專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種抗腫瘤化合物紅波羅花堿a及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種從植物紅波羅花中分離得到的新的抗腫瘤生物堿類(lèi)化合物紅波羅花堿A(DelavatineA)及其制備方法和應(yīng)用。技術(shù)背景腫瘤是引起人類(lèi)死亡的主要原因之一。中國(guó)衛(wèi)生部日前公布2006年城鄉(xiāng)居民主要死亡原因。統(tǒng)計(jì)顯示，惡性腫瘤已成為首要死因?？梢?jiàn)腫瘤的預(yù)防和治療十分迫切。藥物治療是腫瘤的主要治療手段之一。目前，雖然開(kāi)發(fā)出了幾十種抗腫瘤藥物，有效的延長(zhǎng)了患者的生命或者提高了患者的生存質(zhì)量。其中有些抗腫瘤的藥物治療療效非常顯著，如藥物治療小兒急性白血病等。但腫瘤的藥物研究和開(kāi)發(fā)還面臨巨大挑戰(zhàn)，如抗腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥物，其副作用明顯，限制了這些藥物療效的發(fā)揮。著名腫瘤病因?qū)W家、中國(guó)工程院院士程書(shū)鈞認(rèn)為當(dāng)今醫(yī)學(xué)對(duì)于腫瘤的防治依然處于初級(jí)階段。中藥有幾千年的人體毒性實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，也許中藥會(huì)在抗腫瘤方面走在世界的前列。從天然產(chǎn)物中尋找高效低毒的抗腫瘤活性的先導(dǎo)化合物一直是新藥研究的熱點(diǎn)。紫崴科角蒿屬植物IncarvilleaL.全球共有14種，我國(guó)有10種，多分布于西南地區(qū)，此外東北、華北、西北等地區(qū)，其中5種(角蒿，毛子草，紅波羅花，雞肉參，藏波羅花)供藥用，在民間主要用于治療肝炎、菌痢等。對(duì)角蒿屬植物的研究較少，1990年以來(lái)遲玉明等人對(duì)角蒿I.5/朋似&Lam.和毛子草I.wgwto(Royle)Royle進(jìn)行了化學(xué)成分和藥理活性的研究。紅波羅花(/wan^/eacfe/ava力，是紫葳科角蒿屬(/恥an^7/^L.)植物，多年生無(wú)莖草本，主要分布在云南和四川。紅波羅花的根部做為雞肉參入藥。味甘、淡，性溫。補(bǔ)氣益血。主治病后氣血不足，頭暈神疲，產(chǎn)后少乳(《中華本草》編委會(huì)，《中華本草》，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社.1999,第7分冊(cè)，426-427)。目前從藥用植物中分離具有抗腫瘤的活性成分是化學(xué)工作者的熱點(diǎn)之一。而目前對(duì)紅波羅花的化學(xué)成分研究不多，因此我們對(duì)紅波羅花進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，以期從其中分離得到具有良好的抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有良好抗腫瘤效果的天然化合物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明是從生長(zhǎng)在中國(guó)云南洱源縣的紅波羅花中提取分離得到的一種新的生物堿類(lèi)化合物，命名為DelavatineA，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:上述化合物的制備方法如下(l)提取將紅波羅花干燥全草，粉碎，以80。％乙醇回流提取2-4次，每次1.5-2.5小時(shí)，提取液減壓濃縮成浸膏，加水稀釋后用HC1溶液調(diào)Ph至2-3,過(guò)濾，得濾液和濾渣，濾液加NaOH溶液調(diào)Ph至10-11，用氯仿萃取，得到氯仿部位；(2)分離將上述氯仿部位應(yīng)用硅膠柱層析，以體積為20:l2:l的氯仿-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含紅波羅花堿A的流分，再經(jīng)C18反相柱層析，以重量比為50:100-70:100的甲醇-水進(jìn)行洗脫，薄層層析檢測(cè)，得紅波羅花堿A純品。本發(fā)明生物堿類(lèi)化合物DelavatineA為黃色油狀物，[ot]+56°(c0.05,CH3C1);碘化鉍鉀反應(yīng)陽(yáng)性；由電噴霧離子質(zhì)譜信號(hào)m/z278[M+H]+，高分辨質(zhì)譜得該化合物精密質(zhì)量數(shù)為278.1546[M+H]+，推算其分子式為<:1911191^0;紫外光譜在273nm和249nm有強(qiáng)吸收。&和13(^核磁共振數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)表明，該化合物物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。表lDelavatineA的iH和"C核磁共振數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>"Cand'H5ppmrecordedat600MHz偶合常數(shù)具體實(shí)施方式下面的實(shí)施例可以使本專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1:紅波羅花(/m^rz7/eaA/ava力全草3kg，用80%乙醇20L回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮得60g浸膏，加水稀釋后用2n/。HCl,調(diào)PH至2-3,過(guò)濾，得濾液和濾渣，濾液加20。/。NaOH調(diào)PH至11，用氯仿萃取，得到氯仿部位；減壓濃縮萃取部位，得到粗品25g。將粗品與50g硅膠混合拌樣，加到已裝好的硅膠柱頂端，以氯仿-丙酮(體積比為20:12:1)系統(tǒng)梯度洗脫，收集含DelavatineA的流分，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇-水(重量比為50%-70%)進(jìn)行洗脫，薄層層析檢測(cè)，得DelavatineA純品212mg。實(shí)施例2:DelavatineA的細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料1.1、受試樣品DelavatineA用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000pg/ml的溶液或均勻的混懸液，然后用含匿SO的PBS(-)稀釋。1.2、細(xì)胞株A549(人肺癌細(xì)胞)LOVO(人腸癌細(xì)胞)6T-CEM(人T細(xì)胞白血病細(xì)胞)HL-60(人白血病細(xì)胞)HepG-2(人肝癌細(xì)胞)1.3、培養(yǎng)液RPMI1640+15。/oNBS+雙抗1.4、其他材料全自動(dòng)酶標(biāo)儀型號(hào)WellscanMK-2，生產(chǎn)廠商Labsystems進(jìn)口96孔培養(yǎng)板等。2、試驗(yàn)方法MTT法96孔板每孔加入濃度為46Xl()4個(gè)/ml的細(xì)胞懸液lOOpl，置37。C，5%032培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后，加入樣品液，設(shè)雙復(fù)孔，37°C，5。/。C02作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20nl，作用4h后加入溶解液，100^1/孔，置培養(yǎng)箱內(nèi)，溶解后用MK-2全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)570nmOD值。3、試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表2，結(jié)果顯示，DelavatineA對(duì)人肺癌細(xì)胞，人腸癌細(xì)胞，人T細(xì)胞白血病細(xì)胞，人白血病細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞均有較好的抑制活性，DelavatincA有很好的抗腫瘤作用，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。實(shí)施例3:DelavatineA對(duì)小鼠S180肉瘤(實(shí)體型)的療效實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料1.1受試樣品DelavatineA用少量吐溫一80助溶后用0.5%CMC配成溶液。1.2動(dòng)物品系昆明種小鼠來(lái)源第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屮心提供。合格證號(hào)滬動(dòng)合證字107號(hào)體重18—20g性別雌性。1.3移植性腫瘤小鼠S180肉瘤，由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院傳代維持。2、實(shí)驗(yàn)方法取生長(zhǎng)良好的小鼠S180肉瘤腹水，用生理鹽水以l:4稀釋?zhuān)恐恍∈笠钙は陆臃N0.2ml，隨機(jī)分組，分為對(duì)照組，環(huán)磷酰胺組(CTX組，20mg/kg，ipX7)、LID-15-1(5mg/kg)組，接種后次日起給藥，給藥體積為0.5ml/20g體重，連續(xù)灌胃7天。接種后10日脫頸處死動(dòng)物，稱(chēng)動(dòng)物體重后解剖取瘤塊，稱(chēng)瘤重。結(jié)果判定根據(jù)以下公式對(duì)照組平均瘤重一給藥組平均瘤重腫瘤抑制率％=-x100%對(duì)照組平均瘤重3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果DdavatineA有顯著的抑瘤作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。表2DelavatineA對(duì)人體腫瘤細(xì)胞的體外增殖抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3DelavatineA對(duì)小鼠S180肉瘤的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與對(duì)照組比較*P<0.05,**P<0.01。權(quán)利要求1、一種抗腫瘤化合物紅波羅花堿A，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下id="icf0001"file="S2008100345393C00011.gif"wi="45"he="32"top="39"left="95"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2、如權(quán)利要求1所述的抗腫瘤化合物紅波羅花堿A的制備方法，其特征在于具體步驟如下(1)提取將紅波羅花干燥全草，粉碎，以80%乙醇回流提取2-4次，每次1.5-2.5小時(shí)，提取液減壓濃縮成浸膏，加水稀釋后用HC1溶液調(diào)Ph至2-3,過(guò)濾，得濾液和濾渣，濾液加NaOH溶液調(diào)Ph至10-11，用氯仿萃取，得到氯仿部位；(2)分離將上述氯仿部位應(yīng)用硅膠柱層析，以體積為20:12:1的氯仿-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含紅波羅花堿A的流分，再經(jīng)C18反相柱層析，以重量比為50:100-70:100的甲醇-水進(jìn)行洗脫，薄層層析檢測(cè)，得紅波羅花堿A純品。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗腫瘤化合物紅波羅花堿A在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
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，具體為一種抗腫瘤化合物紅波羅花堿A。該化合物是一種新的生物堿化合物，從中藥材紅波羅花中提取獲得。該化合物精密質(zhì)量數(shù)為278.1546[M+H]⁺，推算其分子式為C₁₉H₁₉NO；紫外光譜在273nm和249nm有強(qiáng)吸收。實(shí)驗(yàn)表明，該化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。文檔編號(hào)A61K36/185GK101245048SQ200810034539公開(kāi)日2008年8月20日申請(qǐng)日期2008年3月13日優(yōu)先權(quán)日2008年3月13日發(fā)明者濤盧,張衛(wèi)東,徐?？?李慧梁,柳潤(rùn)輝,沈云亨,娟蘇申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)