此之外，化合物可通過植入(直接植入到器官如腸或肝中或皮下植入)固體或可吸收基質(zhì)給藥，所述固體或可吸收基質(zhì)將該化合物緩慢釋放到對象的鄰近組織或周圍組織中。
例如，為治療胃腸炎性疾病，全身性給予化合物，或直接局部給藥到胃組織中。全身性給藥的化合物可通過靜脈內(nèi)、直腸或口服給藥。對于局部給藥，可將浸有藥物的薄片(wafer)或可吸收海綿置于直接與胃組織接觸?；衔锘蚧衔锏幕旌衔锿ㄟ^薄片上藥物的擴散和聚合體基質(zhì)的侵蝕而在體內(nèi)緩慢釋放。
例如通過向肝脈管系統(tǒng)輸注含有化合物的溶液，治療肝的炎癥(即肝炎)。腹膜內(nèi)輸注或灌洗用于減少彌散性腹膜內(nèi)炎癥或預(yù)防外科術(shù)后的炎癥。
對于神經(jīng)炎癥的治療，可靜脈內(nèi)或鞘內(nèi)(即直接注入到腦脊液中)給予化合物。對于局部給藥，可將浸有藥物的薄片或可吸收海綿置于直接與中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織接觸?；衔锘蚧衔锏幕旌衔锿ㄟ^薄片上藥物的擴散或基質(zhì)聚合物的侵蝕而在體內(nèi)緩慢釋放。或者，用已知方法將藥物注入腦中或腦脊液中。例如，放置用作注射口的帶有導(dǎo)管的鉆孔環(huán)，與顱骨相連在鉆入顱骨內(nèi)的鉆孔處。通過插穿位于鉆孔環(huán)上方的隔膜的針或管心針，將液體貯藏器與導(dǎo)管相連。導(dǎo)管組件(如美國專利No.5,954,687描述的組件)能夠提供液體流動路徑，適合于將液體轉(zhuǎn)運至大腦上、附近或其中的所選位置或從其中轉(zhuǎn)運出，以允許在一定時間內(nèi)給予藥物。
對于治療心臟炎癥，例如通過穿透胸壁直接冠狀動脈內(nèi)注射到心臟組織中，或用基于標準經(jīng)皮導(dǎo)管的方法在熒光鏡指導(dǎo)下將抑制劑直接注入組織(如心肌)中或從插入體腔的支撐物(stent)或?qū)Ч苤休斪?，從而傳遞化合物?？墒褂萌魏胃鞣N冠狀動脈導(dǎo)管或輸注導(dǎo)管來給藥。或者，將藥物涂抹或浸漬在置于冠狀動脈中的支撐物上。
肺炎癥例如通過吸入法給予化合物來治療。化合物以氣溶膠噴霧的形式從裝有適當(dāng)拋射劑(例如氣體如二氧化碳)的壓力容器或分配器或從噴霧器中傳遞。
眼炎癥例如通過局部給予眼化合物來治療。藥物以例如凝膠、液體或軟膏的形式傳遞。軟膏、膠體或可滴液體可用本領(lǐng)域中已知的眼傳遞系統(tǒng)如涂藥器或滴眼器傳遞?；蛘?，藥物從放置在眼結(jié)膜下的聚合物植入物中傳遞。任選化合物全身性傳遞。
通過對受影響部位有特異性的途徑治療血管炎。一般而言，血管炎通過靜脈內(nèi)給予CD3調(diào)節(jié)劑來全身性治療。
CD3調(diào)節(jié)劑也可與一種或多種其它的治療性化合物聯(lián)合給予，所述其它的治療性化合物例如抗炎劑或免疫抑制劑。例如CD3調(diào)節(jié)劑與任何各種已知的免疫自身疾病和/或炎性疾病治療一起聯(lián)合給予。與本發(fā)明方法一起使用的自身免疫疾病和/或炎性疾病的合適已知治療包括但不限于氨甲喋呤、環(huán)孢霉素A(包括例如環(huán)孢霉素微乳液和他可莫司)、皮質(zhì)類固醇、抑制素、β干擾素、非甾體抗炎藥(NSAID)和改變病情的抗風(fēng)濕藥物(DMARD)。其它的治療在給予CD3調(diào)節(jié)劑之前、之后或同時給予。
聯(lián)合給藥的有益作用包括但不限于來源于治療劑組合的藥動學(xué)或藥效學(xué)共同作用。這些治療劑的聯(lián)合給藥一般在規(guī)定的時間段(通常是數(shù)分鐘、數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)周，根據(jù)所選的組合不同而定)之內(nèi)進行?！奥?lián)合治療”的目的可能是(但一般不是)包括給予兩種或更多種這些治療劑作為獨立單治療方案的部分，偶然或任意地導(dǎo)致了本發(fā)明的聯(lián)合給藥?！奥?lián)合治療”目的在于包括按順序依次給予這些治療劑，即其中各治療劑在不同時間給藥，也包括以基本同時的方式給予這些治療劑或所述治療劑中的至少兩種。例如通過給予對象含有固定比例的各治療劑的單個膠囊或多個含有各治療劑的單膠囊，可完成基本同時給藥。
所述治療劑可通過相同或不同的途徑給藥。例如，聯(lián)合給藥所選的第一種治療劑可通過靜脈內(nèi)注射給藥，而聯(lián)合給藥的其它治療劑可口服給藥?；蛘撸械闹委焺┛煽诜o藥，或所有治療劑可通過靜脈內(nèi)注射給藥。治療劑的給藥順序并不非常關(guān)鍵?！奥?lián)合治療”也可包括將上述治療劑的給藥再進一步與其它生物活性成份和非藥物治療(例如手術(shù)或放射治療)結(jié)合。當(dāng)聯(lián)合治療進一步包括非藥物治療時，非藥物治療可在任何合適的時候?qū)嵤?，只要治療劑與非藥物治療的組合的共同作用得到有益效果。例如，在適當(dāng)?shù)那闆r下，當(dāng)將非藥物治療暫時從治療劑的給藥中除去時，或許數(shù)天或甚至數(shù)周，仍能獲得有益效果。
為了評價患者是否從單獨或聯(lián)合給予抗CD3抗體中獲益，可用定量的方式檢查患者的癥狀和/或免疫反應(yīng)，并比較用抗體治療前后的癥狀和/或免疫反應(yīng)。例如，可通過測量用抗CD3抗體治療前后患者中的具體癥狀或一系列癥狀，測定患者的癥狀。例如，可用本領(lǐng)域已知的任何標準測量技術(shù)來測量和監(jiān)測癥狀，如發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛、肌無力。在成功治療中，患者狀態(tài)得到改善(即測量指標下降，或持續(xù)好轉(zhuǎn)時間增長)。
例如，在眼色素層炎治療中，抗CD3抗體可與例如皮質(zhì)類固醇、氨甲喋呤、環(huán)孢霉素A、環(huán)磷酰胺和/或抑制素聯(lián)合給藥。同樣，患有疾病如節(jié)段性回腸炎或牛皮癬的患者可用本發(fā)明的抗CD3抗體與Remicaid(英夫利昔單抗)和/或Humira(阿達木單抗)的組合來治療。
治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎時，抗CD3抗體可與皮質(zhì)類甾醇、氨甲喋呤、環(huán)孢霉素A、抑制素、Remicaid(英夫利昔單抗)、Enbrel(依那西普)和/或Humira(阿達木單抗)一起共同給藥。
多發(fā)性硬化癥患者可以接受抗CD3抗體與例如乙酸格拉默(Copaxone)、β干擾素-1a(Avonex)、β干擾素-1a(Rebif)、β干擾素-1b(Betaseron或Betaferon)、米托蒽醌(Novantrone)、地塞米松(Decadron)、甲基潑尼松龍(Depo-Medrol)和/或潑尼松(Deltasone)和/或抑制素的聯(lián)合給藥。
I型糖尿病患者或成人隱性自身免疫糖尿病(LADA)患者也給予第二種藥物，如GLP-I或β-細胞休眠化合物(即減少或抑制胰島素釋放的化合物，如鉀通道開放劑)。
此外，預(yù)防性(即在自身免疫疾病和/或炎性疾病發(fā)作前)或治療性(即在自身免疫疾病和/或炎性疾病的期間)給予CD3調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明方法中，調(diào)節(jié)劑以治療有效量給藥。CD3調(diào)節(jié)劑的“治療有效量”是指達到治療目的所需的量，所述治療目的例如為治療自身免疫疾病和/或炎性疾病，或減輕與自身免疫疾病和/或炎性疾病相關(guān)的癥狀。
本文引用的所有出版物和專利文件通過引用結(jié)合到本文中，如同每篇這種出版物或文件明確和單獨的標明為通過引用結(jié)合到本文中。出版物和專利文件的引用目的并不是承認任何其為有關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，也不構(gòu)成對其內(nèi)容或日期的任何承認。已通過書面描述的形式描述本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可理解，本發(fā)明可以以各種實施方案實施，前面的描述及下述的實施例是為了說明的目的，而不是限制后面的權(quán)利要求。
實施例實施例1抗CD3抗體用于治療眼色素層炎本發(fā)明抗CD3抗體包括各種識別CD3的單克隆抗體(mAb)，例如OKT3、SP34、UCHTI或64.1。(參見例如June，et al，J.Immunol.1363945-3952(1986)；Yang，et al，J.Immunol.1371097-1100(1986)；和Hayward，et al，Immunol.6487-92(1988))。
將純化的小鼠抗大鼠CD3單克隆抗體抗體(BD Pharmingen，稱為G4.18抗體)在可誘導(dǎo)眼色素層炎的大鼠模型中試驗，這種模型如Wildner G，Diedrichs-Mohring M，Thurau SR.，Eur.J.Immunol.32(1)299-306(2002)；和Wildner G，Diedrichs-Mohrmg M，Iht.Immunol.15(8)927-35(2003)中所述。該G4.18抗體與T細胞受體相關(guān)的CD3細胞表面抗原反應(yīng)，該抗原發(fā)現(xiàn)于胸腺細胞、外周T淋巴細胞和樹突狀表皮T細胞中。(參見例如Nicolls M.R.，et al，Transplantation 55459-468(1993)；Nelson，D.J.，et al，J.Exp.Med.179203-212(1994)；Morris D.L.，and WJ.Komocsar.J.Pharmacol.Toxicol.Methods 3737-46(1997))。
為了評定抗CD3治療對眼色素層炎的效果，在大鼠中用腹膜內(nèi)(i.p.)T細胞轉(zhuǎn)移方法來誘導(dǎo)實驗性自身免疫眼色素層炎(EAU)。具體地說，0天時，雌性Lewis大鼠(每只重約140 g，n＝3只大鼠/組)接受2.4×106個L37細胞的i.p.注射，該細胞用來源于視網(wǎng)膜自身抗原S-抗原(SAg)的PDSAg-2/3轉(zhuǎn)染。
在轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)基因T細胞以誘導(dǎo)EAU之前30分鐘及轉(zhuǎn)移1、2和3天后，大鼠接受300μl磷酸緩沖鹽水(PBS)溶液(組1)或300μlPBS中的G4.18抗體(組2)的i.p.注射。每天監(jiān)測每組大鼠的臨床眼色素層炎指征。本文所用的臨床分級標準僅考慮眼前部炎癥，用眼底鏡來分級，例如如de Smet et al，J.Autoimmun.，vol.6587(1993)中所述。下表A中列出了本文所述實驗中使用的臨床分級標準表A臨床分級標準
*眼前房積膿＝白細胞在前房底部沉積，即白色淀。
第12天結(jié)束試驗，對每只大鼠進行視網(wǎng)膜破壞的組織學(xué)評價。本文所述的組織學(xué)標準僅考慮視網(wǎng)膜的破壞，根據(jù)治療9天后的冷凍切片評價，例如如文獻de Smet et al.，J.Autoimmun.，vol.6587(1993))中所述。本文所述試驗中所用的組織學(xué)分級標準列于下表B中表B組織學(xué)分級標準
在本文所述實驗的第3天開始出現(xiàn)眼色素層炎的臨床癥狀。圖1圖示了接受PBS的大鼠(即組1)和接受抗CD3抗體的大鼠(即組2)中眼色素層炎進展的臨床和組織學(xué)效果。本文給出的結(jié)果報告為該組的所有眼在整個觀察時間內(nèi)最大分數(shù)的平均值。
實施例2抗CD3抗體用于治療動脈粥樣硬化抗CD3抗體在治療動脈粥樣硬化中的效果用倉鼠抗小鼠CD3抗體來評定。本文所述試驗設(shè)計為評價抗CD3治療對動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生的效果，以及抗CD3治療對治療現(xiàn)有動脈粥樣硬化損傷的進展的效果。
產(chǎn)生倉鼠145 2C11單克隆抗體F(ab’)2片段的細胞株用于評價抗CD3治療的效果，該單克隆抗體能結(jié)合小鼠CD3ε(即鼠CD3復(fù)合體的ε鏈)。10周大的雄性LDLR-/-C57BL/6小鼠用作體內(nèi)動脈粥樣硬化模型。對于組織學(xué)和動脈粥樣硬塊發(fā)生的分析，以及增殖和細胞因子分析，用高膽固醇飲食(1.25％膽固醇，0％膽酸鹽)喂食同胞小鼠，持續(xù)13或24周。在開始高膽固醇飲食前一周(n＝5)(即為了評價抗CD3抗體對動脈硬化斑塊發(fā)生的效果)或開始后13周(n＝9)(即為了評價抗CD3抗體對現(xiàn)有動脈粥樣硬化損傷的進展的效果)，連續(xù)5天靜脈內(nèi)(i.v.)給予抗CD3 F(ab′)2(50μg/小鼠/天)。對照小鼠(對于13周飲食n＝5；對于24周飲食n＝6)平行注射PBS。
通過Sudan IV染色脂質(zhì)沉積，分析胸腹主動脈和主動脈竇內(nèi)的動脈粥樣硬化損傷(圖2和圖3)。從彼此相距50μm的六個切片(5μm)計算各主動脈根的脂質(zhì)沉積的平均值。通過使用MetaMorph6軟件(Zeiss)的計算機影像分析來進行脂質(zhì)沉積的定量。本文給出的結(jié)果表示為平均值±s.e.m。采用雙尾Student′s T-檢驗，在P＜0.05時認為數(shù)值間的差異有顯著性。
如圖2所示，抗CD3治療抑制小鼠中粥樣硬化斑塊的發(fā)生。另外，圖3證明，抗CD3治療也減少(即抑制)已有損傷中粥樣硬化斑塊發(fā)生的進一步發(fā)展。
其它實施方案雖然本發(fā)明已結(jié)合具體說明進行了描述，但上述描述目的在于說明，而不限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求的范圍定義。其它方面、優(yōu)點和修改都包括在下列權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種治療或減輕炎性疾病的癥狀的方法，所述方法包括鑒別已患有或有風(fēng)險患所述炎性疾病的對象，和給予所述對象抗CD3抗體。
2.權(quán)利要求1的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以抑制炎性細胞因子的表達或增加抗炎細胞因子的表達。
3.權(quán)利要求1的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以誘導(dǎo)免疫抑制。
4.權(quán)利要求1的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以誘導(dǎo)免疫耐受。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述單克隆抗體是完全人單克隆抗體。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述炎性疾病是慢性炎性疾病或急性炎性疾病。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述炎性疾病是自身免疫疾病。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述炎性疾病是眼色素層炎、血管炎或動脈粥樣硬化。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述對象是人或者馬。
11.權(quán)利要求1的方法，所述方法進一步包括給予所述對象抗炎劑或免疫抑制劑。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述抗炎劑或免疫抑制劑是皮質(zhì)類固醇、抑制素、β干擾素、非甾體抗炎藥(NSAID)、氨甲喋呤、環(huán)孢霉素A或改變病情的抗風(fēng)濕藥物(DMARD)。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述環(huán)孢霉素A是環(huán)孢霉素微乳液或他克莫司。
14.一種減少動脈上動脈粥樣硬化斑塊形成的方法，所述方法包括給予對象抗CD3抗體。
15.權(quán)利要求14的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以抑制所述動脈組織內(nèi)炎性細胞因子的表達或增加其中抗炎細胞因子的表達。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述單克隆抗體是完全人單克隆抗體。
18.一種抑制組織炎癥的方法，所述方法包括將發(fā)炎組織暴露于抗CD3抗體。
19.權(quán)利要求18的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以抑制所述發(fā)炎組織中炎性細胞因子的表達或增加其中抗炎細胞因子的表達。
20.權(quán)利要求18的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述單克隆抗體是完全人單克隆抗體。
22.權(quán)利要求18的方法，其中所述組織是血管組織或眼組織。
全文摘要
本發(fā)明提供治療自身免疫疾病和/或炎性疾病的方法。
文檔編號A61P9/10GK1972714SQ200580018139
公開日2007年5月30日 申請日期2005年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月6日
發(fā)明者B·馬赫, Y·迪恩, M·科斯科-維爾布瓦 申請人:諾夫免疫股份有限公司