專利名稱：：一種紅車軸草提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種植物提取物，尤其是涉及一種紅車軸草提取物及其制備方法。技術(shù)背景隨著社會的進(jìn)步與發(fā)展，生活節(jié)奏的加快，工作壓力加大，高強度緊張生活，既而產(chǎn)生一系列植物神經(jīng)功能失調(diào)疾病，如婦女更年期綜合癥等疾病給患者和家庭帶來極大的痛苦。根據(jù)流行病學(xué)的統(tǒng)計估算，更年期婦女占全部女性人口的20%，其中8090%會有更年期綜合癥的癥狀表現(xiàn)。如心腦血管癥狀出現(xiàn)潮熱，出汗，血管痙攣型疼痛，高血壓，眩暈，耳鳴，眼花等；神經(jīng)精神方面情緒不穩(wěn)定，緊張而焦慮，失眠且健忘，有的人甚至性格都發(fā)生了變化，嚴(yán)重的完全類似精神病患者，大多數(shù)抑郁型患者。目前中國更年期婦女約1.3億，其中臨床表現(xiàn)更年期綜合癥的可達(dá)1億人，全球更年期婦女約4.5億，中國更年期婦女占有28%。過去一直認(rèn)為更年期激素替代療法能夠治療和緩解更年期癥狀，還可以預(yù)防心肌梗塞等疾病的發(fā)生，但是據(jù)最新研究表明，更年期激素替代療法不但沒有預(yù)防心血管疾病的作用，且加劇女性患心腦血管病和乳腺癌的危險。據(jù)報道異黃酮可有效減輕更年期的癥狀，具有雌激素樣作用的大豆異黃酮可在女性體內(nèi)發(fā)揮雌激素樣效應(yīng)其抗氧化作用可以延遲女性衰老，使皮膚保持彈性異黃酮還可調(diào)節(jié)絕經(jīng)女性神經(jīng)--內(nèi)分泌系統(tǒng)，使更年期女性的內(nèi)分泌達(dá)到平衡，有效防治更年期綜合征，從而提高老年女性的生活質(zhì)量，異黃酮抗氧化作用可以延遲女性衰老。異黃酮還可調(diào)節(jié)骨代謝，防止鈣等礦物質(zhì)從骨骼中流失，促進(jìn)骨骼形成，從而改善骨密度，適用于骨質(zhì)疏松的預(yù)防。紅車軸草(Tr/fo/ZumpratenseL)為豆科植物，別名也稱為紅三葉草、紅花苜蓿，紅荷蘭翹搖。紅車軸草含有黃酮類物質(zhì)、蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類和維生素等成分。如紅車軸草含有鷹嘴豆芽素A(biochaninA)和B(formonetin)、染料木素(genistein)和大豆素(daidzein0等4種異黃酮，它們在植物中主要在苷形式存在，分別為印度黃檀苷(sissoirin)、芒柄花苷(ononin)、染色木苷9genistin)和大豆苷(daidzin)。紅車軸草以鷹嘴豆芽素A和B含量最高，約占干重的0.1-0.9%，其它異黃酮與黃酮類約為0.08%。紅車軸草還含trifoside、毛蕊異黃酮(calycosin)、柳穿魚素9peclolinarigenin)、紅車軸草素(pratensein)和野靛苷(pseudobaptigenin)等異黃酮成分。目前，發(fā)現(xiàn)紅車軸草有3種黃酮醇類物質(zhì)槲皮素(quercetin)、異槲皮苷(isoquercitrin)和金絲桃苷(hyperoside)。紅車軸草花中還含三葉豆苷(trifolin)、異李鼠素(isorhamnetin)、車軸草醇(pratol)等多種黃酮成分。其它成分包括香豆素和酚羧酸，鮮草中含紫苜蓿酚(dicoumarol)約15.5嗎/g，含痕量的香豆雌酚(coumestrol)，也具雌性植物樣作用，并有水楊酸、香豆酸酚羧酸類化合物；揮發(fā)油，其含量約為0.03%，包括水楊酸甲酯、芐基乙醇、乙酯、2-苯乙醇和乙酯、鄰氨基苯甲酯、丁子香酚以及糠醛等40多種萬分；蛋白質(zhì)、糖和維生素以干重計，蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在生長后期達(dá)23%;含有各種必需氨基酸。糖類質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.4%,其中有蔗糖、葡萄糖、果糖、木糖和淀粉等。全草中尚有胡蘿卜素、VitD和VitE。胡蘿卜素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在開花期最高，a-和P-胡蘿卜素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在春季開花期分別為4.3%和53.6%，在夏季開花期分別為3.2%和45.9%。紅車軸草的藥理作用(1)選擇性抗痙攣、消炎和殺菌作用紅車軸草在體外有抑制草履蟲的作用(0.2%醇浸劑可使草履蟲于30min內(nèi)停止活動)。大豆素具有類似罌粟堿樣的解除平滑肌痙攣作用，大豆苷及大豆素可以緩解高血壓患者的頭痛等癥狀。(2)雌激素樣作用染料木素、鷹嘴豆芽素A和B及大豆素均有雌性激素樣作用，它們與己烯雌酚和雌二醇結(jié)構(gòu)相似，而活性約為己烯雌酚(diethylstilbestrol)的1/10萬，為雌二醇(estradiol)的1/2萬-1/50(以重量計)。紅車軸草作為一植物雌激素有其獨到之處它們幾乎能分布到人體每個細(xì)胞中發(fā)揮作用，這是人體自身激素達(dá)不到的；它們具雙調(diào)節(jié)作用，當(dāng)人體雌激素水平高時，可抑制激素分泌，因它能與雌激素受體結(jié)合，從而阻止了人體自身激素的結(jié)合。反之，當(dāng)人體雌激素水平低時，它們能提供額外的雌激素樣作用。正因如此，紅車軸草在臨床上既被用來治療婦女體內(nèi)雌激素水平升高時的經(jīng)前期綜合征，又被用于治療雌激素降低時的更年期綜合征和絕經(jīng)。(3)紅車軸草也能治療雌激素病如子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位及骨質(zhì)疏松癥.(4)抗癌作用乳腺癌病人血漿中雌激素偏高，植物雌性激素對其有拮抗作用，從而抑制乳腺癌。紅車軸草具有防治婦女多種疾病的多種功效，必將產(chǎn)生良好的社會效益和經(jīng)濟效益。因此，國內(nèi)外對紅車軸草的研究越來越多，也越來越深入。目前，國內(nèi)外對紅車軸草提取物的制備方法大概分以下幾種1、柱層析法此方法采用醇溶媒提取，提取液濃縮離心取藥渣，將藥渣用石油醚或正己垸脫脂干燥，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮后，析晶得到提取物A，將萃取后的藥渣用5090%的醇提取，回收醇，將所得到的析晶后母液及濃縮也調(diào)PH值810，過大孔樹脂后分離，得提取物B,將提取物A與B合并，用醇精致，得到高含量的提取物。此方法可得到較高純度的總異黃酮提取物，但是工藝復(fù)雜，收率低，成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。2、紅車軸草采用醇提取，提取液濃縮干燥，加入石油醚或溶劑油萃取，萃取液干燥得干燥物，干燥物中再加入醇回流提取，提取液減壓濃縮，得濃縮液，濃縮液中加入中性氧化鋁，吸附，用水洗滌，洗滌液干燥，再用乙酸乙酯回流，提取液干燥得總異黃酮提取物。此方法雖然避免了樹脂柱的使用，但將中性氧化鋁代替樹脂柱吸附，仍然避免不了收率低，提取不完全的缺點；其次，再制備過程中使用了大量的有機溶劑，化學(xué)污染比較嚴(yán)重，對工作人員來說，吸入后體內(nèi)代謝比較慢，身體傷害極大；再次，制備歩驟繁瑣，不易操作，因此更不適合工業(yè)化生產(chǎn)。3、溶劑法紅車軸草采用醇提取后干燥所得提取物總異黃酮，但含量多低于20%。
發(fā)明內(nèi)容為了克服上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種紅車軸草提取物；另一個目的就是提供一種工藝簡單、質(zhì)量穩(wěn)定、收率高、成本低、污染小，適合工業(yè)化生產(chǎn)的紅車軸草提取物的制備方法；本發(fā)明還有一個目的就是提供該提取物的制劑。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明在常規(guī)溶劑法的基礎(chǔ)上，采用含水乙醇依次梯度溶解后，最后得到的提取物總異黃酮含量不低于20%。本發(fā)明的一種紅車軸草提取物，是由以下歩驟制備得到的(1)取紅車軸草，用含水低級醇提取，過濾，濃縮得浸膏；(2)水沉，放置，離心得沉淀物；(3)向沉淀物中分別依次加入含水低級醇梯度溶解，離心，取相應(yīng)醇濃度上清液，濃縮干燥即得提取物粉末。歩驟1中所述的提取方法包括但不限于水浸提、水煎提、醇浸提、醇回流提取、醇滲漉等。所述的濃縮方法包括但不限于常壓濃縮、減壓濃縮、反滲透濃縮等。所述的低級醇指指C,C3含水醇溶液，包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇，優(yōu)選乙醇。所述的歩驟(1)中，含水乙醇的濃度為1095%，優(yōu)選5095%乙醇，最佳80%乙醇。所述的歩驟(3)中低級醇濃度依次增加，具體為乙醇濃度為1095%'優(yōu)選30~70%乙醇濃度，最佳4060%。進(jìn)一步，將上述歩驟(2)的沉淀物中加入1040%乙醇溶解，離心，得沉淀物l備用；取上清液濃縮干燥，得提取物粉末a。再進(jìn)一步，將上述的沉淀物1中加入4050%的乙醇溶解，離心，得沉淀物2備用；取上清液干燥得提取物粉末b。更進(jìn)一步，將上述的沉淀物2中加入5070%的乙醇溶解，離心，得沉淀物3備用；取上清液干燥得提取物粉末c。所述的依次得到的沉淀物還可以用更高濃度的乙醇進(jìn)行溶解，直到將沉淀物中的有效成分完全提取出來，凡是利用本發(fā)明的梯度溶解得到的提取物都在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。如沉淀物3中再用7080%乙醇溶解，得提取物，其總異黃酮含量為5.38%。所述本發(fā)明的提取物中總異黃酮包括大豆苷元、染料木素、鷹嘴豆芽素A、刺芒柄花素。所優(yōu)選的提取物a中含總異黃酮為510%;提取物b中總異黃酮含量不低于20%，最佳2030%;提取物c中總異黃酮含量不低于20X，最佳2030%。本發(fā)明紅車軸草的制備方法，包括以下步驟(1)取紅車軸草，用含水乙醇回流提取，過濾，濃縮得浸膏；(2)水沉，放置，離心得沉淀物；(3)向沉淀物中分別依次加入含水乙醇梯度溶解，離心，取不同乙醇濃度上清液，濃縮干燥即得提取物粉末。本發(fā)明優(yōu)選的紅車軸草的制備方法，包括以下步驟(1)取紅車軸草，用1012倍量的5095%乙醇回流提取13此，每次13小時，合并濾液，濾液濃縮干燥得浸膏；(2)浸膏中加水，攪拌，放置，離心得到沉淀物；(3)向沉淀物中分別依次加入1090%乙醇梯度溶解，5080。C攪拌13小時，放置，離心，分別取不同乙醇濃度上清液濃縮干燥即得提取物。本發(fā)明更優(yōu)選的紅車軸草的制備方法，其步驟如下(1)取紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏；(2)稠浸膏加入水至藥材兩倍量，于60。C下攪拌2小時，放置，離心得到沉淀物；(3)向沉淀物中加入1040%乙醇(最佳為30%)至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，離心，得沉淀物i備用，取上清液減壓濃縮至比重為i.io-u5，減壓干燥得到提取物粉末a;向藥渣中加入4050%(最佳為50%)乙醇至藥材兩倍量，于60。C下攪拌1.5小時，離心，得沉淀物2備用，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，；向藥渣中加入5070%乙醇(最佳為60%)至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，離心，得沉淀物3備用，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。本發(fā)明還提供了用本發(fā)明的提取物作為藥物活性制備而成的藥物組合物，可以選用本發(fā)明的提取物粉末a、b、c中一種或一種以上作為藥物活性成分，優(yōu)選提取物粉末b、c。本發(fā)明的藥物組合物，包括提取物和根據(jù)需要該組合物還可以加入藥物可接受的載體，還可以包括其他活性成分。本發(fā)明的組合物，是單位劑量的藥物制劑形式。所述的單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑的每袋等。本發(fā)明的組合物，其中的提取物作為有效組分，其在制劑中所占重量百分比可以是0.199.9%,其余為藥物可接受的載體，按照制劑常規(guī)方法制備。本發(fā)明的組合物，其藥物制劑形式可以是任何口服制劑或注射劑。其中口服制劑包括但不限于片劑，糖衣片劑，薄膜衣片劑，腸溶衣片劑，膠囊劑，硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含片、口崩片、顆粒劑。沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、滴丸劑，微丸劑、栓劑、霜劑、噴霧劑等；注射劑包括但不限于靜脈注射劑，粉針劑、皮下注射劑等。本發(fā)明的組合物，在制備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、e—環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明采用依次梯度溶解，能夠完全將有效組分提取出來，而且紅車軸草中總異黃酮含量不低于20%，現(xiàn)有技術(shù)認(rèn)為單單依照溶劑法而不采用樹脂柱或氧化鋁等進(jìn)行吸附提純，無法制備出總異黃酮含量在20%以上的紅車軸草提取物，克服了技術(shù)偏見。2、本發(fā)明采用依次梯度醇沉的方法，收率高，提取物含量完全提取完全而且穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量可控。3、本發(fā)明中避免大量如石油醚、溶劑油、乙酸乙酯，正己垸等有機溶劑的使用，減少對環(huán)境的污染，減少了化學(xué)溶劑對工作人員身心的侵害。本發(fā)明中僅僅使用了水和不同濃度的乙醇，將毒性和危害性降到最低，同時生產(chǎn)成本低，適合大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。4、本發(fā)明的制備方法，沒有采用過樹脂柱等吸附系統(tǒng)，只是經(jīng)過簡單的溶解，制備歩驟簡單，可操作性好，容易掌握，重現(xiàn)性好。5、本發(fā)明的不同濃度乙醇提取物粉末，即用同一方法制備出不同含量的提取物，根據(jù)制劑的工藝要求可單獨使用也可以合并使用，更有利于工業(yè)化生產(chǎn)。6、本發(fā)明的制備方法中避免了樹脂或氧化鋁等吸附介質(zhì)的使用，降低成本，適合工業(yè)化生產(chǎn)。實驗例提取物中總異黃酮的測定方法采用實施例]制備的提取物進(jìn)行含量測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜迪馬C18柱(4.6mmX200mm，5ym);流動相以0.1。/。H3P04水溶液、乙腈為流動相進(jìn)行梯度洗脫，見表1;檢測波長為254nm，柱溫3(TC。表1流動相梯度表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>對照品溶液的制備精密稱取大豆苷元、染料木素、刺芒柄花素、鷹嘴豆芽素A對照品適量，加甲醇制成每lmL中約含15pg上述對照品的溶液，即得。供試品溶液的制備取三批紅車軸草提取物各25mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲30min，定容，即得。測定法分別取對照品溶液和供試品溶液各l(HtL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定，即得。結(jié)果見表2表2紅車軸草中總異黃酮含量粉末A粉末B粉末ci10.030.0309.629.529.59.828.929.8平均9.629.529.8具體實施例實施例1提取物的制備方法紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于60'C下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入50%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入60%乙醇至藥材兩倍量，于60'C下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。上述的提取物粉末a中含總異黃酮為10%，提取物b中含總異黃酮為30X，提取物c中含總異黃酮為30.0X。實施例2提取物的制備方法車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6CTC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入1040%乙醇至藥材兩倍量，于5(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入4050%乙醇至藥材兩倍量，于5(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入5070%乙醇至藥材兩倍量，于50。C下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。上述的提取物粉末a中含總異黃酮為9.5X，提取物b中含總異黃酮為28%，提取物c中含總異黃酮為26.0X。實施例3提取物的制備方法車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入1040%乙醇至藥材兩倍量，于8(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入40~50%乙醇至藥材兩倍量，于8(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入50~70%乙醇至藥材兩倍量，于8(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。上述的提取物粉末a中含總異黃酮為9.5%，提取物b中含總異黃酮為15%，提取物c中含總異黃酮為26.4%。實施例4提取物的制備方法紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用95%乙醇回流提取兩次，每次1小時，第一次95%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入10%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入50%乙醇至藥材兩倍量，于60'C下攪拌1小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.0-U5，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入60%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。上述的提取物粉末a中含總異黃酮為8%，提取物b中含總異黃酮為20X,提取物c中含總異黃酮為20%。實施例5提取物的制備方法紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用10%乙醇回流提取3次，每次3小時，第一次50%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于60。C下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入40%乙醇至藥材兩倍量，于60。C下攪拌3小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入70%乙醇至藥材兩倍量，于60。C下攪拌3小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為U0-U5，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入90%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌3小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。上述的提取物粉末a中含總異黃酮為15%，提取物b中含總異黃酮為8%，提取物c中含總異黃酮為5%。實施例6提取物的制備方法紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用50%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入50%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入60%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15,減壓干燥得到提取物粉末c。上述的提取物粉末a中含總異黃酮為5X，提取物b中含總異黃酮為15%，提取物c中含總異黃酮為15%。實施例7提取物的制備方法紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，提取物中含總異黃酮10%。實施例8提取物的制備方法取紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，棄去上清液，藥渣備用，向藥渣其中加入50%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末。提取物中含異黃酮含量為25%。實施例9提取物的制備方法紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%乙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，上清液棄去，藥渣備用，向藥渣其中加入50%乙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，上清液棄去，藥渣備用；向藥渣中加入60%乙醇至藥材兩倍量，于60。C下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末。提取物中含總異黃酮含量為25%。例10提取物制劑取實施例1的提取物，提取物粉末a40g，提取物粉末b40g，提取物粉末cl0g，混合均勻后，加入1.5倍量糊精，0.5%蔗糖，1.5%的微晶纖維素，用適量乙醇溶解制成軟材，制粒，6(TC鼓風(fēng)干燥，制粒，整粒，即得顆粒劑。實施例11提取物制劑取實施例l的提取物，提取物粉末a50g，提取物粉末b30.9g，提取物粉末cl5g，均勻混合后，加入5%交聯(lián)聚維酮，0.1%的硬脂酸鎂，50%的微晶纖維素，用適量乙醇溶液制成軟材，制粒，6(TC鼓風(fēng)干燥，制粒，整粒，壓制成片，即得口腔崩解片。實施例12提取物制劑取實施例7的提取物粉末100g，加入100mgPEG，混合均勻，熔融，上滴丸機，制成滴丸。實施例13提取物制劑取實施例8的提取物粉末100g，加入100mgPEG，混合均勻，熔融，上滴丸機，制成滴丸。實施例14提取物制劑取實施例7，8，9中的任意一種提取物粉末0.5g，葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉().9g和蒸餾水lml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝5()()支，即得。實施例15提取物制備紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%甲醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%甲醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收甲醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%甲醇醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入50%甲醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入60%甲醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。實施例16紅車軸草藥材粉碎成粗粉，用80%丙醇回流提取兩次，每次2小時，第一次80%丙醇用量為藥材的12倍，第二次為10倍，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收丙醇至稠浸膏，加入水至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌2小時，冷庫放置過夜，離心得到沉淀物，向其中加入30%丙醇至藥材兩倍量，于60'C下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末a，藥渣備用，向藥渣其中加入50%丙醇至藥材兩倍量，于60。C下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末b，藥渣備用；向藥渣中加入60%丙醇至藥材兩倍量，于6(TC下攪拌1.5小時，室溫放置過夜，離心取上清液減壓濃縮至比重為1.10-1.15，減壓干燥得到提取物粉末c。權(quán)利要求1、一種紅車軸草的提取物，其特征在于，是由以下步驟得到的(1)取紅車軸草，用含水低級醇提取，過濾，濃縮得浸膏；(2)水沉，放置，離心得沉淀物；(3)向沉淀物中分別依次加入含水低級醇梯度溶解，離心，取相應(yīng)醇濃度上清液，濃縮干燥即得提取物粉末。2、如權(quán)利要求1所述的一種紅車軸草的提取物，其特征在于，所述的步驟(3)中低級醇濃度依次增加。3、如權(quán)利要求1所述的一種紅車軸草提取物，其特征在于所述的低級醇為乙醇。4、如權(quán)利要求1所述的一種紅車軸草提取物，其特征在于所述低級醇的濃度為1095%。5、一種紅車軸草的提取物，其特征在于權(quán)利要求l的沉淀物中加入1040%乙醇溶解，離心，得沉淀物(1)備用，取上清液濃縮干燥得提取物粉末，命名為提取物(a)。6、一種紅車軸草提取物，其特征在于取權(quán)利要求5的沉淀物(1)，向其中加入4050%乙醇溶解，離心，得沉淀物(2)備用，取上清液濃縮干燥得提取物粉末，命名為提取物(b)。7、一種紅車軸草提取物，其特征在于取權(quán)利要求6的沉淀物(2)，向其中加入50%70%乙醇溶解，離心，得沉淀物(3)備用，取上清液濃縮干燥得提取物粉末，命名為提取物(c)。8、如權(quán)利要求6或7所述的紅車軸草提取物，其特征在于所述的提取物中總異黃酮含量不低于20%。9、一種藥物組合物，其特征在于包含權(quán)利要求18任意一項提取物。10、如權(quán)利要求1所述的紅車軸草提取物的制備方法，其步驟如下(1)取紅車軸草粗粉，用1012倍，5095%乙醇提取13次，每次13小時，過濾，合并濾液，濃縮回收乙醇至稠浸膏；(2)稠浸膏加入水，攪拌，放置，離心得到沉淀物；(3)向沉淀物中分別依次加入1090%乙醇梯度溶解，508(TC攪拌13小時，放置，離心，分別取相應(yīng)乙醇濃度上清液，濃縮干燥即得提取物。全文摘要本發(fā)明公開一種紅車軸草提取物及其制備方法，取紅車軸草，用含水乙醇回流提取，濾液濃縮得浸膏；浸膏水沉，放置，離心得沉淀物；向沉淀物中分別依次加入含水乙醇梯度醇沉，離心，取相應(yīng)乙醇濃度上清液，濃縮干燥即得提取物粉末。該方法總異黃酮含量不低于20％，操作簡單，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A61K133/00GK101396422SQ200710061218公開日2009年4月1日申請日期2007年9月28日優(yōu)先權(quán)日2007年9月28日發(fā)明者巖劉,劉順航,平王,閆立萍,馬素珍申請人:天津天士力現(xiàn)代中藥資源有限公司