專利名稱：用于生物活性物質(zhì)口腔給藥的微粒系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于生物活性物質(zhì)如營(yíng)養(yǎng)保健品的口腔給藥的微粒系統(tǒng)及其 相應(yīng)的制備方法。
背景技術(shù)：
"功能食品"被定義為對(duì)一種或多種特定身體機(jī)能具有積極效果的食品或 其成分，該食品或其成分超越純粹的營(yíng)養(yǎng)效果，引起健康狀態(tài)或良好狀態(tài)的改 善和/或預(yù)防和治療疾病。將具有作為天然成分而存在于功能食品中的確定的 化學(xué)結(jié)構(gòu)的產(chǎn)品定義為"營(yíng)養(yǎng)保健品"。
如果將功能食品或營(yíng)養(yǎng)保健品以有效劑量服用并將它們制成可生物利用 的，從而產(chǎn)生它們的生物活性，功能食品或營(yíng)養(yǎng)保健品(包括當(dāng)將它們濃縮時(shí) 的食品)具有潛在的保健效果。
營(yíng)養(yǎng)保健品以及功能食品的使用在人群中已經(jīng)是很普遍的，但是由于傳統(tǒng) 藥物使用的有效減少，它們?cè)陲暳瞎I(yè)的合理使用正擴(kuò)展到畜牧業(yè)和獸醫(yī)領(lǐng) 域。
用于在祠料工業(yè)中制備豬、牛、山羊、綿羊、馬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科 動(dòng)物、駱駝、兔類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物、家禽以及其他哺乳動(dòng)物、魚類和曱殼動(dòng)
物的飼料的營(yíng)養(yǎng)保健品可以來自許多類別，例如黃酮類化合物、維生素、抗 氧化劑、免疫系統(tǒng)刺激劑、淀粉多糖和非淀粉多糖、益生菌劑、益生元、腸道 營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)劑、微量元素、酶和生物活性肽。
所述營(yíng)養(yǎng)保健品的特征為相當(dāng)大的不穩(wěn)定性并且對(duì)環(huán)境和生物因素如胃 消化過程敏感，從而引起顯著的活性損失。目前，將所述營(yíng)養(yǎng)保健品以合適的 劑量添加到飼料中，利用常規(guī)的技術(shù)過程，沒有預(yù)先保護(hù)該營(yíng)養(yǎng)保健品不受外 部環(huán)境影響。
實(shí)際上，使用維生素和抗氧化劑的一個(gè)局限是在氧或其他氧化劑存在下，
在酸性環(huán)境中它們穩(wěn)定性降低了 。這種不穩(wěn)定性常常導(dǎo)致與它們的有效效力結(jié) 果相反，并且導(dǎo)致以非常高的劑量使用它們。
近來已經(jīng)提出使用維生素如維生素E作為營(yíng)養(yǎng)保健品物質(zhì)來改善肉的質(zhì) 量、肌原纖維的穩(wěn)定性、增強(qiáng)肉的嫩度、風(fēng)味、香味和口味在牛肉方面，它 們確保高水平的肌紅蛋白，即使在儲(chǔ)存過程中，具有改進(jìn)的、新鮮的紅色肉質(zhì)， 這尤其是適合于市場(chǎng)；在豬肉方面，它們減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)以及丙二醛(脂 質(zhì)過氧化反應(yīng)的指示劑)的水平。
從文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)可見，如果給藥適當(dāng)，使用維生素和營(yíng)養(yǎng)保健品物質(zhì)可以引 起家兔、雉雞以及魚例如鯉魚的肉質(zhì)改善。
通過調(diào)節(jié)發(fā)情周期以及降低泌乳牛只的胎盤滯留和乳腺炎的發(fā)病率，為不 同的牛種提供高劑量的維生素E可以提高其繁殖能力。
能夠用于畜牧業(yè)的其他營(yíng)養(yǎng)保健品屬于黃酮類化合物類別。在誘導(dǎo)生產(chǎn)干 擾素，該類分子被認(rèn)為具有胃保護(hù)活性、抗菌活性、消炎活性以及免疫刺激活 性。可以被歸結(jié)于黃酮類化合物的其他效果包括抗氧化劑以及細(xì)胞膜保護(hù)活 性、支氣管擴(kuò)張劑效果以及類鴉片效果，具有調(diào)節(jié)胃腸活性和流經(jīng)胃腸粘膜的 電解質(zhì)流(抗腹瀉效果)。由于口腔給藥之后不規(guī)律的吸收，與使用黃酮類化 合物相關(guān)的 一 個(gè)問題是它們的生物利用率降低。
仍然存在有許多未解決的問題困擾著豬和牛的飼養(yǎng)，在很多情況下，仍然 需要去尋找方案來克服能夠影響整個(gè)群體或單個(gè)物種的疾病，這些疾病對(duì)于飼 養(yǎng)者來說造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
當(dāng)前影響許多農(nóng)場(chǎng)的一個(gè)主要健康問題包括在生長(zhǎng)和育肥過程中豬的胃-食管潰瘍。在大多數(shù)受感染的動(dòng)物中，該疾病的后果是動(dòng)物死亡。在斷奶過程 中以及在母豬中也可以觀察到由于潰瘍?cè)斐傻乃劳?即使不太常見)。在肉畜 保持階段，受感染的動(dòng)物顯得色澤暗淡，生長(zhǎng)非常緩慢。它們中的許多不會(huì)死 亡，隨著時(shí)間的過去潰瘍能夠痊愈，但是生長(zhǎng)受到了損害，對(duì)于飼養(yǎng)者來說具 有明顯的、不利的經(jīng)濟(jì)后果。
正如許多其他動(dòng)物物種包括人的幼體一樣，另一個(gè)影響豬類物種的重要疾
病是由輪狀病毒引起的腹瀉。仔豬的輪狀病毒感染具有2-4天的潛伏期，這取 決于病毒株的毒性、仔豬的年齡、母豬的免疫狀態(tài)以及環(huán)境和銅養(yǎng)條件。在自
然條件下，在初生動(dòng)物中腹瀉也可以自身顯示出來，但是在2-6周齡到哺乳結(jié) 束或斷奶后第一天的動(dòng)物中更為頻繁。受感染的仔豬在腹瀉發(fā)作之前的幾個(gè)小 時(shí)變得厭食和抑郁。通常，有嘔吐現(xiàn)象，但是這并不是典型的輪狀病毒癥狀。 一般地，即使常常在小母豬上發(fā)現(xiàn)腹瀉，受感染的成體也不會(huì)顯示出任何癥狀。 腹瀉可以是嚴(yán)重的，開始具有水性或乳脂狀糞便，該糞便迅速地變成流體狀， 并且量很大，顏色為淡黃色或綠色。腹瀉可以持續(xù)超過10天的時(shí)間?；謴?fù)到 正常狀態(tài)是緩慢的，需要l-2周的時(shí)間。在哺乳動(dòng)物中以及在感染時(shí)間比較長(zhǎng) 的那些動(dòng)物中脫水是更為明顯的。死亡率通常超過80%，在短短幾天時(shí)間內(nèi)就 可以影響到整個(gè)農(nóng)場(chǎng)。死亡率可以達(dá)到20°/。，在哺乳動(dòng)物中更高。
在動(dòng)物飼料中使用營(yíng)養(yǎng)保健品可以減少抗生素、消炎藥物、止痛藥和生長(zhǎng) 促進(jìn)劑的使用。
本發(fā)明所要解決的問題是提高提供給動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)保健品的生物利用率。如 上面所解釋的，目前是將營(yíng)養(yǎng)保健品加入到飼料中。這導(dǎo)致所述物質(zhì)暴露于環(huán) 境因素如大氣氧氣和生物因素如胃消化過程中。所述的因素導(dǎo)致部分或全部降 解所加入到飼料中的營(yíng)養(yǎng)保健品，從而導(dǎo)致一旦將所述物質(zhì)給予到動(dòng)物中，所 述物質(zhì)的生物利用率^i氐。
該問題由在后附權(quán)利要求中所定義的微粒系統(tǒng)及其制備方法所解決。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)在已經(jīng)出乎意料地發(fā)現(xiàn)，并且形成了本發(fā)明的主題，口腔給予經(jīng)適當(dāng)保 護(hù)的營(yíng)養(yǎng)保健品物質(zhì)(將在下文中詳細(xì)定義)提高了營(yíng)養(yǎng)保健品自身的生物利 用率，避免了在祠料制備過程、其貯存過程以及在治療過程的動(dòng)物的消化和吸 收過程中其活性損失或大幅Pf#<。
更具體地，我們出乎意料地發(fā)現(xiàn)，在豬類物種中使用適當(dāng)保護(hù)的黃酮類化 合物作為營(yíng)養(yǎng)保健品產(chǎn)生了許多有益效果，這些效果可以以很多方式進(jìn)行解 釋。當(dāng)它們以合適的濃度存在于飼料中時(shí)，提供的^f鼓嚢化黃酮類化合物具有對(duì) 胃腸粘膜的有益效果，防止與抗菌和炎性作用有關(guān)的潰瘍。此外，在干擾素的 釋放增加之后，與對(duì)細(xì)胞膜的抗氧化和保護(hù)作用一起，獲得了免疫系統(tǒng)的刺激 作用。
此外，在受肺病影響的豬類物種中，其特征為急性和慢性支氣管痙攣，提 供經(jīng)適當(dāng)保護(hù)的黃酮類化合物作為營(yíng)養(yǎng)保健品具有支氣管擴(kuò)張劑的效果。
從在豬類物種中使用適當(dāng)保護(hù)的黃酮類化合物作為營(yíng)養(yǎng)保健品中，出乎意 料地發(fā)現(xiàn)了另一效果，即"類鴉片，，效果("opioid"),其特征為調(diào)節(jié)胃腸蠕動(dòng)(緩
慢的運(yùn)輸)以及調(diào)整通過腸粘膜的電解質(zhì)流。該機(jī)理產(chǎn)生了顯著的抗腹渴活性， 將在本專利申請(qǐng)所附隨的實(shí)施例中進(jìn)一步詳細(xì)說明。
施用黃酮類化合物的一個(gè)問題是在口服之后它們的生物利用率降低。 實(shí)際上，黃酮類化合物可以作為糖苷配基或作為糖苷(即連接到糖上的糖 苷配基)而存在。通常，糖苷配基是難溶的，因此在生物流體中具有非常低的 溶出率。低的溶出率意味著不規(guī)則的吸收和低的生物利用率。糖苷比糖普配基 更易溶，因此施用糖苷產(chǎn)生了提高的生物利用率。實(shí)際上，對(duì)于進(jìn)入外周循環(huán) 的吸收來說，只有在由腸內(nèi)糖普酶水解為糖苷糖部分之后糖苷配基才是可以被 吸收的。根據(jù)本發(fā)明的微囊化黃酮類化合物可以解決它們低的生物利用率的問 題，當(dāng)將它們直接輸送到腸時(shí)，在那里它們被釋放出來并且被腸內(nèi)糖苷酶所降 解。
可以在本發(fā)明的微粒系統(tǒng)內(nèi)被膠嚢化的其他營(yíng)養(yǎng)保健品物質(zhì)包括五羥黃 酮和蕓香苷(與鼠李糖和葡萄糖綴合的五羥黃酮)。
將所述物質(zhì)負(fù)載在由衍生自纖維素的聚合物構(gòu)成的微粒系統(tǒng)中，所述纖維 素是例如纖維素乙酰鄰苯二曱酸酯、具有pH依賴性溶解度的纖維素偏苯三酸 酯或者作為優(yōu)拉劑E、 L、 S、 RL、 RS (EudragitE,L, S，RL,RS)而已知的、 具有pH依賴性溶解度的曱基丙烯酸或丙烯酸乙酯共聚物。
具體地，用于制備在本專利申請(qǐng)中描述和要求保護(hù)的《效球和微?；蝾w粒系 統(tǒng)的纖維素乙酰鄰苯二曱酸酯或丙烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物在酸性胃環(huán)境 中是不溶的，但是在中性-堿性環(huán)境是極易溶的。這些成分配比在胃環(huán)境中提 供了活性物質(zhì)的或多或少地完全保護(hù)，并且如在體外實(shí)驗(yàn)所證實(shí)的，在模擬的 腸環(huán)境中，藥物、營(yíng)養(yǎng)保健品或活性物質(zhì)可以完全地和快速地釋放。
如今，我們出乎意料地發(fā)現(xiàn)，施用根據(jù)所要求保護(hù)的方法制備的微嚢化黃 酮類化合物可以避免疾病的發(fā)生并且可以改善營(yíng)養(yǎng)和生產(chǎn)效率，動(dòng)物經(jīng)過處 理，其健康具有明顯的有益響應(yīng)，對(duì)于祠養(yǎng)者來說具有確實(shí)的經(jīng)濟(jì)利益。
本發(fā)明的另 一方面涉及將根據(jù)本發(fā)明的含營(yíng)養(yǎng)保健品的微膠嚢和非膠嚢 化的抗氧化劑同時(shí)添加到動(dòng)物飼料中。因此，非膠嚢化的抗氧化劑是保護(hù)飼料
避免環(huán)境降解，從而可以長(zhǎng)期儲(chǔ)存；同時(shí)膠嚢化的抗氧化劑被直接運(yùn)送到腸內(nèi)， 并且在該位置釋放。
本發(fā)明的樣史粒系統(tǒng)由抗胃溶的(gastroresistant)、生物相容的以及可生物 降解的聚合物基質(zhì)構(gòu)成，其包括至少一種抗胃溶的并且可腸溶的聚合物，至 少 一種具有酸基的生物相容和可生物降解的聚合物的 一價(jià)、二價(jià)或三價(jià)金屬離 子鹽，至少一種另外的生物相容和生物可降解的聚合物以及生物活性物質(zhì)。
對(duì)于術(shù)語生物活性物質(zhì)是指營(yíng)養(yǎng)保健品，即黃酮類化合物、維生素、抗氧 化劑、免疫刺激劑、淀粉多糖和非淀粉多糖、益生菌劑、益生元、腸道營(yíng)養(yǎng)調(diào) 節(jié)劑、微量元素、酶和生物活性肽。
所述的微粒系統(tǒng)是用于將生物活性物質(zhì)優(yōu)選通過口腔給藥到動(dòng)物中，所述 動(dòng)物選自豬、牛、山羊、綿羊、馬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、駱駝科動(dòng) 物、兔類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物和其他哺乳動(dòng)物(包括人)、家禽、魚和曱殼動(dòng)物。 優(yōu)選的動(dòng)物是這些物種的幼體。
該微粒體系的特定組成可以保護(hù)所述的生物活性物質(zhì)避免被酶和胃酸降 解，允許它們釋放到可以發(fā)揮其活性的腸內(nèi)。
優(yōu)選地，所述的至少一種抗胃溶并且可腸溶的聚合物選自鄰苯二曱酸纖 維素酯(例如，纖維素乙酰鄰苯二曱酸酯、羥丙基-曱基纖維素鄰苯二曱酸酯)、 偏苯三酸纖維素酯(例如，纖維素偏苯三酸酯、羥丙基纖維素偏苯三酸酯、羥 丙基-曱基纖維素偏苯三酸酯)、丙烯酸酯和聚曱基丙烯酸酯。聚曱基丙烯酸酯 是最優(yōu)選的。
所述的至少一種具有酸基的生物相容和可生物降解的聚合物的一價(jià)、二價(jià) 或三價(jià)金屬離子鹽是海藻酸、透明質(zhì)酸或黃原酸膠的鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鉤鹽、 鋇鹽、鍶鹽、鋅鹽、鋁鹽、鐵鹽或鉻鹽。
所述的至少一種生物相容和可生物降解的聚合物選自由以下物質(zhì)組成的 組葡聚糖、硬葡聚糖、甘露聚糖、半乳甘露聚糖、膠凝糖、角叉菜膠、果膠、 聚酑、聚氨基酸、聚胺、黃原膠、黃蓍膠、瓜耳膠、黃原酸膠、纖維素及其衍 生物、羧曱基纖維素、乙基纖維素、曱基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維
素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇、聚氧乙烯、羧基乙烯基聚合物、淀粉、膠
原、曱殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、作為泊洛沙姆(poloxamer)而已知的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
羧曱基纖維素、乙基纖維素、曱基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、 羥丙基曱基纖維素、聚乙烯醇、聚氧乙烯、羧基乙烯基聚合物、淀粉、膠原、 甲殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、作為泊洛沙姆而已知的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚 物是優(yōu)選的。
上面描述的并且可以通過下面描述的方法來制備的微粒系統(tǒng)具有1 ~300 樣t米的直徑，優(yōu)選為3 ~ 100pm。
本發(fā)明也涉及制備所述抗胃溶的微粒系統(tǒng)的方法。 所述方法包括以下步驟
a) 制備含有至少一種生物相容和可生物降解的聚合物以及一種陰離子、 陽離子、兩性離子或非離子型表面活性劑的溶液、懸浮液或乳液；
b) 將至少一種生物活性物質(zhì)溶解或分散于來自步驟a)的溶液、懸浮液 或乳液中(混合物A);
c) 制備至少一種生物相容和可生物降解的聚合物的一價(jià)金屬離子鹽的水 溶液(混合物B);
d) 將溶液B加入到混合物A中；
e )制備至少一種抗胃溶并且可腸溶的聚合物的溶液或^t液(混合物C);
f) 將混合物C加入到混合物B中；
g) 將來自步驟f)的溶液或懸浮液噴霧到或擠出到可溶的二價(jià)或三價(jià)無機(jī) 離子鹽的水溶液中；
二價(jià)或三價(jià)離子的存在導(dǎo)致不溶基質(zhì)的形成，該不溶基質(zhì)是由例如4丐和/ 或鋇和/或一些其他二價(jià)或三價(jià)陽離子的海藻酸鹽構(gòu)成的。這導(dǎo)致了含有生物 活性物質(zhì)的不遂^敖粒系統(tǒng)的形成。
h) 備選地，在步驟g)，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，可以使用噴霧干燥機(jī) 來噴霧和干燥來自步驟f)的混合物。
由步驟b)獲得的混合物A優(yōu)選是乳液或懸浮液，所述乳液或懸浮液是通 過以下方法獲得的將等量或其他量的生物相容-可生物降解的聚合物與陰離
子、陽離子、兩性離子或非離子型表面活性劑溶解于蒸餾水中，優(yōu)選在室溫下
進(jìn)行。上面提到的兩個(gè)組分的用量都在0.1%~50% w/v之間，優(yōu)選在0.4%~ 30% w/v之間。
將活性物質(zhì)加入到所制備的溶液中，同時(shí)連續(xù)攪拌直到獲得穩(wěn)定的溶液、 懸浮液或乳液(混合物A )。所加入的活性物質(zhì)的用量在0.1°/。 ~ 50% w/v之間， 優(yōu)選在0.4% ~ 30% w/v之間。
混合物C是pH在5 ~ 9之間的緩沖液，優(yōu)選在7 ~ 8之間；所述混合物C 包括至少一種抗胃溶并且可腸溶的聚合物，其用量在10。/。 50。/。w/v之間，優(yōu) 選在5%~25%之間。
以1:2的優(yōu)選體積比將混合物B加入到混合物A中，接著以3:1的優(yōu)選體 積比將所獲得的溶液加入到混合物C中。
在步驟g)中，借助于尺寸為10nm 5000(xm,優(yōu)選為300|im ~ 2000pm 的噴嘴、噴口或注射器進(jìn)行噴霧。借助于自動(dòng)或半自動(dòng)微嚢機(jī) (microencapsulators )、蠕動(dòng)泵或活塞泵或其他可替代物，或者通過注射器進(jìn) 行擠出，其中在為了產(chǎn)生10~250滴/分鐘，優(yōu)選20~ 120滴/分鐘的速度下手 動(dòng)和/或自動(dòng)地操作所述注射器。
噴霧或擠出導(dǎo)致形成非常小的滴狀物，在可溶的二價(jià)或三價(jià)無機(jī)離子鹽的 水溶液中收集這些滴狀物，將攪拌保持在10 ~ 200rpm，優(yōu)選20 ~ 100prm的速 度。被擠出的溶液與無機(jī)鹽溶液的體積比在1:1 1:6之間，優(yōu)選地，該比例為 1:4。
該二價(jià)或三價(jià)無機(jī)離子鹽選自氯化鈣、氯化鋇、氯化鍶、氯化鋅、氯化 鋁、氯化鐵或氯化鉻，優(yōu)選氯化鉤、氯化鋇或氯化鋁。更優(yōu)選為氯化釣。所述 無機(jī)鹽溶液的濃度在0.1M ~ 2.0M之間，優(yōu)選在0.2M ~ 0.8M之間。
二價(jià)或三價(jià)金屬鹽的存在導(dǎo)致形成基質(zhì)，該基質(zhì)由可生物降解和生物相容 的具有g(shù)的聚合物以及所用的二價(jià)或三價(jià)金屬構(gòu)成，從而實(shí)現(xiàn)快速沉淀微粒 系統(tǒng)。
該微粒系統(tǒng)具有球形形狀，并且是不溶的。通過抽吸或過濾將它們從溶液 中分離出來。任選地，可以將它們用生理溶液(等滲鹽水)洗滌幾次。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以使所得到的凝:粒系統(tǒng)進(jìn)行外表面交聯(lián)使
用聚胺型交聯(lián)劑，通過生物相容和可生物降解聚合物的二價(jià)或三價(jià)金屬離子鹽
的界面聚合作用來進(jìn)行，其中聚胺型交聯(lián)劑例如硫酸魚精蛋白或磷酸魚精蛋 白、聚-L-賴氨酸氫溴酸鹽(分子量為l，000Da~80，0000Da)、聚乙烯胺、脫乙 酰殼多糖(分子量為15，000Da~ l，OOO，OOODa)。所述交耳關(guān)劑優(yōu)選以濃度為 0.01% ~ 5% w/v的水溶液。
在以下條件下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)溫度為5 40。C，優(yōu)選大約25。C;時(shí)間為1 分鐘~120分鐘，優(yōu)選為3~30分鐘。
交聯(lián)反應(yīng)^ 1起樣史粒系統(tǒng)的膜的硬化，使它們更易于處理。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，接著使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)使所述微 粒系統(tǒng)進(jìn)行冷凍干燥，或者通過不會(huì)損害膠嚢化生物活性物質(zhì)的活性的、本領(lǐng) 域已知的任意方法來使其干燥。
可選地，本發(fā)明樣支粒的制備方法可以設(shè)計(jì)成球形顆粒。在這種情況下，將 增稠劑如玉米淀粉、乳糖等與生物相容和可生物降解的聚合物加入到組分混合 物中。通過本領(lǐng)域已知的合適造粒機(jī)將所得到的濕物質(zhì)擠出。由此，獲得顆粒 分布為50~ 1000孩￡米，優(yōu)選為150 50(M鼓米的球形顆粒。然后用抗胃溶并且 可腸溶的聚合物包衣所述顆粒，以提供本發(fā)明的微粒。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，可以在可控制的大氣中，在-20。C 40。C、優(yōu) 選4t: 40。C的溫度下儲(chǔ)存所述的微粒系統(tǒng)。
形成本發(fā)明主題的微粒系統(tǒng)可以被口服，也可以伴隨液態(tài)食物施用或者作 為固體飼4+的添加劑而施用。
在另外一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及動(dòng)物預(yù)包裝飼料，其具有所加入的本 發(fā)明微粒系統(tǒng)以及所添加形成的飼料，該飼料還加入有未膠嚢化抗氧化劑。
本發(fā)明提供了具有這樣一種尺寸的微粒系統(tǒng)，使得可以在固態(tài)和液態(tài)食品 中的最佳M而沒有涉及顆粒聚集的任何問題，因此，不會(huì)從固體中分離出來 或從液體中沉淀下來。這使得其易于施用到動(dòng)物中。
本發(fā)明的抗胃溶的微粒系統(tǒng)可以口服，并且比較經(jīng)濟(jì)；在酸性的胃環(huán)境中， 所述^f效粒系統(tǒng)有效地保護(hù)所負(fù)載的生物活性物質(zhì)；并且，在腸環(huán)境(小腸或大 腸)中，快速地釋;^丈具有高生物活性的前述物質(zhì)。
不僅在獸醫(yī)胃腸和營(yíng)養(yǎng)科，特別是在單胃動(dòng)物物種中，而且在多胃非反芻
動(dòng)物和具有退化的非功能性前胃的那些反芻動(dòng)物中，所述抗胃溶的 鼓粒系統(tǒng)具 有顯著的應(yīng)用潛力。
可以將該制品分類為畜牧飼料添加劑(如在Reg. CE N°1831/2003的1st 附件所記載的)。
在畜牧場(chǎng)中，本發(fā)明解決了這樣的實(shí)質(zhì)問題，即服用一定量的活性營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)，足以顯示出其有益效果。 實(shí)施例1:
制備含有6%01-維生素E的微粒系統(tǒng)
乳液A:在室溫下將等量的泊洛沙姆(0.4% w/v BSAF， Ludwigshafen， Germany )和十二烷基石克酸鈉(0.4% w/v Sigma-Aldrich, Milan, Italy )溶解于蒸 餾水中。在持續(xù)攪拌下，將a曙維生素E ( 1.6% w/v， Sigma-Aldrich, Milan, Italy ) 加入到所得到的溶液中，以提供穩(wěn)定的和均勻的乳液。
溶液B:在室溫下制備低粘度的海藻酸鈉(250cps， 2°/。溶液，25°C ) (Sigma-Aldrich, Milan, Italy )的2%水溶液。
溶液C:聚曱基丙烯酸酉旨(Eudmgit SI00 , R6hm, Pharma， GmbH, Darmstadt Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中形成的20% w/v溶液。
在持續(xù)攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中，然后，再在持 續(xù)攪拌下以3:1的體積比將所述溶液加入到乳液A中。
所得到的乳液的百分含量組成為
5%聚曱基丙烯酸酯
1%海藻酸鈉
0.1%泊洛沙姆
0.1%十二烷^5危酸鈉
0.4。/。a-維生素E
使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧 千燥機(jī))在以下條件下使所得到的乳液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C，出 口溫度為100°C，施加的壓力為4atm。
得到了微粒系統(tǒng)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?。所?的微粒系統(tǒng)表現(xiàn)為細(xì)粉，不溶于水，具有在5~35微米之間的顆粒分布，具有
優(yōu)良的濕潤(rùn)性、流動(dòng)性和流度特性。
在純乙醇中將微粒系統(tǒng)溶出之后，所含有的a-維生素E含量的測(cè)定在 291nm下在分光光度計(jì)中進(jìn)行。相對(duì)于理論值，差當(dāng)量(titre )是101±3%。
接著使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥典(Pharmacopeia (FUIXI))中所規(guī)定的分析，以便評(píng)價(jià)在酸性環(huán)境中維生素的體外穩(wěn)定性，以 及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
實(shí)施例2:
制備含有22%01-維生素E的微粒系統(tǒng) 乳液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 (2% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany)和十二烷基石克酸鈉(2% w/v Sigma-Aldrich， Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將a-維生素E (8%w/v, Sigma-Aldrich, Milan, Italy ) 加入到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的乳液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2% w/v的低粘度海藻 酸鈉(250cp, 2%溶液,25°C)(海藻酸,鈉鹽，低粘度，Sigma-Aldrich, Milan, Italy)的水溶液。
溶液C:
在室溫下通過攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(EudragitSlOO , R6hm, Pharma, GmbH， Darmstadt, Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶液。
在持續(xù)》茲力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中，然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到乳液A中，持續(xù)渦輪攪拌15分鐘。使用蠕動(dòng) 泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧干燥機(jī))在以 下條件下使所得到的乳液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C，出口溫度為 100°C,施力p的壓力為4 atm。
得到了微粒系統(tǒng)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
55.56%聚曱基丙烯酸酯 11.11%海藻酸鈉
5.56%泊洛沙姆
5.56%十二烷基石克酸鈉
22.22。/。a-維生素E
如通過激光散射(Coulter LS230, Beckman-Coulter， Fullerton, CA， USA)所 測(cè)定的，該不溶于水的微粒系統(tǒng)的特征為正常的粒度分布，平均直徑為19±12.8 微米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于被加入到固態(tài)和液態(tài)伺料中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在純乙醇中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微粒系統(tǒng)所含有 的a-維生素E含量的測(cè)定在波長(zhǎng)291nm下在分光光度計(jì)中進(jìn)行。差當(dāng)量(titre ) 等于102±1.84% (n = 4)。
如在上面所詳細(xì)記載的，使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥 典(Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以^更評(píng)價(jià)在酸性環(huán)境中維生素 的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
實(shí)施例3
制備含有6%蕓香苷的微粒系統(tǒng) 懸浮液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 ( 0.4% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany)和十二烷基硫酸鈉(0.4% w/v Sigma-Aldrich， Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將蕓香苷(1.6%w/v， Sigma-Aldrich, Milan, Italy)加 入到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的懸浮液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2% w/v的低粘度海藻 酸鈉(250cp, 2%溶液，25°C)(海藻酸，鈉鹽，低粘度，Sigma-Aldrich, Milan, Italy)的水溶液。
溶液C:
在室溫下通過攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(EudragitS100 ， R6hm， Pharma, GmbH， Darmstadt, Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶液。
在持續(xù)磁力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中；然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到懸浮液A中，持續(xù)渦輪攪拌(UltraTurrax) 15 分鐘。使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Btichi小型噴 霧干燥機(jī))在以下條件下使所得到的乳液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C， 出口溫度為100°C，施加的壓力為4atm。
得到了微粒系統(tǒng)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
75.76%聚曱基丙烯酸酯
15.15%海藻酸鈉
1.52%泊洛沙姆
1.52%十二烷基硫酸鈉
6.06°/。蕓香苷
如通過激光散射(Coulter LS230, Beckman-Coulter， Fullerton， CA， USA)所 測(cè)定的，該不溶于水的微粒系統(tǒng)的特征為正常的粒度分布，平均直徑為 21.9士13.7微米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于被加入到固態(tài)和液態(tài)飼料中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在pH7.5的磷酸緩沖液中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微 粒系統(tǒng)所含有的蕓香苷含量的測(cè)定在367nm的波長(zhǎng)下在分光光度計(jì)中進(jìn)行。 相對(duì)于理論值，差當(dāng)量(titre)等于108.0±1.84% (n = 4)。
如上面所詳細(xì)記載的，使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥典 (Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以便評(píng)價(jià)蕓香苷的體外穩(wěn)定性。
具體地，在pHl.O的模擬酸性環(huán)境中，在120分鐘之后不到20%的活性物 質(zhì)被釋放出來；接著轉(zhuǎn)換到pH7.5，在15分鐘內(nèi)負(fù)載于微粒系統(tǒng)的活性物質(zhì) 完全釋放。
實(shí)施例4:
制備含有11%蕓香苷的微粒系統(tǒng) 懸浮液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 ( 0.8% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany)和十二烷^5克酸鈉(0.8% w/v Sigma-Aldrich, Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將蕓香苷(3.2%w/v， Sigma-Aldrich， Milan, Italy)加 入到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的懸浮液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2% w/v的低粘度海藻 酸鈉(250cp, 2%溶液,25。C)(海藻酸，鈉鹽，低粘度，Sigma-Aldrich, Milan, Italy)的水溶液。
溶液C:
在室溫下通過攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(EudragitSlOO , R6hm， Pharma， GmbH, Darmstadt, Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶液。
在持續(xù)磁力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中；然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到懸浮液A中，持續(xù)渦輪攪拌15分鐘。
使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧 干燥機(jī))在以下條件下使所得到的懸浮液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C, 出口溫度為100°C，施加的壓力為4atm。
得到了孩吏粒系統(tǒng)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
69.44%聚曱基丙烯酸酯
13.89%海藻酸鈉
2.78%泊洛沙姆
2.78%十二烷基>5克酸鈉
11.11%蕓香苷
如通過激光散射(Coulter LS230， Beckman-Coulter， Fullerton, CA, USA )所 測(cè)定的，該不溶于水的微粒系統(tǒng)的特征為正常的粒度分布，平均直徑為 23.8± 14.3微米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于^^皮加入到固態(tài)和液態(tài)飼^l"中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在pH7.5的磷酸緩沖液中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微 粒系統(tǒng)所含有的蕓香苷含量的測(cè)定在367nrn的波長(zhǎng)下在分光光度計(jì)中進(jìn)行。 相對(duì)于理論值，差當(dāng)量(titre)等于91.43±10% (n = 4)。
如在上面所詳細(xì)記載的，使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥 典(Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以便評(píng)價(jià)在酸性環(huán)境中蕓香普 的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
具體地，在pH1.0的模擬酸性環(huán)境中，在120分鐘之后不到15%的活性物 質(zhì)被釋放出來；接著轉(zhuǎn)換到pH7.5,在15分鐘內(nèi)負(fù)載于孩史粒系統(tǒng)的活性物質(zhì) 完全釋放。
實(shí)施例5:
制備含有22%蕓香苷的微粒系統(tǒng) 懸浮液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 (2% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany )和十二烷基石克酸鈉(2% w/v Sigma-Aldrich, Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將蕓香苷(8。/。w/v, Sigma-Aldrich, Milan, Italy)加入 到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的乳液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2% w/v的低粘度海藻 酸鈉(250cp, 2%溶液,25°C)(海藻酸，鈉鹽，低粘度，Sigma-Aldrich, Milan, Italy)的水溶液。
溶液C:
在室溫下通過攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(EudragitSlOO , R6hm， Pharma, GmbH， Darmstadt, Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶液。
在持續(xù)磁力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中；然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到懸浮液A中，持續(xù)渦輪攪拌15分鐘。
使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧 干燥機(jī))在以下條件下使所得到的懸浮液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C, 出口溫度為100°C，施加的壓力為4atm。
得到了微粒系統(tǒng)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
55.56%聚曱基丙烯酸酯
11.11%海藻酸鈉
5.56%泊洛沙姆
5.56%十二烷基疏酸鈉
22.22%蕓香苷
所得到的微粒系統(tǒng)不溶于水，并且，如通過激光散射(Coulter LS230, Beckman-Coulter, Fullerton, CA， USA)所測(cè)定的，其特征為正常的粒度分布， 平均直徑為21.2±12.7微米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于被加入到固態(tài)和液態(tài)祠料中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在pH7.5的磷酸緩沖液中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微 粒系統(tǒng)所含有的蕓香苷含量的測(cè)定在367nm的波長(zhǎng)下在分光光度計(jì)中進(jìn)行。 相對(duì)于理論值，差當(dāng)量(titre)等于102.4±2.6% (n = 4)。
如在上面所詳細(xì)記載的，使樣克粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥 典(Pharmacopeia (FUI XI))中所身見定的分析，以-使評(píng)i"介在酸性環(huán)境中蕓香苷 的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
具體地，在pHl.O的模擬酸性環(huán)境中，在120分鐘之后不到10%的活性物 質(zhì)被釋放出來；接著轉(zhuǎn)換到pH7.5,在15分鐘內(nèi)負(fù)載于微粒系統(tǒng)的活性物質(zhì) 完全釋放。
實(shí)施例6:
制備含有6%五羥黃酮的微粒系統(tǒng) 懸浮液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 ( 0.4% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany)和十二烷基石克酸鈉(0.4% w/v Sigma國Aldrich， Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將五羥黃酮(1.6%w/v, Sigma-Aldrich， Milan, Italy ) 加入到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的懸浮液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2%的低粘度海藻酸鈉 (250cp， 2%溶液，25。C )(海藻酸，鈉鹽，低粘度，Sigma畫Aldrich, Milan, Italy) 的水溶液。 溶液C:
在室溫下通過持續(xù)攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(Eudragit S100 , R6hm, Pharma, GmbH, Darmstadt, Germany )在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶 液。
在持續(xù)磁力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中；然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到懸浮液A中，持續(xù)渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘。
使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧 干燥機(jī))在以下條件下使所得到的溶液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C,出 口溫度為100°C,施加的壓力為4atm。
得到了微粒系統(tǒng)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
75.76%聚曱基丙烯酸酯
15.15%海藻酸鈉
1.52%泊洛沙姆
1.52%十二烷基石克酸鈉
6.06%五羥黃酮
如通過激光散射(Coulter LS230， Beckman-Coulter, Fullerton， CA, USA )所 測(cè)定的，該不溶于水的微粒系統(tǒng)的特征為正常的粒度分布，平均直徑為 21.3士12.9微米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于^^皮加入到固態(tài)和液態(tài)銅料中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在pH7.5的磷酸緩沖液中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微 粒系統(tǒng)所含有的五羥黃酮含量的測(cè)定在366nm的波長(zhǎng)下通過分光光度計(jì)來進(jìn) 行。相對(duì)于理論值，差當(dāng)量(titre)等于97.5±11.5% (n = 4)。
如在上面所詳細(xì)記載的，使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥
典(Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以便評(píng)價(jià)在酸性環(huán)境中五羥黃 酮的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
具體地，在pH1.0的模擬酸性環(huán)境中，在120分鐘之后不到15%的五羥黃 酮被釋放出來；接著轉(zhuǎn)換到pH7.5,在15 - 30分鐘內(nèi)不低于50%的負(fù)載于微 粒系統(tǒng)的活性物質(zhì)釋;^文出來。
實(shí)施例7:制備含有11%五羥黃酮的微粒系統(tǒng)
懸浮液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 ( 0.8% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany )和十二烷^5克酸鈉(0.8% w/v Sigma誦Aldrich， Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將五羥黃酮(3.2%w/v， Sigma-Aldrich， Milan, Italy ) 加入到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的懸浮液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2% w/v的低粘度海藻 酸鈉(250cp， 2%溶液，25°C)(海藻酸，鈉鹽，低粘度，Sigma-Aldrich, Milan, Italy)的水溶液。
溶液C:
在室溫下通過持續(xù)攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(Eudragit S100 ， R6hm, Pharma， GmbH, Darmstadt, Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶 液。
在持續(xù)》茲力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中；然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到懸浮液A中，持續(xù)渦輪攪拌(UltraTurrax) 15 分鐘。
使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧 干燥機(jī))在以下條件下使所得到的溶液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C，出 口溫度為100°C ，施加的壓力為4 atm。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，得到了微粒系統(tǒng)，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
69.44%聚曱基丙烯酸酯
13.89°/。海藻酸鈉
2.78%泊洛沙姆
2.78%十二烷基硫酸鈉
11.11%五羥黃酮
該樣i粒系統(tǒng)不溶于水，并且，如通過激光散射(Coulter LS230, Beckman-Coulter， Fullerton， CA, USA)所測(cè)定的，其特征為正常的粒度分布， 平均直徑為27.1士6.0孩史米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于被加入到固態(tài)和液態(tài)飼料中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在pH7.5的磷酸緩沖液中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微 粒系統(tǒng)所含有的五羥黃酮含量的測(cè)定在366nm的波長(zhǎng)下通過分光光度計(jì)來進(jìn) 行。相對(duì)于理論值，差當(dāng)量(titre)等于100.7±15.8% (n = 4)。
如在上面所詳細(xì)記載的，使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥 典(Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以^更評(píng)^f介在酸性環(huán)境中五羥黃 酮的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
具體地，在pHl.O的模擬酸性環(huán)境中，在120分鐘之后不到5%的五羥黃 酮被釋放出來；接著轉(zhuǎn)換到pH7.5，在15-30分鐘內(nèi)不低于60%的負(fù)載于微 粒系統(tǒng)的活性物質(zhì)釋放出來。
實(shí)施例8:
制備含有22%五羥黃酮的微粒系統(tǒng) 懸浮液A:
在室溫下在100rpm的持續(xù)磁力攪拌下將泊洛沙姆407 (2% w/v BSAF, Ludwigshafen, Germany)和十二烷基石克酸鈉(2% w/v Sigma國Aldrich, Milan, Italy)溶解于蒸餾水中。將五羥黃酮(8。/。w/v， Sigma-Aldrich, Milan, Italy)加 入到該溶液中，渦輪攪拌(UltraTurrax) 15分鐘得到穩(wěn)定的懸浮液。
溶液B:
在室溫下在lOOrpm的持續(xù)磁力攪拌下制備濃度為2% w/v的低粘度海藻 酸鈉(250cp, 2%溶液，25°C)(海藻酸,鈉鹽，低粘度，Sigma-Aldrich， Milan,Italy)的水溶液。 溶液C:
在室溫下通過持續(xù)攪拌制備聚曱基丙烯酸酯(Eudragit S100 ， R6hm， Pharma， GmbH， Darmstadt, Germany)在pH7.5的磷酸緩沖液中的20% w/v溶 液。
在持續(xù)磁力攪拌下以1:2的體積比將溶液C加入到溶液B中；然后，以 3:1的體積比將所述溶液加入到懸浮液A中，持續(xù)渦輪攪拌(UltraTurrax) 15 分鐘。
使用蠕動(dòng)泵，通過裝備有0.5mm直徑噴嘴的噴霧干燥機(jī)(Biichi小型噴霧 干燥機(jī))在以下條件下使所得到的溶液進(jìn)行噴霧空氣進(jìn)口溫度為120°C，出 口溫度為100°C,施加的壓力為4atm。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，得到了微粒系統(tǒng)，然后將其適當(dāng)?shù)厥占?br> 該產(chǎn)品表現(xiàn)為具有良好的流動(dòng)性和流度特性的細(xì)粉。
以噴霧溶液的組成計(jì)算，產(chǎn)品的組成如下
55.56%聚曱基丙烯酸酯
11.11°/。海藻酸鈉
5.56%泊洛沙姆
5.56%十二烷基石克酸鈉
22.22s。/。五輕黃酮
該樣吏粒系統(tǒng)不溶于水，并且，如通過激光散射(Coulter LS230， Beckman-Coulter, Fullerton, CA, USA)所測(cè)定的，其特征為正常的粒度分布， 平均直徑為27.3微米。
該粉末具有良好的自由流動(dòng)性和濕潤(rùn)性，因此，為了獲得均勻的混合物或 懸浮液，特別適合于^f皮加入到固態(tài)和液態(tài)飼料中。
在制備微粒系統(tǒng)之后，在pH7.5的磷酸緩沖液中將微粒系統(tǒng)溶出之后，微 粒系統(tǒng)所含有的五羥黃酮含量的測(cè)定在367nm的波長(zhǎng)下通過分光光度計(jì)來進(jìn) 行。差當(dāng)量(titre)等于98.7% (n-4)。
如在上面所詳細(xì)記載的，使微粒系統(tǒng)進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式的藥 典(Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以1更評(píng)價(jià)在酸性環(huán)境中五羥黃
酮的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
具體地，在pH1.0的模擬酸性環(huán)境中，在120分鐘之后不到10%的五羥黃 酮被釋放出來；接著轉(zhuǎn)換到pH7.5，在15-30分鐘內(nèi)不低于50。/。的負(fù)載于微 粒系統(tǒng)的活性物質(zhì)釋放出來。
實(shí)施例9
制備含有蕓香普的顆粒 抗胃溶的顆粒
將適當(dāng)量的泊洛沙姆407 (BASF， Ludwigshafen， Germany )與十二烷基硫 酸鈉(Sigma-Aldrich, Milan, Italy)混合于合適的粉末混合機(jī)中，然后將蕓香 苷(Sigma-Aldrich, Milan, Italy)與玉米淀粉、乳糖以及其他成分例如本領(lǐng)域 技術(shù)人員已知的那些成分一起加入以提供均勻的混合物。使用含有聚乙烯吡咯 烷酮(Kollidon 19-32 BASF)的10%水溶液的粘合劑溶液來吸收所述混合物。 通過合適的球形造粒機(jī)(granulator- spheroniser)將該濕物質(zhì)擠出以提供球形 顆粒，該球形顆粒具有50 ~ 1000微米，優(yōu)選150 ~ 500微米的顆粒分布。
在包衣鍋或流化床中通過以下方法將所述球形顆粒包衣噴涂纖維素乙酰 鄰苯二曱酸酯(Sigma)或聚曱基丙烯酸酯(Eudragit S100 , R6hm， Pharma, GmbH， Darmstadt, Germany )在pH7.5磷酸緩沖液中的溶液，所述溶液添加有 膜增塑劑，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那些膜增塑劑。
該操作一直進(jìn)行到球形顆粒的包衣完成且均勻。
如在上面所詳細(xì)記載的，接著使包衣顆粒進(jìn)行如在用于抗胃溶的藥物形式 的藥典(Pharmacopeia (FUI XI))中所規(guī)定的分析，以便評(píng)價(jià)在酸性環(huán)境中蕓 香苷的體外穩(wěn)定性，以及在模擬腸環(huán)境中的釋放。
權(quán)利要求
1.一種微粒系統(tǒng)，其由含有生物活性物質(zhì)的抗胃溶的、生物相容的以及可生物降解的聚合物基質(zhì)構(gòu)成，其中所述基質(zhì)包括至少一種抗胃溶并且可腸溶的聚合物，所述聚合物選自鄰苯二甲酸纖維素酯、偏苯三酸纖維素酯、丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯；至少一種陰離子、陽離子、兩性離子型或非離子型表面活性劑；至少一種具有酸基的生物相容和可生物降解的聚合物的一價(jià)、二價(jià)或三價(jià)金屬離子鹽，其選自海藻酸的鹽、透明質(zhì)酸的鹽和黃原酸膠的鹽；至少一種另外的生物相容和可生物降解的聚合物，其選自葡聚糖、硬葡聚糖、甘露聚糖、半乳甘露聚糖、膠凝糖、角叉菜膠、果膠、聚酐、聚氨基酸、聚胺、黃原膠、黃蓍膠、瓜耳膠、黃原酸膠、纖維素及其衍生物、聚乙烯醇、聚氧乙烯、羧基乙烯基聚合物、淀粉、膠原、甲殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、作為泊洛沙姆而已知的聚氧乙烯-聚氧丙烯的嵌段共聚物；其特征在于，所述生物活性物質(zhì)選自黃酮類化合物、維生素、抗氧化劑、免疫刺激劑、淀粉多糖和非淀粉多糖、益生菌劑、益生元、腸道營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)劑、微量元素、酶和生物活性肽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒系統(tǒng)，其中，所述的至少一種抗胃溶并且 可腸溶的聚合物是聚甲基丙烯酸酯。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的微粒系統(tǒng)，其中，所述的至少一種具有酸 基的生物相容和可生物降解的聚合物的一價(jià)、二價(jià)或三價(jià)金屬離子鹽是海藻 酸、透明質(zhì)酸或黃原酸膠的鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、釣鹽、鋇鹽、鍶鹽、鋅鹽、鋁 鹽、 鐵鹽或鉻鹽。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項(xiàng)所述的微粒系統(tǒng)，其中，另外的生物相 容和可生物降解的聚合物是作為泊洛沙姆而已知的聚氧乙烯-聚氧丙烯的嵌段 共聚物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1~4中任何一項(xiàng)所述的微粒系統(tǒng)，其中，所述微粒系統(tǒng) 具有l(wèi)-30(H敫米的直徑，優(yōu)選3 100孩t米。
6. 權(quán)利要求1 ~ 5中任何一項(xiàng)所述的微粒系統(tǒng)在制備用于將生物活性物質(zhì) 施用到動(dòng)物中的抗胃溶藥物劑型中的用途。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中，所述動(dòng)物包括豬、牛、山羊、 綿羊、馬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、駱駝科動(dòng)物、兔類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物 及包括人的其他哺乳動(dòng)物、家禽和魚；優(yōu)選為所述物種的幼體。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的用途，其中，所述施用是口服。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中，在口服的情況下，將所述微粒系 統(tǒng)與液體或固體食物混合，或者將其用作動(dòng)物飼料的添加劑。
10. 權(quán)利要求1~5中任何一項(xiàng)所述的微粒系統(tǒng)在制備用于施用到根據(jù)權(quán) 利要求7的動(dòng)物中的藥物用途，用于預(yù)防潰瘍；在干擾素的釋放增加之后刺激 免疫系統(tǒng)；減緩胃腸運(yùn)輸和蠕動(dòng)(類鴉片效果)，具有對(duì)流經(jīng)腸粘膜的電解質(zhì) 流的調(diào)節(jié)效果，因而具有抗腹渴活性；減小脂質(zhì)過氧化反應(yīng)丙二醛含量；提高 繁殖能力和調(diào)節(jié)發(fā)情周期；降低胎盤滯留的發(fā)病率；降低乳腺炎的發(fā)病率；提 高呼吸功能。
11. 根據(jù)權(quán)利要求IO所述的用途，其中，用于制備具有抗菌、消炎、抗 氧化劑和細(xì)胞膜保護(hù)作用的藥物用于治療特征為急性或慢性支氣管痙攣的肺 病。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的用途，其中，即使在儲(chǔ)存過程中，用于 提高肉的質(zhì)量和感官特性。
13. 添加有根據(jù)權(quán)利要求1 ~5中任何一項(xiàng)所述微粒系統(tǒng)的動(dòng)物飼料。
14. 添加有根據(jù)權(quán)利要求1 ~5中任何一項(xiàng)所述微粒系統(tǒng)以及非膠嚢化抗 氧化劑的動(dòng)物詞料。
15. 微粒系統(tǒng)的生產(chǎn)方法，其包括以下步驟a) 制備含有至少一種生物相容和可生物降解的聚合物以及一種陰離子、 陽離子、兩性離子或非離子型表面活性劑的溶液、懸浮液或乳液；b) 將至少一種生物活性物質(zhì)溶解或分散于來自步驟a)的溶液、懸浮液 或乳液中(混合物A);c) 制備至少一種生物相容和可生物降解的聚合物的一Y介金屬離子鹽的水 溶液(混合物B );d) 將溶液B加入到混合物A中； e )制備至少一種抗胃溶并且可腸溶的聚合物的溶液或分敉液(混合物C);f) 將混合物C加入到混合物B中；g) 將來自步驟f)的溶液或懸浮液噴霧到或擠出到可溶的二價(jià)或三價(jià)無機(jī) 離子鹽的水溶液中；h) 作為步驟g)的可替代方案，通過噴霧干燥機(jī)來噴霧和干燥來自步驟f) 的混合物。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述混合物A是含有至少一種 生物相容和可生物降解的聚合物， 一種陰離子、陽離子、兩性離子型或非離子 型表面活性劑以及至少一種生物活性物質(zhì)的溶液、懸浮液或乳液。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，由步驟b)獲得的混合物A優(yōu) 選是乳液或懸浮液，所述乳液或懸浮液是通過以下過程獲得的將等量的生物 相容和可生物降解的聚合物與陰離子、陽離子、兩性離子或非離子型表面活性 劑溶解于蒸餾水中，優(yōu)選在室溫下進(jìn)行；上面提到的兩個(gè)組分的用量都在0.1% ~ 50% w/v之間，優(yōu)選在0.4% ~ 30% w/v之間。
18. 根據(jù)前述權(quán)利要求的方法，其中，在持續(xù)攪拌下將活性物質(zhì)加入到所 制備的溶液中，所述攪拌一直繼續(xù)到獲得穩(wěn)定的溶液、懸浮液或乳液(混合物 A);所加入的活性物質(zhì)的用量在0.1% w/v ~ 50% w/v之間，優(yōu)選在0.4% ~ 30% w/v之間。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15~18中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，所述混合物B 是至少 一種生物相容和可生物降解的聚合物的 一價(jià)金屬離子鹽的水溶液。
20. 根據(jù)權(quán)利要求15~ 19中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，混合物C是pH 在5 9之間的緩沖液，優(yōu)選在7 8之間；所述混合物C包括抗胃溶并且可 腸溶的聚合物，其用量在10。/。-30。/。w/v之間，優(yōu)選在15%~25%之間。
21. 根據(jù)權(quán)利要求15~20中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，以l:2的優(yōu)選體 積比將混合物B加入到混合物A中，接著以3:1的優(yōu)選體積比將所獲得的溶 液加入到混合物C中。
22. 根據(jù)權(quán)利要求15~21中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟g)中， 通過尺寸為10|im~5000|im，優(yōu)選為300pm ~ 2000(xm的噴嘴、噴口或針進(jìn)行 噴霧；通過自動(dòng)或半自動(dòng)微嚢機(jī)、蠕動(dòng)泵或活塞泵或其他泵，或者使用手動(dòng)和 /或自動(dòng)注射器進(jìn)行擠出，其中在為了產(chǎn)生10~250滴/分鐘，優(yōu)選20 120滴/ 分鐘的速度下操作所述注射器。
23. 根據(jù)權(quán)利要求15-22中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟g)中， 所述的二價(jià)或三價(jià)無機(jī)離子鹽溶液是氯化鈣、氯化鋇、氯化鍶、氯化鋅、氯化 鋁、氯化鐵或氯化鉻的水溶液。
24. 根據(jù)權(quán)利要求15~23中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，所述無機(jī)鹽溶 液具有在0.1M ~ 2.0M之間，優(yōu)選在0.2M ~ 0.8M之間的濃度。
25. 根據(jù)權(quán)利要求15~24中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法另外 包括通過使用交聯(lián)劑使所述微粒系統(tǒng)的外表面交聯(lián)的步驟，所述交聯(lián)劑選自 硫酸魚精蛋白或磷酸魚精蛋白、聚-L-賴氨酸氫溴酸鹽、聚乙烯胺、脫乙酰殼 多糖。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述交聯(lián)劑是濃度為0.01-5% w/v的水溶液。
27. 根據(jù)權(quán)利要求15-26中任何一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法另外 包括冷凍干燥所述樣i粒系統(tǒng)的步驟。
28. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，將粘合劑和其他賦形劑加入到 具有本領(lǐng)域技術(shù)人員已知賦形劑的活性成分的混合物中，以提供可以通過造粒 機(jī)擠出的濕物質(zhì)，來提供球形顆粒。
29. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述球形顆粒具有50 ~ 1000微 米，優(yōu)選150 ~ 500孩t米的顆粒分布。
30. 根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的方法，其中，用抗胃溶并且可腸溶的聚 合物來包衣所述球形顆粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于膠囊化生物活性物質(zhì)的抗胃溶并且可腸溶的微粒系統(tǒng)，所述生物活性物質(zhì)選自黃酮類化合物、維生素、抗氧化劑、免疫刺激劑、淀粉多糖和非淀粉多糖、益生菌劑、益生元、腸道營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)劑、微量元素、酶和生物活性肽。該微粒系統(tǒng)允許將前述的營(yíng)養(yǎng)保健品物質(zhì)施用到動(dòng)物中，提高了生物利用率；所述動(dòng)物是例如豬、牛、山羊、綿羊、馬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、駱駝科動(dòng)物、兔類動(dòng)物、嚙齒類動(dòng)物及包括人的其他哺乳動(dòng)物、魚和甲殼動(dòng)物。
文檔編號(hào)A61K9/16GK101365427SQ200680047817
公開日2009年2月11日 申請(qǐng)日期2006年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月22日
發(fā)明者丹尼爾·維戈, 厄鮑多·科特, 埃爾奧諾拉·穆納里, 弗朗西斯科·德斯蒙, 瑪麗亞·羅薩里亞·勞羅, 瑪麗亞·路易莎·托雷, 薩拉·斯科卡, 里塔·帕特齊亞·阿昆諾, 馬西莫·福斯蒂妮 申請(qǐng)人:米蘭大學(xué);帕維亞大學(xué);薩勒諾大學(xué)