專利名稱：制備多生物素化化合物的方法
制備多生物素化化合物的方法本發(fā)明涉及診斷領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生可用于信號放大的多生物素化樹枝狀大分子化合物的方法，特別是在診斷試驗(yàn)中檢測分析物的過程中。允許檢測分析物諸如蛋白質(zhì)及核酸的探針被廣泛地使用，并且是選擇用于體外診斷和體內(nèi)診斷的工具。然而，由于這些分析物不總是充足地大量地存在，因此，可能難以檢測這些分析物。因此，需要檢測放大系統(tǒng)。已開發(fā)出用于檢測不足量的分析物的一些技術(shù)。這些技術(shù)包括增加分析物的量，例如利用PCR技術(shù)或NASBA技術(shù)，或放大檢測，例如通過利用具有多種標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)。因此，專利申請EP0774119A描述了具有多種標(biāo)記物的軛合物,所述多種標(biāo)記物包括具有最多100個(gè)單體單元的聚合物支持物，所述聚合物支持物含有I至10個(gè)半抗原分子和I至10個(gè)標(biāo)記物基團(tuán)，并且還描述了通過以下的固相合成來制備這些軛合物(a)通過 在支持物的預(yù)定的位置引入與半抗原分子和/或標(biāo)記物基團(tuán)共價(jià)偶聯(lián)的單體衍生物，和/或(b)合成后，通過使半抗原分子和/或標(biāo)記物基團(tuán)與支持物的反應(yīng)基偶聯(lián)。樹枝狀大分子是被清楚地定義的具有多個(gè)分支并以多個(gè)外圍官能團(tuán)封端的大分子。由于樹枝狀大分子具有多個(gè)官能團(tuán)的事實(shí)，樹枝狀大分子優(yōu)勢之一是它們可被用作穩(wěn)定的偶聯(lián)劑，如由該申請人提交的專利申請W003/72546中所描述的。另一個(gè)優(yōu)勢還在于以下事實(shí)樹枝狀大分子是具有多種標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)，因?yàn)樗鼈兊耐鈬倌軋F(tuán)可被用于結(jié)合多種標(biāo)記物諸如生物素、熒光團(tuán)或其組合。因此，專利申請W001/02861描述了一方面結(jié)合至I至1200個(gè)探針且另一方面結(jié)合至I至1200個(gè)標(biāo)記物的樹枝狀大分子。這些樹枝狀大分子被用于信號放大。其它的多生物素化樹枝狀大分子還描述于專利申請W000/72802中。然而，制備樹枝狀大分子的常規(guī)方法具有以下缺點(diǎn)樹枝狀大分子在液相中合成，這比在固相中更復(fù)雜且更漫長。此外，一些方法產(chǎn)生非中性樹枝狀大分子和非極化樹枝狀大分子。本申請人現(xiàn)已驚奇地開發(fā)出制備多生物素化樹枝狀大分子化合物的新穎方法，在新穎方法允許可重現(xiàn)地且可控地制備如下的生物素化化合物的意義上說，新穎方法可以克服現(xiàn)有技術(shù)方法的缺點(diǎn)-水溶性的，盡管是電中性的，-極化的，由于其功能(包括生物素功能)的單獨(dú)且精確的空間分布，及-在固相中合成。因此，本發(fā)明的第一目的是制備具有式(I)的化合物的方法
權(quán)利要求
1.用于制備具有式(I)的化合物的方法
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述取代基AA1和AA2，如果適用，AA3、AA4和AA5,是相同的，并優(yōu)選地是賴氨酸衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述取代基&、G1，如果適用，G2、G3> G4 和 G5,是相同的，且優(yōu)選具有式(-NH-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-C0-)。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中的一項(xiàng)所述的方法，其特征在于整數(shù)IVIi1，如果適用，n2、n3、n4和n5,是相同的，并優(yōu)選地等于2或3。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述W基團(tuán)是甲氧基三苯甲基。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于相同的，并且，如果適用，WJPW’ 2是相同的，WJPW’ 3是相同的，WjPW’ 4是相同的，且WjPW’ 5是相同的。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述胺保護(hù)基WpW、，并且，如果適用，W2、r 2、％、r 3、胃4和w’ 4、w5和w’ 5，是芴基甲氧基羰基。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述取代基AA是賴氨酸衍生物，且B是NH2。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于X是
10.具有式(I)的化合物
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的具有式⑴的化合物，其特征在于所述取代基AA1和AA2,如果適用，AA3、AA4和AA5,是相同的，并優(yōu)選地是賴氨酸衍生物。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11中任一項(xiàng)所述的具有式(I)的化合物，其特征在于所述取代基6(|、61，如果適用，62、63、64和G5,是相同的，且優(yōu)選具有式(-NH-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CO-)。
13.根據(jù)權(quán)利要求10至12中的一項(xiàng)所述的具有式(I)的化合物，其特征在于整數(shù)％、n1；如果適用，n2、n3、n4和n5,是相同的，并優(yōu)選地等于2或3。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求10至13中任一項(xiàng)所述的具有式(I)的化合物，其特征在于X是且Y是生物素。
15.根據(jù)權(quán)利要求10至14中任一項(xiàng)所述的具有式(I)的化合物，其特征在于AA是賴氨酸衍生物，且B是NH2。
16.根據(jù)權(quán)利要求10至15中任一項(xiàng)所述的具有式(I)的化合物，其特征在于所述抗配體是Fab’片段。
17.根據(jù)權(quán)利要求10所述的具有式(I)的化合物，其特征在于
18.通過權(quán)利要求I至9中所描述的方法獲得的化合物在診斷試驗(yàn)中用于信號放大的用途。
19.權(quán)利要求10至17中所描述的化合物在診斷試驗(yàn)中用于信號放大的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及制備具有式(I)的化合物的新穎的方法，其中-X是生物素或Y是生物素或Z是生物素或V是生物素或還涉及具有式(I)的化合物及其在臨床和工業(yè)診斷中的用途。
文檔編號A61K31/4188GK102822673SQ201180005882
公開日2012年12月12日 申請日期2011年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月12日
發(fā)明者賽維爾·拉庫 申請人:生物梅里埃公司