專利名稱：治療腫瘤形成的免疫原性組合物及方法
治療腫瘤形成的免疫原性組合物及方法相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)主張?jiān)?010年4月27日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案US61/328，471的優(yōu)先權(quán)，該臨時(shí)申請(qǐng)案的整體 內(nèi)容通過弓I用并入本文。聯(lián)邦政府資助的研究下取得發(fā)明權(quán)的聲明本工作由來自國(guó)家衛(wèi)生院的資助支持，資助號(hào)為NIHK23-DE018464-02。政府享有本發(fā)明的部分權(quán)利。
背景技術(shù)：
設(shè)計(jì)為分泌GM-CSF且經(jīng)致命輻射的腫瘤細(xì)胞疫苗(GVAX)，在各種黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌以及頭頸鱗狀細(xì)胞癌的模型中顯示有希望的的療效，但由于多個(gè)免疫學(xué)檢驗(yàn)點(diǎn)封鎖(immunological checkpoint blockade),GVAX作為單一治療劑對(duì)于重癥患者的臨床療效似乎不佳。最近發(fā)現(xiàn)，對(duì)于重癥抗激素性前列腺癌的第III期測(cè)試，GVAX具有不確定的功效。過去的免疫治療方案往往設(shè)計(jì)為主要刺激腫瘤特異性宿主免疫響應(yīng)，而無法克服腫瘤造成免疫逃避(immune evasion)的關(guān)鍵機(jī)制，已經(jīng)成為該方案的主要限制。眾多用于遞減抗腫瘤免疫響應(yīng)的定義機(jī)制中，已經(jīng)假定T調(diào)節(jié)細(xì)胞(Treg)、骨髓源性抑制細(xì)胞及耐受性樹突細(xì)胞(tolerizing dendriticcells, DCs)為能阻止成功的免疫治療的負(fù)調(diào)節(jié)劑。某些這種免疫逃避檢驗(yàn)點(diǎn)途徑的一個(gè)下游后果為免疫系統(tǒng)輸入臂中活化的抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cells, APCs)數(shù)目受限。需要能克服腫瘤細(xì)胞造成的免疫逃避關(guān)鍵機(jī)制的改良腫瘤細(xì)胞疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
如下所述，本發(fā)明的通常特征在于免疫原性組合物，包括表達(dá)與至少一種TLR促效劑配伍的細(xì)胞因子(GM-CSF)的贅生性細(xì)胞，以及使用該組合物誘發(fā)或提升免疫響應(yīng)的方法。—方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種免疫原性組合物，含有一種或多種表達(dá)重組免疫激活細(xì)胞因子之增殖機(jī)能不全的基因改造贅生性細(xì)胞，以及至少一種Toll樣受體(TLR)促效劑。另一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種改善對(duì)象體內(nèi)腫瘤形成的疫苗，該疫苗含有在藥學(xué)可接受的賦形劑中有效量的表達(dá)重組免疫激活細(xì)胞因子之增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，和有效量的外源性Toll樣受體(TLR)促效劑。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種在具有腫瘤形成或具有腫瘤形成發(fā)展?jié)摿Φ膶?duì)象體內(nèi)誘發(fā)贅生性細(xì)胞抗原特異性免疫響應(yīng)的方法，該方法涉及向?qū)ο蠼o藥有效量的免疫原性組合物，該組合物含有一種或多種表達(dá)重組免疫激活細(xì)胞因子之增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，且包括其量足以在所述對(duì)象體內(nèi)誘發(fā)贅生性細(xì)胞抗原特異性免疫響應(yīng)的外源性Toll樣受體(TLR)促效劑。再一方面，本發(fā)明的通常特征在于一種包括編碼GM-CSF的表達(dá)載體之增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，包括，以及至少一種TLR促效劑。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種在具有腫瘤形成或具有腫瘤形成發(fā)展?jié)摿Φ膶?duì)象體內(nèi)治療或預(yù)防腫瘤形成的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的本文所揭示的免疫原性組合物或疫苗，其量足以在所述對(duì)象體內(nèi)誘發(fā)贅生性細(xì)胞抗原特異性免疫響應(yīng)，從而治療該對(duì)象。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種在具有腫瘤形成的對(duì)象體內(nèi)治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，從而治療或預(yù)防該對(duì)象體內(nèi)的腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種治療對(duì)象體內(nèi)已建立的腫瘤或預(yù)防對(duì)象體內(nèi)腫瘤形成的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，從而治療該 對(duì)象體內(nèi)已建立的腫瘤或預(yù)防對(duì)象體內(nèi)的腫瘤形成。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種在具有微轉(zhuǎn)移或病變殘存的對(duì)象體內(nèi)治療微轉(zhuǎn)移或病變殘存的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，從而治療該對(duì)象體內(nèi)的微轉(zhuǎn)移或病變殘存。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種免疫化對(duì)象的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種用于治療腫瘤形成的藥物組合物，包括有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，以及藥學(xué)可接受的賦形劑。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種用于治療腫瘤形成的試劑盒，該試劑盒包括有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，和以本文所揭示的任何方法使用該試劑盒的說明書。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種治療或預(yù)防對(duì)象體內(nèi)宮頸癌的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，從而治療或預(yù)防該對(duì)象體內(nèi)的宮頸癌。又一方面，本發(fā)明的通常特征在于，一種治療對(duì)象體內(nèi)多態(tài)性TLR缺乏的方法，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的本文所揭示的任何免疫原性組合物或疫苗，從而治療該對(duì)象體內(nèi)的多態(tài)性TLR缺乏。上述任一方面或本文中敘述的本發(fā)明其它任一方面的多個(gè)具體實(shí)施例中，該細(xì)胞因子是粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)。另一具體實(shí)施例中，該細(xì)胞含有相當(dāng)量的至少一種TLR促效劑與GM-CSF。再一具體實(shí)施例中，該TLR促效劑是TLR4促效劑、TLR5促效劑、TLR6促效劑、TLR7或TLR8促效劑、TLR9促效劑。又一具體實(shí)施例中，該免疫原性組合物含有TLR4促效劑和TLR7/8促效劑。又一具體實(shí)施例中，該TLR4促效劑是LPS、LPS片段或合成性吡喃葡萄糖基脂質(zhì)A類似物，該TLR7/8促效劑是R848。其它具體實(shí)施例中，通過輻射使得該細(xì)胞增殖機(jī)能不全。某些具體實(shí)施例中，該贅生性細(xì)胞選自下列所組成的組:白血病、慢性骨髓性白血病、前列腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、舌癌、喉癌、扁桃體癌、下咽癌、鼻咽癌、乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦癌。其它具體實(shí)施例中，該組合物包括每IxlO5細(xì)胞至少約Ing TLR4促效劑至每IxlO5細(xì)胞IOng TLR4促效劑。進(jìn)一步的具體實(shí)施例中，該組合物含有每5xl05細(xì)胞至少約3至5ng。另一具體實(shí)施例中，該細(xì)胞含有與脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)載體相結(jié)合的TLR促效劑。進(jìn)一步的具體實(shí)施例中，該細(xì)胞含有LPS/脂質(zhì)膠束體。其它具體實(shí)施例中，該免疫原性組合物含有表達(dá)一種或多種腫瘤抗原的細(xì)胞。進(jìn)一步的具體實(shí)施例中，該免疫原性組合物含有自體細(xì)胞或同種異基因細(xì)胞。上述任一方面或本文中敘述的本發(fā)明其它任一方面的多個(gè)具體實(shí)施例中，該贅生性細(xì)胞來源于癌細(xì)胞系或來源于腫瘤。又一具體實(shí)施例中，該癌細(xì)胞系或腫瘤選自白血病、慢性骨髓性白血病、前列腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、舌癌、喉癌、扁桃體癌、下咽癌、鼻咽癌、乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦癌。又一具體實(shí)施例中，該免疫原性組合物通過全身給藥或口服給藥。進(jìn)一步的具體實(shí)施例中，該免疫原性組合物通過肌肉注射、靜脈注射、瘤內(nèi)注射或瘤周注射給藥。另外的具體實(shí)施例中，該方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的一種或多種化療劑。某些具體實(shí)施例中，該一種或多種化療劑選自乙酸阿比特龍、六甲蜜胺、脫水長(zhǎng)春堿、奧里斯汀(auristatin)、貝沙羅汀、比卡魯胺、BMS 184476、2，3, 4, 5, 6-五氟-N_(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、爭(zhēng)光霉素、N, N- 二甲基-L-纟顏氨酰-L-纈氨酰-N-甲基-L-纈氨酰-L-PiOly-1-L脯氨酸-叔丁酰胺、惡液質(zhì)素、西馬多丁、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、3’，4，-雙脫氧氫 _4，-脫氧-8，-norvin-caleukoblastine (3，, 4’-didehydro-4’ -deoxy-8’ -norvin-caleukoblastine)、多烯紫杉醇(docetaxol)、多西他賽(doxetaxel)、環(huán)磷酰胺、卡鉬、卡氯芥(BCNU)、順鉬、念珠藻素、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺(DTIC)、更生霉素、柔毛霉素、地西他賓、尾海兔素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那司提、氟他胺、羥基脲及羥基脲紫杉醇、異環(huán)磷酰胺、利阿唑、氯尼達(dá)明、環(huán)己亞硝脲(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥)、左旋苯丙氨酸氮芥、羥乙基磺酸米伏布爾(mivobulin isethionate)、根霉素、sertenef、鏈脲霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇類、尼魯米特、奧那司酮、紫杉酚、潑尼氮芥、甲芐肼、RPR109881、磷酸雌氮芥、三苯氧胺、他索納明、紫杉醇、維甲酸、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、硫酸硫酸長(zhǎng)春地辛及長(zhǎng)春氟寧。另外的具體實(shí)施例中，相對(duì)于單獨(dú)使用GVAX，該方法提升樹突細(xì)胞的活化和/或增加AHl特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞或P15E特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的數(shù)目。某些具體實(shí)施例中，相對(duì)于單獨(dú)使用GVAX，該方法降低或穩(wěn)定化腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤生長(zhǎng)或?qū)ο蟠婊盥省＿M(jìn)一步的具體實(shí)施例中，該細(xì)胞來源于白血病、慢性骨髓性白血病、前列腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、舌癌、喉癌、扁桃體癌、下咽癌、nasaipharynx癌、乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦癌或其細(xì)胞系。另外的具體實(shí)施例中，該細(xì)胞包括TLR4促效劑及TLR7/8促效劑。其它具體實(shí)施例中，該TLR促效劑與脂質(zhì)載體相結(jié)合。定義“細(xì)胞因子”意指局部作用并調(diào)理個(gè)體免疫響應(yīng)的激素?！盎蚋脑熨樕约?xì)胞”意指經(jīng)過基因改造以表達(dá)轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞或細(xì)胞群落，并給藥予患者作為癌癥治療的一部分。本發(fā)明的免疫原性組合物或疫苗包括贅生性(如，腫瘤)細(xì)胞，該細(xì)胞是進(jìn)行治療的患者的“自體”或“同種異基因”細(xì)胞，或與取自該患者的腫瘤細(xì)胞混合的“無關(guān)細(xì)胞”。通常，該經(jīng)過基因改造的贅生性細(xì)胞與正在折磨該患者的腫瘤細(xì)胞一般型相同。例如，患有黑色素瘤的患者典型將給藥來源于黑色素瘤的基因改造細(xì)胞。本文中，表達(dá)GM-CSF的基 因改造腫瘤細(xì)胞疫苗可指為“GVAX”。美國(guó)專利第US 5，637，483、US5, 904, 920,US 6, 277, 368,US 6，350，445 號(hào)，以及美國(guó)專利公開第 US 20100150946 號(hào)揭示了經(jīng)過基因改造以表達(dá)細(xì)胞因子如GM-CSF，之后再次向患者給藥以治療癌癥的自體及同種異基因癌細(xì)胞，上述每篇專利均通過引用而清楚地并入本文。美國(guó)專利第US 6，033，674和US5，985，290號(hào)中揭示了用于治療胰腺癌的表達(dá)GM-CSF的基因改造癌細(xì)胞或“表達(dá)細(xì)胞因子的細(xì)胞疫苗”形式，上述兩篇專利均通過引用而清楚地并入本文。美國(guó)專利US6，464，973揭示了表達(dá)普遍免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的無關(guān)細(xì)胞系，該專利通過引用而清楚地并入本文?！傲＜?xì)胞巨噬細(xì)胞集落剌激因子(GM-CSF)多肽”意指，具有免疫調(diào)節(jié)活性并具有至少約85%氨基酸序列被鑒定為基因登錄號(hào)(GenBankAccession N0.) AAA52122.1的細(xì)胞因子或其片段。例示性GM-CSF 序列(NCBI AAA52122.1)提供如下:I mwlqsllllg tvacsisapa rspspstqpw ehvnaiqear rllnlsrdta aemnetvevi61semfdlqept clqtrlelyk qglrgsltkl kgpltmmash ykqhcpptpe tscatqiitf121 esfkenlkdfI lvipfdcwe pvqe已經(jīng)顯示，GM-CSF誘發(fā)粒細(xì)胞與巨噬細(xì)胞譜系的造血細(xì)胞的生長(zhǎng)。此外，它也活化樹突細(xì)胞抗原處理及呈遞功能，該樹突細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中主要的抗原呈遞細(xì)胞(APC)。一具體實(shí)施例中，免疫原性組合物包括GM-CSF編碼序列，該序列有效地鏈結(jié)至用以在該疫苗的細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)的調(diào)控序列，。"GM-CSF核酸分子”意指，編碼GM-CSF多肽的多核苷酸。GM-CSF核酸分子可編碼鼠科動(dòng)物或人類的GM-CSF，并且可以為基因組DNA形式(見美國(guó)專利公開第US 2006/0057127號(hào)，該專利通過引用以其整體并入本文)或cDNA形式(見美國(guó)專利公開第US2006/0057127號(hào)，該專利通過引用以其整體并入本文)。一具體實(shí)施例中，該GM-CSF編碼序列將美國(guó)專利公開第US 2006/0057127號(hào)中揭示的氨基酸序列編碼，該專利通過引用以其整體并入本文。GM-CSF編碼序列的其它實(shí)例可在基因庫(kù)登錄號(hào)AF373868、AC034228、AC034216、M10663 及 NM000758 中找到。例示性GM-CSF編碼序列(AF373868)提供如下:lgcagtctgtt tcctaccaga ctgggagcct caagggccaa atgtgagggc cagtgggagg61gtcccgttta cctccccaga acaggtcctg gtgtggattg gaaagacttg ttgactgact121gtctgagcta tgacaactca tttctaggag gaaagtgacc ttctctccca gatgggtcat181acaggctctc tgcctccctg gccatcagct gaaccactat ctatggctcc cttccctgcc241ctccagcctc cagggtgcta tccaacacat gtgatatcta catgtagtat ccatgtcctc301atctctcccc cgagagctcc ctggaaagag ctgagccaag gccttgcaaa aaaggtggag361aaagggccag ggcctggaca tttcatgttc ccaccccagc ctggccacta ggagtgttct421acgcaggctc agatggatgg ggctggcctc acagtggggt ctggaggact aaggtttggt481ttctctatgc aaggtcagaa aaactcccac agtacaggga aactggccag ggctgcagac541tcagaccaca gtgctaaagc catgaactcc acctgctctc tgaaggctcg ccaacctgag601tccagcagaa tgttctcgct tgtgtccaac cccactggtt taggctgaat cagcctctag661ggcccagagg cactgcacct ggagtaggga gcttctccag tatcagagtc accttcagag721gcctggagcc tttcataaag caggtaagag gactcaatag atgcatctgc atggaaaaca781tcctcccctc taccaggcac ctgtatgtac aaccaatcac agcagcacac atacacccag841aaatgggcac gtgtgggccc acaccccttt agctatgaaa cccaggcatg gggcagcttg901agccagatac cttgtgcaaa cacaaactcg tgctgtcttc tctgaactcc attgtgaaaa
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1561gcatagcctg cccaaaggcc cctgggatta caggcaggatggggagccct atctaagtgt1621ctcccacgcc ccaccccagc cattccaggc caggaagtccaaactgtgcc cctcagaggg1681agggggcagc ctcaggccca ttcagactgc ccagggaggg ctggagagcc ctcaggaagg1741cgggtgggtg ggctgtcggt tcttggaaag gttcattaatgaaaaccccc aagcctgacc1801acctagggaa aaggctcacc gttcccatgt gtggctgata agggccagga gattccacag186lttcaggtagt tcccccgcct ccctggcatt ttgtggtcaccattaatcat ttcctctgtg1921tatttaagag ctcttttgcc agtgagccca gtacacagag agaaaggcta aagttctctg1981gaggatgtgg ctgcagagcc tgctgctctt gggcactgtg gcctgcagca tctctgcacc2041cgcccgctcg cccagcccca gcacgcagcc ctgggagcatgtgaatgcca tccaggaggc2101ccggcgtctc ctgaacctga gtagagacac tgctgctgag atggtaagtg agagaatgtg2161ggcctgtgcc taggccaccc agctggcccc tgactggcca cgcctgtcag cttgataaca2221tgacattttc cttttctaca gaatgaaaca gtagaagtca tctcagaaat gtttgacctc2281caggtaagat gcttctctct gacatagctt tccagaagcccctgccctgg ggtggaggtg2341gggactccat tttagatggc accacacagg gttgtccactttctctccag tcagctggct2401gcaggaggag ggggtagcaa ctgggtgctc aagaggctgctggccgtgcc cctatggcag2461tcacatgagc tcctttatca gctgagcggc catgggcaga cctagcattc aatggccagg2521agtcaccagg ggacaggtgg taaagtgggg gtcacttcatgagacaggag ctgtgggttt2581ggggcgctca ctgtgccccg agaccaagtc ctgttgagacagtgctgact acagagaggc2641acagaggggt ttcaggaaca acccttgccc acccagcagg tccaggtgag gccccacccc2701cctctccctg aatgatgggg tgagagtcac ctccttccctaaggctgggc tcctctccag2761gtgccgctga gggtggcctg ggcggggcag tgagaagggcaggttcgtgc ctgccatgga2821cagggcaggg tctatgactg gacccagcct gtgcccctcccaagccctac tcctgggggc2881tgggggcagc agcaaaaagg agtggtggag agttcttgta ccactgtggg cacttggcca2941ctgctcaccg acgaacgaca ttttccacag gagccgacctgcctacagac ccgcctggag3001ctgtacaagc agggcctgcg gggcagcctc accaagctca agggcccctt gaccatgatg3061gccagccact acaagcagca ctgccctcca accccggtga gtgcctacgg cagggcctcc312lagcaggaatg tcttaatcta gggggtgggg tcgacatggg gagagatcta tggctgtggc3181tgttcaggac cccagggggt ttctgtgcca acagttatgtaatgattagc cctccagaga3241ggaggcagac agcccatttc atcccaagga gtcagagcca cagagcgctg aagcccacag
3301tgctccccag caggagctgc tcctatcctg gtcattattgtcattatggt taatgaggtc3361agaggtgagg gcaaacccaa ggaaacttgg ggcctgcccaaggcccagag gaagtgccca3421ggcccaagtg ccaccttctg gcaggacttt cctctggccccacatggggt gcttgaattg3481cagaggatca aggaagggag gctacttgga atggacaaggacctcaggca ctccttcctg3541cgggaaggga gcaaagtttg tggccttgac tccactccttctgggtgccc agagacgacc3601tcagcccagc tgccctgctc tgccctggga ccaaaaaggcaggcgtttga ctgcccagaa3661ggccaacctc aggctggcac ttaagtcagg cccttgactctggctgccac tggcagagct3721atgcactcct tggggaacac gtgggtggca gcagcgtcacctgacccagg tcagtgggtg3781tgtcctggag tgggcctcct ggcctctgag ttctaagaggcagtagagaa acatgctggt384lgcttccttcc cccacgttac ccacttgcct ggactcaagtgttttttatt tttctttttt3901taaaggaaac ttcctgtgca acccagatta tcacctttgaaagtttcaaa gagaacctga3961aggactttct gcttgtcatc ccctttgact gctgggagccagtccaggag tgagaccggc4021cagatgaggc tggccaagcc ggggagctgc tctctcatgaaacaagagct agaaactcag4081gatggtcatc ttggagggac caaggggtgg gccacagccatggtgggagt ggcctggacc4141tgccctgggc cacactgacc ctgatacagg catggcagaagaatgggaat attttatact4201gacagaaatc agtaatattt atatatttat atttttaaaatatttattta tttatttatt4261taagttcata ttccatattt attcaagatg ttttaccgtaataattatta ttaaaaatat4321gcttctactt gtccagtgtt ctagtttgtt tttaaccatgagcaaatgcc agtggtgcct4381gccttcccat gaggcagggg agggaggaaa cggggaggtggagagggggc gggggcctcc4441caggcgttgg gcactatcca agggccaaca ctgtcagagcagaggggagg tgagagccgg4501gcataggtgc ggaattctgc acacctggac gggcttcccgggatgctcca gggctcccac4561cccagagaat ggctctcaag ttcacctgga agtccaagtgaccagcccag ggaactctta4621tcccagagaa gggcaccacc cttcctgggg aggcctgggggttggctggt cactggctga4681acaggcccac tctggcatca ggcaaaacac ctgccctgtagaggccttgg cccctgtgcc4741ccacgccctg cccctcacac tctgagattt aaccattccgaaagtaaaca gcaaaataga4801ctaactgttc aggggaaaag aaaccaaacc acaggggtcacagtgcagcg tatttaccaa4861acttgcccca aaatgggtga tcttaatctc tgagagtcagaatgtaaggt cataatttgt4921tggtacatgg ctgtagtgcc gcatgtttct gaattggtttttatttttac atgaaatttt4981gaatctaatc aggcactttc ccctaaaact catggcctgcaggctaaaaa caaagtaggc5041ctcctccttc tccttacttt gacagctggg ctcaaggccttgttcctgaa cctgttccct5101catctccctc caggactatg aggaagtgga tgtgccccaagtcttaggcg ggcagcaggg5161ccagcttctc cttgacaggt gggcctaagg aagctggcttgtggcagctt tagcccctgc5221ctggcactgt ctgcagtcat gcgcccacca cccctcttgcttcctctact tcagtcagca5281cctgcagaca gcgccaggcc tggccagaga cccactccatgctcatgcag aaagaccgtg
5341acttcaggtg tgattacaaa taagaagtca gggtgaacgctcaggatgaa gcctgagtgt5401cagcacaggc aagaatccat gaagtgtgct gtggttgttgaaaatgcatg aaaatcacat5461cttgcccagc gataaggtcc tctctgtctt ccgcgtaagccagtgatgac tgataagagg5521tttagcattt ccttagcctc acatatatag gtacccctctccacagaaat gctgccaagc5581ccagggctcg gaccagcttg gagtcacctt caagtaataccatgcacctg tacgtgctcc
5641tggctcatgt gctctggggg tcagaaagcc attcttccca atgaaagtag ccacgatatc5701tccccacgaa aagtacacag cagtctgtgc tgacattcag aaagaactct cggctgacaa5761taacacacac aagataagtc tgggtctcca tcaaacgtta ttttgctctt agtgcccctt5821tgtgctcctg accaatttct ctggcttccg gggtcccttc aataggcccc agaaaaccag5881tgaggtaaga aacagctgcc ccgggacctt tcataccaca tttgaacagg gagagagaga5941tctcaccagt cagtgcccag ggaagagata acaacaaggg atagtggagt ga“Toll樣受體促效劑”意指活化TLR受體家族成員的試劑?！斑拎咸烟腔|(zhì)A”或“批喃葡萄糖基脂質(zhì)A”或“批葡糖基脂質(zhì)佐劑”或“GLA”意指，美國(guó)專利公開第US 11/862，122和US20080131466號(hào)中揭示的新穎的、臨床階段、人類Toll樣受體-4(TLR-4)促效劑，上述專利以其整體并入本文。“ IDC-1005 ”意指，在含有卵磷脂的穩(wěn)定的水包角鯊烯油乳液的存在下，lmg/mlGLA 與 0.2mg/ml R848 的混合物。“脂質(zhì)載體”意指，能用于通過脂質(zhì)體的形成而將試劑傳輸至細(xì)胞的任何組合物，其非限制性實(shí)例是脂質(zhì)體。

“R848”意指分子量為314.17的咪唑喹啉化合物，該化合物是通過TLR7/TLR8MyD88依賴的信道經(jīng)而活化免疫細(xì)胞的TLR促效劑。R848具有下述分子式=C17H22N4O2 ;結(jié)構(gòu)如下:
權(quán)利要求
1.一種免疫原性組合物，包括一種或多種經(jīng)基因改造的增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，所述經(jīng)基因改造的增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞表達(dá)重組免疫激活細(xì)胞因子，且包括至少一種Toll樣受體(TLR)促效劑。
2.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述細(xì)胞因子是粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)。
3.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述細(xì)胞包括相當(dāng)量的至少一種TLR促效劑與GM-CSF。
4.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述TLR促效劑是TLR4促效劑、TLR5促效劑、TLR6促效劑、TLR7促效劑、TLR8促效劑或TLR9促效劑。
5.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述組合物包括TLR4促效劑及TLR7/8促效劑。
6.如權(quán)利要求5所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述TLR4促效劑是LPS、LPS片段或合成的吡喃葡萄糖基脂質(zhì)A類似物，且所述TLR7/8促效劑是R848。
7.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，通過輻射使所述細(xì)胞增殖機(jī)能不全。
8.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述贅生性細(xì)胞選自下列所組成的組:白血病、慢性骨髓性白血病、前列腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、舌癌、喉癌、扁桃體癌、下咽癌、鼻咽癌、乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦癌。
9.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述組合物包括每IxlO5細(xì)胞至少約Ing TLR4促效劑至每IxlO5細(xì)胞IOng TLR4促效劑。`
10.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述組合物包括每5xl05細(xì)胞至少約3至5ng。
11.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述細(xì)胞包括與脂質(zhì)體或其它脂質(zhì)載體聯(lián)合的TLR促效劑。
12.如權(quán)利要求11所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述細(xì)胞包括LPS/脂質(zhì)膠束體。
13.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，進(jìn)一步包括表達(dá)一種或多種腫瘤抗原的細(xì)胞。
14.如權(quán)利要求1至13任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其特征在于，所述細(xì)胞是自體細(xì)胞或同種異基因細(xì)胞。
15.一種改善對(duì)象體內(nèi)腫瘤形成情況的疫苗，所述疫苗在藥學(xué)上可接受的賦形劑中，包括有效量的增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，所述增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞表達(dá)重組免疫激活細(xì)胞因子，并包括有效量的外源性Toll樣受體(TLR)促效劑。
16.如權(quán)利要求15所述的疫苗，其特征在于，所述細(xì)胞經(jīng)過基因改造以表達(dá)GM-CSF。
17.如權(quán)利要求15所述的疫苗，其特征在于，所述組合物包括TLR4促效劑及TLR7/8促效劑。
18.如權(quán)利要求17所述的疫苗，其特征在于，所述TLR4促效劑是LPS、LPS片段或合成的吡喃葡萄糖基脂質(zhì)A類似物，且TLR7/8促效劑是R848。
19.如權(quán)利要求15所述的疫苗，其特征在于，所述細(xì)胞包括LPS/脂質(zhì)膠束體。
20.如權(quán)利要求12所述的疫苗，進(jìn)一步包括表達(dá)一種或多種腫瘤抗原的細(xì)胞。
21.如權(quán)利要求12至20任何一項(xiàng)所述的疫苗，其特征在于，所述細(xì)胞是自體細(xì)胞或同種異基因細(xì)胞。
22.—種在具有腫瘤形成或具有腫瘤形成發(fā)展?jié)摿Φ膶?duì)象體內(nèi)誘發(fā)贅生性細(xì)胞抗原特異性免疫響應(yīng)的方法，所述方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包括一種或多種增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，所述增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞表達(dá)重組免疫激活細(xì)胞因子，且所述免疫原性組合物包括包括外源性Toll樣受體(TLR)促效齊U，所述外源性Toll樣受體(TLR)促效劑的量足以在所述對(duì)象體內(nèi)誘發(fā)贅生性細(xì)胞抗原特異性免疫響應(yīng)。
23.一種在具有腫瘤形成或具有腫瘤形成發(fā)展?jié)摿Φ膶?duì)象體內(nèi)治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展的方法，所述方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，所述量足以在所述對(duì)象體內(nèi)誘發(fā)贅生性細(xì)胞抗原特異性免疫響應(yīng)，從而治療所述對(duì)象。
24.一種在具有腫瘤形成的對(duì)象體內(nèi)治療或預(yù)防腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括向?qū)ο蠼o藥有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗,從而治療或預(yù)防所述對(duì)象體內(nèi)的腫瘤進(jìn)展或轉(zhuǎn)移。
25.—種在對(duì)象體內(nèi)治療已建立的腫瘤或預(yù)防腫瘤形成的方法，所述方法包括向所述對(duì)象給藥有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，從而在對(duì)象體內(nèi)治療已建立的腫瘤或預(yù)防腫瘤形成。
26.—種在對(duì)象體內(nèi)治療微轉(zhuǎn)移或病變殘存的方法，所述方法包括向所述對(duì)象給藥有效量的如權(quán)利要求1至21任何 一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，從而治療所述對(duì)象體內(nèi)的微轉(zhuǎn)移或病變殘存。
27.一種免疫化對(duì)象的方法，所述方法包括向所述對(duì)象給藥如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗。
28.如權(quán)利要求14至27任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述贅生性細(xì)胞來源于癌細(xì)胞系或來源于腫瘤。
29.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述癌細(xì)胞系或腫瘤選自下列所組成的組:白血病、慢性骨髓性白血病、前列腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、舌癌、喉癌、扁桃體癌、下咽癌、鼻咽癌、乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦癌。
30.如權(quán)利要求14至16任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述免疫原性組合物通過全身給藥或口服給藥。
31.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述免疫原性組合物通過肌肉注射、靜脈注射、瘤內(nèi)注射或瘤周注射給藥。
32.如權(quán)利要求8或9所述的方法，進(jìn)一步包括向所述對(duì)象給藥有效量的一種或多種化療劑。
33.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述一種或多種化療劑選自下列所組成的組:乙酸阿比特龍、六甲蜜胺、脫水長(zhǎng)春堿、奧里斯汀、貝沙羅汀、比卡魯胺、BMS 184476、.2，3, 4, 5, 6-五氟-N_(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、爭(zhēng)光霉素、N, N- 二甲基-L-纟顏氨酰-L-纈氨酰-N-甲基-L-纈氨酰-L-丙基-1-L-脯氨酸-叔丁酰胺、惡液質(zhì)素、西馬多丁、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、3’，4’ -雙脫氧氫_4’ -脫氧_8’ -norvin-caleukoblastine、多烯紫杉醇、多西他賽、環(huán)磷酰胺、卡鉬、卡氮芥(BCNU)、順鉬、念珠藻素、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、氮烯唑胺(DTIC)、更生霉素、柔毛霉素、地西他賓、尾海兔素、多柔比星(阿霉素)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、非那司提、氟他胺、羥基脲及羥基脲紫杉醇、異環(huán)磷酰胺、利阿唑、氯尼達(dá)明、環(huán)己亞硝脲(CCNU)、MDV3100、二氯甲基二乙胺(氮芥)、左旋苯丙氨酸氮芥、羥乙基磺酸米伏布爾、根霉素、sertenef、鏈脲霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇類、尼魯米特、奧那司酮、紫杉酚、潑尼氮芥、甲芐肼、RPR109881、磷酸雌氮芥、三苯氧胺、他索納明、紫杉醇、維甲酸、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、硫酸硫酸長(zhǎng)春地辛及長(zhǎng)春氟寧。
34.如權(quán)利要求12至31任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，相對(duì)于單獨(dú)使用GVAX，所述方法提升樹突細(xì)胞的活性和/或增加AHl特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的數(shù)目或pl5E特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的數(shù)目。
35.如權(quán)利要求12至31任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，相對(duì)于單獨(dú)使用GVAX，所述方法降低或穩(wěn)定腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤生長(zhǎng)或?qū)ο蟠婊盥省?br> 36.一種包括編碼GM-CSF的表達(dá)載體的增殖機(jī)能不全的贅生性細(xì)胞，以及至少一種TLR促效劑。
37.如權(quán)利要求34所述的贅生性細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞衍生于白血病、慢性骨髓性白血病、前列腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、舌癌、喉癌、扁桃體癌、下咽癌、鼻咽癌、乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、黑色素瘤、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及腦癌或其細(xì)胞系。
38.如權(quán)利要求34所述的贅生性細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞包括TLR4和TLR7/8促效劑。
39.如權(quán)利要求34所述的贅生性細(xì)胞，其特征在于，所述TLR促效劑與脂質(zhì)載體聯(lián)合。
40.一種用于治療腫瘤形成的藥物組合物，包括有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，以及藥學(xué)可接受的賦形劑。
41.一種用于治療腫瘤形成的試劑盒，所述試劑盒包括有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，以及在如權(quán)利要求22至33任何一項(xiàng)所述方法中使用所述試劑盒的說明書。
42.一種治療或預(yù)防對(duì)象體內(nèi)宮頸癌的方法，所述方法包括向所述對(duì)象給藥有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，從而治療或預(yù)防所述對(duì)象體內(nèi)的宮頸癌。
43.一種治療對(duì)象體內(nèi)多態(tài)性TLR缺乏的方法，所述方法包括向所述對(duì)象給藥有效量的如權(quán)利要求1至21任何一項(xiàng)所述的免疫原性組合物或疫苗，從而治療所述對(duì)象體內(nèi)的多態(tài)性TLR缺乏。
全文摘要
本發(fā)明提供一種免疫原性組合物，所述組合物包括表達(dá)與至少一種TLR促效劑配伍的細(xì)胞因子(GM-CSF)的贅生性細(xì)胞，以及使用所述組合物誘發(fā)或提升免疫響應(yīng)的方法。
文檔編號(hào)A61K38/19GK103118697SQ201180031871
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2011年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者Y·J·金, D·M·帕多略, C·G·德雷克, M·戴維斯, J·付 申請(qǐng)人:約翰·霍普金斯大學(xué)