專利名稱：促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及一種包含鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白、含礦物質(zhì)酵母(含有Zn、Se、Cu)的脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑。
背景技術(shù)：
脂聯(lián)素(Adiponectin)是由包含244個(gè)氨基酸的脂肪組織分泌的激素，于1996年自人脂肪組織中被分離出來(lái)。脂聯(lián)素是脂肪組織特異性的分泌蛋白(非專利文獻(xiàn)2)，不僅大量存在于脂肪組織中，而且還大量存在于血液中(在正常人中為flOyg/ml)(非專利
文獻(xiàn)3)。已知其在骨骼肌和肝臟中通過(guò)活化AMP激酶(AMP-activated protein kinase ；AMPK)而促進(jìn)脂肪的燃燒和糖的攝取。已知該脂聯(lián)素在小型脂肪細(xì)胞中大量地分泌，當(dāng)脂肪細(xì)胞肥大化時(shí)，其分泌量會(huì)減少。此外，脂聯(lián)素作為抑制動(dòng)脈硬化的有益脂肪細(xì)胞因子而為人所知。脂肪細(xì)胞因子中，除上述有益脂肪細(xì)胞因子以外，還存在PAI-1、TNF-α等促進(jìn)動(dòng)脈硬化的有害脂肪細(xì)胞因子。在正常狀態(tài)下，這些有益脂肪細(xì)胞因子和有害脂肪細(xì)胞因子的分泌量保持平衡。但是，當(dāng)由于肥胖等導(dǎo)致脂肪細(xì)胞肥大化時(shí)，有益脂肪細(xì)胞因子的分泌量會(huì)減少，而另一方面，有害脂肪細(xì)胞因子會(huì)過(guò)剩地分泌。結(jié)果，兩者的平衡崩潰而成為II型糖尿病、動(dòng)脈硬化癥等生活習(xí)慣病發(fā)病的原因?？梢?jiàn)，脂聯(lián)素與肥胖及伴隨肥胖而來(lái)的生活習(xí)慣病相關(guān)，認(rèn)為活化該脂聯(lián)素對(duì)預(yù)防或治療生活習(xí)慣病有效。而且，還已知脂聯(lián)素具有抑制肝纖維化的效果。已發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素具有改善高血壓、改善脂代謝、改善胰島素敏感性、抗炎作用、抑制肝纖維化、促進(jìn)正常肝細(xì)胞增殖的效果(專利文獻(xiàn)I)、抗炎效果(專利文獻(xiàn)2)等多方面的作用(專利文獻(xiàn)2 5)，可以說(shuō)使血中的脂聯(lián)素濃度上升的藥品或飲食品顯示出對(duì)代謝綜合征具有預(yù)防、改善作用。在上述背景下，作為促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的藥劑，已知有噻唑烷衍生物。但是，該噻唑烷衍生物有時(shí)伴有腹瀉、便秘、惡心等消化系統(tǒng)癥狀、肝臟損傷等副作用。此外，提出了若干種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的化合物或成分。例如，專利文獻(xiàn)6中公開(kāi)了 N-乙酰半胱氨酸使脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素的表達(dá)量增加；以及夾竹桃麻素使血漿中的脂聯(lián)素濃度上升且使脂肪組織中的脂聯(lián)素的表達(dá)量增加。專利文獻(xiàn)7中公開(kāi)了姜辣素化合物，專利文獻(xiàn)8中公開(kāi)了余甘子果實(shí)或其提取物使脂聯(lián)素的產(chǎn)生增強(qiáng)。除這些物質(zhì)以外，還期待優(yōu)良的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的物質(zhì)。因此，在代謝綜合征的對(duì)策成為社會(huì)問(wèn)題的當(dāng)前，要求開(kāi)發(fā)出一種具有促進(jìn)并增強(qiáng)脂聯(lián)素在體內(nèi)產(chǎn)生的作用的安全的物質(zhì)。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :日本特開(kāi)2002-363094號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2 :日本特開(kāi)2000-256208號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3 :日本專利第3018186號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)4 :美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)第2002/0132773號(hào)專利文獻(xiàn)5 :日本特開(kāi)2005-325072號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6 :日本特開(kāi)2005-232059號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)7 :日本特開(kāi)2006-45210號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)8 :日本特開(kāi)2006-56836號(hào)公報(bào)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)I :馬場(chǎng) t 辦江等，F(xiàn)oods&Food Ingredients Journal of Japan, 1998年，No. 178，p. 52-60非專利文獻(xiàn)2 :Maeda K et al. , Biochem. Biophys. Res. Commun. , 221:286 (1996) 非專利文獻(xiàn)3:Arita Y et al. , Biochem. Biophys. Res.Commun.，257:79 83(1999)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問(wèn)題本發(fā)明的課題在于提供一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生且在副作用和毒性等安全性方面不存在問(wèn)題并且能夠口服攝取的組合物。用于解決問(wèn)題的手段發(fā)明人對(duì)各種食材進(jìn)行了關(guān)于脂聯(lián)素產(chǎn)生的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白、含礦物質(zhì)酵母(含有Zn、Se、Cu)組合而制備的混合物顯示出優(yōu)良的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的能力，從而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明涉及[1] 一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含有鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母，并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用；如上述[I]所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，鮭魚(yú)魚(yú)白提取物為含有通過(guò)對(duì)鮭魚(yú)魚(yú)白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物；[3]如上述[I]或[2]所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，啤酒酵母提取物為含有5(Γ80%的RNA的啤酒酵母提取物；[4]如上述[1Γ[3]中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含礦物質(zhì)酵母為在干酵母中含有2 3%的鋅、0. 3^0. 5%的銅和0.01、. 02%的硒的含礦物質(zhì)酵母；[5]如上述[1Γ[4]中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，每100質(zhì)量份的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物含有16 17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物、33 34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和22 23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母。發(fā)明效果本發(fā)明的脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑在以鮭魚(yú)魚(yú)白提取物作為主要成分并單獨(dú)含有啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白、含礦物質(zhì)酵母時(shí)不具有產(chǎn)生脂聯(lián)素的能力，而通過(guò)將上述物質(zhì)混合則具有優(yōu)良的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的效果。本發(fā)明的脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑對(duì)改善、治療或預(yù)防糖尿病、肥胖、動(dòng)脈硬化癥以及起因于上述疾病的癥狀例如糖尿病并發(fā)癥(糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病性腎病等)、腦梗塞、心肌梗塞、腎硬化癥等有效。


圖I是表示使用本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物測(cè)定分泌到脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)上清中的脂聯(lián)素濃度而得到的結(jié)果的圖。
具體實(shí)施例方式作為本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，只要是含有鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用的組合物，則沒(méi)有特別限制，在此，促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用是指促進(jìn)作為糖代謝、脂代謝等的重要調(diào)節(jié)因子的脂聯(lián)素的分泌、從而使體內(nèi)特別是血中的脂聯(lián)素量增加的作用。作為上述鮭魚(yú)魚(yú)白提取物，只要是可以作為食品用途使用的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物則沒(méi)有特別限制，優(yōu)選含有通過(guò)對(duì)鮭魚(yú)魚(yú)白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物。特別優(yōu)選含有2(Γ70%的分子量100(Γ3000的寡核苷酸、寡肽的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物。這樣的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物例如可以從株式會(huì)社工>·工7 · 7 r々卜U —等獲得。另外，上述鮭魚(yú)魚(yú)白提取物也可以依據(jù)日本特開(kāi)2004-16143中記載的方法來(lái)制備。即，從鮭魚(yú)的魚(yú)白中除去皮、肌肉、血管等后，進(jìn)行純化而去除油分，接著利用蛋白酶和 核酸酶進(jìn)行處理。上述蛋白酶是以胰蛋白酶作為主體的蛋白酶。胰蛋白酶為具有高特異性的絲氨酸蛋白酶，在精氨酸和賴氨酸的羧基側(cè)選擇性地水解肽鍵，因此適于含有大量精氨酸的魚(yú)精蛋白的水解。另外，上述蛋白酶除了包含胰蛋白酶以外，還可以包含其他蛋白酶例如胰凝乳蛋白酶等。作為良好的蛋白酶，可以列舉777才4 >夕' 7卜丨J一株式會(huì)社制造的蛋白酶。另外，利用核酸酶進(jìn)行水解反應(yīng)的溫度為6(T75°C的范圍，其中最優(yōu)選70°C。蛋白酶處理和核酸酶處理的順序沒(méi)有特別限制，優(yōu)選先利用蛋白酶進(jìn)行處理，接著利用核酸酶進(jìn)行處理。作為上述啤酒酵母提取物，只要是可以作為食品用途使用的啤酒酵母提取物則沒(méi)有特別限制，優(yōu)選含有5(Γ80%的RNA的啤酒酵母提取物。這樣的啤酒酵母提取物例如可以從株式會(huì)社"> 工^ · 7 r夕卜U —等獲得。作為上述雞膠原蛋白，沒(méi)有特別限制，可以優(yōu)選使用食品用的雞膠原蛋白，可以優(yōu)選列舉例如株式會(huì)社二斤 二 7 · 7 r夕卜U —制造的雞膠原蛋白。作為上述含礦物質(zhì)酵母，只要是提高了礦物質(zhì)含量的面包酵母則沒(méi)有特別限制，優(yōu)選在干酵母中含有2 3%的鋅的含礦物質(zhì)酵母，其中可以列舉在干酵母中含有2 3%的鋅、O. 3^0. 5%的銅、O. 0Γ0. 02%的硒的含礦物質(zhì)酵母。這樣的含礦物質(zhì)酵母可以從株式會(huì)社工> ·工7 · 7 r々卜U —等獲得。另外，可以通過(guò)將富含鋅的鋅酵母、富含銅的銅酵母、富含硒的硒酵母混合來(lái)制備這樣的含礦物質(zhì)酵母。富含各礦物質(zhì)的酵母可以從株式會(huì)社工A ·工7 · 7 r夕卜J 一等獲得。另外，作為本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物中的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母的配合比例，可以優(yōu)選例示每100質(zhì)量份的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物含有1(Γ25質(zhì)量份、優(yōu)選16 17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物，25^40質(zhì)量份、優(yōu)選33 34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和15 30質(zhì)量份、優(yōu)選22 23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母的組合物。本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物中，除了可以添加藥學(xué)上容許的通常的載體、粘合劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、稀釋劑、PH緩沖劑、崩解劑、增溶劑、助溶劑、等滲劑等各種調(diào)劑用配合成分以外，還可與其他脂聯(lián)素產(chǎn)生促進(jìn)劑等治療藥并用。本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物可以用作對(duì)治療或預(yù)防由脂聯(lián)素的產(chǎn)生下降引起的疾病有用的藥品、補(bǔ)充品、食品、飼料等，施用量或攝取量?jī)?yōu)選為成年人每人每天
O.I 10g，更優(yōu)選O. 5 5g。作為可以應(yīng)用本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物的食 品或食品材料的種類(lèi)，沒(méi)有特別限制，可以列舉例如酸奶、飲料型酸奶、果汁、牛奶、豆奶、酒類(lèi)、咖啡、紅茶、煎茶、烏龍茶、運(yùn)動(dòng)飲料等各種飲料，布丁、餅干、面包、蛋糕、果凍、煎餅等烘烤糕點(diǎn)，羊羹等日式糕點(diǎn)，冷凍甜點(diǎn)、口香糖等的面包/糕點(diǎn)類(lèi)，烏冬面、蕎麥面等面類(lèi)，魚(yú)糕、火腿、魚(yú)肉香腸等摻有魚(yú)肉的制品，味卩曾、醫(yī)油、調(diào)味汁、蛋黃醫(yī)、甜味料等調(diào)味品類(lèi)，奶釀、奶油等乳制品， 腐、魔芋以及咸烹海味、餃子、炸肉餅、沙拉等各種家常菜。另外，可以根據(jù)需要在應(yīng)用了促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物的食品或食品材料中進(jìn)一步配合維生素、礦物質(zhì)等其他營(yíng)養(yǎng)成分。在將本發(fā)明的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物應(yīng)用于食品或飼料中的情況下，可以在食品或食品材料或者飼料或飼料材料的包裝體或附帶的說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用的主旨。以下，利用實(shí)施例具體地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍并不限定于這些例示。實(shí)施例I[試樣的制備]將60mg鮭魚(yú)魚(yú)白提取物(株式會(huì)社工> ·工7 · 7 r夕卜一制造的“ ” V tT>”)、10mg啤酒酵母提取物(株式會(huì)社二 > 二；^ · 7 r夕卜一制造的“啤酒酵母提取RNA”)、20mg膠原蛋白(株式會(huì)社二 >· 二 7^*7 r 卜一制造的“雞膠原蛋白”)、13· 5mg含礦物質(zhì)酵母(株式會(huì)社工> 工7 · 7 r々卜U —制造的“混合含礦物質(zhì)酵母C”)懸浮于PBS中，制備成2. 5mg/ml后,利用Φ O. 45 μ m的過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。使用該濾液，以表I所示的試樣濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)。表I
ΓΓWm I Wma#3
(/ig/ml)(Mg/ml)(yg/ml)
鮭魚(yú)魚(yú)白提取物 — O2 9I 45 —啤酒酵母提取物 O4~iYa
膠原蛋白 ........................................................................................... O9.7.......... 4 8.5
含礦物質(zhì)酵母 ~ O6.5 —… 3 2.5
總計(jì) OI 5 O2 5 0[促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的效果](1)3T3_L1細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)將3T3-L1細(xì)胞(小鼠成纖維細(xì)胞)在含有10%胎牛血清的杜爾貝科改良的伊格爾培養(yǎng)基(CS-DMEM)中培養(yǎng)至達(dá)到密集的狀態(tài)(鋪滿)后，除去培養(yǎng)燒瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，并利用PBS (-)洗滌2次。然后，添加O. 1%胰蛋白酶-EDTA溶液而將細(xì)胞從燒瓶底面剝離，將該剝離的細(xì)胞和O. 1%胰蛋白酶-EDTA溶液轉(zhuǎn)移至離心沉淀管中。向其中添加等體積的10%CS-DMEM，并以1500rpm進(jìn)行5分鐘的離心分離。然后，使細(xì)胞在10%FCS_DMEM中達(dá)到均勻，接種至燒瓶中并放入CO2孵育箱中，在5%C02的條件下在37°C下進(jìn)行培養(yǎng)。(2)向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)在10%CS_DMEM中培養(yǎng)3T3-L1細(xì)胞，自達(dá)到密集狀態(tài)(鋪滿)之日起2天后，將培養(yǎng)基更換為分化培養(yǎng)基I并進(jìn)一步培養(yǎng)2天。接著，將培養(yǎng)基更換為分化培養(yǎng)基2并培養(yǎng)2天。向脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)中使用了分化培養(yǎng)基I和分化培養(yǎng)基2。
分化培養(yǎng)基I為包含10%FBS、0. 5mM異丁基-I-甲基黃嘌呤(IBMX)、I μ M地塞米松(DEX)和10μ g/ml胰島素的DMEM。分化培養(yǎng)基I的制備通過(guò)將10mg/ml胰島素、500mMIBMX和ImM DEX的混合液用10%FCS_DMEM稀釋來(lái)進(jìn)行。另外，分化培養(yǎng)基2為包含10%FCS和I μ M胰島素的DMEM。分化培養(yǎng)基2的制備通過(guò)將10mg/ml胰島素用10%FCS_DMEM稀釋來(lái)進(jìn)行。(3)促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的效果的評(píng)價(jià)分化成脂肪細(xì)胞后，將培養(yǎng)基更換為O. P/oBSA-DMEM并培養(yǎng)24小時(shí)。然后，添加混合物以分別達(dá)到O μ g/ml (試樣I) >50 μ g/ml (試樣2) >250 μ g/ml (試樣3)，進(jìn)而在37。。下孵育48小時(shí)。收集培養(yǎng)上清，使用脂聯(lián)素ELISA試劑盒(大塚制藥株式會(huì)社)測(cè)定上清中的脂聯(lián)素量。結(jié)果示于圖I中，數(shù)值化后的結(jié)果示于表2中。結(jié)果，添加50 μ g/ml和250 μ g/ml時(shí)與未添加(試樣I)時(shí)相比，觀察到脂聯(lián)素濃度呈濃度依賴性地增加。若將未添加時(shí)(對(duì)照)設(shè)為100%，則在添加50 μ g/ml的混合物時(shí)分泌到培養(yǎng)上清中的脂聯(lián)素濃度顯示為對(duì)照的126%，在添加250μ g/ml的混合物時(shí)分泌到培養(yǎng)上清中的脂聯(lián)素濃度顯示為對(duì)照的183%(顯著性水平為1%時(shí)具有顯著差異)。此時(shí)，在任何濃度下對(duì)存活率均無(wú)影響。表權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含有鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母，并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用。
2.如權(quán)利要求I所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，鮭魚(yú)魚(yú)白提取物為含有通過(guò)對(duì)鮭魚(yú)魚(yú)白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物。
3.如權(quán)利要求I或2所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，啤酒酵母提取物為含有5(Γ80%的RNA的啤酒酵母提取物。
4.如權(quán)利要求廣3中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，含礦物質(zhì)酵母為在干酵母中含有2 3%的鋅、O. 3^0. 5%的銅和O. 0Γ0. 02%的硒的含礦物質(zhì)酵母。
5.如權(quán)利要求f4中任一項(xiàng)所述的促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其特征在于，每100質(zhì)量份的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物含有16 17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物、33 34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和22^23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母。
全文摘要
本發(fā)明要解決的課題在于提供一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生且在副作用和毒性等安全性方面不存在問(wèn)題并且能夠口服攝取的組合物。制備一種促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的組合物，其含有鮭魚(yú)魚(yú)白提取物、啤酒酵母提取物、雞膠原蛋白和含礦物質(zhì)酵母，并且具有促進(jìn)脂聯(lián)素產(chǎn)生的作用。作為鮭魚(yú)魚(yú)白提取物，優(yōu)選含有通過(guò)對(duì)鮭魚(yú)魚(yú)白進(jìn)行酶處理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分。作為啤酒酵母提取物，優(yōu)選含有50~80%的RNA。作為含礦物質(zhì)酵母，優(yōu)選在干酵母中含有2~3%的鋅、0.3~0.5%的銅和0.01~0.02%的硒。另外，優(yōu)選每100質(zhì)量份的鮭魚(yú)魚(yú)白提取物含有16~17質(zhì)量份的啤酒酵母提取物、33~34質(zhì)量份的雞膠原蛋白和22~23質(zhì)量份的含礦物質(zhì)酵母。
文檔編號(hào)A61P9/10GK102892423SQ20118002477
公開(kāi)日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
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