專利名稱：一種三尖杉內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中的新化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，具體地說是涉及一種三尖杉(Cephalotaxus fortunei)內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物中的新化合物，即一種木霉屬內(nèi)生真菌深綠木霉Trichoderma atroviride發(fā)酵產(chǎn)物中新化合物Trichodermanin B ；此外，本發(fā)明還涉及該化合物的的制備方法，以及iTrichodermanin B的用途。
背景技術：
內(nèi)生真菌(Endophytic fungi)是指在生活史中某一階段或整個階段存在于健康植物組織內(nèi)部，對植物組織沒有引起明顯病癥或對宿主沒有造成明顯傷害的真菌。全世界已經(jīng)研究過內(nèi)生真菌的植物約有400種。自從1993年短葉紅豆杉Taxus brevifolia的韌皮部分離到一株產(chǎn)抗癌物質(zhì)紫杉醇的內(nèi)生真菌。近二十年來發(fā)表的關于植物內(nèi)生真菌的研究中涉及到的藥用植物有47科110余種，并且研究多集中在內(nèi)生真菌對植物影響的生理生化機制，生物轉化，次生代謝物中的活性物質(zhì)分離提取，以及活性此生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量調(diào)控等方面。這些都充分說明內(nèi)生真菌可以作為生物活性代謝產(chǎn)物的潛在資源庫，具有很大的深入研究的價值。三尖杉C印halotaxus fortune Hook. f.又名榧子、血榧、石榧，為三尖杉科三尖杉屬，是我國亞熱帶特有的重要藥源植物，其木材堅實，有彈性，具有多種用途，種子榨油可供制皂及油漆，果實入藥有潤肺、止咳，消積之效，其葉、枝，種子及根等可提取多種植物堿 (三尖杉堿，三尖杉酯堿，高三尖杉酯堿等)，可治療癌癥(其中主要用于提煉高三尖杉酯堿用于治療急性粒細胞性白血病)，所以三尖杉是一種具有多種用途的重要野生經(jīng)濟植物，具有多方面的保護價值。由于其良好的抗癌活性，目前三尖杉植物資源被過度利用，資源數(shù)量急劇減少，處于漸危狀態(tài)。若不加以保護有可能進一步陷入瀕危境地。因此，尋找與之相關的活性產(chǎn)物新來源，是十分需要和迫切的。而內(nèi)生真菌正是其中一個很好的可以深入研究的活性代謝產(chǎn)物的來源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種三尖杉內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物中的新化合物， 并提供該化合物的制備方法和用途。發(fā)明人在對三尖杉內(nèi)生真菌的研究中，發(fā)現(xiàn)了一株木霉屬內(nèi)生真菌，即深綠木霉 Trichoderma atroviride,具有較好的抗稻瘟霉活性，發(fā)明人對其發(fā)酵產(chǎn)物在提取、分離和純化方面進行了系統(tǒng)的研究，得到一種新化合物Trichodermanin B。進一步研究還發(fā)現(xiàn)該化合物的結構如下述結構式所示，其分子式為C15H28O3，分子量為256。
權利要求
1.具有下述結構式的化合物，其分子式為C15H28O3，分子量為256。
2.權利要求1所述的化合物的制備方法，以深綠木霉Trichodermaatrovirid為發(fā)酵菌種，先后采用液體發(fā)酵、溶劑萃取和硅膠色譜柱分離方法分離得到，包括如下步驟(1)菌種的準備使用PDA培養(yǎng)基，高溫滅菌，制成斜面，置于常溫狀態(tài)下，無雜菌生長時，接種深綠木霉 Trichoderma atrovirid菌絲體，于常溫下培養(yǎng)，作為菌種；(2)發(fā)酵種子液制備在多個錐形瓶中分別裝入液體培養(yǎng)基；于高溫滅菌后，進行接種Trichoderma atrovirid菌種，常溫下振蕩培養(yǎng)，將該培養(yǎng)物作為種子；(3)接種準備發(fā)酵瓶，發(fā)酵培養(yǎng)基適量，培養(yǎng)基組成與種子培養(yǎng)基相同，高溫滅菌，接種，常溫下震蕩培養(yǎng)，真菌即可發(fā)酵成熟；(4)萃取待真菌發(fā)酵成熟后，分別收集發(fā)酵液和菌絲體①發(fā)酵液的處理方法待真菌發(fā)酵成熟后，過濾去菌絲體，對發(fā)酵成熟的濾液層進行乙酸乙酯部位的萃取，將乙酸乙酯部位合并、濃縮；②菌絲體的處理方法烘干菌絲體，用乙醇浸泡，再以乙醇為溶劑超聲輔助萃取多次， 合并、濃縮乙醇；(5)單體分離純化將發(fā)酵物萃取濃縮后的浸膏，用硅膠色譜柱分離，洗脫液的極性為石油醚丙酮 =15 1，以IOml為單位收集洗脫液，將第15管收集液重結晶，即可得到新化合物 Tri choderman inB0
3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征是，( 發(fā)酵種子液制備中，常溫下振蕩培養(yǎng)是指 28°C、180r · min-1、培養(yǎng) 48h。
4.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征是，(3)接種中，常溫下震蕩培養(yǎng)是指觀！、 180r · mirT1，培養(yǎng) 6-7 天。
5.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征是，菌絲體的處理方法包括如下步驟將菌絲體于30-70°C下烘干，用乙醇浸泡12-48小時，再以乙醇為溶劑超聲輔助萃取1-5次，每次 10-50分鐘，合并、濃縮乙醇。
6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征是，將菌絲體于50°C烘干，用乙醇浸泡M 小時，再以乙醇為溶劑超聲輔助萃取3次，每次30分鐘。
7.權利要求1所述的化合物在制備抗真菌的藥物中的應用。
8.權利要求1所述的化合物在制備抗病毒的藥物中的應用。
9.權利要求1所述的化合物在制備抗腫瘤的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以一株三尖杉內(nèi)生真菌深綠木霉Trichoderma atroviride為來源分離制備的具有下述結構式的化合物Trichodermanin B，其分子式為C15H28O3，分子量為256。本發(fā)明還公開了該化合物的制備方法，并通過體外實驗發(fā)現(xiàn)其具有一定的抗真菌、抗病毒和抗腫瘤活性。本發(fā)明為新的活性藥物開發(fā)打下了基礎。
文檔編號A61K31/343GK102464634SQ20101054158
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月11日 優(yōu)先權日2010年11月11日
發(fā)明者孫培欣, 孫慧, 鄭承劍, 韓婷, 馬文輝 申請人:閱微生物技術(上海)有限公司