專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種可用于皮膚美容保健及延緩皮膚衰老的組合精華素及其制備方法。它是用從新鮮鹿茸中提取分離的、具有天然生物活性的鹿茸多肽及其保護(hù)劑為主要功效成分的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉、與具有促進(jìn)功效成分透皮吸收的納米級(jí)緩沖微乳按一定比例配成的組合美容精華素，具體涉及ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素及其制備方法。
背景技術(shù)：
一、美容精華素的技術(shù)背景:精華素是將從某些動(dòng)物臟器或組織、天然植物或中草藥、海洋生物、微生物等中提取、分離、純化出來(lái)的天然功效成分或生物活性物質(zhì)或皮膚營(yíng)養(yǎng)素等，按照一定的比例添加到某些高品質(zhì)液體化妝品中即可制備成具有不同美容功效和皮膚抗衰老作用的美容精華素，這是當(dāng)今美容化妝品和皮膚抗衰老外用制劑中最受消費(fèi)者青睞和歡迎的劑型之一。目前國(guó)際上無(wú)論是哪個(gè)國(guó)家的精華素產(chǎn)品、也無(wú)論是哪個(gè)品牌的精華素，無(wú)論其中含有什么成分、或者具有何種功能的精華素，無(wú)非有兩種劑型，即水劑型精華素和油劑型精華素兩種。在中國(guó)，目前，用于面部美容的精華素之中大都含有某些皮膚組織及其細(xì)胞生存和生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)素、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、抗氧化生物酶、保濕因子、生物活性物、天然植物及中草藥提取物和植物揮發(fā)油、以及膠原蛋白水解液、胎牛血漿或血清等，因此誕生了諸如皮膚抗衰老精華素、皮膚營(yíng)養(yǎng)精華素、皮膚美白精華素、皮膚抗皺精華素、皮膚保濕精華素、皮膚祛斑精華素、豐胸美體精華素、纖體瘦身精華素、香薰精華素等。人們習(xí)慣地認(rèn)為，只要平時(shí)經(jīng)常使用它就有一定的皮膚抗衰、防老、抗皺、保濕、美白、去斑等作用。當(dāng)皮膚自然衰老而出現(xiàn)較多皺紋、或因季節(jié)變化皮膚變得干燥粗糙、因不良習(xí)慣變得面部灰暗無(wú)光、因長(zhǎng)時(shí)間光照皮膚色素加深時(shí)，都會(huì)選擇使用不同類(lèi)型的精華素。ニ、鹿茸多肽的
背景技術(shù)：
近年來(lái)，相關(guān)領(lǐng)域的研究人員已經(jīng)對(duì)鹿茸、特別是新鮮鹿茸中ー些具有高度生物的活性物質(zhì)和功效成分進(jìn)行研究、開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，如對(duì)鹿茸多肽及鹿茸生長(zhǎng)因子應(yīng)用性研究工作正陸續(xù)展開(kāi)。由于鹿茸自我生長(zhǎng)和再生修復(fù)速度很快，因此人們推測(cè)鹿茸中可能存在某種與一般組織不同或者種類(lèi)更多、含量更加豐富的鹿茸活性多肽因子(主要包括鹿茸多肽和生長(zhǎng)因子)，從而有序控制、有效刺激著鹿茸的快速生長(zhǎng)，并促進(jìn)鹿茸骨質(zhì)和表皮層的迅速增生。目前，鹿茸多肽正在被相關(guān)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究和應(yīng)用:(I)用于創(chuàng)傷愈合:鹿茸多肽能加速實(shí)驗(yàn)性骨折大鼠骨痂的形成和骨折的愈合，改善骨折部位的生物力學(xué)性能，對(duì)骨痂內(nèi)骨膠原的積累和鈣鹽沉積有促進(jìn)作用；鹿茸多肽還是一種促細(xì)胞有絲分裂劑，能刺激軟骨細(xì)胞和成骨樣細(xì)胞増殖；且鹿茸多肽對(duì)大鼠背部皮膚缺損有修復(fù)作用，對(duì)表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖也有明顯的促進(jìn)作用，能加速皮膚創(chuàng)傷愈合。(2)用于神經(jīng)損傷修復(fù):鹿茸總多肽在體外可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化。它能促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生、カロ快其神經(jīng)軸突生長(zhǎng)速度，有助于坐骨神經(jīng)功能的恢復(fù)。鹿茸多肽還能促進(jìn)周?chē)窠?jīng)生長(zhǎng)，主要是通過(guò)擴(kuò)張神經(jīng)外周及內(nèi)部血管，改善損傷神經(jīng)的微環(huán)境，提高微動(dòng)脈血流量等作用實(shí)現(xiàn)；同時(shí),還具有加快損傷神經(jīng)變性壞死物質(zhì)的清除,增加對(duì)神經(jīng)再生物質(zhì)的供給,加快軸漿的恢復(fù)，進(jìn)而防止神經(jīng)元壞死，促進(jìn)神經(jīng)損傷早期的再生功能。(3)用于免疫功能提升:鹿茸混合多肽有對(duì)抗環(huán)磷酰胺所誘導(dǎo)的小鼠白細(xì)胞和骨髄有核細(xì)胞減少，能提高血清總蛋白、白蛋白及球蛋白含量以及吞噬細(xì)胞的吞噬功能；對(duì)紅細(xì)胞免疫功能、特異或非特異性免疫功能具有一定的提升作用。(4)用于抗炎作用:鹿茸多肽可對(duì)各種急、慢性炎癥發(fā)揮明顯的抑制作用，并可使腎上腺皮質(zhì)的興奮性和刺激作用增強(qiáng)。而鹿茸多肽的有明顯抗炎作用。提高抗氧化作用:鹿茸多肽可提高小鼠清除自由基的能力，降低動(dòng)物組織腦和肝組織中丙ニ醛(MDA)含量，抑制細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化水平和生物膜受損程度；且在體外能抑制大鼠腦、肝、腎微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)及還原型細(xì)胞色素C形成，提高機(jī)體的抗氧化作用。(6)用于腫瘤抑制:鹿茸多肽對(duì)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤株有顯著的促分化作用，井能抑制腫瘤細(xì)胞的増殖。同時(shí)，能使腫瘤模型 動(dòng)物的生存時(shí)間顯著延長(zhǎng)，抗腫瘤作用顯現(xiàn)。(7)對(duì)性功能影響:鹿茸多肽使腺垂體細(xì)胞培養(yǎng)液中黃體生成素含量增多，睪丸精原細(xì)胞數(shù)目增多，生精細(xì)胞層數(shù)增多，睪酮素分泌增多。然而，人們過(guò)去對(duì)新鮮鹿茸的提取多采用傳統(tǒng)的煎、煮、熬或烘烤、風(fēng)干、粉碎、酒泡等古老方式，在很大程度上破壞了不耐熱、易變性的多肽、蛋白質(zhì)等活性成分，其中可用于皮膚外用方面的生物活性物質(zhì)及其功效成分少之又少，加上過(guò)去對(duì)新鮮鹿茸功效成分的測(cè)定和分析多集中在一般組成成分和普通生化組分等方面，因此，鹿茸生物活性物質(zhì)和功效成分在皮膚方面鮮少應(yīng)用，在化妝品美容保健和皮膚抗衰老方面的應(yīng)用更加稀少。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼發(fā)現(xiàn)和報(bào)道了新鮮鹿茸中不僅具有能促進(jìn)細(xì)胞核糖體及蛋白質(zhì)合成的鹿茸多肽，而且還從新鮮鹿茸中提取分離了具有多肽類(lèi)活性物質(zhì)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子，并證明該鹿茸活性多肽及其細(xì)胞因子大約由68個(gè)氨基酸組成，其分子量月7200道爾頓，純品鹿茸多肽的性狀為淡黃色粉末，屬于水溶性物質(zhì)，易溶于水。同時(shí)還證實(shí)，在提取分離的鹿茸多肽中，還含有其它能促進(jìn)細(xì)胞分裂和増殖的多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如角質(zhì)形成細(xì)胞因子(KGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、血小板衍生因子(TOGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)等，真正是ー個(gè)鹿茸多肽及細(xì)胞生長(zhǎng)因子庫(kù)。而這些具有天然生物活性的鹿茸多肽及細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是目前公認(rèn)的皮膚美容保健、延緩皮膚衰老和皮膚屏障功能重建的重要功效成分和生物活性物質(zhì)。因此，鹿茸多肽及其細(xì)胞生長(zhǎng)因子的發(fā)現(xiàn)和提取分離，為其在皮膚美容保健之中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。三、微乳的
背景技術(shù)：
微乳(microemulsion，ME)是ー種由水相、油相、表面活性劑及助表面活性劑所組成的外觀(guān)澄清透明的、液滴粒徑小于IOOnm的、且熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)均十分穩(wěn)定的液態(tài)體系。微乳以極小微粒著稱(chēng)，它的乳滴可自由分散在另ー種液體之中而形成膠體分散系統(tǒng)，其乳滴形狀多為球形，且大小基本均勻一致，流動(dòng)性良好，即使經(jīng)過(guò)一定溫度下的長(zhǎng)時(shí)間放置、加熱或高壓滅菌或離心分離也不會(huì)使之分層。即使在相組成臨界點(diǎn)上，由于溫度發(fā)生變化而被破壞，但當(dāng)恢復(fù)到正常溫度吋，此系統(tǒng)又可自主恢復(fù)到微乳狀態(tài)。微乳和普通乳狀液具有三個(gè)根本點(diǎn):第一，普通乳液的形成一般需要外界提供能量，而微乳則是自發(fā)形成的;第ニ，普通乳液是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，在存放過(guò)程中將發(fā)生聚結(jié)而最終分為油、水兩相。而微乳則是熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)均穩(wěn)定體系，不會(huì)發(fā)生聚結(jié)。第三，普通乳液的粒徑通常在微米級(jí)，而微乳的粒徑基本控制在lO-lOOnm，并可作為脂溶性和水溶性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與功效成分的載體。微乳中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與功效成分根據(jù)其親脂性和親水性的差異，可能主要存在于油相、水相、油水界面膜相，或在各相之間進(jìn)行分布。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與功效成分的解離性質(zhì)、脂水分配系數(shù)可能有所變化，這樣，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與功效成分在微乳系統(tǒng)中就可能呈現(xiàn)出不同的穩(wěn)定性及其分布特征等。微乳作為功效成分載體和促進(jìn)透皮吸收滲透劑，與普通乳劑相比，微乳粒徑微小至納米級(jí)、且分布非常均勻，因此，更加有利干與生物活性物質(zhì)和功效成分相融合和均勻分布，使其透皮作用更佳，生物利用度更高；而且，與脂質(zhì)體等其它相比，微乳性質(zhì)更加穩(wěn)定，且制備更易エ業(yè)化或產(chǎn)業(yè)化。當(dāng)前同類(lèi)技術(shù)或產(chǎn)品的不足之處目前美容精華素應(yīng)用的不足之處:美容精華素的生產(chǎn)簡(jiǎn)便、操作容易、使用方便、且在實(shí)際應(yīng)用及其作用功效上確有很多優(yōu)點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，然而，其明顯的缺陷和不足也有不少。目前美容精華素應(yīng)用的不足之處主要有如下方面:第一，大多數(shù)用于皮膚美容的精華素中含有不同濃度的こ醇，使用時(shí)具有一定的嗅覺(jué)刺激性和皮膚刺激性，特別是某些對(duì)こ醇敏感的膚質(zhì)很容易引起皮膚過(guò)敏和皮膚干燥，而且對(duì)眼睛也有不同程度的刺激性；第二，美容精華素的作用和功效主要依賴(lài)于其中所含有或添加的功效成分及其生物活性，但很多功效成分及其生物活性在液體或溶劑之中很容易降解或水解，以至于很多功效成分的分子結(jié)構(gòu)破壞、生物活性喪失、生理功能降低；第三，美容精華素的頻繁開(kāi)啟容易揮發(fā)和丟失部分溶齊U，使其中功效成分的溶解性和穩(wěn)定性降低，不僅影響產(chǎn)品的感官和質(zhì)量，而且也影響到產(chǎn)品的穩(wěn)定性和實(shí)際效果，因此，精華素通常較難保存、且貯存期不太長(zhǎng)；第四，美容精華素在經(jīng)常使用過(guò)程中如未注意衛(wèi)生，很容易使其造成污染、滋生大量有害或致病性微生物，從而影響皮膚健康、甚至造成交叉感染；第五，為促進(jìn)功效成分和生物活性物質(zhì)透皮吸收，某些美容精華素中添加了一定濃度的促透皮滲透劑，而有些促透皮滲透劑較易引起皮膚過(guò)敏或刺激、過(guò)多使用甚至有一定的生物毒性(如DMSO等)；第六，美容精華素中大多數(shù)是水溶性物質(zhì)、即使其中添加了某些油溶性物質(zhì)，需要添加ー些乳化劑或助乳化劑才能使其均勻分散、完全溶解，但即使添加ー些乳`化劑或助乳化劑也很難維持精華素的長(zhǎng)久穩(wěn)定性、且某些乳化劑或助乳化劑使用曾有引起皮膚過(guò)敏的報(bào)道；第七，更重要的是，精華素中的溶劑本身并不具備促進(jìn)功效成分經(jīng)皮滲透和吸收的作用，即使目前人們?cè)诰A素中人為添加ー些所謂促皮膚滲透劑，但其實(shí)際促透皮滲透作用又非常有限，特別是由于皮膚屏障結(jié)構(gòu)的組織學(xué)特點(diǎn)，嚴(yán)格限制了一些外源性物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、水、糖、脂質(zhì)、維生素、無(wú)機(jī)離子或化妝品功效成分等物質(zhì)通過(guò)，絕大多數(shù)功效成分均無(wú)法或很難通過(guò)完整的皮膚角質(zhì)層屏障發(fā)揮應(yīng)有的生物學(xué)作用，因此，添加到精華素中的功效成分和生物活性物質(zhì)的生物利用度較小、生物學(xué)作用和使用效果有限。目前鹿茸多肽應(yīng)用的不足之處:鹿茸多肽作為具有生物活性的功效成分具有廣泛的生物學(xué)作用和應(yīng)用領(lǐng)域，但鹿茸多肽目前主要在醫(yī)學(xué)研究和部分臨床領(lǐng)域中應(yīng)用，尚未見(jiàn)在皮膚美容保健和延緩皮膚衰老中應(yīng)用的正式產(chǎn)品。而且，如果采用現(xiàn)有方法制備的鹿茸多肽在皮膚美容保健和延緩皮膚老化產(chǎn)品中應(yīng)用仍然存在一定局限性和不足之處。主要表現(xiàn)在:(I)采用傳統(tǒng)加熱、強(qiáng)酸或酶蛋白水解新鮮鹿茸所得到的鹿茸多肽雖多肽含量較高、且得率較高，但加熱、強(qiáng)酸或酶蛋白水解方法不僅較多浪費(fèi)能源和污染環(huán)境，而且所得鹿茸多肽在很大程度上失去了天然生物活性，實(shí)際應(yīng)用時(shí)其生物學(xué)作用和生理學(xué)功能有限，也難以最大限度發(fā)揮和達(dá)到鹿茸多肽本應(yīng)具有的應(yīng)用效果；(2)采用目前常規(guī)的酸醇法提取分離所得鹿茸多肽，其分子構(gòu)象、天然特性等較傳統(tǒng)方法較多保留、生物學(xué)活性也有所提高，但酸醇法所得鹿茸多肽較為粗糙、純度不高、且含有較多不溶性雜質(zhì)和皮質(zhì)類(lèi)固醇激素及性激素，這些直接用在皮膚美容保健和延緩皮膚老化方面可能存在著皮膚刺激及過(guò)敏風(fēng)險(xiǎn)和副作用等；(3)采用柱層析法或高效液相進(jìn)ー步純化，雖能得到分子量分布均ー性較好、純度較高、生物活性較好的鹿茸多肽，但采用此法所得鹿茸多肽不僅得率很低、操作繁瑣、需要特殊儀器設(shè)備、應(yīng)用成本高、價(jià)格貴等，而且該法難以產(chǎn)業(yè)化擴(kuò)試和規(guī)模生產(chǎn)，也無(wú)法普及應(yīng)用；加上該法完全剔除其它成分、包括具有協(xié)同增效的功效成分，故實(shí)際應(yīng)用效果也很有限；(4)鹿茸多肽在液體中不易保存、且易于降解、生物活性也大大降低，而采用凍干粉并輔以保護(hù)劑和增效劑才是最佳方案。目前微乳應(yīng)用的不足之處:雖然目前已有微乳產(chǎn)品，有些也許其粒徑也能達(dá)到納米級(jí)，但目前配制的微乳，盡管其組方及其比例不盡相同，特別是其水相均用去離子水或蒸餾水，這雖對(duì)整個(gè)微乳形成至關(guān)重要，但·采用蒸餾水作為水相配制微乳對(duì)其PH值無(wú)緩沖和穩(wěn)定作用，特別是ー些用于皮膚美容、抗衰老、再生修復(fù)、促進(jìn)皮膚細(xì)胞増殖等功能性的美容化妝品對(duì)PH值的穩(wěn)定性具有更高要求，特別是用于促進(jìn)表皮和真皮細(xì)胞増殖的活性多肽和細(xì)胞因子類(lèi)美容化妝品，不僅需要最佳的PH值環(huán)境，而且，還需要穩(wěn)定的pH條件才能更加有利于皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)和増殖；不僅如此，皮膚細(xì)胞生存、生長(zhǎng)和分裂、增殖還需要一定的離子濃度和滲透壓，而這些，僅采用原來(lái)所用的水相(蒸餾水)是無(wú)法具備的、也是其應(yīng)用的缺陷和不足。本發(fā)明的納米級(jí)微乳配方中的水相棄用蒸餾水而采用的0.01mol/LPH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水目前檢索尚未發(fā)現(xiàn)有人在微乳制備時(shí)使用，利用此微乳配方及制備方法不僅為皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)和増殖提供了良好的微環(huán)境，而且，還為其提供了較為穩(wěn)定而合適的PH條件以及優(yōu)越的離子濃度和滲透壓；同時(shí)，還可緩沖或中和該產(chǎn)品在實(shí)際應(yīng)用于面部皮膚之后因?yàn)槊娌科つw的PH值較低而出現(xiàn)整個(gè)微乳系統(tǒng)pH值的波動(dòng)或下降，從而更加有利于皮膚組織細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖以及新生細(xì)胞生理功能的充分發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)目前相關(guān)技術(shù)及其制劑的某些缺陷和不足，發(fā)明ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素。該組合精華素中的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中的鹿茸多肽不僅具有良好的天然構(gòu)象、生物活性和分子量小等特點(diǎn)，且復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中還具有完全匹配的鹿茸多肽活性保護(hù)性和協(xié)同增效劑；該組合精華素中的納米級(jí)緩沖微乳不僅具有粒徑小、分布均勻、速溶復(fù)合鹿茸多肽凍干粉、促進(jìn)功效成分與生物活性物質(zhì)滲透及透皮吸收好·等優(yōu)點(diǎn)，還具有皮膚組織細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖最為有利和適宜的PH值、離子濃度和滲透壓等微環(huán)境。而且，復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其透皮吸收性更好、穩(wěn)定性更好、感觀(guān)良好、療效性更好、使用更安全和方便。而且，本發(fā)明的目的還在于提供ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素的制備方法。同時(shí)，針對(duì)上述相關(guān)技術(shù)及其制劑的某些缺陷和不足等問(wèn)題，本發(fā)明提供解決這些缺陷問(wèn)題的方案如下。
本發(fā)明的設(shè)計(jì)原則本發(fā)明總體設(shè)計(jì)原則是:利用鹿茸多肽高效天然生物活性及其與保護(hù)劑和增效劑復(fù)合后的共濟(jì)協(xié)同作用所具有的獨(dú)特皮膚抗衰老、表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建與美容保健生物學(xué)效應(yīng)和生理學(xué)功效、以及鹿茸多肽生物活性不易在液體中長(zhǎng)久保存而制備成凍干粉等；同時(shí)，利用納米級(jí)緩沖微乳具有對(duì)鹿茸多肽及其保護(hù)劑和增效劑的良好溶解性和包容性以及活化效應(yīng)，特別是納米級(jí)緩沖微乳作為良好經(jīng)皮傳遞載體的促進(jìn)鹿茸多肽及其保護(hù)劑和增效劑的透皮吸收作用等，發(fā)明ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素。本發(fā)明具體設(shè)計(jì)原則是:首先設(shè)計(jì)ー種能成功從新鮮鹿茸中提取分離具有天然生物活性、高效生理學(xué)作用的鹿茸多肽的エ藝技術(shù)和操作方法、并獲得品質(zhì)優(yōu)良的小分子鹿茸多肽；再將這種具有天然生物活性、高效生理學(xué)作用及促進(jìn)皮膚組織細(xì)胞増殖和相關(guān)蛋白組合成、表達(dá)與分泌的小分子鹿茸多肽與不同種類(lèi)的鹿茸多肽凍干保護(hù)劑和協(xié)同增效劑按照合適的比例進(jìn)行復(fù)合配制并制備出復(fù)合鹿茸多肽凍干粉，使之具有更長(zhǎng)作用效應(yīng)、更好協(xié)同效果和更久保存期等；然后，設(shè)計(jì)并配制能與該復(fù)合鹿茸多肽凍干粉完全匹配、相溶、且具有促進(jìn)鹿茸多肽及其保護(hù)增效劑透皮吸收的納米級(jí)緩沖微乳，并將它作為復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的溶媒及經(jīng)皮傳遞與透皮吸收載體；最后，試制并確定復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳最佳比例、并配制出具有皮膚抗衰老與美容保健作用的組合精華素。使本發(fā)明的這種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，在未混合前既能長(zhǎng)久保留鹿茸多肽的天然構(gòu)象及分子結(jié)構(gòu)，又能持續(xù)發(fā)揮鹿茸多肽的高度生物活性和生理功能，還解決了鹿茸多肽在液體中長(zhǎng)期保存易于分解或降解并不斷失去其生物活性等問(wèn)題；同時(shí)，使納米級(jí)緩沖微乳既保留了美容精華素所具有的使用方便和舒適等特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，又具有高效經(jīng)皮傳遞載體和促進(jìn)透皮吸收的功能，還營(yíng)造和提供了有利于皮膚組織細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、増殖和代謝最佳的細(xì)胞微環(huán)境，即合適的營(yíng)養(yǎng)條件、生長(zhǎng)因子、PH值、離子濃度、滲透壓等，使這種復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素在實(shí)際應(yīng)用中具有更好的皮膚抗衰老和美容保健效果。本發(fā)明的技術(shù)方案(一 )本發(fā)明組合精華素的組方及其比例:1.ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其特征在于它是由具有皮膚抗衰老和美容保健作用的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳兩個(gè)部分所組成，其各自原料組成的百分比分別如下:(I)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉原料組成重量百分比是:鹿茸多肽:0.01 0.50 ;甘露醇:0.10 1.50 ;甘氨酸:0.10 1.50 ;脯氨酸:0.10 1.50 ;羥脯氨酸:0.10 1.50 ;白蛋白:0.20 2.50。(2)納米級(jí)緩沖微乳原料組成重量百分比是:pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.01mol/L):20.0 60.0 ;肉豆蘧酸異丙酯:5.0 25.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:
15.0 55.0 ;聚甘油脂肪酸酷:5.0 30.0。(3) 復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素組成重量百分比是:復(fù)合鹿茸多肽凍干粉:0.01-10.0 ;納米級(jí)緩沖微乳:90.0-99.99。2.ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其特征是它由具有皮膚抗衰老和美容保健作用的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉各原料組成的優(yōu)選百分比與納米級(jí)緩沖微乳各原料組成的優(yōu)選百分比分別如下:(I)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉原料組成的優(yōu)選重量百分比是:鹿茸多肽:0.02 ;甘露醇:0.50 ;甘氨酸:0.50 ;脯氨酸:0.50 ;羥脯氨酸:0.50 ;白蛋白:0.98。(2)納米級(jí)緩沖微乳原料組成的優(yōu)選重量百分比:pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.01mol/L):36.0 ;肉豆蘧酸異丙酯:14.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:37.5 ;聚甘油脂肪酸酷:12.5。(3)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素組成的重量百分比:復(fù)合鹿茸多肽凍干粉:3.0 ;納米級(jí)緩沖微乳:97.0。3.ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其特征在于它們是由3%的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉和97%的納米級(jí)緩沖微乳所組成。3%的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉是由鹿茸多肽、甘露醇、甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸和白蛋白所組成；而97%的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉溶媒-納米級(jí)緩沖微乳則是由:水相(0.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水)、油相(肉豆蘧酸異丙酷)、表面活性劑(辛酸癸酸聚こニ醇甘油酷)和助表面活性劑(聚甘油脂肪酸酷)所組成。( ニ)本發(fā)明組合精華素制備技術(shù)及操作方法:
1、復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的制備技術(shù)及操作方法:(I)準(zhǔn)確稱(chēng)取剛剛從雄性梅花鹿割據(jù)下來(lái)的含血新鮮鹿茸，并將其切成小塊后，直接放入高速電動(dòng)勻漿器的容器之中。(2)配制pH4.0醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩沖溶液作為新鮮鹿茸酸解勻漿液 ’然后，按照新鮮鹿茸10倍的比例將事先預(yù)冷的該酸解勻漿液添加到內(nèi)有新鮮鹿茸小塊的高速電動(dòng)勻漿器之中，并立即進(jìn)行酸解勻漿。(3)收集并合并上述新鮮鹿茸酸解勻漿液，立即放置于高速冷凍離心機(jī)中高速離心，留取高速離心后的上層清液(上清液)，并用量筒計(jì)量其體積。(4)將此上清液用粗濾器進(jìn)行過(guò)濾后，再用超濾器和分子量為10萬(wàn)道爾頓的聚砜中空纖維超濾膜進(jìn)行超濾；小心收集分子量< 10萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(首次超濾透過(guò)液)，并計(jì)量體積(ml)。(5)將分子量< 10萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(首次超濾透過(guò)液)用超濾器和分子量為I萬(wàn)道爾頓的聚砜中空纖維超濾膜再次進(jìn)行超濾；小心收集分子量< I萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(二次超濾透過(guò)液)，并計(jì)量體積(ml)。(6)將分子量< I萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(二次超濾透過(guò)液)用納濾器和分子量為300道爾頓的納濾膜對(duì)上述體積過(guò)大的透過(guò)液進(jìn)行濃縮，可得到被納濾膜截留的濃縮液(三次納濾截留液)，其中含有分子量在300-10000道爾頓之間的、與皮膚美容和抗衰老相關(guān)的鹿茸多肽及細(xì)胞因子。且經(jīng)過(guò)該納濾膜后，可除去皮膚美容禁用的性激素和皮質(zhì)類(lèi)固醇激素，如睪酮素(分子量在288.42)、皮質(zhì)醇(分子量在362.46)、雌醇(分子量在270)、雌ニ醇(分子量在272.38)、雌三醇(分子量在288)、黃體酮(分子量在314.47)等。(7)檢測(cè)并調(diào)整納濾膜截留液中鹿茸多肽含量，使其達(dá)到2mg/ml后，再取該調(diào)整液IOOml (鹿茸多肽總含量0.20g)，分別加入甘露醇5.0g、甘氨酸5.0g、脯氨酸5.0g、羥脯氨酸5.0g、白蛋白9.8g,充分混合均勻。(8)將上述含鹿茸多肽濃縮液及其保護(hù)劑和增效劑的鹿茸多肽復(fù)合液經(jīng)0.45 y m濾菌器超濾后分裝至規(guī)格為IOml的西林瓶中，每支西林瓶中加入該復(fù)合液1.0ml，如此可分裝100支西林瓶中；然后，按照冷凍干燥的規(guī)范化程序，放置到冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，即可得到每個(gè)西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羥脯氨酸50mg、白蛋白98mg的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉，加蓋后，立即進(jìn)行壓蓋密封，并于_20°C低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?、納米級(jí)緩沖微乳的制備:(I)在室溫條件下，首先按照辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:聚甘油脂肪酸酷=3: I的比例，準(zhǔn)確吸取辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯375ml和聚甘油脂肪酸酷125ml，并放置在同一個(gè)潔凈的IOOOml容器之中；然后，再用JB-3A型定時(shí)恒溫磁力攪拌器進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，轉(zhuǎn)速200rpm/min,連續(xù)IOmin,使之完全混勻?yàn)樾了峁锼峋郅偿舜几视王ヅc聚甘油脂肪酸酯的混合液500ml。(2)分別量取360ml pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.01mol/L)和140ml肉豆蘧酸異丙酯，分別加至500ml辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯與聚甘油脂肪酸酷混合液中；用定時(shí)恒溫磁力攪拌器進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，轉(zhuǎn)速200rpm/min,連續(xù)30min,即可得到液體總量為IOOOml的無(wú)色透明的納米級(jí)緩沖微乳。(3)將此納米級(jí)緩沖微乳分別分裝至規(guī)格為IOml的無(wú)色透明的西林瓶中，每個(gè)西林瓶中加入該液IOml,如此可分裝到100支西林瓶中；加蓋后,立即進(jìn)行壓蓋密封,并置于陰涼、干燥、通風(fēng)處保存?zhèn)溆?。這樣，裝有納米級(jí)緩沖微乳的西林瓶數(shù)量與含有復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的西林瓶的數(shù)量相同。(4)此時(shí)，該納米級(jí)緩沖微乳原料組成的優(yōu)選重量百分比正好是:pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.0lmol/L) 36.0、肉豆蘧酸異丙酯14.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯37.5、聚甘油脂肪酸酷12.5。3、復(fù)合鹿茸多 肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素的制備與用法:(I)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素的制備:各取I支裝有復(fù)合鹿茸多肽凍干粉和納米級(jí)緩沖微乳的西林瓶、并開(kāi)啟瓶蓋。立即將納米級(jí)緩沖微乳倒入至復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中，將其反復(fù)顛倒輕輕混勻3min，直到復(fù)合鹿茸多肽凍干粉完全被溶解為止；再用無(wú)色透明滴瓶上的滴管將此完全溶解液全部轉(zhuǎn)移到帶滴管的無(wú)色透明滴瓶中混勻、加蓋，即成為IOml復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，可直接將其進(jìn)行皮膚或面部外用。由于每支有復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg,而姆支凍干粉需要添加IOml納米級(jí)緩沖微乳后才可配制成本發(fā)明組合精華素，亦即每IOml組合精華素中含有鹿鸞多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg。如以配制IOOml組合精華素計(jì)算，即將IOml組合精華素中各成分相應(yīng)擴(kuò)大10倍，則每IOOml組合精華素中復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中各物質(zhì)的百分比含量正好是:鹿茸多肽:0.02 ;甘露醇:
0.50 ;甘氨酸:0.50 ;脯氨酸:0.50 ;羥脯氨酸:0.50 ;白蛋白:0.98。而復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素組成的重量百分比也正好是:復(fù)合鹿茸多肽凍干粉3.0、納米級(jí)緩沖微乳97.0。(2)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素的使用方法:正式使用前，先按照醫(yī)學(xué)美容規(guī)范化要求去除面部皮膚老化的角質(zhì)(僅在首次使用吋)；以后使用吋，則按照常規(guī)潔面法清潔面部皮膚；待皮膚完全干燥后，即可取本發(fā)明組合精華素10-20滴于手掌之中并使其均勻分散；然后，以此輕輕涂擦或拍打面部，直至其基本擦干和吸收干凈即可；如皮膚仍然干燥，可按此法再重復(fù)一次；每天使用2-3次，連續(xù)使用30天為ー個(gè)使用周期。如某些面部老化較為明顯或嚴(yán)重者，可按照上述用法連續(xù)使用3個(gè)周期、直至獲得明顯效果為止。本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)和有益.效果1、目前鹿茸多肽作為主要功效成分多用于ロ服以提高機(jī)體免疫功能等用途，也有將鹿茸多肽作為注射液用于骨損傷修復(fù)及促進(jìn)成骨細(xì)胞増殖等用途，但將鹿茸多肽作為主要功效成用于配制護(hù)膚化妝品及美容保健品和皮膚抗衰老產(chǎn)品目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明采用復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳合理應(yīng)用和優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)結(jié)合模式現(xiàn)用現(xiàn)配組合精華素、并將其直接用于營(yíng)養(yǎng)護(hù)膚、表皮細(xì)胞增殖及活化、以及抗皺、祛斑、激光、磨削或果酸去死皮(無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的老化角質(zhì)層)過(guò)度等引起的表皮損傷和皮膚角質(zhì)層剝脫后修復(fù)、表皮屏障功能重建等皮膚美容保健和皮膚抗衰老領(lǐng)域此乃首次，而且在其組成體系及組方成分與比例設(shè)計(jì)、以及其制備方法和應(yīng)用模式等方面具有創(chuàng)新性?；蛘哒f(shuō)，目前國(guó)內(nèi)外用于皮膚抗衰老和美容保健的所有精華素中尚未見(jiàn)以鹿茸多肽作為主要功效成分配制的產(chǎn)品，更無(wú)將復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳按照特定組方和比例現(xiàn)用現(xiàn)配的組合精華素。 2、目前制備和市售的鹿茸多肽多及其相關(guān)產(chǎn)品主要來(lái)源于傳統(tǒng)エ藝及酸醇法從鹿茸中提取分離的粗品鹿茸多肽，其中不僅含有較多不溶性雜質(zhì)和美容化妝品產(chǎn)品中明令禁止添加的類(lèi)固醇皮質(zhì)激素和性激素(包括雌ニ醇、雌三醇、黃體酮、睪酮素、脫氫表雄酮、皮質(zhì)醇等)，而且，這些鹿茸多肽的天然構(gòu)象和分子結(jié)構(gòu)及生物活性等在提取分離時(shí)均受到不同程度影響、甚至出現(xiàn)明顯改變，限制和影響了其應(yīng)用范圍和使用效果。但是，采用本發(fā)明制備的復(fù)合鹿茸多肽不僅鹿茸多肽含量高、分子量較小，而且，含有多種與皮膚抗衰老和美容保健相關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子(如表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子)等具有天然生物活性的增效協(xié)同成分，尤其是采用本發(fā)明制備方法中采用分子量300道爾頓的納濾膜進(jìn)行超濾后，不僅起到了對(duì)鹿茸多肽濃度的調(diào)控作用，且去除了新鮮鹿茸中所固有的類(lèi)固醇皮質(zhì)激素和性激素。3、本發(fā)明制備方法提取鹿茸多肽采用的原料是含血新鮮鹿茸，而傳統(tǒng)方法及酸醇法提取鹿茸多肽則是采用經(jīng)過(guò)大量自來(lái)水沖洗和蒸餾水漂洗的不含血鹿茸。鹿茸血本身就來(lái)源稀少、非常稀缺和珍貴、且含有大量豐富的與皮膚美容保健和延緩皮膚衰老相關(guān)的生物活性物質(zhì)。本發(fā)明所用含血鹿茸不僅可得鹿茸中更加優(yōu)質(zhì)的鹿茸多肽，而且，還同時(shí)可得鹿茸血中包括鹿茸多肽在內(nèi)的生物活性物質(zhì)；更重要的是，直接采用剛從雄性梅花鹿割據(jù)下來(lái)的新鮮鹿茸提取鹿茸多肽，還可大大筒化提取エ藝，提高工作效率，節(jié)省制備時(shí)間，提高多肽資源利用，減輕環(huán)境污染，降低水源浪費(fèi)，減少生產(chǎn)成本等。4、本發(fā)明制備方法提取鹿茸多肽所用醋酸-醋酸鈉緩沖系統(tǒng)的pH值較傳統(tǒng)酸醇法pH3.0-3.5的范圍提高到pH3.8-4.0范圍，使多肽生成條件更加溫和，大分子水解或降解反應(yīng)更加合理，從而，既可提高鹿茸多肽得率，又能獲得更多優(yōu)質(zhì)鹿茸多肽，還能更好保持其天然構(gòu)象和生物活性，而且，還能保留其中更多細(xì)胞生長(zhǎng)因子等與皮膚美容保健和延緩皮膚衰老相關(guān)生物活性物質(zhì)。
5、本發(fā)明制備方法提取鹿茸多肽時(shí)徹底摒棄了傳統(tǒng)酸醇法中添加高純度和高濃度こ醇等污染環(huán)境、又不安全、還可使部分多肽變性的化學(xué)提取分離法，而改為通過(guò)不同分子量超濾膜等物理分離法，這些創(chuàng)新不僅可得到更高得率的鹿茸多肽，且能更好保持其天然構(gòu)象和生物活性，而且還能保留其中更多細(xì)胞生長(zhǎng)因子等與皮膚美容保健和延緩皮膚衰老相關(guān)生物活性物質(zhì)。6、作為天然生物制劑在皮膚抗衰老和美容保健之中應(yīng)用時(shí)，主要功效成分鹿茸多肽不僅需要較長(zhǎng)時(shí)間保留其原有分子結(jié)構(gòu)及其天然生物活性，而且，還需要復(fù)配其它保護(hù)劑和增效劑及其共濟(jì)協(xié)同劑，以增強(qiáng)和提高其生物學(xué)作用和生理學(xué)功能的近期和遠(yuǎn)期效果。本發(fā)明的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉正是按皮膚抗衰老和美容保健作用效果合理設(shè)計(jì)了相應(yīng)的保護(hù)劑和增效劑及其共濟(jì)協(xié)同成分，而復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中的整體配方與組合及其比例也與目前相關(guān)產(chǎn)品不同。7、本發(fā)明中復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳均適合于產(chǎn)業(yè)化、也易于大規(guī)模批量生產(chǎn)。按照本發(fā)明實(shí)施，相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員很容易實(shí)現(xiàn)。因此，有利于該發(fā)明的普及和推廣應(yīng)用。8、復(fù)合鹿茸多肽凍干粉為本發(fā)明重要功效成分和生物活性物質(zhì)，將其設(shè)計(jì)為固態(tài)形式，不僅易于包裝和運(yùn)輸，也不容易破碎和泄漏，還不容易受到污染、病原性微生物也難以滋生和繁殖；而且，復(fù)合鹿茸多肽凍干粉這種固態(tài)形式極易保存、低溫和常溫均可，大大延長(zhǎng)該產(chǎn)品的保存期和使用期。同時(shí)，鹿茸多肽等功效成分和生物活性物質(zhì)在固態(tài)時(shí)也不易分解或降解。因此，復(fù)合鹿茸多肽凍干粉這種固態(tài)形式既能夠保留其功效成分的生物活性，又能夠保持其生物學(xué)作用和生理學(xué)功能，且使其作用更好、效果更明顯。9、復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中除了鹿茸多肽之外，還有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，以及保護(hù)、活化、協(xié)同和增效其生物學(xué)作用和生理學(xué)功能的輔佐成分，使生物活性更高、組成成分更全、生物利用度更好、生物學(xué)效應(yīng)更強(qiáng)，從而，更加有利于共濟(jì)協(xié)同和聯(lián)合增效作用的發(fā)揮，也更加有利于多方位、多層次、多靶點(diǎn)的發(fā)揮皮膚抗衰老和美容保健作用。

10、復(fù)合鹿茸多肽凍干粉作為本發(fā)明最重要的功效成分、以及其相應(yīng)的保護(hù)劑和增效劑及其共濟(jì)協(xié)同成分如無(wú)匹配、合適、穩(wěn)定的溶媒系統(tǒng)包容和活化，將很難達(dá)到預(yù)期之目的、也很難最大限度發(fā)揮其高效生物學(xué)效應(yīng)和最佳生理學(xué)作用。本發(fā)明的納米級(jí)緩沖微乳不僅具有能快速溶解和良好保護(hù)鹿茸多肽天然生物活性的特點(diǎn)和實(shí)效，而且，這種納米級(jí)緩沖微乳既能為原位皮膚組織細(xì)胞和新生細(xì)胞的生存、生長(zhǎng)和増殖分化提供穩(wěn)定和良好的生化微環(huán)境，而且，還能最大限度地促進(jìn)復(fù)合鹿茸多肽及其保護(hù)劑、增效劑和共濟(jì)協(xié)同成分不斷滲透和透皮吸收，使本發(fā)明最重要的功效成分復(fù)合鹿茸多肽以及其相應(yīng)保護(hù)劑、增效劑和共濟(jì)協(xié)同成分最大限度發(fā)揮其高效生物學(xué)效應(yīng)和最佳生理學(xué)作用。11、復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素采用現(xiàn)用現(xiàn)配的方式，也是有別于常規(guī)美容精華素的不同之處。按照本發(fā)明實(shí)施，既能夠保持組合精華素的品質(zhì)，又能夠防止鹿茸多肽等生物活性成分因在精華素基質(zhì)及其溶媒中的水解或降解而失去其生物活性。特別是，采用納米級(jí)緩沖微乳作為精華素基質(zhì)及溶媒，能使復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中各個(gè)成分更容易溶解和分散；而且，采用納米級(jí)緩沖微乳作為精華素基質(zhì)及溶媒所配制的組合精華素，顆粒微小、分布均勻、使用更加舒適和宜人；同吋，采用納米級(jí)緩沖微乳作為精華素基質(zhì)及溶媒所配制的組合精華素，能攜帶復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中更多生物活性物質(zhì)，并有效促進(jìn)這些生物活性物質(zhì)和功效成分透皮吸收，使其生物利用度更好、使鹿茸多肽更加穩(wěn)定，生物學(xué)作用和功能更強(qiáng)。12、本發(fā)明的納米級(jí)微乳配方中的水相棄用蒸餾水而采用的0.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水目前檢索尚未發(fā)現(xiàn)有人在微乳制備時(shí)使用，也未見(jiàn)在美容精華素中直接應(yīng)用。利用該磷酸鹽緩沖生理鹽水進(jìn)行微乳配方及制備方法，不僅為皮膚細(xì)胞生長(zhǎng)和増殖提供了良好的微環(huán)境，而且，還為其提供了較為穩(wěn)定而合適的PH條件以及優(yōu)越的離子濃度和滲透壓；同時(shí)，還可緩沖或中和該產(chǎn)品在實(shí)際應(yīng)用于面部皮膚之后因?yàn)槊娌科つw的PH值較低而出現(xiàn)整個(gè)微乳系統(tǒng)PH值的波動(dòng)或下降，從而更加有利于皮膚組織細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖以及新生細(xì)胞生理功能的充分發(fā)揮。


圖1.復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的制備エ藝流程及技術(shù)路線(xiàn)圖。圖2.納米級(jí)緩沖微乳的制備エ藝流程及技術(shù)路線(xiàn)圖。圖3.組合精華素的制備エ藝流程及技術(shù)路線(xiàn)圖。圖4.實(shí)驗(yàn)例2中給藥側(cè)與對(duì)照側(cè)含水量的對(duì)比示意圖。圖5.實(shí)驗(yàn)例3中自愿者自評(píng)與研究者對(duì)使用本發(fā)明產(chǎn)品后不同時(shí)間皮膚水分情況評(píng)分對(duì)比示意圖。圖6.實(shí)驗(yàn)例3中自愿者自評(píng)與研究者對(duì)使用本發(fā)明產(chǎn)品后不同時(shí)間皮膚彈性情況評(píng)分對(duì)比示意圖。圖7.實(shí)驗(yàn)例3中自愿者自 評(píng)與研究者對(duì)使用本發(fā)明產(chǎn)品后不同時(shí)間皮膚膚色情況評(píng)分對(duì)比示意圖。 圖8.實(shí)驗(yàn)例3中自愿者自評(píng)與研究者對(duì)使用本發(fā)明產(chǎn)品后不同時(shí)間皮膚細(xì)紋情況評(píng)分對(duì)比示意圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施舉例1:復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的制備:(I)準(zhǔn)確稱(chēng)取剛從活體梅花鹿割據(jù)下來(lái)的含血新鮮鹿茸100g，使用鋒利的菜刀或鋼鋸將其切成大小約為0.5cm3左右的小塊，置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?2)分別用已潔凈干燥和消毒過(guò)的容量瓶配制0.2mol/L的醋酸鈉溶液和0.2mol/L的醋酸溶液；然后，分別準(zhǔn)確量取醋酸鈉溶液80ml和醋酸溶液920ml，并置于同一容器中進(jìn)行混合，調(diào)整該溶液PH值至4.0，再用蒸餾水定容至IOOOml，使之成為pH4.0的醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩沖溶液，立即蓋好容量瓶塞，并馬上放置于4°C冰箱之中進(jìn)行預(yù)冷備用。(3)立即將上述預(yù)冷的含血新鮮鹿茸小塊全部放置于FSH-1I型高速電動(dòng)勻漿器的容器之中，并將已配制并預(yù)冷好的PH4.0的醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩沖溶液作為新鮮鹿茸酸解勻漿液；然后按新鮮鹿茸10倍的比例將上述IOOOml預(yù)冷醋酸-醋酸鈉(HAc-NaAc)緩沖溶液分兩次添加到內(nèi)有含血新鮮鹿茸小塊的高速電動(dòng)勻漿器的容器之中，毎次啟動(dòng)高速電動(dòng)勻漿器20min進(jìn)行酸解勻漿。(3)分次收集并合井鹿茸酸解勻漿液，并立即置于高速冷凍離心機(jī)中高速離心。高速冷凍離心機(jī)的離心溫度為4°C,轉(zhuǎn)速為8500rpm/min,離心時(shí)間20min。
(4)離心完成后，留取離心后的上層清液(上清液)，并用量筒準(zhǔn)確計(jì)量其體積。然后，將此上清液用超濾裝置中連接的粗濾器先進(jìn)行過(guò)濾后，再經(jīng)過(guò)該超濾裝置中分子量為10萬(wàn)道爾頓的聚砜中空纖維超濾膜進(jìn)行首次超濾；小心收集分子量< 10萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(首次超濾透過(guò)液)，并計(jì)量體積(ml)。同時(shí)，棄除分子量> 10萬(wàn)道爾頓的截留液用于本發(fā)明之外的其它用途。(5)將上述分子量< 10萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(首次超濾透過(guò)液)再用超濾器和分子量為I萬(wàn)道爾頓的聚砜中空纖維超濾膜進(jìn)行第二次超濾；小心收集分子量< I萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(二次超濾透過(guò)液)，并計(jì)量體積(ml)。同吋，棄除分子量< 10萬(wàn)道爾頓和> I萬(wàn)道爾頓的截留液用于本發(fā)明之外的其它用途。(6)將收集分子量< I萬(wàn)道爾頓的全部透過(guò)液(二次超濾透過(guò)液)再用納濾器和分子量為300道爾頓的納濾膜對(duì)上述體積過(guò)大的透過(guò)液進(jìn)行濃縮，可得到被納濾膜截留的濃縮液(三次納濾截留液)，其中含有分子量在300-10000道爾頓之間的、與皮膚美容和抗衰老相關(guān)的鹿茸多肽及細(xì)胞因子。 研究發(fā)現(xiàn)，從新鮮鹿茸中分離提取得到的分子量在10000道爾頓及其以下的蛋白質(zhì)肽類(lèi)物質(zhì)中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如胰島素樣生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子類(lèi)物質(zhì)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子等；且經(jīng)過(guò)該納濾膜后，可除去皮膚美容禁用的性激素和皮質(zhì)類(lèi)固醇激素，如睪酮素(分子量在288.42)、皮質(zhì)醇(分子量在362.46)、雌醇(分子量在270)、雌ニ醇(分子量在272.38)、雌三醇(分子量在288)、黃體酮(分子量在314.47)等。(7)檢測(cè)經(jīng)過(guò)納濾器和300道爾頓納濾膜截留液中鹿茸多肽含量，然后，通過(guò)濃縮或稀釋的方式調(diào)整納濾膜截留液中鹿茸多肽含量，使其達(dá)到2mg/ml。(8)準(zhǔn)確吸取經(jīng)過(guò)調(diào)整為2mg/ml的鹿茸多肽液IOOml (鹿茸多肽總含量0.20g)；然后，各準(zhǔn)確稱(chēng)取甘露醇5.0g、甘氨酸5.0g、脯氨酸5.0g、輕脯氨酸5.0g、白蛋白9.8g,分別將它們加入到IOOml (鹿茸多肽總含量0.20g)鹿茸多肽液之中，最后用JB-3A型定時(shí)恒溫磁力攪拌器進(jìn)行充分混勻，轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分，連續(xù)10-20min，直到其中的固形物完全被溶解為止。(9)將上述含有鹿茸多肽濃縮液及其保護(hù)劑和增效劑的復(fù)合液，經(jīng)過(guò)規(guī)格為
0.45um濾菌膜進(jìn)行超濾除菌后即可得到無(wú)菌鹿茸多肽復(fù)合液，立即按照無(wú)菌操作要求在超凈工作臺(tái)中將其分別分裝至已消毒過(guò)的規(guī)格為IOml西林瓶之中。每支西林瓶中加入
1.0ml，如此可分裝100支西林瓶中；然后，再按照冷凍干燥的規(guī)范化程序，放置到冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥；迅速加蓋，并立即進(jìn)行壓蓋密封，即可得到每個(gè)西林瓶中含鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg的復(fù)合鹿鸞多肽凍干粉；然后，將其迅速置于_20°C冰箱之中冷凍保存?zhèn)溆谩?shí)施舉例2:納米級(jí)緩沖微乳的制備:(I)將肉豆蘧酸異丙酯(IPM)作為油相，辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯⑶作為表面活性剤，聚甘油脂肪酸酷(C)為助表面活性剤，pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.0lmol/L)作
為水相。室溫下將IPM與水相分別以9.8: 0.2,9: 1、8: 2、7: 3.....2: 8、I: 9、
0.2: 9.8的比例混合，設(shè)定表面活性劑與助表面活性劑的質(zhì)量比(S/C)即Km值分別為1、
2.3、4并配制S/C滴定液，將配制的滴定液用來(lái)滴定IPM與水相組成ニ元液。滴定過(guò)程中，當(dāng)ニ元液變?yōu)槌吻鍟r(shí)，通過(guò)肉眼觀(guān)察有無(wú)乳光產(chǎn)生并結(jié)合Zeta粒徑測(cè)定判斷是否形成微乳，記錄形成微乳時(shí)S/C滴定液的消耗量并計(jì)算出油相，水相，表面活性劑和助表面活性劑各成份在微乳體系中的百分比，通過(guò)軟件計(jì)算分析即可知道形成微乳時(shí)各成分的比值。結(jié)果顯示Km = 3時(shí)，微乳區(qū)域最大，同時(shí)為了降低表明活性劑的用量等綜合考慮，因此在Km=3時(shí)我們選擇納米級(jí)緩沖微乳各成分比例為pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.01mol/L):肉豆蘧酸異丙酯(IPM): (S/C)為36%: 14%: 50%。(2)在無(wú)菌間之中，首先按照辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯:聚甘油脂肪酸酷=3: I的比例，分別用已潔凈、干燥、消毒過(guò)的量筒準(zhǔn)確量取辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯375ml和聚甘油脂肪酸酷125ml ;之后，在室溫中，將它們?cè)俚谷氲酵粋€(gè)潔凈、干燥、消毒過(guò)的IOOOml容器之中；然后，再用JB-3A型定時(shí)恒溫磁力攪拌器進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分，連續(xù)10-20min，使之充分?jǐn)嚢?、完全混勻?yàn)樾了峁锼峋郅偿舜几视王ヅc聚甘油脂肪酸酷的混合液 500ml。(3)分別量取360ml pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.01mol/L)和140ml肉豆蘧酸異丙酷，并將它們分別加到上述500ml辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯與聚甘油脂肪酸酷的混合液中；然后用JB-3A型定時(shí)恒溫磁力攪拌器充分?jǐn)嚢?，轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分，連續(xù)30min，即可得到液體總量為IOOOml無(wú)色透明的納米級(jí)緩沖微乳。(4)將此納米級(jí)緩沖微乳經(jīng)過(guò)規(guī)格為0.45 y m濾菌膜進(jìn)行超濾除菌后，立即按照無(wú)菌操作要求在超凈工作臺(tái)中將其分別分裝至已消毒過(guò)的規(guī)格為IOml無(wú)色透明的西林瓶之中。每個(gè)西林瓶中加入該液10ml，如此分裝可得到100支西林瓶裝的無(wú)菌納米級(jí)緩沖微乳；立即加蓋，迅速進(jìn)行壓蓋密封，井置于陰涼、干燥、通風(fēng)、避光處保存?zhèn)溆?。這樣，裝有納米級(jí)緩沖微乳的西林瓶數(shù)量與含有復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的西林瓶的數(shù)量相同。(5)而且，該納米級(jí)緩沖微乳原料組成的優(yōu)選重量百分比正好是:pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.0lmol/L) 36.0、肉豆蘧酸異丙酯14.0 ;辛酸癸酸聚こニ醇甘油酯37.5、聚甘油脂肪酸酷12.5。實(shí)施舉例3:組合精華素的制備與用法:`
(I)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素的制備:各取I支裝有復(fù)合鹿茸多肽凍干粉和納米級(jí)緩沖微乳的西林瓶、并開(kāi)啟瓶蓋。直接將納米級(jí)緩沖微乳倒入至復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中，加蓋反復(fù)顛倒混勻，直到復(fù)合鹿茸多肽凍干粉完全溶解為止；再用無(wú)色透明滴瓶上的滴管將此溶解液全部轉(zhuǎn)移到帶滴管的無(wú)色透明滴瓶中混勻、加蓋，即成為10毫升復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素。由于每支有復(fù)合鹿茸多肽凍干粉的西林瓶中含鹿鸞多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、輕脯氨酸50mg、白蛋白98mg，而每支凍干粉需要添加IOml納米級(jí)緩沖微乳后才可配制成本發(fā)明組合精華素，亦即每10毫升組合精華素中含有鹿茸多肽2mg、甘露醇50mg、甘氨酸50mg、脯氨酸50mg、羥脯氨酸50mg、白蛋白98mg。如以配制IOOml組合精華素計(jì)算，即將IOml組合精華素中各成分相應(yīng)擴(kuò)大10倍，則每IOOml組合精華素中復(fù)合鹿茸多肽凍干粉中各物質(zhì)的百分比含量正好是:鹿茸多肽:0.02 ;甘露醇:0.50 ;甘氨酸:0.50 ;脯氨酸:0.50 ;羥脯氨酸:
0.50;白蛋白:0.98。而復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素組成的百分比(W/V)也正好是:復(fù)合鹿茸多肽凍干粉3.0、納米級(jí)緩沖微乳97.0。(2)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素的使用方法:正式使用前，先按照醫(yī)學(xué)美容規(guī)范化要求去除面部皮膚老化的角質(zhì)(僅在首次使用吋)；以后使用吋，則按照常規(guī)潔面法清潔面部皮膚；待皮膚完全干燥后，即可取本發(fā)明組合精華素10-20滴于手掌之中并使其均勻分散；然后，以此輕輕涂擦或拍打面部，直至其基本擦干和吸收干凈即可；如皮膚仍然干燥，可按此法再重復(fù)一次；每天使用2-3次，連續(xù)使用30天為ー個(gè)使用周期。如某些面部老化較為明顯或嚴(yán)重者，可按照上述用法連續(xù)使用3個(gè)周期、直至獲得明顯效果為止。下面通過(guò)實(shí)驗(yàn)例進(jìn)ー步說(shuō)明上述制備的本發(fā)明組合精華素的的有益效果。實(shí)驗(yàn)例1:鹿茸多肽因子組合精華素的透皮滲透率實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)主要研究鹿茸多肽因子組合精華素(復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素)與單純復(fù)合鹿茸多肽凍干粉(用PH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.0lmol/L)稀釋)通過(guò)Franz體外透皮擴(kuò)散儀對(duì)這兩個(gè)對(duì)象的透皮濾實(shí)驗(yàn)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示鹿茸多肽因子組合精華素比單純用磷酸鹽緩沖生理鹽水溶解的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉単位面積累積透皮吸收量高，說(shuō)明了采用納米級(jí)緩沖微乳作為精華素基質(zhì)及溶媒所配制的組合精華素，能更有效促進(jìn)這些生物活性物質(zhì)和功效成分透皮吸收。實(shí)驗(yàn)例2:鹿茸多肽因子組合精華素的皮膚修復(fù)效果:健康大鼠6只，雌雄各半，在大鼠背部皮膚備皮24h后，用50%甘醇酸在脫毛區(qū)2cmX2cm范圍輕輕反復(fù)涂抹10分鐘，用棉球吸除多余液體，即為皮膚角質(zhì)剝脫損傷模型。然后在大鼠皮膚損傷處ー側(cè)涂抹鹿茸多肽因子組合精華素，另ー側(cè)涂抹生理鹽水，每天涂抹兩次，連續(xù)15天，在實(shí) 驗(yàn)過(guò)程中觀(guān)察動(dòng)物皮膚以及動(dòng)物整體，在使用后是否會(huì)出現(xiàn)刺激性和不良反應(yīng)，并于15天時(shí)檢測(cè)損傷皮膚的含水量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示皮膚損傷后涂抹鹿茸多肽能明顯改善大鼠剝脫損傷的皮膚，本實(shí)驗(yàn)涂抹15天后，給藥側(cè)傷痕明顯少于對(duì)照側(cè)，且檢測(cè)出給藥側(cè)含水量明顯高于對(duì)照側(cè)(如圖4)，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。實(shí)驗(yàn)例3:鹿茸多肽因子組合精華素的臨床試驗(yàn):隨機(jī)招募符合入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)的健康志愿受試者30例健康中老年志愿者，均為女性，年齡范圍為40 57歲，平均年齡(48.12±5.45)歲，職業(yè)為醫(yī)護(hù)人員26人、普通工人4人。按照美容醫(yī)學(xué)試驗(yàn)及臨床觀(guān)察設(shè)計(jì)，每天面部涂搽兩次，毎次使用10滴(大約0.5ml左右)，連續(xù)不間斷使用天然鹿茸活性多肽因子凍干粉與活化劑(液)配制的組合精華素，使用周期為4周。并且，在美容醫(yī)學(xué)及臨床試驗(yàn)前、使用過(guò)程中、使用后的4周內(nèi)，每周進(jìn)行隨訪(fǎng)、并采用數(shù)碼照相拍照，然后，自愿者自己和研究者再應(yīng)用相關(guān)評(píng)價(jià)量表和photoshop cs5軟件進(jìn)行臨床療效觀(guān)察和客觀(guān)評(píng)價(jià)。量表按I 4分進(jìn)行評(píng)分。其中，I為使用后皮膚狀況最好，4為使用后皮膚狀況最差。結(jié)果:如圖天然鹿茸活性多肽因子凍干粉組合精華素對(duì)中老年健康志愿受試者面部皮膚水分、彈性、膚色、細(xì)紋等有明顯改善(如圖5 8)。圖5 8中*表示與試驗(yàn)前相比，評(píng)分均值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)，* *表示與試驗(yàn)前相比評(píng)分均值有顯著性差異(P < 0.01)。本發(fā)明所述的實(shí)施舉例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式所進(jìn)行的具體描述，并非對(duì)本發(fā)明構(gòu)思和范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)思想的前提下，本領(lǐng)域中技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)內(nèi)容，已經(jīng)全部記載在權(quán)利要求書(shū)中。
權(quán)利要求
1.ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其特征在于它是由具有皮膚抗衰老和美容保健作用的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳兩個(gè)部分所組成，其各自原料組成的百分比如下: (1)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉原料組成的重量百分比: 鹿茸多肽:0.01 0.50 甘露醇0.10 1.50 甘氨酸0.10 1.50 脯氨酸0.10 1.50 羥脯氨酸0.10 1.50 白蛋白0.20 2.50 (2)納米級(jí)緩沖微乳原料組成的重量百分比: pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水(0.01 mol/L): 20.0 60.0 肉豆蔻酸異丙酯:5.0 25.0 辛酸癸酸聚乙ニ醇甘油酷:15.0 55.0 聚甘油脂肪酸酷:5.0 30.0 (3)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素組成的重量百分比: 復(fù)合鹿茸多肽凍干粉:0 .01 10.0 納米級(jí)緩沖微乳:90.0 99.99。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其中的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉各原料組成的優(yōu)選百分比及納米級(jí)緩沖微乳各原料組成的優(yōu)選重量百分比分別如下: (1)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉原料組成的優(yōu)選重量百分比: 鹿茸多肽0.02 甘露醇0.50 甘氨酸0.50 脯氨酸0.50 羥脯氨酸0.50 白蛋白0.98 (2)納米級(jí)緩沖微乳原料組成的優(yōu)選重量百分比:，0.01 mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖生理鹽水:36.0 肉豆蔻酸異丙酷:14.0 辛酸癸酸聚乙ニ醇甘油酯:37.5 聚甘油脂肪酸酯:12.5 (3)復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素組成的重量百分比: 復(fù)合鹿茸多肽凍干粉:3.0 納米級(jí)緩沖微乳:97.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的ー種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素，其特征在于:它們是由3%的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉和97%的納米級(jí)緩沖微 乳所組成 。
全文摘要
本發(fā)明涉及化妝品皮膚美容保健及延緩皮膚衰老等領(lǐng)域，具體是一種用于皮膚美容保健的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉與納米級(jí)緩沖微乳組合精華素及其制備方法。將從新鮮鹿茸中提取分離的具有高效天然生物活性的復(fù)合鹿茸多肽凍干粉、與具有促進(jìn)該功效成分透皮吸收的納米級(jí)緩沖微乳按一定比例配成組合美容精華素，能使其功效成分透皮吸收快、生物活性保存長(zhǎng)、生物利用度高、作用效果好、使用更安全。另外，該組合精華素制備工藝簡(jiǎn)練、技術(shù)操作簡(jiǎn)單，既可節(jié)約能源和成本，又低碳環(huán)保不污染環(huán)境，且適合產(chǎn)業(yè)化批量生產(chǎn)和普及應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K8/06GK103110534SQ201310033710
公開(kāi)日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者莫壯宏, 丁克祥, 左夏林, 朱曉亮, 郝林琳, 梁虹 申請(qǐng)人:海南巨鹿堂保健美容品有限公司, 丁克祥