專利名稱：用于多種藥物遞送的粒子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含兩種或更多種活性劑的微粒狀藥物遞送組合物。
背景技術(shù)：
指向單個(gè)分子靶標(biāo)的抗癌劑經(jīng)常顯示有限的效力、差的安全性和差的耐藥性分布?；蚪M革命和系統(tǒng)生物學(xué)的進(jìn)步已經(jīng)識(shí)別出潛在的協(xié)同療法，可同時(shí)用于更有效地治療癌癥。然而，多種治療藥物的靶向遞送具有困難。盡管可非共價(jià)地將藥物包膠在聚合物納米粒子中并以調(diào)節(jié)的方式釋放它們，但是對(duì)于組合藥物遞送，包膠策略的使用能夠在包膠和釋放多種藥物中導(dǎo)致批次間差異性，尤其是當(dāng)使用具有不同溶解度、電荷和分子量的藥物吋。

發(fā)明內(nèi)容
以時(shí)間空間調(diào)節(jié)的方式將多種藥物或候選藥物有效遞送至特定疾病細(xì)胞和組織(例如，遞送至癌細(xì)胞，例如，遞送至特定器官或組織中的癌細(xì)胞)的納米技術(shù)的發(fā)展能夠潛在地克服當(dāng)前面臨的治療挑戰(zhàn)。本發(fā)明提供了用于控制遞送組合物的形成和活性劑從藥物遞送組合物如粒子釋放的方法和組合物。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于制備藥物遞送組合物如粒子的方法，所述藥物遞送組合物包含與聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的聚合物)結(jié)合的活性剤。本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，通過(guò)工程化和共混不同的藥物官能化和配體官能化聚合物，可將能夠遞送兩種、三種或更多種藥物的粒子可再現(xiàn)地工程化和表征。另外，這些方法允許調(diào)整藥物釋放和藥代動(dòng)力學(xué)的特征，例如單獨(dú)地對(duì)于每種類型的藥物，例如，與活性劑的特征(例如，溶解度、電荷、分子量、半衰期和/或生物分布特征)無(wú)關(guān)。此夕卜，通過(guò)靶向藥物加載粒子至特定組織或細(xì)胞，例如，癌細(xì)胞，能夠?qū)崿F(xiàn)協(xié)同藥物效果，其能夠改變活性劑的生物分布。這能夠轉(zhuǎn)化成較好的效カ和耐受性，從而使活性劑適合于潛在的臨床發(fā)展。在ー個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于包含聚合物基質(zhì)的粒子，所述聚合物基質(zhì)包含第一活性劑和第二活性剤，其中將所述聚合物基質(zhì)設(shè)置成提供所述第一和第二活性劑各自的釋放動(dòng)力學(xué)，使得所述第一和第二活性劑各自的少于50%在將粒子在約37° C懸浮在中性水溶液(例如，緩沖鹽水溶液(例如，PBS))中的最初兩個(gè)小時(shí)(例如，最初的4，6，8，10，12，15，20，25，或30小吋)內(nèi)釋放。在一些實(shí)施方案中，所述聚合物基質(zhì)還包含ー種或多種另外的活性剤，以及也可設(shè)置所述聚合物基質(zhì)，提供另外活性劑中的一種或多種的控制的(例如，類似的)釋放動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施方案中，將所述基質(zhì)設(shè)置成獨(dú)立地提供所述第一和第二活性劑各自的釋放動(dòng)力學(xué)，使得少于50%的第一活性劑在最初的兩個(gè)小時(shí)(例如，最初的4，6，8，10，12，15，20，25，或30小吋)內(nèi)釋放以及少于50%的第二活性劑在最初的兩個(gè)小時(shí)(例如，最初的4，6，8，10，12，15，20，25，或30小時(shí))內(nèi)釋放。在另一方面，本發(fā)明的特征在于包含聚合物基質(zhì)的粒子，所述聚合物基質(zhì)包含第一活性劑和第二活性剤，其中設(shè)置所述聚合物基質(zhì)，使得所述第一和第二活性劑各自在受試者的循環(huán)中具有至少30分鐘、至少ー個(gè)小時(shí)或至少兩個(gè)小時(shí)(例如，至少4，6，8，10，12，15，20，25，或30小吋)的半衰期。在一些實(shí)施方案中，所述聚合物基質(zhì)還包含ー種或多種另外的活性剤，以及也可設(shè)置所述聚合物基質(zhì)，提供另外活性劑中的一種或多種的類似的釋放動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施方案中，設(shè)置所述聚合物基質(zhì)，使得在粒子中時(shí)第一活性劑在受試者的循環(huán)中具有至少30分鐘、至少ー個(gè)小時(shí)或至少兩個(gè)小時(shí)(例如，至少4，6，8，10，12，15，20，25，30小時(shí))的半衰期，以及在粒子中時(shí)第二活性劑在受試者的循環(huán)中獨(dú)立地具有至少30分鐘、至少ー個(gè)小時(shí)或至少兩個(gè)小時(shí)(例如，至少4，6，8，10，12，15，20，25，30小時(shí))的半衰期。在一些實(shí)施方案中，設(shè)置所述聚合物基質(zhì)，使得與不存在所述聚合物基質(zhì)的情況下 的活性劑相比，所述第一活性劑和/或第二活性劑在受試者的循環(huán)中的半衰期至少長(zhǎng)30分鐘、至少ー個(gè)小時(shí)或至少兩個(gè)小時(shí)(例如，至少4，6，8，10，12，15，20，25，30小時(shí))。在上述粒子的一些實(shí)施方案中，使第一和/或第二活性劑與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。也可使任何另外的活性劑與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。在ー些方面，本發(fā)明的特征在于具有多種活性劑的粒子，其中所述粒子包含(a)疏水聚合物核芯，其包含(i)與可生物降解聚合物，例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合的第一活性剤，和；(ii)第二活性劑；和(b)表面暴露的親水層。在一些實(shí)施方案中，所述可生物降解聚合物為嵌段共聚物，其具有相對(duì)疏水的第一末端和相對(duì)親水的第二末端，其中所述疏水核芯包含與第一活性劑結(jié)合的嵌段共聚物的第一末端，以及其中所述親水層包含嵌段共聚物的第二末端。在一些實(shí)施方案中，所述親水層包含多種兩性嵌段共聚物，每種具有與疏水聚合物核芯相互作用的相對(duì)疏水末端和表面暴露的相對(duì)親水末端。在一些實(shí)施方案中，所述可生物降解聚合物和結(jié)合的活性劑完全包含在疏水核芯中。在其它實(shí)施方案中，所述可生物降解聚合物為兩性的以及存在于疏水核芯和親水層兩者中。當(dāng)然，這些實(shí)施方案不相互排斥。在ー個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于具有多種活性劑的粒子，其中所述粒子包含(a)疏水聚合物核芯，其包含(i)與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合的第一活性劑(例如，親水活性劑或疏水活性剤)，和；(ii)第二活性劑(例如，親水活性劑或疏水活性剤)；和(b)兩性殼，其包含多種兩性嵌段共聚物，所述兩性嵌段共聚物具有與疏水聚合物核芯相互作用的疏水末端和表面暴露的親水末端。在一些實(shí)施方案中，所述兩性殼還包含多種靶向嵌段共聚物，每種具有與疏水聚合物核芯相互作用的疏水末端和與靶向劑結(jié)合的親水末端。在一些實(shí)施方案中，所述第二活性劑也與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述第二活性劑為不與可生物降解聚合物結(jié)合的疏水活性剤。
在上述粒子的一些實(shí)施方案中，所述靶向劑包括適體、核酸、核酸配體、多肽、蛋白質(zhì)配體、小分子、生長(zhǎng)因子、激素、細(xì)胞因子、白介素、抗體、抗體片段、整聯(lián)蛋白、纖連蛋白受體、碳水化合物、P糖蛋白受體、肽、素?cái)M肽、烴、小模塊免疫藥物(small modularimmunopharmaceutical)、細(xì)胞結(jié)合序列、親和體(Affibody)、納米體(Nanobody)、Adnectin、域抗體(Domain Antibody)或Avimer,或其任何組合。在一些實(shí)施方案中，所述靶向劑為包含小于8個(gè)氨基酸的肽。在上述粒子的一些實(shí)施方案中，所述靶向劑與前列腺特異性膜抗原(P SMA)結(jié)合。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，所述靶向劑可為AlO適體。在上述粒子的一些實(shí)施方案中，所述可生物降解聚合物包括聚乳酸、聚已內(nèi)酷、聚こ醇酸、聚酐或聚(丙交酷-共聚-こ醇酸)或其任何衍生物。在上述粒子的一些實(shí)施方案中，所述具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物包括聚乳酸、聚酸內(nèi)酷、聚こ醇酸、聚酐或聚(丙交酷-共聚-こ醇酸)的衍生物。在一些實(shí)施方案中，所述可生物降解聚合物為共聚物，例如，嵌段共聚物。示例性親水活性劑包括順鉬、卡鉬、mitaplatin、奧沙利鉬、茉莉酸甲酷、ニ氯こ酸鹽/酯(dichloroacetate)或伊立替康(irinotecan),及其衍生物或前藥。示例性疏水活性劑包括紫杉醇、多西紫杉醇、吉非替尼(gefitinib)、tubacin、樺木酸、白藜蘆醇、琥珀酸a -生育酹酯或考布他汀，及其衍生物或前藥。在一些實(shí)施方案中，所述第一活性劑和第二活性劑獨(dú)立地選自生物分子、生物活性劑、小分子、藥物、前藥、藥物衍生物、蛋白質(zhì)、肽、疫苗、輔料、成像劑(例如，熒光部分)或多核苷酸?？蓪⒈旧暾?qǐng)所述的任何活性劑與本申請(qǐng)所述的任何其它活性劑或其它活性劑ー起包含在粒子中。在一些實(shí)施方案中，所述第一和第二活性劑分別為紫杉醇或多西紫杉醇和吉非替尼；吉非替尼和紫杉醇或多西紫杉醇；奧沙利鉬(或奧沙利鉬前藥)和伊立替康；伊立替康和奧沙利鉬(或奧沙利鉬前藥)；紫杉醇和tubacin ；tubacin和紫杉醇(placlitaxel);氯尼達(dá)明、ニ氯こ酸鹽/酷、琥珀酸a -生育酚酯、樺木酸或白藜蘆醇和己酸鉬(IV);己酸鉬(IV)和氯尼達(dá)明、ニ氯こ酸鹽/酷、琥珀酸a-生育酚酯、樺木酸或白藜蘆醇；琥珀酸a -生育酚酯或茉莉酸甲酯和多西紫杉醇；或多西紫杉醇和琥珀酸a -生育酚酯或茉莉酸甲酷。這些粒子還可包含第三活性劑，例如，考布他汀(combretestatin)。本申請(qǐng)披露的粒子可包含另外的活性剤，例如，三種，四種，五種，六種或更多種活性劑。在一些實(shí)施方案中，另外活性劑中的ー種或多種(例如，第三活性剤)與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)披露的粒子的平均直徑為約IOOiim或更小，例如，約10 u m或更小，約IOOOnm或更小，約800nm或更小，約600nm或更小，約500nm或更小，約400nm或更小，約300nm或更小，約250nm或更小，約200nm或更小，約IOOnm或更小，約80nm或更小，約60nm或更小，約50nm或更小，或約40nm或更小。在一些實(shí)施方案中，提供多種本申請(qǐng)披露的粒子。所述多種粒子的平均特征尺寸(average characteristic dimension)可為約100 u m或更小，例如，約lOum或更小，約IOOOnm或更小，約800nm或更小，約600nm或更小，約500nm或更小，約400nm或更小，約300nm或更小，約250nm或更小，約200nm或更小，約IOOnm或更小,約80nm或更小,約60nm或更小,約50nm或更小,或約40nm或更小。在一些實(shí)施方案中，所述多種粒子的多分散指數(shù)為0. 8或更小，例如，0. 6或更小，0. 4或更小，0. 2或更小，或0. I或更小。 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的特征在于藥物組合物，其包含任何的上述粒子和任選的ー種或多種可藥用載體和/或稀釋劑?？膳渲扑鏊幬锝M合物，例如，用于靜脈內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，ロ服，透皮，跨膜，腹膜內(nèi)，顱內(nèi)，眼內(nèi)，硬膜外，鞘內(nèi)，局部，灌腸，注射，肺途徑或輸注遞送。在ー些方面，本發(fā)明的特征在于制備具有多種活性劑的納米粒子的方法。所述方法可包括在揮發(fā)性的水可混溶的有機(jī)溶劑中溶解與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合的第一活性劑(例如，親水活性劑或疏水活性剤)，以形成第一溶液；在揮發(fā)性的水可混溶的有機(jī)溶劑中溶解第二活性劑(例如，親水活性劑或疏水活性劑)，以形成第二溶液；在水可混溶的有機(jī)溶劑中溶解多種兩性嵌段共聚物，以形成第三溶液；并合并第一、第二和第三溶液，使得形成納米粒子，這種納米粒子具有由兩性嵌段 共聚物包圍的疏水聚合物核芯。在ー些方面，本發(fā)明的特征在于配制包含至少兩種活性劑的粒子的方法。所述方法可包括提供第一和第二活性劑；使第一活性劑或其前藥或衍生物與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合；并制備包含結(jié)合的第一活性劑和第二活性劑的粒子。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括使第二活性劑或其前藥或衍生物與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述第一和第二活性劑對(duì)于在不存在可生物降解聚合物的情況下形成粒子是不適合的。在這種情況中，使第一活性劑和/或第二活性劑與可生物降解聚合物結(jié)合能夠給予所述第一和第二活性劑形成粒子的適應(yīng)性。在上述方法的一些實(shí)施方案中，所述粒子可通過(guò)沉淀、乳化或乳化和溶劑蒸發(fā)形成。在一些實(shí)施方案中，所述粒子通過(guò)微流控技術(shù)設(shè)備Unicrofluidics apparatus)形成。在ー些方面，本發(fā)明的特征在于將多種活性劑遞送至受試者中的生物靶標(biāo)的方法。所述方法可包括得到藥物組合物，所述藥物組合物包含多種本申請(qǐng)披露的包含靶向劑的粒子，其中所述靶向劑特異性地與生物靶標(biāo)結(jié)合；并以有效地將粒子中的活性劑遞送至生物祀標(biāo)的量向受試者給藥藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，所述祀向劑特異性地與腫瘤細(xì)胞或腫瘤脈管系統(tǒng)結(jié)合。在其它方面，本發(fā)明的特征在于將多種活性劑遞送至受試者的方法。所述方法可包括得到藥物組合物，所述藥物組合物包含多種本申請(qǐng)披露的粒子；并以有效地遞送活性劑的量向受試者給藥藥物組合物。在另外的方面，本發(fā)明的特征在于治療需要治療的受試者中的障礙(例如，癌癥或本申請(qǐng)披露的其它障礙)的方法，所述方法包括向受試者給藥有效量的上述粒子，其中選擇所述第一和第二活性劑以治療障礙。在ー些方面，本發(fā)明的特征在于在時(shí)間空間上控制向受試者給藥兩種或更多種活性劑的方法。所述方法可包括提供包含聚合物基質(zhì)的粒子，所述聚合物基質(zhì)包含第一活性劑和第二活性剤，其中將所述聚合物基質(zhì)設(shè)置成提供所述第一和第二活性劑各自的希望的時(shí)間空間釋放動(dòng)力學(xué)(tempospatial relsase kinetic);并向受試者給藥所述粒子,使得所述第一和第二活性劑以希望的時(shí)間空間釋放動(dòng)力學(xué)從粒子釋放。在一些實(shí)施方案中，所述希望的時(shí)間空間釋放動(dòng)力學(xué)包括在希望的位置(例如，器官、組織或細(xì)胞，或腫瘤或腫瘤脈管系統(tǒng))釋放藥物。在一些實(shí)施方案中，所述希望的時(shí)間空間釋放動(dòng)力學(xué)包括釋放所述第一和第二活性剤，使得將所述第一和第二活性劑各自希望的劑量提供至受試者。在ー些實(shí)施方案中，使所述第一和第二活性劑中的一種或兩種與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。在任何上述給藥方法中，可將粒子或多種粒子靜脈內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，ロ服，透皮，跨膜，腹膜內(nèi)，顱內(nèi)，眼內(nèi)，硬膜外，鞘內(nèi)，局部，通過(guò)灌腸，通過(guò)注射，通過(guò)肺途徑或通過(guò)輸注遞送。本申請(qǐng)使用的"親水活性剤"是這樣的活性剤其在20° C和一個(gè)大氣壓下在水中的溶解度為50mg/L或更大，例如，100mg/L或更大，200mg/L或更大，500mg/L或更大，
I.Og/L或更大，2. Og/L或更大，或者5. Og/L或更大。本申請(qǐng)使用的"疏水活性剤"是這樣的活性剤其在20° C和一個(gè)大氣壓下在水 中的溶解度為小于50mg/L,例如，小于20mg/L,小于10mg/L,小于5. 0mg/L,小于2. 0mg/L,或者小于I. 0mg/Lo在一些情況中，兩種或更多種活性劑的親水性可彼此相對(duì)地測(cè)量，S卩，第一活性劑可比第二活性劑更加親水。例如，與第二活性劑相比，第一活性劑在水中的溶解度可較大。除非另有限定，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的相同的含義。盡管可以在本發(fā)明的實(shí)踐或檢測(cè)中使用相似于或等價(jià)于那些本文中描述的方法和材料，但在下文中描述了適當(dāng)?shù)姆椒ê筒牧?。將本申?qǐng)?zhí)峒暗乃谐霭嫖?、專利申?qǐng)、專利和其它參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。在沖突的情況下，可以控制本申請(qǐng)，包括定義。此外，材料、方法、以及實(shí)例僅是示例性的而不意在限制。根據(jù)下列詳述和權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見(jiàn)。


圖IA是與藥物(圓圈、正方形或三角形)結(jié)合的羥基官能化聚丙交酯(PLA-OH)和各種聚丙交酷-聚こニ醇(PLA-PEG)和與靶向配體結(jié)合的PLA-PEG的示意圖。圖IB是包含與藥物(圓圈、正方形或三角形)結(jié)合的羥基官能化聚丙交酯的靶向納米粒子和組合療法對(duì)癌細(xì)胞死亡的效果的示意圖。圖2圖示官能化聚丙交酯的轉(zhuǎn)化的1H-NMR表征。PLA-OH通過(guò)芐基的脫保護(hù)由PLA-OBn形成并且通過(guò)在7. 3ppm處苯環(huán)強(qiáng)度的降低顯現(xiàn)。在與單琥拍酸鉬(IV)前藥結(jié)合后，在PLA-Pt中鉬前藥的存在通過(guò)在6. 3ppm處出現(xiàn)氨基質(zhì)子顯現(xiàn)。圖3是示出PLA-OH納米粒子(PLA_0H_NP)的體外毒性的線圖。圖4A-4B是示出含聚(乳酸-共聚-こ醇酸)-聚こニ醇-C00H (PLGA-PEG-C00H)的示例性納米粒子的形成的示意圖，PLA-OH與單琥珀酸Pt(IV) (Poly-Pt)和多西紫杉醇結(jié)合。納米粒子可通過(guò)納米沉淀(4A)或者通過(guò)微流控技術(shù)方法(4B)制備。圖5A是示出通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定的Poly-Pt-Doce-NP的尺寸的柱狀圖。圖5B是Poly-Pt-Doce-NP的透射電子顯微鏡照片。圖6A-6B 是 C，C，t [Pt (NH3) Cl2 (OH)(琥珀酸鹽)]/DMF-0. IM TBAPF6 (6A)和Poly-Pt (IV)/DMF-0. IM TBAPF6(6B)的在各種掃描速率的循環(huán)伏安圖。圖6C-6D分別為圖6A和6B的各自的伏安圖的還原峰值電位相對(duì)于伏安圖掃描速率的做圖。圖7A-7B示出鉬(7A)和多西紫杉醇(7B)從雙重藥物Poly-Pt-Doce-NP的體外釋放。圖8A-8B是示出單琥珀酸Pt (IV)(單琥珀酸鹽)、順鉬、PolyPt-NP和PolyPt-NP-Apt對(duì)LNCaP (8A)和PC3 (8B)細(xì)胞的細(xì)胞毒性的線圖。圖9是示出PolyPt-NP和靶向PolyPt-NP-Apt的LNCaP細(xì)胞攝取的ー組顯微照片。DIC，差分干涉比較；FITC，異硫氰酸熒光素；EEA1，小鼠單克隆抗體。
圖IOA是鉬-DNA加合物的形成的示意圖。圖IOB是一組顯微照片，示出在用PolyPt-Doce-NP-Apt或PolyPt-NP-Apt處理細(xì)胞后在LNCaP細(xì)胞中Pt-GG加合物的檢測(cè)。圖11是PLA-OH、PLA-COOH和PLA-藥物的示例性合成的示意圖。對(duì)于與PLA-0H和PLA-COOH結(jié)合，可使用其它化學(xué)品(例如，T-NH2)。圖12是示出由PLA-OH形成PLA-Pt的示意圖。圖13是包含PLA-Pt和多西紫杉醇并任選與靶向配體(A10適體)結(jié)合的雙重藥物納米粒子的結(jié)構(gòu)的示意圖。圖14是用于開(kāi)發(fā)靶向聚合物納米粒子的組合半自動(dòng)方法的示意圖。使用具有多個(gè)入口的微流體系統(tǒng)引入不同的藥物官能化聚合物、配體官能化聚合物、游離聚合物和游離藥物，以混合希望的前體?；旌纤俾视奢斎肓髁恐?，所述輸入流量通過(guò)與PC連接的注射泵自動(dòng)控制。通過(guò)在微流體通道中流動(dòng)聚焦(flow focusing),所得聚合物和藥物前體沉積在水溶液中。前體流動(dòng)速率的每個(gè)組合導(dǎo)致不同的納米粒子制劑，其自動(dòng)收集在96孔板中，用于進(jìn)ー步純化和分析。圖15A是PLA-COOH的合成的示意圖。圖15B 示出 PLA-COOH 的 1H-NMR 表征。圖16A是PLA-氯尼達(dá)明的合成的示意圖。圖16B 不出 PLA-氯尼達(dá)明(PLA-Loni)的1H-NMR 光譜堆積(spectral stack)。圖17A是PLA- ニ氯こ酸鹽/酯(PLA-DCA)的合成的示意圖。圖17B示出在催化量的堿N，N-ニ異丙基こ胺(DIPEA)的存在下使ニ氯こ酸酐與PLA-OH反應(yīng)得到的PLA-DCA的IH-NMR光譜堆積。
具體實(shí)施例方式本申請(qǐng)?zhí)峁┌瑑煞N或更多種活性劑的藥物遞送組合物，其中至少ー種活性劑與可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。所述遞送組合物允許共同遞送多種藥物(例如，具有不同特征的藥物，例如，親水和疏水藥物)，并且能夠獨(dú)立地控制每種藥物的釋放參數(shù)。另外，所述遞送組合物可包含用于將系統(tǒng)遞送至希望的細(xì)胞靶標(biāo)的靶向劑。作為ー個(gè)實(shí)例，PLA-官能化雙重藥物遞送組合物通過(guò)以下方法開(kāi)發(fā)將多西紫杉醇組合在鉬改性的PLA聚合物中，得到適度高的粒子載荷，所述粒子具有適合的粒度，用于將順鉬和多西紫杉醇同時(shí)遞送至前列腺癌細(xì)胞。遞送組合物在ー個(gè)方面，所述遞送組合物是包含兩種或更多種活性劑的粒子?；钚詣┛膳c可生物降解聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物)結(jié)合。所述粒子也可包含包圍疏水核芯的兩性外殼，所述兩性外殼含有多種兩性分子(例如，兩性脂類或兩性共聚物)。所述粒子可進(jìn)ー步在粒子表面上包含靶向劑。另外，可制造粒子(例如，聚合物微米和納米粒子)，使得它們可生物降解，使得它們包含已經(jīng)由FDA批準(zhǔn)的材料，以及使得它們導(dǎo)致亞微米粒度(例如，IOnm-IOOOnm或其它范圍，例如，25nm-250nm,例如，15nm-50nm, 10nm-500nm),或者微米級(jí)粒度。在本申請(qǐng)中認(rèn)為，納米級(jí)粒子的最大橫截面尺寸最大為lOOOnm。微米級(jí)粒子的最大橫截面尺寸為超過(guò)
I.0微米(例如，I. 0微米至最高100微米，或更大，例如，I. 0-2. 0微米，I. 0-10. 0微米，5-25微米，和25-50微米)，也可根據(jù)本申請(qǐng)所述方法制造。在一些情況中，所述粒子為納米粒子，即，所述粒子具有小于I微米的特征尺寸，其中所述特征尺寸為粒子的最大橫截面尺寸。例如，所述粒子的特征尺寸在一些情況中可小于約500nm,小于約400nm,小于約250nm,小于約200nm,小于約150nm,小于約IOOnm,小于約50nm,小于約30nm,小于約IOnm,小于約3nm,或小于約lnm。 在一些情況中，可存在粒子群。本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方案涉及這種粒子群。例如，在一些實(shí)施方案中，所述粒子群的平均特征尺寸在一些情況中小于約500nm,小于約400nm,小于約250nm,小于約200nm,小于約150nm,小于約IOOnm,小于約50nm,小于約30nm,小于約IOnm,小于約3nm,或小于約lnm。在一些實(shí)施方案中,所述粒子各自可為基本相同的形狀和/或粒度("單分散的")。例如，所述粒子可具有特征尺寸分布，使得不超過(guò)約5%或約10%的粒子的特征尺寸比粒子的平均特征尺寸大約10%，以及在一些情況中，使得不超過(guò)約8%，約5%，約3%，約1%，約0. 3%>，約0. 1%，約0. 03%,或約0. 01%的粒子的特征尺寸比粒子的平均特征尺寸大約10%。在一些情況中，不超過(guò)約5%的粒子的特征尺寸比粒子的平均特征尺寸大約5%，大約3%，大約1%，大約0. 3%，大約0. 1%，大約0. 03%，或大約0. 01%。在一些實(shí)施方案中，不超過(guò)25%的制造粒子的直徑與平均粒子直徑相差超過(guò)平均粒子直徑的150%，100%, 75%，50%, 25%，20%, 10%,或5%。經(jīng)常希望制造在粒度、形狀和/或組成方面相對(duì)均勻的粒子群，使得每個(gè)粒子具有相似的性質(zhì)。例如，使用本申請(qǐng)所述方法制造的至少80%，至少90%，或至少95%的粒子的直徑或最大尺寸可落在平均直徑或最大尺寸的±5%內(nèi)，±10%內(nèi)，或±20%內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，粒子群在粒度、形狀和/或組成方面可為不均勻的。參見(jiàn)例如PCT公開(kāi)WO 2007/150030，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。在一些實(shí)施方案中，粒子群的多分散指數(shù)為0. 6或更小，例如，0. 5或更小，0. 4或更小，0. 3或更小，0. 2或更小，0. I或更小，或0. 05或更小。在許多實(shí)施方案中，配制粒子用于控制釋放。當(dāng)將天然或合成聚合物與活性劑組合，使得藥物保留在聚合物體系中，隨后以預(yù)定方式釋放時(shí)，發(fā)生控制釋放。設(shè)計(jì)為粒子的聚合物藥物遞送組合物可通過(guò)表面或本體侵蝕、擴(kuò)散和/或溶脹然后擴(kuò)散，以時(shí)間或條件依賴性方式釋放結(jié)合的活性剤?；钚詣┑尼尫趴稍陂L(zhǎng)或短時(shí)間內(nèi)恒定，可在長(zhǎng)或短時(shí)間內(nèi)循環(huán)，或者可由環(huán)境或其它外部事件觸發(fā)(參見(jiàn)，例如，Langer和Tirrell, 2004, Nature,428:487-492)。一般而言，與其它藥物遞送方法相比，控制釋放聚合物系統(tǒng)可在較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)提供特定范圍內(nèi)的藥物水平，由此提高藥物效力和最大化患者依從性。盡管可使用PLA和PLGA非共價(jià)地包膠藥物和以調(diào)節(jié)的方式釋放，但是使用這種組合藥物遞送策略在釋放多種藥物中可導(dǎo)致批次間的差異性，尤其是當(dāng)使用具有不同特征(例如，溶解度、電荷、分子量、半衰期、生物分布特征)的藥物吋。相反，包含本申請(qǐng)所述的藥物-聚合物結(jié)合物的遞送組合物的使用對(duì)藥物的載荷和釋放提供更多的控制，尤其是當(dāng)遞送具有不同溶解度、電荷和分子量的藥物吋。不希望受理論束縛，粒子參數(shù)(例如，粒度、電荷等)可改變活性劑從粒子的遞送(例如，有效載荷的損失、藥物流出、聚集、遞送至希望的位置等)。在一些情況中，較大粒子傾向于比較小粒子更快地?fù)p失有效載荷和/或較小粒子的藥物流出可比較大粒子更快。在一些情況中，較小粒子可比較大粒子更可能聚集。粒子的粒度可影響粒子在整個(gè)身體中的分布。例如，與較小粒子相比，注射到血流中的較大粒子可更可能停留在小血管中。在一些情況中，與較小粒子相比，較大粒子可較小可能地穿越生物屏障(例如，毛細(xì)血管壁)。在遞送組合物中使用的粒子的粒度可基于應(yīng)用來(lái)選擇，以及將為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地獲知。例如，如果希望在患者的整個(gè)血流中全身性地遞送粒子，可選擇較小粒度(例如， <200nm)的粒子。作為另ー個(gè)實(shí)例，如果希望通過(guò)注射由患者的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)螯合粒子(例如，在肝、脾等中螯合粒子)，可選擇較大粒度(例如,>200nm)的粒子。當(dāng)選擇粒子粒度時(shí)，也可考慮希望的遞送時(shí)長(zhǎng)。例如，與較大粒子相比，較小粒子傾向于在血流中循環(huán)較長(zhǎng)的時(shí)長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，將所述粒子設(shè)計(jì)成基本上在特定靶標(biāo)(例如腫瘤)的位置累積。在一些實(shí)施方案中，這可至少部分地由干與所述粒子相連的靶向部分的存在，如本申請(qǐng)所述。在一些實(shí)施方案中，這可至少部分地由于增強(qiáng)的滲透性和保留(EPR)效果，其允許粒子特異性地在腫瘤位置累積。EPR效果為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，是指這樣的性質(zhì)通過(guò)這種效果，與正常組織相比，某些尺寸的材料(例如，粒子)傾向于更多地累積在腫瘤組織中。聚合物在一些實(shí)施方案中，所述遞送組合物包含一種或多種聚合基礎(chǔ)組分(例如，聚合物)。本申請(qǐng)使用的"聚合物"表示普通含義，即，包含由共價(jià)鍵連接的ー種或多種重復(fù)單元(單體)的分子結(jié)構(gòu)。所述重復(fù)單元可全部相同，或者在一些情況中，在聚合物中可存在超過(guò)ー種類型的重復(fù)單元。在一些情況中，所述聚合物為生物來(lái)源的，即，生物聚合物。在一些情況中，在聚合物中也可存在另外的部分，例如靶向部分如本申請(qǐng)所述的那些。如果在聚合物中存在超過(guò)ー種類型的重復(fù)單元，那么將聚合物稱為"共聚物"。應(yīng)理解的是，在使用聚合物的任何實(shí)施方案中，所使用的聚合物在一些情況中可為共聚物。形成共聚物的重復(fù)單元可按任何方式排列。例如，重復(fù)單元可按無(wú)規(guī)順序排列，可按交替順序排列，或者排列為"嵌段"共聚物，即，包含ー個(gè)或多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域包含第一重復(fù)單元(例如，第一嵌段)，和ー個(gè)或多個(gè)區(qū)域，每個(gè)區(qū)域包含第二重復(fù)單元(例如，第二嵌段)，等等。嵌段共聚物可具有兩個(gè)(ニ嵌段共聚物)，三個(gè)(三嵌段共聚物)，或更多數(shù)目的不同嵌段。在一些實(shí)施方案中，聚合物為兩性的，S卩，具有親水部分和疏水部分，或者相對(duì)親水部分和相對(duì)疏水部分。親水聚合物是通常吸引水的聚合物以及疏水聚合物是通常排斥水的聚合物。親水或疏水聚合物可例如通過(guò)以下方法識(shí)別制備聚合物樣品并測(cè)量它與水的接觸角(通常，親水聚合物的接觸角小于約50°，而疏水聚合物的接觸角大于約50° )。在一些情況中，兩種或更多種聚合物的親水性可彼此相對(duì)地測(cè)量，即，第一聚合物與第二聚合物相比可較親水或較不親水。例如，第一聚合物可具有比第二聚合物較小的接觸角。在含有超過(guò)兩種聚合物的實(shí)施方案中，可通過(guò)比較溶解度參數(shù)將聚合物按順序評(píng)級(jí)。在一組實(shí)施方案中，聚合物基礎(chǔ)組分(例如，聚合物)可為生物相容的，即，當(dāng)嵌入或注射到活的受試者中時(shí)，聚合物通常不引發(fā)不利應(yīng)答，例如，無(wú)顯著發(fā)炎和/或免疫系統(tǒng)急性排斥聚合物，例如，通過(guò)T-細(xì)胞應(yīng)答。當(dāng)然，應(yīng)承認(rèn)的是，"生物相容性"是相對(duì)概念，甚至對(duì)于與活體組織高度相容的聚合物，ー些程度的免疫應(yīng)答也是可以預(yù)料的。然而，本申請(qǐng)使用的"生物相容性"是指不發(fā)生至少一部分免疫系統(tǒng)導(dǎo)致的材料的急性排斥，即，植入到受試者中的非生物相容材料在受試者中引起足夠嚴(yán)重的免疫應(yīng)答，使得免疫系統(tǒng)導(dǎo)致的材料的排斥不能被足夠地控制，以及經(jīng)常達(dá)到必須將材料從受試者移除的程度。測(cè)定生物相容性的一個(gè)簡(jiǎn)單試驗(yàn)是將聚合物暴露于體外細(xì)胞；可生物相容聚合物是在中等濃度，例如，在約50微克/IO6細(xì)胞的濃度通常不導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡的聚合物。例如，可生物相容聚合物當(dāng)暴露于細(xì)胞如成纖維細(xì)胞或上皮細(xì)胞時(shí)可導(dǎo)致少于約20%細(xì)胞死亡，即使由這種細(xì)胞吞噬或以其它方式攝取。可用于本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案中的可生物相容聚合物的非限制性實(shí)例包括聚ニ噁烷酮(PDO)、聚羥基脂肪酸酷、聚羥基丁酸酷、聚(癸ニ酸甘油酷)、聚こ醇酸交酷、聚丙交酷、聚已內(nèi)酷、聚酐或包含這些和/或其它聚合物的共聚物或衍生物。 在某些實(shí)施方案中，可生物相容聚合物是可生物降解的，即，所述聚合物能夠在生理環(huán)境中例如在體內(nèi)化學(xué)和/或生物地降解。例如，所述聚合物可通過(guò)暴露于水(例如，在受試者中)而自然地水解，所述聚合物可通過(guò)暴露于熱(例如，在約37° C的溫度)而降解。聚合物的降解能夠以不同的速率進(jìn)行，取決于使用的聚合物或共聚物。例如，聚合物的半衰期(50%的聚合物降解成単體和/或其它非聚合部分的時(shí)間)可大概為數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年，取決于聚合物。所述聚合物可生物降解，例如，通過(guò)酶促活性或細(xì)胞機(jī)理，在一些情況中，例如，通過(guò)暴露于溶菌酶(例如，具有相對(duì)低的P 。在一些情況中，所述聚合物可分解成細(xì)胞能夠重新使用或處置而對(duì)細(xì)胞沒(méi)有明顯毒性影響的單體和/或其它非聚合部分(例如，聚丙交酯可水解以形成乳酸，聚こ醇酸交酯可水解以形成こ醇酸等)?？缮锝到饩酆衔锏膶?shí)例包括但不限于聚(丙交酷)(或聚(乳酸))、聚(こ交酷)(或聚(こ醇酸))、聚(原酸酷)、聚(己內(nèi)酷)、聚賴氨酸、聚(こ烯亞胺)、聚(丙烯酸)、聚氨酯、聚(酸酐)、聚(酷)、聚碳酸丙ニ醇酯、聚(こ烯亞胺)、聚(丙烯酸)、聚氨酷、聚(P氨基酯)等，以及這些和/或其它聚合物的共聚物或衍生物，例如，聚(丙交酯-共聚-こ交酯)(PLGA)。在另ー組實(shí)施方案中，本發(fā)明聚合物能夠控制免疫原性，例如聚(亞烷基ニ醇)(也稱為聚(亞烷基氧化物))，例如聚(丙ニ醇)，或聚(環(huán)氧こ烷)，也稱為聚(こニ醇)("PEG")，具有式-(CH2-CH2-O)n-，其中n為任何正整數(shù)。在一些實(shí)施方案中，可使用支化PEG(參見(jiàn)，例如，Veronese et al, 2008, BioDrugs, 22:315-329 ；Hamidi et al, 2006, DrugDeliv. ,13:399-409).聚(こニ醇)単元能夠以任何適合的形式存在于聚合基礎(chǔ)組分中。例如，所述聚合基礎(chǔ)組分可為嵌段共聚物，其中的ー個(gè)嵌段是聚(こニ醇)。包含聚(乙ニ醇)重復(fù)單元的聚合物也稱為"PEG化"聚合物。由于聚(こニ醇)基團(tuán)的存在，這種聚合物能夠控制炎癥和/或免疫原性(即，引起免疫應(yīng)答的能力)。在一些情況中，也可使用PEG化降低在聚合物和生物部分之間的電荷相互作用，例如，通過(guò)在聚合物表面上形成親水層，其能夠屏蔽聚合物，使聚合物不與生物部分相互作用。例如，可使用PEG化形成內(nèi)部比外部更疏水的粒子。在一些情況中，聚(こニ醇)重復(fù)單元的添加能夠提高聚合結(jié)合物的血漿半衰期，例如，通過(guò)降低吞噬系統(tǒng)的聚合物攝取，同時(shí)降低細(xì)胞的轉(zhuǎn)染/攝取效率。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將獲知PEG化聚合物的方法和技木，例如，通過(guò)使用EDC (I-こ基-3- (3- ニ甲基氨基丙基)碳化ニ亞胺鹽酸鹽)和NHS (N-羥基琥珀酰亞胺)將聚合物反應(yīng)至胺中的PEG基團(tuán)末端，例如，通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合技術(shù)(ROMP)等。另外，本發(fā)明的某些實(shí)施方案涉及含聚(酷-醚)的共聚物，例如，具有通過(guò)酯鍵(例如，R-C (O)-O-Rj鍵)和醚鍵(例如，R-O-Rj鍵)接合的重復(fù)單元的聚合物?？芍苽浔旧暾?qǐng)所述聚合物，使其側(cè)鏈官能團(tuán)，S卩，沿著聚合物(例如，聚合物的一部分)的長(zhǎng)度存在的官能團(tuán)與活性劑結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，對(duì)于每1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，12，15，或20個(gè)聚合物單體單元，所述聚合物具有約ー個(gè)官能團(tuán)(例如，結(jié)合的官能團(tuán))。可將官能團(tuán)限制于聚合物的一部分，例如，限制在嵌段共聚物中。在一些實(shí)施方案中，所述官能團(tuán)為羥基、羧基、氨基、酰氨基、氨基甲酸酯基、馬來(lái)酰亞胺基、硫醇基、鹵素、疊氮基、proparzyl、烯丙基等。另外,官能團(tuán)可通過(guò)連接子與聚合物接合。已知多種方法使用共價(jià)鍵(例如包括O -鍵、JI-鍵、金屬-非金屬鍵、不可知相互作用、ニ硫鍵和三中心ニ電子鍵)使異官能連接子(heterofunctional linker)與活性劑 結(jié)合。在一個(gè)實(shí)例中，鍵(例如，交聯(lián))可通過(guò)以下方法形成通過(guò)使用I-こ基-3-[3_ ニ甲基氨基丙基]碳化ニ亞胺鹽酸鹽/N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)或苯并三唑-I-基-氧基-三-吡咯烷子基-鱗六氟磷酸鹽/N-羥基苯并三唑(pyBOP/HOBt)在羧基(或馬來(lái)酰亞胺)和伯胺之間形成酰胺鍵。所述反應(yīng)可忍受水性溶劑和有機(jī)溶劑(例如但不限于，ニ氯甲烷、こ腈、氯仿、四氫呋喃、丙酮、甲酰胺、ニ甲基甲酰胺、卩比唆、ニ噁烷或ニ甲基亞砜)。在另ー個(gè)實(shí)例中，鍵合(例如，交聯(lián))在水性和有機(jī)溶劑中在馬來(lái)酰亞胺和巰基(硫醇)基團(tuán)之間形成。還原可斷裂交聯(lián)可在巰基(硫醇)基團(tuán)之間通過(guò)吡啶巰基、3-硝基-2-吡啶巰基(Npys)基團(tuán)和Boc-S-叔丁基巰基(StBu)基團(tuán)實(shí)現(xiàn)。所述反應(yīng)可忍受水性和有機(jī)溶劑(例如但不限于，ニ氯甲烷、こ腈、氯仿、四氫呋喃、丙酮、甲酰胺、ニ甲基甲酰胺、吡啶、ニ噁烷或ニ甲基亞砜)。制備具有側(cè)鏈官能團(tuán)的官能化聚合物的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，制備方法和官能化聚丙交酯、聚こ交酯、聚酯酰胺描述于Gerhardt et al. , 2006, Biomacromolecules,7:1735-42。官能化雙內(nèi)酯的合成和在制備具有羥基官能團(tuán)的聚酷、聚(乳酸-共聚-羥甲基こ醇酸)和聚(乳酸-共聚-こ醇酸-共聚-羥甲基こ醇酸)中的使用描述于Leemhuiset al.，2007，BiomacromoIecuIeS，8:2943-49;Leemhuis et al.，2003，Eur. J. Org.Chem.，3344-49;和 Leemhuis et al.，2006, Macromoleculesj 39:3500-08。輕甲基和玻J白酉先化 PLA 聚合物描述于 Noga et al.，2008，Biomacromoleculesj 9:2056-62。聚己基取代的丙交酯披露于Trimaille et al.，2005，Chimia 59:348 - 352;和Trimaille et al.，2007，J.Biomed. Mater. Res.，80A: 55-65。Jing 和 Hillmyerj 2008，J. Am. Chem. Soc.，130:13826-27描述了具有官能ニ環(huán)酯的PLA。具有側(cè)鏈羧基的聚(a-羥基酸)披露于Kimura et al.，I988，Macromoleculesj 21:3338-40。另外，可生物降解酯可衍生于氨基酸，如Kolitz et al.
，2009，Macromolecules, DOI:10. 102l/ma900464g;Cohen-Arazi et al.，2008，41:7259-63中所述。在一些實(shí)施方案中，所述聚合物可通過(guò)"click"法官能化，如Jiang et al.，2008，Macromoleculesj 41:1937-44 中所述。聚合物的合成和結(jié)合的另外方法披露于US 20080248126，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文?？筛淖兣c活性劑結(jié)合的例如具有側(cè)鏈官能團(tuán)的聚合物的長(zhǎng)度，以提供希望的參數(shù)。通常，提高聚合物長(zhǎng)度會(huì)降低活性劑釋放速率。在一些實(shí)施方案中，所述聚合物在與活性劑結(jié)合之前的分子量為約2000g/mol，例如，約3000g/mol，約4000g/mol，約5，000g/mol,約 10，000g/mol,約 20，000g/mol,約 50，000g/mol,或約 100，000g/mol。結(jié)合能夠形成鍵的反應(yīng)性官能團(tuán)允許結(jié)合不同的藥物井隨后在生理?xiàng)l件中水解這種鍵，從而導(dǎo)致受控方式的藥物釋放。圖11示出用于開(kāi)發(fā)具有側(cè)鏈羥基的可生物降解聚丙交酯衍生物的示例性手段。簡(jiǎn)而言之，通過(guò)重氮化反應(yīng)使用亞硝酸鈉在酸的存在下將胺轉(zhuǎn)化成羥基。所得単體2可連同乳酸直接用于縮聚，以得到聚丙交酯共聚物，Poly-OBn。相同的聚合物可通過(guò)環(huán)狀丙交酯單體3的開(kāi)環(huán)聚合(ROP)制備，環(huán)狀丙交酯單體3通過(guò)a-羥基酸在非常稀釋的反應(yīng)條件下在甲苯中用對(duì)甲苯磺酸進(jìn)行脫水反應(yīng)制備。對(duì)于高分子量聚合物的合成，ROP手段有利。芐基保護(hù)基防止在聚合過(guò)程中羥基的副反應(yīng)。然后羥基官能化可生物降解聚丙交酯(PLA-OH)可通過(guò)芐基脫保護(hù)使用Pd/C催化劑合成。對(duì)于合成羧基·官能化聚丙交酷，可用酸酐處理PLA-0H，例如，琥珀酸酐或衣康酸酐(參見(jiàn)圖15A)。圖12示出用于結(jié)合順鉬前藥的示例性策略。通過(guò)DCC/H0BT偶合使單琥珀酸鉬4 (順鉬的前藥)與PLA-OH聚合物結(jié)合，得到最終的PLA-Pt (圖12)。相似的策略可用于結(jié)合其它藥物分子?；钚詣┧隽Ｗ影瑑煞N或更多種活性剤，其中至少ー種活性劑與聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的聚合物)結(jié)合。選擇的活性劑可適用于寬范圍的應(yīng)用(例如，治療、成像和診斷應(yīng)用)以及包括蛋白質(zhì)、肽、糖、脂類、甾類、DNA、RNA、小分子藥物，和本申請(qǐng)所述的任何藥物的前藥。本申請(qǐng)所述的前藥是在體內(nèi)代謝成藥物活性形式的藥理物質(zhì)。在一些情況中，與藥物活性形式相比，前藥為藥物惰性的或活性顯著較低的。在一些實(shí)施方案中，所述活性劑為小分子藥物。術(shù)語(yǔ)"小分子"是本領(lǐng)域承認(rèn)的，是指分子量小于約2000g/摩爾，小于約1500g/摩爾，小于約IOOOg/摩爾，小于約800g/摩爾，小于約700g/摩爾，小于約600g/摩爾，小于約500g/摩爾，小于約400g/摩爾，小于約300g/摩爾，小于約200g/摩爾，小于約IOOg/摩爾，或更小的組分。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將能夠測(cè)定小分子藥物是否適于用聚合物(例如，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的聚合物)進(jìn)行官能化。在一些實(shí)施方案中，活性劑為親水或疏水的。親水或疏水活性劑可例如通過(guò)以下方法鑒別測(cè)量活性劑在水中的溶解度。在一些情況中，兩種或更多種活性劑的親水性可彼此相對(duì)地測(cè)量，即，第一活性劑可比第二活性劑較親水。例如，第一活性劑在水中的溶解度可大于第二活性剤。在含有超過(guò)兩種活性劑的實(shí)施方案中，可通過(guò)比較溶解度參數(shù)將活性劑按順序分級(jí)。在一些實(shí)施方案中，活性劑的組合對(duì)于治療障礙而言是協(xié)同的。藥物作用和應(yīng)答的分子基礎(chǔ)的深入研究已經(jīng)得到了關(guān)于實(shí)驗(yàn)測(cè)定許多藥物和化合物的藥物介導(dǎo)的分子相互作用分布和調(diào)節(jié)活性的大量信息(參見(jiàn)，例如，Drews, 2000，Science, 287:1960-64;Imming et al.，2007，Nature Rev. Drug Discov. 5， 821-834; Robertson，2005，Biochemistry, 44:5561-71;Zybarth et al.，2006，Curr. Drug Targets, 7:387-395;Wisharteta I.，2006，Nucleic Acids Res.，34:D668_D672;Ya，et a I.，20 06,App I.Bioinformatics, 5:131-139;Liu et al. , 2007, Nucleic Acids Res.，35:D198_D201;和 Jiet al. , 2003, Drug Disco v. Today, 8:526-529)。藥物的分子相互作用分布描述藥物與可歸因于它的藥效、毒理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)和組合效果的單個(gè)生物分子、途徑或過(guò)程的相互作用。分子相互作用可用于指導(dǎo)活性劑組合的開(kāi)發(fā)。可使用的活性劑的適合的非限制性實(shí)例包括5-氟尿嘧啶(5-FU):在癌癥治療中常用的抗代謝物藥物。典型的給藥首先是歷時(shí)15分鐘以彈丸形式的400mg/m2的(即，每平方米計(jì)算的體表面積)靜脈內(nèi)治療，然后歷時(shí)46小時(shí)以連續(xù)輸注形 式的攜帯泵遞送2，400mg/m2。適合的化學(xué)治療藥物可分成下面的類別烷基化劑、抗代謝藥、蒽環(huán)類、植物生物堿、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、單克隆抗體和其它抗腫瘤藥物。除了上述化學(xué)治療藥物，即，多柔比星、紫杉醇，其它適合的化學(xué)治療藥物包括酪氨酸激酶抑制劑甲磺酸伊馬替尼(Gleevec⑩或Glivec馨)、順鉬、卡鉬、奧沙利鉬、ニ氯甲基ニこ胺(mechloethamine)、環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、巰嘌呤、嘧啶、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春地辛、鬼臼毒素(LOlCB)、依托泊甙、多西紫杉醇、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(L01CB和L01XX)、伊立替康、托泊替坎、安吖啶、依托泊甙、磷酸依托泊甙、替尼泊甙、更生霉素、氯尼達(dá)明和單克隆抗體，例如曲妥珠單抗(Herceptin⑩)、西妥昔單抗、貝伐單抗和利妥昔單抗(Rituxan⑩)等等。另外的示例性活性劑包括PARP抑制劑，存活素抑制劑、雌ニ醇和ニ氯こ酸鹽/酷。活性劑的其它實(shí)例包括但不限于抗微生物劑，鎮(zhèn)痛藥，抗炎劑，抗刺激剤，聚結(jié)改性劑，利尿藥，擬交感神經(jīng)藥，代謝調(diào)節(jié)劑，減食欲劑，抗酸藥和其它胃腸病用藥；抗寄生物藥，抗抑郁藥，抗高血壓藥，抗膽堿藥，興奮劑，抗激素，中樞和呼吸興奮劑，藥物拮抗劑，調(diào)血脂藥，排尿酸藥，強(qiáng)心甙類，電解質(zhì)類，麥角及其衍生物，祛痰藥，安眠藥和鎮(zhèn)靜藥，抗糖尿病劑，多巴胺能藥，止吐藥，肌肉松弛藥，擬副交感神經(jīng)藥，抗驚厥藥，抗阻胺藥，^ -阻斷劑，通便藥，抗心律不齊藥，對(duì)比劑，放射性藥物，抗過(guò)敏劑，安神藥，血管擴(kuò)張劑，抗病毒藥，和抗腫瘤或殺細(xì)胞藥或具有抗癌性質(zhì)的其它藥物，或其組合。其它適合的活性劑包括避孕藥和維生素以及微量和大量營(yíng)養(yǎng)素。另外的其它實(shí)例包括抗感染藥如抗生素類和抗病毒藥；鎮(zhèn)痛藥和鎮(zhèn)痛組合；減食欲劑；驅(qū)蟲(chóng)藥；抗關(guān)節(jié)炎藥；抗哮喘藥；抗驚厥藥；抗抑郁藥；抗利尿藥；抗痢疾藥(antidiarrleals);抗阻胺藥；抗炎藥；抗偏頭痛藥；止惡心藥；抗腫瘤藥；抗帕金森病藥；止癢藥；抗精神病藥；解熱藥，鎮(zhèn)痙藥；抗膽堿藥；擬交感神經(jīng)藥；黃嘌呤衍生物；心血管藥(包括鈣拮抗藥和3-阻斷劑如吲哚洛爾和抗心律不齊藥)；抗高血壓藥；利尿藥；血管擴(kuò)張劑(包括一般冠狀的、周圍的和大腦的)；中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮劑；咳嗽和感冒用藥，包括解充血藥；激素如雌ニ醇和其它留類，包括皮質(zhì)類固醇；催眠藥；免疫抑制藥；肌肉松弛藥；抗副交感神經(jīng)藥；精神興奮藥；鎮(zhèn)靜藥；和安神藥；以及天然生成或基因工程化的蛋白質(zhì)、多糖類、糖蛋白或脂蛋白類。示例性代謝調(diào)節(jié)劑包括氯尼達(dá)明、ニ氯こ酸鹽/酷、琥珀酸a -生育酚酯、茉莉酸甲酷、樺木酸和白藜蘆醇。在一些實(shí)施方案中，所述粒子包括抗癌劑和代謝調(diào)節(jié)劑。在某些實(shí)施方案中，所述粒子可包含洛伐他汀，一種膽固醇降低和心臟病活性剤，其可包含在本申請(qǐng)所述的納米粒子中。在另一方面，包含在粒子核芯中的適合的活性劑為苯妥英(Phenytoin), —種抗驚厥劑(Pfizer, Inc在USA作為Dilantin⑩出售以及在UK作為Epanutin⑩出售)。可將抗生素結(jié)合在粒子中，例如萬(wàn)古霉素,其經(jīng)常用于治療感染,包括抗甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)導(dǎo)致的感染。所述粒子任選包含環(huán)孢素，ー種親脂藥物，其為免疫抑制劑，在同種異體器官移植后廣泛使用，以降低患者免疫系統(tǒng)的活性和器官排斥的危險(xiǎn)(原始制劑由Novartis在商標(biāo)名稱Sandimmune⑩下出售，以及較新的微乳制劑在Neoral⑩下出售)。同樣，包含環(huán)孢素的粒子可在局部乳劑中用于治療干燥性角結(jié)膜炎。在這點(diǎn)上，可將結(jié)合這種藥物的具有多功能表面區(qū)域的粒子設(shè)計(jì)成將等劑量的各種藥物直接遞送至癌細(xì)胞，從而潛在地最小化通常遞送至患者的量和最小化對(duì)其它組織的附帯損害。在某些具體方面，本發(fā)明的粒子包含以下物質(zhì)中的ー種或多種非留類抗炎劑(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、COX-I和II抑制劑等。例如，吲哚美辛是適合的NSAID，適于結(jié)合到本發(fā)明的多相納米組分中。呈治療劑形式的其它活性劑描述于WO 2008/124632中，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。可用輔助相容性部分官能化的親水藥物的非限制性實(shí)例包括順鉬、卡鉬、mitaplatin、奧沙利鉬、pyriplatin、己酸鉬(IV)、伊立替康、茉莉酸甲酷、磷酸地塞米松、鹽 酸尼卡地平、甲基水楊酸、ニ氯こ酸鹽/酷、硝化甘油、親水血清素5-肌3受體拮抗劑(例如，昂丹司瓊、格拉司瓊)、氨基四氫化萘(例如，S (-) -2-(N-丙基-N-2-噻吩基こ基胺)-5-羥基四氫化萘)、蒽環(huán)類等。在一些實(shí)施方案中，所述藥物或藥物前體可包含無(wú)機(jī)或有機(jī)金屬化合物，例如，鉬化合物(如本申請(qǐng)所述)、釕化合物(例如，反式-[RuCI2(DMSO)4]、反式-[RuCl2 (咪唑)2!T等)、鈷化合物、銅化合物、鐵化合物等。在一些實(shí)施方案中，將核酸修復(fù)抑制劑與DNA損害劑(例如，鉬化合物)組合配制。作為實(shí)例，將順鉬前藥(單琥珀酸鉬)官能化至具有側(cè)鏈羥基的PLA (參見(jiàn)實(shí)施例I)。另外，將多西紫杉醇與PLA-Pt組合(藥物載荷w/w% :多西紫杉醇3% ；Pt 5%)，以及歷經(jīng)數(shù)天證實(shí)了順鉬和多西紫杉醇從納米粒子的控制釋放。相似的手段可用于結(jié)合其它活性剤。例如，對(duì)于開(kāi)發(fā)具有側(cè)鏈奧沙利鉬的聚丙交酷，可合成羧基在軸向位置的奧沙利鉬前藥，其將與PLA-OH偶合。具有紫杉醇側(cè)鏈基團(tuán)的聚丙交酯通過(guò)以下方法制備通過(guò)用琥珀酸酐處理PLA-0H，產(chǎn)生含羧基的聚丙交酷，并將這種化合物直接與紫杉醇的羥基偶合。在tubacin-官能化聚合物的情況中，可將相同的含羧基的聚丙交酯與tubacin的輕基結(jié)合。在ー個(gè)方面，本發(fā)明提供能夠?qū)⒕哂胁煌瘜W(xué)性質(zhì)的多種活性劑以安全、有效和控制的方式給藥于患者(例如，同時(shí)地)的組合物和方法。將多種活性劑組合至單ー遞送組合物也允許將活性劑靶向至特定細(xì)胞靶標(biāo)，例如，腫瘤細(xì)胞。事實(shí)上，許多傳統(tǒng)組合療法(例如，使用兩種或更多種藥物的癌癥治療)的治療效カ經(jīng)常是有限的，這是因?yàn)榕c單獨(dú)給藥相比，當(dāng)將兩種藥物組合給藥時(shí)，單個(gè)藥物的劑量限制性毒性(DLT)較低。在這種情況中，在組合療法中需要將每種藥物的劑量降低，由此降低單獨(dú)藥物對(duì)總體治療效カ的貢獻(xiàn)。另外，這阻礙了識(shí)別新的協(xié)同作用的機(jī)會(huì)。通過(guò)使用與可生物降解聚合物結(jié)合的活性劑作為組合治療中的ー種或多種，本發(fā)明解決了這個(gè)問(wèn)題。因?yàn)檫@些結(jié)合物以靶向方式遞送藥物，它們與藥物本身相比具有較高的劑量限制性毒性。通過(guò)使用結(jié)合物作為組合治療的ー種或多種，可因而提高一種或多種藥物在組合中的劑量。在一種實(shí)施方案中，將兩種或更多種結(jié)合物(每種攜帶不同的藥物)組合給藥。在一種實(shí)施方案中，將結(jié)合物與ー種或多種非結(jié)合藥物一起給藥。在任何這些實(shí)施方案中，應(yīng)理解的是，可只提高ー種或數(shù)種藥物在組合中的劑量(例如，在兩種藥物的組合中的ー種或兩種藥物)。還應(yīng)理解的是，可提高結(jié)合的藥物的劑量和/或未結(jié)合的藥物的劑量。本發(fā)明的方法和組合物決不限于具體藥物、具體藥物組合或具體疾病，但是本申請(qǐng)披露的某些組合可提供有利和/或協(xié)同結(jié)果。例如，并且非限制性地，可將具有已知協(xié)同作用的某些藥物組合至単一遞送組合物中。例如，紫杉醇或多西紫杉醇與吉非替尼已證實(shí)在乳腺癌MCF7/ADR細(xì)胞中具有強(qiáng)協(xié)同效果；0xal0platin和伊立替康在AZ-521和NUGC-4細(xì)胞中具有協(xié)同抗癌效果；以及紫杉醇和tubacin協(xié)同地增強(qiáng)微管蛋白こ酰化。另外，可將考布他汀或阻斷新生血管形成的其它藥物結(jié)合至遞送組合物中，包括包含對(duì)PSMA特異性的靶向劑的遞送組合物?？山Y(jié)合的其它組合可參見(jiàn)，例如，Jia et al.，2009，Nat. Rev. Drug. Discov. ,8:111-128，以及包括DL-環(huán)絲氨酸和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酷；紫杉醇和NU6140 ;吉非替尼和紫杉烷；吉非替尼和H)98059 ；AZT和非核苷HIV-I逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑；aplidin和阿糖胞苷；吉非替尼 和ST 1926 ;西地那非和伊洛前列素；右美托咪啶和ST-91 ;麥考酚酸莫酯和咪唑立賓；紫杉醇和discodermolide ;氨節(jié)西林和達(dá)托霉素；坎地沙坦西酯和雷米普利；ニ氮嗪和ニ丁酰-cGMP ;ニ異丙酚和七氟烷；氨芐西林和亞胺培南；青蒿素和姜黃素；多柔比星和曲貝替定；和阿奇霉素和亞胺培南。將Jia et al.，Nat. Rev. Drug. Discov.，8:111-128的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。例如，并且非限制性地，目前用環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤和氟尿嘧啶的組合(CMF)或環(huán)磷酰胺、多柔比星和氟尿嘧啶的組合(CAF)治療某些轉(zhuǎn)移乳腺癌。因此，在一種實(shí)施方案中,在這些組合治療中的上述藥物中的兩種或三種可在單一粒子中給藥。膀胱癌、頭頸癌和子宮內(nèi)膜癌可類似地通過(guò)以下方法治療在単一粒子中給藥M-VAC(甲氨蝶呤、長(zhǎng)春堿、亞德里亞霉素、順鉬)或CMV(順鉬、甲氨蝶呤、長(zhǎng)春堿)中的兩種或更多種單獨(dú)藥物。普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到用于其它傳統(tǒng)組合療法的這些實(shí)施方案的改變(例如，非限制性地，在“Combination Cancer Therapy:Modulators and Potentiators，，，Schwartz, Ed. , Humana Press, 2004; “Combination Therapy of AIDS，，，EcL by DeClerq etal. , Birkhauser, 2004;等中描述的那些)。靶向劑在某些實(shí)施方案中，可改性本發(fā)明結(jié)合物，以包含靶向劑，該靶向劑將本發(fā)明結(jié)合物導(dǎo)向特定細(xì)胞類型、細(xì)胞集合或組織。優(yōu)選地，靶向劑與粒子表面關(guān)聯(lián)。多種適合的革巴向劑是本領(lǐng)域已知的(Cotten et al. , Methods Enzym. 217:618, 1993; Torchilin, Eur.J. Pharm. Sci. 11:881, 2000;Garnett, Adv. Drug Deliv. Rev. 53:171, 2001)。例如，可使用大量與祀標(biāo)細(xì)胞表面上的抗原結(jié)合的不同材料中的任何材料。祀標(biāo)細(xì)胞表面抗原的抗體一般將呈現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)的必需特異性。除了抗體之外，也可使用適合的免疫反應(yīng)片段，例如Fab、Fab'或F(ab' ) 2片段。在形成靶向機(jī)制中適合使用的許多抗體片段已經(jīng)是本領(lǐng)域可得到的。類似地，可適合地使用靶標(biāo)細(xì)胞表面上的任何受體的配體作為靶向劑。這些包括任何小分子或生物分子(天然的或合成的)，其特異性地與在希望的靶標(biāo)細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面受體、蛋白質(zhì)或糖蛋白結(jié)合。
存在其它靶向劑，例如核酸配體，例如適體，其是小的寡核苷酸，其與某些靶標(biāo)分子特異性結(jié)合并且是在癌細(xì)胞如前列腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的靶標(biāo)蛋白的有力候補(bǔ)。核酸配體是可用干與特定分子結(jié)合的核酸。例如，培加尼布是聚こニ醇化的抗VEGF適體，其是以高特異性與特定靶標(biāo)結(jié)合的一種單鏈核酸。盡管培加尼布適體最初由FDA在2004年批準(zhǔn)治療年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)疾病，但是它具有治療前列腺癌的潛力，因?yàn)樗禺愋缘嘏cVEGF165(確認(rèn)為腫瘤血管發(fā)生的關(guān)鍵誘導(dǎo)物的蛋白質(zhì))結(jié)合。Latil et al.，Int.J. Cancer, 89, 167-171(2000)暗示，VEGF表達(dá)可在早期腫瘤中用作預(yù)后標(biāo)記物。具體適體包括，例如，適體0-7，其與成骨細(xì)胞結(jié)合；A10RNA適體，其與前列腺癌細(xì)胞結(jié)合；適體TTA1，其與乳腺癌細(xì)胞結(jié)合；和長(zhǎng)效A9RNA適體(Javi er et al. , Bioconjug. Chem. 2008June18; 19 (6) :1309-1312) o還可參見(jiàn)，Wilson等人的美國(guó)已公布專利申請(qǐng)20090105172。一般而言，適體在寬范圍PHC4-9)、生理?xiàng)l件和溶劑中穩(wěn)定。適體已知與抗體相比具有較低免疫原性并且因?yàn)槌叽绲脑蚰軌蚋菀椎卮┩改[瘤。適體結(jié)合位點(diǎn)的形狀(其包括溝槽和裂縫)提供高度特異性特征和類藥物能力。然而，主動(dòng)靶向需要RNA適體從正常細(xì)胞分辨癌細(xì)胞。其它示例性靶向劑包括肽，例如CLTl和CLT2，其與血塊中的纖維蛋白-纖維連接 素復(fù)合物結(jié)合。用于與腦、腎、肺、皮膚、胰腺、腸、子宮、腎上腺和前列腺中的細(xì)胞結(jié)合的各種肽是本領(lǐng)域公知的，例如包括在Pasqualini et al. , Mol. Psychiatry, 1:421-2 (1996)和Rajotte et al. , J. Clin. Invest.，102:430-437 (1998)中描述的那些。在本發(fā)明的ー個(gè)方面，可存在兩種或更多種不同的靶向劑與粒子表面結(jié)合。第一靶標(biāo)可為免疫系統(tǒng)細(xì)胞，例如白細(xì)胞或T-細(xì)胞，以及第ニ靶標(biāo)可為作為靶區(qū)的腫瘤中的惡性癌細(xì)胞。在粒子表面上的靶向劑以高選擇性與第一靶標(biāo)細(xì)胞結(jié)合，而第二部分具有一般腫瘤靶向表面區(qū)域。適于與和動(dòng)物相關(guān)的靶標(biāo)結(jié)合的部分包括本申請(qǐng)所述的那些。因此，在將本發(fā)明多功能粒子遞送至靶標(biāo)組織后，具有腫瘤靶向部分的粒子一旦從最初靶向細(xì)胞脫離能夠與第二靶標(biāo)(例如，癌)細(xì)胞結(jié)合。在某些方面，提供粒子遞送組合物用于活性劑遞送，所述活性劑遞送為長(zhǎng)循環(huán)的，高選擇性的，并且能夠以復(fù)雜釋放動(dòng)力學(xué)釋放多種藥物。其它靶向劑包括特異性地與生物靶標(biāo)結(jié)合的靶向劑，例如特定免疫系統(tǒng)細(xì)胞(例如，T細(xì)胞或B細(xì)胞)、蛋白質(zhì)、酶,或與受試者相關(guān)的其它循環(huán)劑(circulating agent)。下面提供適用于本申請(qǐng)所述多官能化粒子的靶向部分的示例性和非限制性實(shí)例。蛋白質(zhì)，例如用于樹(shù)突細(xì)胞的熱休克蛋白HSP70和靶向癌細(xì)胞的葉酸。多糖類或糖，例如用于靶向白血病的水楊酸(silylic acid)，靶向毒素如皂草素，抗體，包括CD 2, CD 3, CD 28、T-細(xì)胞和其它適合的抗體列舉在萬(wàn)維網(wǎng)上的"researchd. com/rdicdabs/cdindex. htm"的表中，將其通過(guò)引用的方式并入本文。本申請(qǐng)使用的術(shù)語(yǔ)"結(jié)合"指的是在呈現(xiàn)相互親和性或結(jié)合能力的分子或其部分的相應(yīng)的對(duì)之間的相互作用，通常是由于特異性或非特異性結(jié)合或相互作用，包括但不限于，生物化學(xué)、生理學(xué)和/或化學(xué)相互作用。"生物學(xué)結(jié)合"定義了發(fā)生在分子(包括蛋白質(zhì)、核酸、糖蛋白、碳水化合物、激素等)對(duì)之間的ー類相互作用。術(shù)語(yǔ)"結(jié)合配偶體"是指能夠與特定分子結(jié)合的分子。"特異性結(jié)合"是指通過(guò)分子如多核苷酸、抗體和其它配體的結(jié)合，這種分子與其它相似的生物實(shí)體相比能夠以高得多的程度與結(jié)合配偶體(或有限數(shù)目的結(jié)合配偶體)結(jié)合或識(shí)別結(jié)合配偶體(或有限數(shù)目的結(jié)合配偶體)。在一組實(shí)施方案中，靶向部分的特異性(如通過(guò)解離常數(shù)測(cè)量)小于約I微摩爾，至少約10微摩爾，或至少約100微摩爾。靶向劑的非限制性實(shí)例包括肽、蛋白質(zhì)、酶、核酸、脂肪酸、激素、抗體、碳水化合物、肽多糖、糖肽等。下面詳細(xì)地討論這些和其它靶向劑。在一些情況中，生物靶向部分可相對(duì)大，例如，對(duì)于肽、核酸等。例如，生物部分的分子量可為至少約I，000D a，至少約2，500Da，至少約3000Da，至少約4000Da，或至少約5，OOODa等。在一些情況中，相對(duì)大的靶向劑對(duì)于細(xì)胞之間的區(qū)別可為有用的。例如，在一些情況中，較小靶向劑(例如，小于約IOOODa)對(duì)于某些靶向應(yīng)用可能沒(méi)有足夠的特異性。相反，較大分子量靶向劑能夠提供高得多的靶向親和性和/或特異性。例如，靶向劑能夠提供較小的解離常數(shù)，例如，更緊的結(jié)合。然而，在其它實(shí)施方案中，所述靶向劑可相對(duì)小，例如，分子量小于約1，OOODa或小于約500Da。在一種實(shí)施方案中，所述靶向劑包含蛋白質(zhì)或肽。"蛋白質(zhì)"和"肽"是 本領(lǐng)域中的公知術(shù)語(yǔ)，以及在本領(lǐng)域中沒(méi)有精確定義各自包含的氨基酸數(shù)目。在本申請(qǐng)中使用吋，這些術(shù)語(yǔ)具有本領(lǐng)域中的普通含義。一般地，肽是長(zhǎng)度小于約100個(gè)氨基酸的氨基酸序列，但是可包含最多300個(gè)氨基酸序列。一般認(rèn)為，蛋白質(zhì)是具有至少100個(gè)氨基酸的分子。例如，蛋白質(zhì)可為蛋白質(zhì)藥物、抗體、抗體片段、重組抗體、重組蛋白質(zhì)、酶等。在一些情況中，可將蛋白質(zhì)或肽中的ー個(gè)或多個(gè)氨基酸改性，在一些情況中，例如，通過(guò)添加化學(xué)實(shí)體如碳水化合物基團(tuán)、磷酸基團(tuán)、法尼基(farnesyl)、異法尼基、脂肪酸基團(tuán)、用于結(jié)合、官能化或其它改性的連接子等。肽或蛋白質(zhì)的其它實(shí)例包括但不限于錨蛋白類、抑制蛋白類、細(xì)菌膜蛋白、網(wǎng)格蛋白、連接蛋白類、肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白、內(nèi)皮素受體、膜收縮蛋白、選擇蛋白、細(xì)胞因子；炎癥趨化因子類；生長(zhǎng)因子、胰島素、紅細(xì)胞生成素(EPO)、腫瘤壞死因子(TNF)、神經(jīng)肽類、ネ申經(jīng)肽Y、神經(jīng)降壓肽、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子P、干擾素(IFN)、和激素、生長(zhǎng)抑制齊U、例如染料木黃酮、甾類等；糖蛋白，例如ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、血小板糖蛋白、GPIb-IX復(fù)合物、GPIIb-IIIa復(fù)合物、玻連蛋白、血栓調(diào)節(jié)蛋白、CD4、CD55、CD58、CD59、CD44、CD168、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原、胞間粘附分子、血管細(xì)胞粘附分子、Thy-1、反向轉(zhuǎn)運(yùn)物、CA-15-3抗原、纖連蛋白類、層粘連蛋白、髓鞘相關(guān)糖蛋白、GAP和GAP43。其它實(shí)例包括親和體、納米體、Avimers、Adnectins、域抗體和小分子免疫藥物制劑(SMIPTM) (Trubion PharmaceuticalsInc., Seattle, WA)。本申請(qǐng)使用的"抗體"是指蛋白質(zhì)或糖蛋白，由ー個(gè)或多個(gè)基本由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段編碼的多肽組成。確認(rèn)的免疫球蛋白基因包括K、X、a、Y、
S、I、和y恒定區(qū)基因，以及繁多的免疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈分為K或X。重鏈分為Y、U、a、S、或I，其依次分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。典型免疫球蛋白(抗體)結(jié)構(gòu)單元已知包含四聚體。每個(gè)四聚體包含兩個(gè)相同的多肽鏈對(duì)，每個(gè)對(duì)具有ー個(gè)"輕"鏈(約25kD)和ー個(gè)"重"鏈(約50-70kD)。每個(gè)鏈的N-端定義約100 - 110或更多氨基酸的可變區(qū)，主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別。術(shù)語(yǔ)可變輕鏈(VL)和可變重鏈(VH)分別是指這些輕鏈和重鏈。抗體作為完整免疫球蛋白存在或作為大量充分表征的通過(guò)用各種肽酶消化產(chǎn)生的片段存在?？贵w和其它適合的靶向劑的非限制性實(shí)例包括抗-分化簇抗原⑶-I至⑶-166和這些分子的配體或反受體；抗-細(xì)胞因子抗體，例如，抗-IL-I至抗-IL-18和這些分子的受體；抗-免疫受體抗體、抗T細(xì)胞受體抗體、主要組織相容性復(fù)合物I和II、B細(xì)胞受體、選擇蛋白殺傷抑制受體、殺傷活化受體、OX-40、MadCAM-U Gly-CAMl、整聯(lián)蛋白、鈣粘蛋白、唾液酸粘附素、Fas、CTLA-4、Fe-Y受:體、Fc_a受:體、Fc_〖受:體、Fc-y受:體和它們的配體；抗-金屬蛋白酶抗體，例如，膠原酶、MMP-I至MMP-8、TMP-I、TMP-2 ;抗-細(xì)胞溶解/促炎分子，例如，穿孔蛋白、補(bǔ)體成分、類前列腺素、氧化亞氮、血栓烷；或杭-粘連分子，例如，癌胚抗原、核纖層蛋白或纖連蛋白。靶向劑的其它實(shí)例包括細(xì)胞因子或細(xì)胞因子受體，例如白介素-I (IL-I)、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、ILlI、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-I 受體、IL-2 受體、IL-3 受體、IL-4 受體、IL-5 受體、IL-6 受體、IL-7 受體、IL-8受體、IL-9受體、IL-10受體、IL-Il受體、IL-12受體、IL-13受體、IL-14受體、IL-15受體、IL-16受體、IL-17受體、IL-18受體、淋巴因子抑制因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子、血小板源性生長(zhǎng)因子、干細(xì)胞因子、腫瘤生長(zhǎng)因子P、腫瘤壞死因子、淋巴毒素、Fas、粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、干擾素a、干擾素P、干擾素Y。
靶向劑的另外的其它實(shí)例包括生長(zhǎng)因子和蛋白質(zhì)激素，例如，紅細(xì)胞生成素、血管生成素、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、腫瘤生長(zhǎng)因子a、血小板生成素、甲狀腺刺激因子、甲狀腺釋放激素、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白、表皮生長(zhǎng)因子、VEGF、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、LDL、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素、胰島素生長(zhǎng)因子或胰島素樣生長(zhǎng)因子I和II。靶向劑的另外的實(shí)例包括趨化因子，例如，ENA-78、ELC、GR0_a、GRO-P、GROi、HRG、LIF、IP-10、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MIP-1a ,MIP-I^ 、MIG、MDC、NT_3、NT_4、SCF、LIF、瘦素、RANTES、淋巴細(xì)胞趨化因子、嗜酸細(xì)胞活化趨化因子-I、嗜酸細(xì)胞活化趨化因子-2、TARC、TECK、WAP-l、WAP-2、GCP-l、GCP-2，a -趨化因子受體如 CXCRl、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CXCR7，或 P -趨化因子受體如 CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6 或CCR7。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，靶向劑包括核酸。本申請(qǐng)使用的術(shù)語(yǔ)"核酸"或"寡核苷酸"是指核苷酸的聚合物。本申請(qǐng)使用的"核苷酸"具有本領(lǐng)域中常用的普通含義，即，包含糖部分、磷酸基和堿基(通常含氮)的分子。通常，核苷酸包含ー個(gè)或多個(gè)與糖-磷酸主鏈連接的堿基(僅與糖部分連接，不含磷酸基的堿是"核苷")。在核苷酸中的糖可為，例如，核糖("核糖核酸"或"RNA")或脫氧核糖("脫氧核糖核酸"或"DNA")。在一些情況中，聚合物可包含核糖和脫氧核糖。堿基的實(shí)例包括但不限于天然存在的堿基(例如，腺苷或"A"、胸苷或"T"、鳥(niǎo)苷或"G"、胞苷或"C"或尿苷或"U")。在ー些情況中，聚合物也可包含核苷類似物(例如，阿糖胞苷、肌苷、異鳥(niǎo)嘌呤核苷、水粉蕈素、假尿苷、2，6- ニ氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2-硫代胸苷、3_去氮雜-5-氮雜胞苷ヽ2'-脫氧尿苷、3_硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫脲苷、4-硫代胸苷、2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、2-硫代尿苷、5-溴代胞苷、5-碘代尿苷、肌苷、6-氮雜尿苷、6-氯代嘌呤、7-去氮雜腺苷、7-去氮雜鳥(niǎo)苷、8_氮雜腺苷、8-疊氮基腺苷、苯并咪唑、Ml-甲基腺苷、吡咯并嘧唆、2-氨基-6-氯代嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴代尿苷、5-氟代尿苷、5-甲基胞苷、7-去氮雜腺苷、7-去氮雜鳥(niǎo)苷、8-氧代腺苷、8-氧代鳥(niǎo)苷、0(6)-甲基鳥(niǎo)嘌呤、2-硫代胞苷等)、化學(xué)或生物改性的堿基(例如，甲基化堿)、嵌入的堿基、改性的糖(例如，2'-氟代核糖、2'-氨基核糖、2'-疊氮基核糖、2' -O-甲基核糖、L-對(duì)映異構(gòu)核苷阿拉伯糖、己糖等)、改性的磷酸部分(例如，硫代磷酸或5' -N-亞磷酰胺連接)，和/或可取代至聚合物中的其它天然和非天然存在的堿基，包括取代的和未取代的芳族部分。其它適合的堿基和/或聚合物改性是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在一些情況中，多核苷酸可包括DNA、RNA、改性DNA、改性RNA、反義寡核苷酸、表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)、核苷酸、改性核苷酸、核苷、改性核苷、完整基因或其組合。多核苷酸的其它實(shí)例包括干擾RNA、天然或非天然siRNAs、shRNAs、microRNAs、核酶、DNA質(zhì)粒、反義寡核苷酸、隨機(jī)寡核苷酸或核酶?？蓪⒛[瘤靶向粒子通過(guò)被動(dòng)或主動(dòng)方法遞送至腫瘤中。在前者中，納米粒子通過(guò)滲漏腫瘤毛細(xì)血管開(kāi)窗術(shù)通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散或?qū)α鬟M(jìn)入腫瘤間質(zhì)和細(xì)胞。后者涉及基于分子識(shí)別將藥物遞送至特定位點(diǎn)。最普通的手段使靶向配體與納米粒子結(jié)合。靶向配體增強(qiáng)在納米粒子和靶標(biāo)細(xì)胞位點(diǎn)處的受體之間的相互作用，從而提高局部藥物濃度。許多配體已經(jīng)成功地與納米粒子結(jié)合，包括抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體、葉酸鹽受體和寬范圍的生物分子，如上所述。 分子靶向胞外基質(zhì)("ECM")的實(shí)例包括糖胺聚糖("GAG")和膠原。具有羧基官能團(tuán)的粒子的外表面可與具有游離N-端的病原體相關(guān)分子模式(PAMP)連接。PAMP靶向細(xì)胞或組織表面上的Toll樣受體(TLR)，或者在內(nèi)部向細(xì)胞或組織傳遞信號(hào)，由此潛在地提高攝取。與粒子表面結(jié)合或包含在粒子中的PAMP可包括未甲基化CpG DNA(細(xì)菌)、雙鏈RNA (病毒)、脂多糖(細(xì)菌)、肽多糖(細(xì)菌)、脂阿拉伯甘露聚糖(細(xì)菌)、酵母多糖(酵母)、支原體脂蛋白類如MALP-2 (細(xì)菌)、鞭毛蛋白(細(xì)菌)、多聚肌苷酸多聚胞苷酸(細(xì)菌)、脂磷壁酸(細(xì)菌)或咪唑并喹啉(合成)。也可使用凝集素作為靶向劑，其可與新粒子的連接子共價(jià)連接以靶向粘蛋白和粘膜細(xì)胞層。這種凝集素可從以下物質(zhì)分離相思子(Abrus precatroius)、雙孢子蘑燕(Agaricus bisporus)、獲鱺(Anguilla anguilla)、花生(Arachis hypogaea)、西非單葉豆(Pandeiraea simplicifolia)、紫羊！ 帝甲(Bauhinia purpurea)、ネ對(duì),帛)(粵 Jし(Caraganarobrescens)、鷹嘴豆(Cicer arietinum)、刺松藻(Codium fragile)、曼陀羅草(Daturastramonium)(Dolichos biflorusノ '1: 1 (Erythrina coralIodendronノ(Erytnrina cristagalliノ、歐洲衛(wèi)オ(Euonymus europaeus)、大ii (Glycine max)、陸地大蝸牛(Helix aspersa)、蓋罩大蝸牛(Helix pomatia)、香豌豆(Lathyrus odoratus)、兵ii (Lens culinaris)、美y州(Limulus polypnemus)、番芳ロ (Lysopersicon esculentum)、桑澄(Maclura pomifera)、苦瓜(Momordica charantia)、雞敗血性霉衆(zhòng)菌(Mycoplasmagallisepticum)、莫桑比克眼鏡蛇(Naja mocambique),以及外源凝集素伴刀豆球蛋白 A(Concanavalin A)、玻拍酸伴刀豆球蛋白 A(Succinyl-Concanavalin A)、麥胚凝集素(Triticum vulgaris)、荊豆凝集素 I、II 和 III (Ulex europaeus I, II and III)、西澤接骨木(Sambucus nigra)、懷槐(Maackia amurensis)、黃賠輸(Limax f Iuvus)、美洲大螯奸(Homarus americanus)、黃道蟹(Cancer antennarius)和翅莢百脈根(Lotustetragonolobus)。已經(jīng)提出數(shù)種細(xì)胞表面標(biāo)記物作為用于腫瘤尋靶治療的潛在靶標(biāo)，包括，例如，前列腺特異性膜抗原(PSMA)、HER-2、HER-3、EGFR和葉酸鹽受體。PSMA為充分確立的腫瘤標(biāo)記物，其在前列腺癌中，特別是在沉重性、激素不依賴性和轉(zhuǎn)移性疾病中上調(diào)(Ghosh和Heston, 2004, J. Cell. Bioche m.，91:528-539)。已經(jīng)使用PSMA作為用于成像轉(zhuǎn)移性前列腺癌的腫瘤標(biāo)記物和作為實(shí)驗(yàn)性免疫治療劑的靶標(biāo)。PSMA是批準(zhǔn)用于前列腺癌轉(zhuǎn)移灶的診斷成像的ProstaScintg)( —種基于單克隆抗體的成像劑)的分子祀標(biāo)。已經(jīng)將祀向PSMA的外部區(qū)域的J591 ( ー種去免疫化單克隆抗體)作為用于放射免疫療法和放射免疫成像的試劑進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。據(jù)報(bào)告，放射性標(biāo)記的J591準(zhǔn)確地靶向骨和軟組織中的前列腺癌轉(zhuǎn)移灶并顯示抗腫瘤活性。有趣地，PSMA在大部分非前列腺實(shí)體瘤(包括乳腺癌和肺癌)的新血管系統(tǒng)上以高水平區(qū)別地表達(dá)，以及近來(lái)在兩個(gè)不同的臨床試驗(yàn)中證實(shí)了 PSMA靶向非前列腺癌的臨床可行性(Morris et al. , 2007, Clin. Cancer Res. , 13:2707-13;Milowsky etal.，2007, J. Clin. Oncol.，25:540-547)。PSMA在前列腺癌細(xì)胞和非前列腺實(shí)體瘤新血管系統(tǒng)上高度受限的存在使它成為用于將細(xì)胞毒素劑遞送至大部分實(shí)體瘤的有吸引力的靶標(biāo)。另外的靶向劑描述于WO 2008/124632中，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。在本領(lǐng)域中已知或?qū)㈤_(kāi)發(fā)的其它靶向部分預(yù)期用于本發(fā)明。制備遞送組合物的方法 本申請(qǐng)所述遞送組合物可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法制備，例如，納米沉積和乳液法。另外，可使用微流控技術(shù)方法制備該新型遞送組合物。單ー步驟納米沉積法描述于美國(guó)專利5，118，528中，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。通過(guò)將含物質(zhì)的溶液混合至所述物質(zhì)在其中具有差的溶解度的另ー種溶液(即，非溶剤)，這些方法可用于合成納米粒子。例如，可制造聚合物(例如，PLGA-PEG)納米粒子，其中將在水不可混溶或水可混溶的溶劑中的聚合物溶液添加至含水流體(即，非溶剤)。這種納米沉積方法也描述于例如WO 2007/150030，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，將與具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合的親水活性劑溶解在揮發(fā)性水可混溶的有機(jī)溶劑中，以形成第一溶液，以及將疏水活性劑溶解在揮發(fā)性水可混溶的有機(jī)溶劑中，以形成第二溶液。通過(guò)將多種兩性嵌段共聚物溶解在水可混溶的有機(jī)溶劑中制備第三溶液，并合并第一、第二和第三溶液，使得通過(guò)沉積形成具有被兩性嵌段共聚物包圍的疏水聚合物核芯的納米粒子。制備粒子的雙乳液法(doubleemulsion methods)在 Mundargi etal.，2008，Control. Release, 125:193-209中評(píng)論，將其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式并入本文。我們已經(jīng)開(kāi)發(fā)了能夠通過(guò)快速混合制備PLGA-PEG NP的微流體技術(shù)，其允許用于納米粒子的成核和組裝的均勻條件(Karnik et al.，2008，Nano. Lett.，8:2906-12)。而且，通過(guò)改變不同聚合前體進(jìn)入微流體設(shè)備的流速，可系統(tǒng)地和可再現(xiàn)地控制所得納米粒子的性質(zhì)。這種技術(shù)可用于組合地混合藥物官能化聚合物和配體官能化聚合物，以產(chǎn)生具有不同生物物理化學(xué)性質(zhì)的不同的靶向聚合物納米粒子的庫(kù)，每種攜帯兩種或更多種不同的活性劑，例如，抗癌藥物。從充分定義的前體批次開(kāi)始，可在単一步驟中制備具有不同性質(zhì)的納米粒子(Anderson et al. , 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101:16028-33) 由于逐滴混合，使用微流體快速混合的単一受控納米沉積步驟可提供可再現(xiàn)的自組裝和除去差異性。所有化學(xué)結(jié)合步驟可在由聚合物配制納米粒子之前進(jìn)行，從而進(jìn)一歩最小化差異性。通過(guò)改變不同前體的比例，可得到具有不同粒度、電荷、PEG覆蓋度和配體密度的納米粒子。微流體設(shè)備使得能夠?qū)⒓{米粒子前體溶液快速混合至水中，從而導(dǎo)致可再現(xiàn)的納米沉積。這種手段是穩(wěn)健的并且在設(shè)計(jì)上極其簡(jiǎn)單，從而使它非常適于以自動(dòng)化高生產(chǎn)カ方式制備具有不同性質(zhì)的均勻納米粒子制劑?？煽氐睾涂焖俚鼗旌显噭┎⑻峁┚鶆蚍磻?yīng)環(huán)境的能力使得微流體系統(tǒng)完美地適于合成單分散納米粒子(DeMello and DeMello, 2004, Lab on aChip, 4:11N-15N)。與不控制混合時(shí)間的常規(guī)納米沉積相比，微流控技術(shù)的使用能夠提供所得納米粒子均勻性的顯著增強(qiáng)和再現(xiàn)能力的顯著改善。所述方法得到具有較高藥物載荷和較慢藥物釋放的納米粒子，這可能是由于形成了具有更疏水核芯的更緊湊的納米粒子。而且，所述方法的簡(jiǎn)單性使其適于自動(dòng)化，其中可改變輸入流速以控制納米粒子的組成和性質(zhì)。也可使用用于組合半自動(dòng)納米粒子合成的其它微流體系統(tǒng)，快速合成具有不同生物物理化學(xué)性質(zhì)的納米粒子的庫(kù)。一種示例性系統(tǒng)由四個(gè)計(jì)算機(jī)控制的注射泵組成，其可將不同的前體聚合物、藥物、溶劑和水遞送至設(shè)計(jì)成攝入四種輸入前體流(例如，PLA-藥物A、PLA-藥物B、藥物C和PLA-PEG-配體)的微流體設(shè)備。首先取決于每種前體的流速以ー定比例混合前體，導(dǎo)致不同的前體組合。在此混合步驟后，由所給的前體組合，通過(guò)納米沉 積，使用流動(dòng)聚焦合成納米粒子，得到具有由獨(dú)特前體組合決定的特征的納米粒子制劑。為了制備具有不同制劑的粒子庫(kù)，在合成了ー批納米粒子后，改變流速以得到另一不同的制劑。可規(guī)劃注射泵以系統(tǒng)地改變相對(duì)前體流動(dòng)速率，以對(duì)于每組流速得到不同納米粒子制劑。在一段短暫的時(shí)間(例如，1-5分鐘)之后，改變流速，以每小時(shí)10 - 30種不同制劑的速度連續(xù)地產(chǎn)生新的納米粒子制劑。使用遞送組合物的方法本發(fā)明還包含制品、制劑、試劑盒等，其包含本申請(qǐng)所述的任何組合物。在ー些情況中，疾病(例如，癌癥)的治療可涉及使用本申請(qǐng)所述的組合物或"藥物"。即，本發(fā)明的ー個(gè)方面涉及用于治療疾病(例如，癌癥或腫瘤)的一系列組合物(例如，藥物組合物)或藥物。也可將這些組合物包裝在試劑盒中，所述試劑盒任選地包含使用組合物治療這種病癥的使用說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明的這些和其它實(shí)施方案也可涉及根據(jù)本申請(qǐng)所述的任何技術(shù)和組合物以及組合物組合促進(jìn)疾病(例如，癌癥或腫瘤)的治療。在一些實(shí)施方案中，也可使用本發(fā)明的組合物和方法預(yù)防腫瘤或癌癥的生長(zhǎng)，和/或預(yù)防腫瘤或癌癥的轉(zhuǎn)移。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物可用于收縮或破壞癌癥。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明組合物可単獨(dú)使用或者與ー種或多種另外的抗癌劑或治療(例如，化學(xué)治療劑、靶向治療劑、擬靶向治療劑、激素、輻射、外科手術(shù)等，或其兩種或更多種的任何組合)組合使用。在一些實(shí)施方案中，可將本發(fā)明的組合物給藥于已經(jīng)歷涉及外科手術(shù)、輻射和/或化學(xué)療法的治療的患者。在某些實(shí)施方案中，可將本發(fā)明組合物長(zhǎng)期給藥，以預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)，或者降低癌癥復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，可將包含本發(fā)明粒子的組合物與可藥用載體組合以形成藥物組合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，載體可基于如下所述的給藥途徑、靶標(biāo)組織的位置、遞送的藥物、藥物遞送的時(shí)間過(guò)程等來(lái)選擇。本申請(qǐng)使用的"藥物組合物"或"可藥用"組合物包含與ー種或多種可藥用載體(添加剤)和/或稀釋劑配制在一起的治療有效量的一種或多種本申請(qǐng)所述的組合物。如詳細(xì)描述，可專門配制本發(fā)明藥物組合物用于以固體或液體形式給藥，包括適于以下的形式ロ服給藥，例如，獸用頓服藥(含水或非水的溶液劑或混懸劑)，片劑，例如，目標(biāo)為含服、舌下和全身吸收的那些，球齊IJ、粉末齊IJ、顆粒劑、用于施用至舌的糊劑；腸胃外給藥，例如，通過(guò)皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或硬膜外注射，作為例如無(wú)菌溶液劑或混懸劑，或緩釋制劑；局部施用，例如，作為乳膏劑、軟膏劑或控釋貼劑或噴霧劑，施用至皮膚、肺或口腔；陰道內(nèi)或直腸內(nèi)，例如，作為陰道栓劑、乳膏劑或泡沫劑；舌下；經(jīng)眼；透皮；或經(jīng)鼻，肺和其它粘膜表面。本申請(qǐng)使用的措辭"可藥用"是指那些化合物、材料、組合物和/或劑型在合理的醫(yī)藥判斷范圍內(nèi)適用于與人類和動(dòng)物的組織接觸而不引起過(guò)度的毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或其它問(wèn)題或并發(fā)癥，這與合理的益處/風(fēng)險(xiǎn)比例相稱。本申請(qǐng)使用的措辭"可藥用載體"是指可藥用材料、組合物或媒介物，例如液體或固體填料、稀釋劑、賦形劑或溶劑材料，牽涉在將主體化合物從ー個(gè)器官或身體的一部分?jǐn)y帯或輸送至另ー個(gè)器官或身體的另一部分中。每種載體必須是"可接受的"，即，與制劑·的其它成分相容并且對(duì)患者無(wú)害。可用作可藥用載體的材料的一些實(shí)例包括糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素納、こ基纖維素和こ酸纖維素；西黃蓍膠粉；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；ニ醇，例如丙ニ醇；多元醇，例如丙三醇、山梨醇、甘露醇和聚こニ醇；酯，例如油酸こ酯和月桂酸こ酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無(wú)熱原水；等滲鹽水；林格溶液；こ醇；PH緩沖溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；和在藥物制劑中使用的其它非毒性可相容物質(zhì)。也可在組合物中存在濕潤(rùn)劑、乳化劑和潤(rùn)滑劑如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、剝離劑、包衣衣料、增甜、矯味和加香劑，防腐劑和抗氧化劑?？伤幱每寡趸瘎┑膶?shí)例包括水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯(ascorbylpalmitate)、丁羥茴醚(BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒(méi)食子酸丙酷、a -生育酚(例如，琥珀酸a-生育酚酷)等；和金屬螯合劑，例如檸檬酸、こニ胺四こ酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。通常可按最大量的劑量給藥本發(fā)明組合物，同時(shí)避免或最小化任何潛在的有害副作用。所述組合物可按有效量給藥，単獨(dú)地或在與其它化合物如可用于治療疾病(例如，癌癥)的其它化合物的混合物中。有效量通常是足以在受試者中抑制疾病(例如，癌癥)的量。通過(guò)使用本申請(qǐng)所述的任何測(cè)定或其它已知測(cè)定篩選組合物，本領(lǐng)域技術(shù)人員可測(cè)定組合物的有效量。當(dāng)然，有效量可取決于因素如所治療的病癥的嚴(yán)重性；個(gè)體患者參數(shù)，包括年齡、身體健康狀況、尺寸和體重；同時(shí)進(jìn)行的治療；治療頻率；或給藥模式。這些因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的并且可用不超過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)解決。在一些情況中，使用最大劑量，即，根據(jù)合理醫(yī)療判斷的最高安全劑量。在本發(fā)明藥物組合物中的活性成分的實(shí)際劑量水平可改變，以得到對(duì)于特定患者、組合物和給藥模式有效實(shí)現(xiàn)希望的治療應(yīng)答同時(shí)對(duì)患者無(wú)毒的活性成分的量。選擇的劑量水平可取決于多種因素，包括使用的本發(fā)明具體化合物或其酷、鹽或酰胺的活性、給藥途徑、給藥時(shí)間、所用的具體化合物的排泄或代謝的速度、治療持續(xù)時(shí)間、與所用的具體化合物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料、所治療患者的年齡、性別、體重、身體狀況、一般健康和既往醫(yī)藥歷史，和醫(yī)療領(lǐng)域公知的類似因素。具有本領(lǐng)域普通技能的醫(yī)師或獸醫(yī)能夠容易地對(duì)所需藥物組合物的有效量進(jìn)行測(cè)定和開(kāi)藥方。例如，醫(yī)師或獸醫(yī)能夠以低于實(shí)現(xiàn)希望的治療效果所需的劑量的水平開(kāi)始在藥物組合物中使用的本發(fā)明化合物的劑量，然后逐漸提高劑量，直到達(dá)到希望的效果。在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物或藥物組合物長(zhǎng)期地提供至受試者。長(zhǎng)期治療包括任何形式的重復(fù)給藥延長(zhǎng)的時(shí)間，例如重復(fù)給藥ー個(gè)月或多個(gè)月、在一個(gè)月和一年之間、一年或更多年，或更長(zhǎng)時(shí)間。在許多實(shí)施方案中，長(zhǎng)期治療涉及在受試者的整個(gè)生命期間重復(fù)給藥本發(fā)明的化合物或藥物組合物。例如，長(zhǎng)期治療可涉及規(guī)律地給藥，例如一日一次或多次，一周一次或多次，或者一月一次或多次。一般而言，適合的劑量如本發(fā)明化合物的日劑量將是所述化合物有效產(chǎn)生治療效果的最低劑量。這種有效劑量通常將取決于上述因素。 如果希望，活性化合物的有效日劑量可作為兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)或更多個(gè)亞劑量在一天中以適當(dāng)?shù)拈g隔分離地給藥，任選地，以單位劑量的形式。盡管本發(fā)明組合物可単獨(dú)給藥，但是可如上所述作為藥物制劑(組合物)給藥。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物可被促進(jìn)用于治療異常細(xì)胞增生、疾病(例如，癌癥)或腫瘤，或者包含用于治療伴隨細(xì)胞增生、癌癥或腫瘤的使用說(shuō)明書(shū)，如上所述。在另ー方面，本發(fā)明提供了方法，其涉及通過(guò)給藥本發(fā)明組合物，及其同系物、類似物、衍生物、對(duì)映異構(gòu)體和功能上等同的組合物中的任何ー種，促進(jìn)疾病(例如，癌癥)的預(yù)防或治療，其中所述組合物能夠治療疾病。"使用說(shuō)明書(shū)"可限定促進(jìn)組分，并且通常涉及書(shū)面指示，所述書(shū)面指示在本發(fā)明組合物的包裝上或者與本發(fā)明組合物的包裝相關(guān)聯(lián)。使用說(shuō)明書(shū)也可包含以任何方式提供的任何ロ頭或電子指示。"試劑盒"通常限定包裝，所述包裝包含本發(fā)明組合物和使用說(shuō)明書(shū)，或其同系物、類似物、衍生物、對(duì)映異構(gòu)體和功能上等同的組合物中的任何一種或組合，但是也可包含本發(fā)明組合物和任何形式的使用說(shuō)明書(shū)，所述使用說(shuō)明書(shū)以與組合物相關(guān)的方式提供，使得臨床專家將清楚地認(rèn)識(shí)到，該使用說(shuō)明書(shū)應(yīng)與具體組合物有夫。本申請(qǐng)所述的試劑盒也可含有ー個(gè)或多個(gè)容器，其可含有化合物如所述種類、信號(hào)實(shí)體、生物分子和/或粒子。試劑盒也可含有用于混合、稀釋和/或給藥化合物的使用說(shuō)明書(shū)。試劑盒也可含有具有一種或多種溶劑、表面活性剤、防腐劑和/或稀釋劑(例如，生理鹽水(0.9%NaCl)或5%右旋糖)的其它容器，以及用于混合、稀釋或?qū)⒔M分給藥于樣品或給藥于需要治療的患者的容器。試劑盒的組合物可按任何適合的形式提供，例如，作為液體溶液或作為干燥粉末。當(dāng)提供的組合物是干燥粉末時(shí)，通過(guò)添加適合的溶劑(其也可提供)，可將粉末重建。在使用液體形式的組合物的實(shí)施方案中，所述液體形式可為濃縮的或直接使用的。溶劑可取決于化合物和使用或給藥的模式。用于藥物組合物的適合的溶劑是公知的并且可在文獻(xiàn)中得至IJ。在一組實(shí)施方案中，試劑盒可包含載體裝置，將所述載體裝置隔開(kāi)以嚴(yán)格限制地接受ー個(gè)或多個(gè)容器裝置如小瓶、管等，每個(gè)容器裝置包含特定的組合物。另外，試劑盒可包含用于其它組分(例如，可用于測(cè)定中的緩沖劑)的容器。本申請(qǐng)使用的"受試者"或"患者"是指任何哺乳動(dòng)物(例如，人類)，例如可患疾病(例如，癌癥)的哺乳動(dòng)物。實(shí)例包括人類、非人靈長(zhǎng)類、牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓或嚙齒類動(dòng)物如小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠或荷蘭豬。受試者可為診斷患有疾病或以其它方式已知患有疾病(例如，癌癥)的受試者。在一些實(shí)施方案中，受試者可被診斷為處于患有疾病的危險(xiǎn)中或者已知處于患有疾病的危險(xiǎn)中。在某些實(shí)施方案中，可基于受試者中的已知疾病選擇用于治療的受試者。在一些實(shí)施方案中，可基于受試者中的可疑疾病選擇用于治療的受試者。在一些實(shí)施方案中，疾病可通過(guò)以下方法診斷檢測(cè)生物樣品(例如，尿、唾液、全血、血清、大便等，或其任何組合)中的突變關(guān)聯(lián)物。因此，可將本發(fā)明的化合物或組合物給藥于受試者，至少部分地基于以下事實(shí)在得自受試者的至少ー種樣品(例如，活組織檢查樣品或任何其它生物樣品)中檢測(cè)到突變。在一些實(shí)施方案中，癌癥不能被檢出或者位于受試者中，但是在至少ー種生物樣品中與癌癥相關(guān)的突變的存在足以對(duì)受試者開(kāi)處方或給予一種或多種本發(fā)明組合物。在一些實(shí)施方案中，可給藥所述組合物以預(yù)防疾病如癌癥的發(fā)展。然而，在一些實(shí)施方案中，可懷疑現(xiàn)存疾病的存在，但是還未確定，可給藥本發(fā)明組合物以預(yù)防疾病的進(jìn)ー步生長(zhǎng)或發(fā)展。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，可使用任何適合的技術(shù)識(shí)別或檢測(cè)與疾病如癌癥相關(guān)的突變和/或過(guò)表達(dá)。例如，可使用核酸檢測(cè)技術(shù)(例如，測(cè)序、雜交等)或肽檢測(cè)技術(shù)(例如，測(cè)序、基于抗體的檢測(cè)等)。在一些實(shí)施方案中，可使用其它技術(shù)檢測(cè)或推斷癌癥的存在(例如，組織學(xué)等)。通過(guò)在與癌癥的信號(hào)途徑相關(guān)的ー個(gè)或多個(gè)其它位點(diǎn)檢測(cè)突變、過(guò)表達(dá)、擴(kuò)增或其任何組合，可檢測(cè)或推斷癌癥的存在。實(shí)施例在下列實(shí)例中進(jìn)ー步描述了本發(fā)明，其不限制在權(quán)利要求中描述的本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I. PLA-Pt的合成開(kāi)發(fā)藥物官能化聚合物的ー個(gè)策略是基于氨基酸簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)化成它們的相應(yīng)的a -羥基酸(i)(圖11)。第一步涉及通過(guò)使用亞硝酸鈉在酸的存在下重氮化反應(yīng)6小吋，將胺轉(zhuǎn)化成羥基。這是ー個(gè)高收率反應(yīng)，其中所得單體連同乳酸直接用于縮聚，得到聚丙交酯共聚物Poly-OBn?？s聚通過(guò)本體反應(yīng)條件在150° C在連續(xù)氬氣吹掃下進(jìn)行3小時(shí)，接著進(jìn)ー步在真空下進(jìn)行3小吋。相同聚合物通過(guò)環(huán)狀丙交酯單體(ii)的開(kāi)環(huán)聚合(ROP) 制備，環(huán)狀丙交酯單體(ii)通過(guò)以下方法制備a-羥基酸在非常稀釋的反應(yīng)條件下在甲苯中使用1%對(duì)甲苯磺酸進(jìn)行脫水反應(yīng)。對(duì)于合成高分子量聚合物，ROP手段更有利。芐基保護(hù)基防止羥基在聚合期間發(fā)生副反應(yīng)。然后，羥基官能化可生物降解聚丙交酯(PLA-OH)通過(guò)以下方法合成使用Pd/C催化劑在50psi壓カ芐基脫保護(hù)8小吋。芐基的完全脫保護(hù)使用1H-NMR譜圖通過(guò)監(jiān)測(cè)在7. 3ppm的峰證實(shí)(圖2)。為了合成羧基官能化聚丙交酷，用琥珀酸酐或衣康酸酐處理PLA-0H。作為開(kāi)發(fā)具有側(cè)鏈親水藥物的可生物降解聚合物的演示，使用DCC/H0BT偶合使順鉬的前藥(單琥珀酸鉬)與聚合物結(jié)合，在DMF中于室溫反應(yīng)12小時(shí)后得到最終的PLA-Pt (圖12)。在PLA-Pt中鉬前藥的存在通過(guò)1H-NMR譜圖顯現(xiàn)在與前藥結(jié)合后在
6.3ppm出現(xiàn)胺質(zhì)子(圖2)。
實(shí)施例2. PLA-OH和PLA-Pt納米粒子的合成和表征PLA-OH聚合物的體外毒性通過(guò)用聚(乳酸-共聚-こ醇酸)-聚こニ醇(PLGA-PEG)合成納米粒子來(lái)測(cè)試。所述粒子相對(duì)無(wú)毒，IC5tl值高達(dá)27mg/mL(圖3)。通過(guò)納米沉積使用微流控技術(shù)手段制備了能夠遞送兩種藥物的納米粒子(圖4B)。在本發(fā)明中，我們使用具有官能團(tuán)如羧基的標(biāo)準(zhǔn)PLGA-PEG，連同含有親水藥物作為側(cè)基的聚丙交酷，并在疏水藥物的存在下進(jìn)行納米沉積。一旦制備了納米粒子，將粒子通過(guò)偶合用靶向配體進(jìn)行官能化。使用順鉬前藥作為親水藥物，多西紫杉醇作為疏水藥物，以及AlO-適體作為靶向配體靶向過(guò)表達(dá)前列腺特異性膜抗原(PSMA)的前列腺癌系(圖13)。游離PLGA的存在通常在PLGA-PEG的納米沉積期間提高納米粒子粒度。使用微流控技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)較小粒度納米粒子，甚至在游離PLGA的存在下也是如此(圖5A，表I)。本體納米沉積(bulk nanoprecipitation)得到粒度超過(guò)150nm的粒子,而通過(guò)使用微流控技術(shù)手段，我們可得到約IOOnm的粒度。這些粒子進(jìn)ー步通過(guò)透射電子顯微鏡檢查(TEM)表征(圖5B)。TEM結(jié)果證實(shí)了這些粒子的約IOOnm的粒度。在這些粒子中鉬和多西紫杉醇載荷分別為5%和1%。通過(guò)改變初始進(jìn)料，這些值可容易地改變。 表I.納米粒子的表征
權(quán)利要求
1.包含聚合物基質(zhì)的粒子，所述聚合物基質(zhì)包含第一活性劑和第二活性剤，其中配置所述聚合物基質(zhì)，提供所述第一和第二活性劑中的每種的釋放動(dòng)力學(xué)，使得所述第一和第ニ活性劑中的每種的少于50%在將所述粒子在約37° C懸浮在中性水溶液中的最初兩個(gè)小時(shí)內(nèi)釋放。
2.權(quán)利要求I的粒子，其中所述聚合物基質(zhì)還包含ー種或多種另外的活性剤。
3.包含聚合物基質(zhì)的粒子，所述聚合物基質(zhì)包含第一活性劑和第二活性剤，其中配置所述聚合物基質(zhì)，使得所述第一和第二活性劑中的每 種在受試者的循環(huán)中具有至少兩個(gè)小時(shí)的半衰期。
4.權(quán)利要求3的粒子，其中所述聚合物基質(zhì)還包含ー種或多種另外的活性剤。
5.權(quán)利要求1-4中的任ー項(xiàng)的粒子，其中使所述第一活性劑與可生物降解聚合物結(jié)ムロ o
6.權(quán)利要求1-4中的任ー項(xiàng)的粒子，其中使所述第一活性劑與具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合。
7.權(quán)利要求6或7的粒子，其中使所述第二活性劑與可生物降解聚合物結(jié)合。
8.權(quán)利要求6或7的粒子，其中使所述第二活性劑與具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合。
9.具有多種活性劑的粒子，所述粒子包含 (a)疏水聚合物核芯，其包含 (i)與可生物降解聚合物結(jié)合的第一活性劑；和 (ii)第二活性劑；和 (b)表面暴露的親水層。
10.權(quán)利要求9的粒子，其中所述第一活性劑通過(guò)所述聚合物上的側(cè)鏈官能團(tuán)與所述可生物降解聚合物結(jié)合。
11.權(quán)利要求9或10的粒子，其中所述可生物降解聚合物為具有相對(duì)疏水的第一末端和相對(duì)親水的第二末端的嵌段共聚物，其中所述疏水核芯包含與所述第一活性劑結(jié)合的嵌段共聚物的第一末端，以及其中所述親水層包含所述嵌段共聚物的第二末端。
12.權(quán)利要求9或10的粒子，其中所述親水層包含多種兩性嵌段共聚物，每種包含與所述疏水聚合物核芯相互作用的相對(duì)疏水末端和表面暴露的相對(duì)親水末端。
13.權(quán)利要求1-12中的任ー項(xiàng)的粒子，其還包含靶向劑。
14.權(quán)利要求1-13中的任ー項(xiàng)的粒子，其中所述第一活性劑和第二活性劑獨(dú)立地選自生物分子、生物活性劑、小分子、藥物、前藥、藥物衍生物、蛋白質(zhì)、肽、疫苗、輔料、熒光分子或多核苷酸。
15.權(quán)利要求1-14中的任ー項(xiàng)的粒子，其中所述第一和第二活性劑分別為紫杉醇或多西紫杉醇和吉非替尼；吉非替尼和紫杉醇或多西紫杉醇；奧沙利鉬(或奧沙利鉬前藥)和伊立替康；伊立替康和奧沙利鉬(或奧沙利鉬前藥)；紫杉醇和tubacin ；tubacin和紫杉醇；氯尼達(dá)明、ニ氯こ酸鹽/酷、琥珀酸a-生育酚酯、樺木酸或白藜蘆醇和己酸鉬(IV);己酸鉬(IV)和氯尼達(dá)明、ニ氯こ酸鹽/酷、琥珀酸a-生育酚酯、樺木酸或白藜蘆醇；琥珀酸a-生育酚酯或茉莉酸甲酯和多西紫杉醇；或者多西紫杉醇和琥珀酸a-生育酚酯或茉莉酸甲酷。
16.配制包含至少兩種活性劑的粒子的方法，所述方法包括 提供第一和第二活性劑； 使所述第一活性劑或其前藥或衍生物與具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合；和 制備包含所述結(jié)合的第一活性劑和所述第二活性劑的粒子。
17.權(quán)利要求16的方法，其還包括使所述第二活性劑或其前藥或衍生物與具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合。
18.權(quán)利要求16的方法，其中使所述第一活性劑和/或所述第二活性劑與具有側(cè)鏈官能團(tuán)的可生物降解聚合物結(jié)合給予所述第一和第二活性劑用于形成粒子的適應(yīng)性。
19.在時(shí)間空間上控制兩種或更多種活性劑向受試者的給藥的方法，所述方法包括 提供包含聚合物基質(zhì)的粒子，所述聚合物基質(zhì)包含第一活性劑和第二活性剤，其中配置所述聚合物基質(zhì)，提供所述第一和第二活性劑中的每種的希望的時(shí)間空間釋放動(dòng)力學(xué)；和 向受試者給藥所述粒子，使得所述第一和第二活性劑以所述希望的時(shí)間空間釋放動(dòng)カ學(xué)從所述粒子釋放。
20.包含多個(gè)權(quán)利要求1-15中的任ー項(xiàng)的粒子的藥物組合物，用于靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、ロ月艮、透皮、跨膜、腹膜內(nèi)、顱內(nèi)、眼內(nèi)、硬膜外、鞘內(nèi)、局部、灌腸、注射、肺途徑或輸注遞送。
全文摘要
本發(fā)明提供包含兩種或更多種活性劑的遞送組合物，其中至少一種活性劑與聚合物結(jié)合。所述遞送組合物允許控制釋放多種活性劑，包括具有不同溶解度、電荷和/或分子量的活性劑。
文檔編號(hào)A61K9/22GK102791294SQ201080064009
公開(kāi)日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2010年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月16日
發(fā)明者N.科利施蒂, O.C.法羅克扎德, P.M.瓦倫西亞, R.S.蘭格, S.J.利帕德, S.達(dá)爾 申請(qǐng)人:布里格姆婦女醫(yī)院股份有限公司, 麻省理工學(xué)院