專利名稱：：麥角甾酮在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及麥角齒酮在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：豬荅[尸o/少/oms1/m&〃Wws(Pers.)Fries]是多孔菌科植物，它的干燥菌核稱為藥用豬苓，是常用中藥，在亞洲(主要分布在中國(guó)、曰本，東南亞國(guó)家)、歐洲及北美洲都有分布，也在藥用。豬苓在中國(guó)具有2500多年的藥用歷史，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在以后的《中華本草》、《傷寒論》都有記載。為《中國(guó)藥典》所收錄。具有利尿、抗癌和抗菌的作用，利水滲濕是主要功能。許多利水復(fù)方制劑含有豬苓，例如豬苓湯、豬吝丸、豬吝散、五荅散、分消湯、茵陳五芬散等，這些復(fù)方在臨床應(yīng)用中顯示了很好的療效，而且至今未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道它的毒性反應(yīng)。此外還有豬荅多糖注射劑、復(fù)方豬苓多糖膠丸及豬苓片劑、粉劑等。豬苓的化學(xué)成分主要為多糖類(lèi)和甾體類(lèi)化合物。1973年，曰本學(xué)者M(jìn)iyazaki等報(bào)道了從豬苓中得到一個(gè)水溶性多糖(GU-1)，后來(lái)將其開(kāi)發(fā)為抗腫瘤藥，用于臨床，引起了人們對(duì)豬苓多糖成分的關(guān)注。因此，長(zhǎng)期以來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)豬苓的研究主要集中在多糖的化學(xué)成分、藥理、藥效及應(yīng)用研究。而傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于豬苓的應(yīng)用主要集中在利尿和治療腎疾病方面，起利尿作用的化學(xué)成分一直不明確。另外，目前存在的利尿藥有吲達(dá)帕胺、速尿藥物的缺點(diǎn)是大量應(yīng)用容易引起低血鉀、心律不齊；噻嗪類(lèi)利尿劑(如氯噻嗪、氯噻酮和雙氫克尿塞)有一個(gè)很大的缺點(diǎn)，它們常常會(huì)降低體內(nèi)的鉀含量，另外，嚷嗪類(lèi)利尿劑可增加患者膽汁中膽固醇的飽和度，可能增加膽囊炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供麥角甾酮在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用。2010版《中國(guó)藥典》收載豬苓生藥的功能主治利水滲濕，用于小便不利、水腫、泄瀉、淋濁、帶下。發(fā)明人在對(duì)豬苓的化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上,利用利尿作用為藥理指標(biāo)，篩選與其功能相吻合的有效部位以及有效成分。采用以生理鹽水負(fù)荷的水潴留的動(dòng)物模型對(duì)其中的甾體類(lèi)化合物進(jìn)行利尿篩選，發(fā)現(xiàn)麥角甾酮[ergosta-4，6，8(14)，22-tetraen-3-one]具有較好的利尿效果，為豬苓利尿作用的有效部位。Yuan等[D.Yuan,J.Mori,K.I.Komatsu,T.Makino，Y.Kano.CTze附.尸/wm.5w〃.27(2004)867-870.]對(duì)豬芬中的麥角甾酮進(jìn)行了利尿成分研究，發(fā)現(xiàn)(1)對(duì)正常大鼠的作用，麥角齒酮給予組與麥角甾酮未給予組之間，尿量及Na/K排泄量比無(wú)明顯差異，說(shuō)明麥角甾酮對(duì)正常大鼠無(wú)利尿作用；(2)對(duì)摘除腎上腺及給予DOCA大鼠的作用麥角甾酮給予組與麥角甾酮未給予組之間，尿量及Na/K排泄量比有明顯差異。(3)對(duì)摘除腎上腺及未給予DOCA大鼠的作用麥角甾酮給予組與麥角甾酮未給予組之間，尿量及Na/K排泄量比無(wú)明顯差異。為證實(shí)麥角甾酮是否有利尿作用，發(fā)明人研究了麥角甾酮對(duì)正常大鼠尿量的影響。結(jié)果顯示，小、中、大3個(gè)劑量的麥角甾酮尿量有增加的趨勢(shì)，與生理鹽水組比較是非常顯著性差異(P〈0.01)。麥角甾酮3個(gè)不同的劑量組大鼠6h尿量低于速尿組，說(shuō)明利尿程度弱于速尿，與速尿組比較，麥角齒酮的利尿作用呈現(xiàn)溫和、持久的特點(diǎn)。發(fā)明人還研究了麥角甾酮對(duì)大鼠尿液中Na+、K+及Cr排出量的影響。結(jié)果顯示，3個(gè)不同劑量麥角甾酮Na+、K+及Cr的排出量分別是生理鹽水對(duì)照組Na+、K+及Cr排出量的55.5倍、3~4倍、3.5-4.0倍。3個(gè)不同劑量麥角甾酮Na+和B^排出量高于速尿組Na+和K+排出量，3個(gè)不同劑量麥角溢酮Na+/K+比值也均高于生理鹽水對(duì)照組和速尿組，且隨著麥角甾酮的劑量的增加的NaVK+比值增大，說(shuō)明麥角甾酮對(duì)排出Na+、K+及CT作用較強(qiáng)，提示麥角齒酮具有較好的利尿作用。具體實(shí)施方式1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物速尿片(呋塞米)江蘇林海藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)010730;麥角甾酮[ergosta-4，6，8(14)，22-tetraen-3-one]是從豬苓生藥中分離并通過(guò)各種波譜與光譜技術(shù)(111NMR，13CNMR，2DNMR，MS,UV和IR)鑒定結(jié)構(gòu)，然后通過(guò)有機(jī)合成的方法合成此化合物，產(chǎn)率為40%。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠，體重200~260g,雄性，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。1.3實(shí)驗(yàn)儀器大鼠代謝籠，TD型電子天平，美特列-托利多十萬(wàn)分之一分析天平。2方法與結(jié)果2.1麥角甾酮的合成合成路線1:將5.00g麥角甾醇溶于丙酮，然后把鉻酐的硫酸溶液20ml慢慢滴加到在0'C的麥角甾醇的丙酮溶液，在0'C攪拌8h之后，然后加入異丙醇，減壓回收丙酮，加蒸餾水有沉淀出現(xiàn)，放置，過(guò)濾，固體物進(jìn)行干燥。取干燥的固體物和DDQ在丙酮中加熱回流4h，放置至室溫，過(guò)濾，減壓回收丙酮得到固體物，此固體物過(guò)100-200目氧化鋁柱，洗脫劑為苯-二氯甲烷，最后得到2.08麥角甾酮。合成路線2:將5.00g麥角甾醇溶于丙酮，然后一定比例的草酰氯、DMSO、三乙胺溶液30ml加入到在0。C的麥角甾醇的丙酮溶液，在0。C撹拌10h之后，然后加入異丙醇，減壓回收丙酮，加蒸餾水有沉淀出現(xiàn)，放置，過(guò)濾，固體物進(jìn)行干燥。取干燥的固體物和DDQ在丙酮中加熱回流3h，放置至室溫，過(guò)濾，減壓回收丙酮得到固體物，此固體物過(guò)100-200目氧化鋁柱，洗脫劑為苯-二氯甲烷，最后得到1.5g麥角甾酮。合成路線3:將5.00g麥角甾醇溶于三氯甲烷，將IBX試劑(2-碘?；郊姿?30ml慢慢滴加到在0。C的麥角甾醇的三氯甲烷溶液，在0。C攪拌12h之后，然后加入異丙醇，減壓回收三氯甲烷，加蒸餾水有沉淀出現(xiàn)，放置，過(guò)濾，固體物進(jìn)行干燥。取干燥的固體物和DDQ在三氯甲烷中加熱回流6h，放置至室溫，過(guò)濾，減壓回收三氯甲烷得到固體物，此固體物過(guò)100-200目硅膠柱，洗脫劑為苯-二氯甲烷，最后得到1.3g麥角甾酮。2.2利尿?qū)嶒?yàn)方法將各大鼠按5ml/100g生理鹽水灌胃，置入代謝籠內(nèi)收集2h尿液，選用尿量達(dá)灌胃量的40%以上者為合格動(dòng)物。篩選利尿?qū)嶒?yàn)合格大鼠57只，體重200260g,c^大鼠，隨機(jī)分生理鹽水組為15只，速尿組為12只，其它30只每組10只，組別與劑量分別為生理鹽水對(duì)照組1.00ml/100g、速尿組20mg/kg、麥角甾酮5.0、10.0、20.0mg/kg劑量組。與禁食(不禁水)24h后各組均按4ml/100g體重灌胃給予生理鹽水負(fù)荷，并用手輕壓腹部使其排盡余尿，各組均按lml/100g體重灌胃。給藥后立即將大鼠分別放入方形不銹鋼的代謝籠中，每籠1只。給藥后在代謝籠下面放置帶刻度的試管，每小時(shí)記錄尿液l次，連續(xù)收集6小時(shí)尿量(ml),記錄每小時(shí)每只動(dòng)物的尿量，計(jì)算每組動(dòng)物每小時(shí)的尿量的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算6h每組動(dòng)物總尿量的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，測(cè)定尿液的pH值，并測(cè)定尿樣中Na+、K+及Cr的量(mg),并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1麥角甾酮對(duì)大鼠尿量的影響表1顯示，小、中、大3個(gè)劑量的麥角甾酮尿量有增加的趨勢(shì)，與生理鹽水組比較是非常顯著性差異(P<0.01)。若以對(duì)照組尿量為100%，則3組尿量增加百分率分別為33.4%、32.5%、46.8%。增加率均超過(guò)30%,提示麥角甾酮有較好的利尿效果。但麥角甾酮3個(gè)不同的劑量組大鼠6h尿量低于速尿組，說(shuō)明利尿程度弱于速尿，與速尿組比較，麥角甾酮的利尿作表l正常大鼠生理鹽水負(fù)荷的利尿作用(x±SmL)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，與生理鹽水對(duì)照組比*P<0.05,**P<0.01，***P<0.001表2麥角甾酮對(duì)正常大鼠中Na+、K+、cr無(wú)機(jī)離子含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>用呈現(xiàn)溫和、持久的特點(diǎn)。2.2.2麥角甾酮對(duì)大鼠尿液中Na+、K+及Cr排出量的影響。表2顯示，從Na+、K+及Cr排出量結(jié)果可知，麥角甾酮在增加尿量的同時(shí)，也可明顯增加電解質(zhì)Na+、K+及Cr的排出特別是Na+排出，3個(gè)不同劑量麥角甾酮Na+、K+及Cr的排出量分別是生理鹽水對(duì)照組Na+、K+及Cr排出量的5~5.5倍、3~4倍、3.5~4.0倍。3個(gè)不同劑量麥角甾酮Na+和K+排出量高于速尿組Na+和K+排出量，3個(gè)不同劑量麥角甾酮NaVK+比值也均高于生理鹽水對(duì)照組和速尿組，且隨著麥角甾酮的劑量的增加的>^+/{^比值增大，說(shuō)明麥角甾酮對(duì)排出Na+、K+及Cr作用較強(qiáng)。麥角甾酮的利尿作用可能主要是由于抑制了腎小管對(duì)電解質(zhì)和水的重吸收而產(chǎn)生的，麥角齒酮的利尿作用也可能是拮抗醛固酮使Na+/K+平衡發(fā)生改變。結(jié)果表明，與生理鹽水對(duì)照組比較，麥角甾酮大、中、小劑量組和速尿組，麥角甾酮均能夠明顯提高大鼠尿的排出量(P<0.01),且麥角甾酮對(duì)排出Na+、K+及Cr作用較強(qiáng)，提示麥角甾酮具有較好的利尿作用，3結(jié)論麥角甾酮對(duì)正常的大鼠有較好的利尿作用，且利尿作用維持時(shí)間可高達(dá)6h以上，隨藥量的增加利尿作用增強(qiáng)，其利尿作用雖然不及速尿快，但是卻比速尿作用時(shí)間長(zhǎng)，具有長(zhǎng)效、毒副作用低等特點(diǎn)，可為臨床提供一種新的利尿藥物?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，即使給予大劑量的豬苓，均無(wú)明顯的毒性反應(yīng)。8權(quán)利要求1、麥角甾酮在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及麥角甾酮在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用。豬苓生藥的功能主治利水滲濕，用于小便不利、水腫、泄瀉、淋濁、帶下。發(fā)明人在對(duì)豬苓的化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上，利用利尿作用為藥理指標(biāo)，篩選與其功能相吻合的有效部位以及有效成分。采用以生理鹽水負(fù)荷的水潴留的動(dòng)物模型對(duì)其中的甾體類(lèi)化合物進(jìn)行利尿篩選，發(fā)現(xiàn)麥角甾酮具有較好的利尿效果，為豬苓利尿作用的有效部位。文檔編號(hào)A61K31/575GK101596201SQ20091002327公開(kāi)日2009年12月9日申請(qǐng)日期2009年7月10日優(yōu)先權(quán)日2009年7月10日發(fā)明者孫文基,謝人明,趙英永申請(qǐng)人:西北大學(xué)