一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，主要為液體含水藥物制劑。所述液體含水藥物制劑可增強(qiáng)含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)其在含水制劑中的保存周期。
【專利說明】一種治療TNF- α相關(guān)疾病的人抗體制劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，主要為液體含水藥物制劑，該制劑包含的一種成份可以為50mg/ml有效量的抗TNF-a人源抗體，58.75mg/ml己六醇,0.125mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，1.25mg/ml乙酸鹽，pH值5.2。該制劑包含的另一種成份也可以為50mg/ml有效量的抗TNF-α人源抗體，12mg/ml己六醇，lmg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，1.3mg/ml2_羥基丙羧酸,0.3mg/ml2_羥基丙燒-1，2，3-三羧酸鈉，1.5mg/ml 二水合磷酸二鈉,0.9mg/ml 二水合磷酸一鈉,6.2mg/ml氯化鈉，pH值5.2。該制劑在經(jīng)過至少4次凍融循環(huán)后保存穩(wěn)定性。主要保存治療TNF-α相關(guān)的人抗體，可用于皮下或者靜脈注射使用。
【背景技術(shù)】
[0002]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的關(guān)節(jié)炎，在人群中的發(fā)病率為0.3%-1%，如不及時(shí)治療，可導(dǎo)致骨破壞和關(guān)節(jié)功能障礙。在RA發(fā)病中有多種促炎性細(xì)胞因子參與，如腫瘤壞死因子-a (TNF-a)、白介素如IL-1，IL-6，IL_8等。因此，抑制促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生或阻斷其作用，有望改善關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)。近年來許多新研究開發(fā)的生物制劑可通過阻斷或下調(diào)炎性細(xì)胞因子的活性而達(dá)到控制病情的進(jìn)展，如TNF抑制劑、抗IL-1抗體等，這些生物制劑的主要作用機(jī)制有:(I)針對(duì)細(xì)胞因子或其受體的單克隆抗體；(2)可溶性受體拮抗劑，即不包括跨膜成分和胞內(nèi)功能區(qū)的細(xì)胞因子表面受體。該受體拮抗劑可與游離的細(xì)胞 因子結(jié)合，抑制后者與細(xì)胞表面受體結(jié)合?？扇苄允荏w拮抗劑的半衰期較短，可通過加人某些整合結(jié)構(gòu)如IgG的Fe受體或聚乙烷基乙二醇(polyethylene glycol, PEG)而延長(zhǎng)；(3)受體拮抗蛋白，為無生物活性的蛋白質(zhì)，可與細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合細(xì)胞表面的膜受體。受體拮抗蛋白必須結(jié)合90%以上細(xì)胞表面受體方認(rèn)為有效。
[0003]目前認(rèn)為，在諸多RA炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子中，TNF是最重要的促炎性細(xì)胞因子之一，TNF-a在RA病變的持續(xù)發(fā)展、局部炎癥反應(yīng)和組織損傷中均起著重要作用。RA中TNF- α和TNFR水平在血清、滑膜以及滑液中均顯著升高，特別是病情嚴(yán)重和活動(dòng)期患者。RA患者血清中TNF-α水平與關(guān)節(jié)損傷評(píng)分、紅細(xì)胞沉降率(ESR)及貧血呈正相關(guān)。TNF-a還與RA患者體重減輕和疾病復(fù)發(fā)有關(guān)。TNF可作用于多種細(xì)胞，如促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子和趨化因子，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。TNF-a的主要作用是:(1)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，促進(jìn)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮黏附、滲透，導(dǎo)致局部的炎癥反應(yīng)和血管VEGF生成；⑵作用于肝細(xì)胞，產(chǎn)生C反應(yīng)蛋白(CRP) ; (3)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中TNF-a可分別作用于破骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，導(dǎo)致這些細(xì)胞的活化，產(chǎn)生金屬蛋白酶、膠原酶、基膜溶解酶(stiOmelysin)及前列腺素E2 (PGE2)，進(jìn)一步破壞軟骨引起骨侵蝕、關(guān)節(jié)炎癥和軟骨破壞；(4) TNF-α還可促使滑膜細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生IL-l，IL-8&TNF_a本身而加重組織損傷。因此，抑制TNF-α的作用對(duì)控制RA的病情和改善預(yù)后非常重要。
[0004]目前已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)的TNF-α抑制劑共有3種:可溶性受體拮抗劑-依那西普(Etanercept),人鼠嵌合抗體_英夫利昔單抗(Infliximab)和人源化單抗。Etanercept是重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白，由II型TNF受體(p75)與IgGl的Fe部分組成二聚體；Infliximab是針對(duì)TNF的特異性IgGl單克隆抗體(由人Ig穩(wěn)定區(qū)和鼠Ig可變區(qū)組成的嵌合體)；人源化單抗也是特異性針對(duì)TNF的IgGl單克隆抗體(Ig的穩(wěn)定區(qū)和可變區(qū)均為人源的)。TNF抑制劑的主要不良反應(yīng)有注射部位反應(yīng)、感染、腫瘤、淋巴增殖性疾病、神經(jīng)脫髓鞘病變以及狼瘡樣綜合征。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種含水液體藥物制劑，所述含水藥物制劑包括重組人抗TNF-α單克隆抗體、緩沖液體系、滲透壓調(diào)節(jié)劑、表面活性劑。所述重組人抗TNF-α單克隆抗體是通過基因工程手段，在CHO細(xì)胞中表達(dá)的，并且通過一系列標(biāo)準(zhǔn)的層析步驟純化獲得的。在制備抗體后，制備藥物制劑。
[0006]本發(fā)明所開發(fā)的重組人抗TNF-a單克隆抗體制劑，其中所含的高濃度抗體蛋白更加穩(wěn)定，更加耐受高溫變化引起的聚集反應(yīng)，因此本發(fā)明的抗體制劑可用于保存治療TNF-a相關(guān)的人抗體，增強(qiáng)含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)其在含水制劑中的保存周期，對(duì)于治療TNF-a相關(guān)疾病有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1重組人抗TNF-α單克隆抗體BAT1406兩種制劑的對(duì)比研究(OptimlOOO研究
結(jié)果)。
[0008]圖2重組人抗TNF- α單克隆抗體BAT1406兩種制劑的影響因素試驗(yàn)(高溫研究)。
[0009]圖3重組人抗TNF- α單克隆抗體BAT1406兩種制劑的皮下注射與靜脈注射比較。
[0010]圖4A受試藥物1406對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠tgl97活體關(guān)節(jié)炎得分的影響。
[0011]圖4B受試藥物1406對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠tgl97活體組織病理學(xué)得分的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0012]具體而言，本發(fā)明所提供的制劑為pH4-8的液體含水藥物，該制劑包括20-80mg/ml的抗體濃度，并且具有增強(qiáng)含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩(wěn)定性作用。本發(fā)明的制劑包括以下成分:能以高親和力、低解離速度、高中和能力結(jié)合人hTNF-a的抗體；緩沖液，包括乙酸鹽、2-羥基丙羧酸和磷酸鹽緩沖液；滲透壓調(diào)節(jié)劑，包括己六醇；表面活性劑，包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；調(diào)節(jié)pH的氫氧化鈉、氯化鈉和注射用水。
[0013]在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物制劑中的濃度為大約20-80mg/ml。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物制劑中的濃度為大約50mg/ml。在另一種實(shí)施方案中,所述試劑具有高蛋白濃度，所述試劑不是光敏感的。
[0014]本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，包括乙酸鹽`緩沖液、己六醇、失水聚氧乙烯
(20)山梨糖醇油酸酯和注射用水，pH為大約4-8。所述多元醇是己六醇，所述表面活性劑是失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。
[0015]本發(fā)明提供液體含水抗體制劑，所述制劑包括多元醇，以便調(diào)節(jié)液體體系的滲透壓，穩(wěn)定所述抗體。將所述多元醇添加到所述抗體中，其用量可以根據(jù)需要的所述制劑的等滲而改變。在本發(fā)明制劑的一種優(yōu)選方案中，被作為滲透壓調(diào)節(jié)劑用在所述制劑中的是己六醇。在本發(fā)明的優(yōu)選方案中，己六醇的濃度為20-80mg/ml,優(yōu)選濃度約為60mg/ml,具體為58.75mg/ml。在本發(fā)明制劑的另一種優(yōu)選方案中，被作為滲透壓調(diào)節(jié)劑用在所述制劑中的是己六醇。在本發(fā)明的優(yōu)選方案中，己六醇的濃度為8-15mg/ml,最優(yōu)選濃度約為12mg/ml。
[0016]本發(fā)明提供液體含水抗體制劑，所述制劑包括表面活性劑。典型的表面活性劑包括非離子表面活性劑，如失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。表面活性劑能減少所述制備的抗體的聚集和/或減少顆粒在所述制劑中的形成和/或減少吸附。在本發(fā)明制劑的一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述制劑以失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯為表面活性劑。在一種優(yōu)選方案中，所述制劑包括大約0.1-0.5mg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯,在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，在本發(fā)明的制劑中存在大約0.125mg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。在本發(fā)明制劑的另一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述制劑以失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯為表面活性劑。在一種優(yōu)選方案中，所述制劑包括大約0.5-2.0mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，在本發(fā)明的制劑中存在大約lmg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。
[0017]本發(fā)明提供液 體含水抗體制劑，所述制劑包括緩沖系統(tǒng)，以便將pH保持在大約4-大約8的范圍。在本發(fā)明制劑的一種優(yōu)選方案中，緩沖液系統(tǒng)為乙酸鹽，在另一種實(shí)施方案中，pH范圍為大約4.5-6.0，最優(yōu)選實(shí)施方案的pH為5.0-5.2。在本發(fā)明制劑的另一種優(yōu)選實(shí)施方案中，緩沖液體系為2-羥基丙羧酸和磷酸鹽，在另一種實(shí)施方案中，pH范圍為大約4.5-6.0，最優(yōu)選實(shí)施方案的pH為5.2。
[0018]本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，包括有效量的抗體成分；乙酸鹽或者2-羥基丙羧酸和磷酸鹽；包括己六醇；包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；和注射用水，pH為大約4-8。所述抗體成分在液體狀態(tài)下保質(zhì)期為36個(gè)月。
[0019]本發(fā)明還提供了含水的藥用組合物，包括有效量的抗體成分；乙酸鹽或者2-羥基丙羧酸和磷酸鹽；包括己六醇；包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；和注射用水，pH為大約4-8。所述制劑在室溫下可保存二個(gè)月，在2-8°C下保質(zhì)期為36個(gè)月。冷凍本發(fā)明的制劑還可以用于進(jìn)一步延長(zhǎng)它的保質(zhì)期。
[0020]本發(fā)明提供液體含水藥物制劑，包括適合治療用途的抗體，這種藥物制劑便于施用，并且含有高蛋白濃度，主要用于治療由TNF-α引起的病癥。在一種實(shí)施方案中，所述藥物制劑具有增強(qiáng)了的穩(wěn)定性。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑在經(jīng)過至少4次凍融循環(huán)后是穩(wěn)定的。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體針對(duì)人TNF-α。在另一種實(shí)施方案中,所述抗體是重組人抗TNF-α單克隆抗體BAT1406。
[0021]在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，所述液體含水藥物制劑包括抗體或其抗原結(jié)合部分，它是重組抗體或其抗原結(jié)合部分，它能抑制人TNF-α誘導(dǎo)的ELAM-1在人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)。在另一種實(shí)施方案中，所述要求保護(hù)的制劑包括重組人抗TNF-a單克隆抗體BAT1406 ο
[0022]本發(fā)明提供含水的藥用制劑，包括有效量的抗體成分，緩沖液體系乙酸鹽或者2-羥基丙羧酸和磷酸鹽，滲透壓穩(wěn)定劑己六醇，表面活性劑失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯和注射用水，PH為大約4-8。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述制劑是適合于進(jìn)行單次皮下注射的，在另一種實(shí)施方案中，所述制劑是適合進(jìn)行靜脈注射，兩者的藥代基本保持一致。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物制劑中的濃度為大約I -100mg/ml。
[0023]在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所制試劑是裝在管形瓶中的含有表I所示成分的
0.8ml的溶液。其中制劑包含的一種成份可以為40mg有效量的hTNF-α抗體、47mg己六醇、0.1mg失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯、Img乙酸鹽，用于調(diào)節(jié)pH的氫氧化鈉和注射用水。其中制劑包含的另一種成份可以為40mg有效量的hTNF-α抗體、9.6mg己六醇、0.8mg失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯、1.04mg 2-羥基丙羧酸、0.24mg 2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉、1.2mg二水合磷酸二鈉、0.72mg二水合磷酸一鈉、4.96mg氯化鈉，用于調(diào)節(jié)pH的氫氧化鈉和注射用水。
[0024]表I A.重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406的A制劑成份列表
[0025]
【權(quán)利要求】
1.一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于: 一種液體含水藥物制劑，其包含 (1)20-80mg/ml有效量的抗TNF_a人源抗體， (2)20 -80mg/ml 己六醇， (3)0.1-0.5mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)0.5 -2.5mg/ml 乙酸鹽， (5)注射用水， (6)pH約為4-8, 其中抗TNF-a人源抗體為重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406。
2.權(quán)利要求1中，抗TNF-a人源抗體濃度為40-60mg/ml,優(yōu)選為50mg/ml。
3.權(quán)利要求1中，己六醇濃度為55-65mg/ml,優(yōu)選為58.75mg/ml。
4.權(quán)利要求1中，失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯濃度為0.1-0.2mg/ml，優(yōu)選為0.125mg/ml。
5.權(quán)利要求1中，乙酸鹽濃度為1.0-2.0mg/ml，優(yōu)選為1.25mg/ml。
6.權(quán)利要求1中，pH值為5.0-5.4，優(yōu)選為5.2。
7.一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于: 一種液體含水藥物制劑，其包含 (1)50mg/ml有效量的抗TNF_a人源抗體， (2)58.75mg/ml 己六醇， (3)0.125mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)1.25mg/ml 乙酸鹽， (5)注射用水，
(6)pH 約為 5.2， 其中抗TNF-a人源抗體為重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406。
8.一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于: 一種液體含水藥物制劑，其包含 (1)20-80mg/ml有效量的抗TNF- α人源抗體， (2)8-15mg/ml己六醇， (3)0.5-2.0mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)0.8-2.0mg/ml2-羥基丙羧酸， (5)0.1-0.5mg/ml2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉， (6)1.0-2.0mg/ml 二水合磷酸二鈉， (7)0.5-1.5mg/ml 二水合磷酸一鈉， (8)5.0 -8.0mg/ml 氯化鈉， (9)注射用水，
(10)pH 約為 4.0 -6.0, 其中抗TNF-α人源抗體為重組人抗TNF-α單克隆抗體BAT1406。
9.權(quán)利要求8中，抗TNF-α人源抗體濃度為40-60mg/ml,優(yōu)選為50mg/ml。
10.權(quán)利要求8中，己六醇濃度為11-13mg/ml,優(yōu)選為12mg/ml。
11.權(quán)利要求8中，失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯濃度為0.8-1.2mg/ml，優(yōu)選為 1.0mg/ml ο
12.權(quán)利要求8中，2-羥基丙羧酸濃度為1.0-1.5mg/ml,優(yōu)選為1.3mg/ml。
13.權(quán)利要求8中，2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉濃度為0.2-0.4mg/ml,優(yōu)選為0.3mg/ml。
14.權(quán)利要求8中，二水合磷酸二鈉濃度為1.2-1.8mg/ml,優(yōu)選為1.5mg/ml。
15.權(quán)利要求8中，二水合磷酸一鈉濃度為0.8-1.0mg/ml,優(yōu)選為0.9mg/ml。
16.權(quán)利要求8中，氯化鈉濃度為6.0-6.5mg/ml,優(yōu)選為6.2mg/ml。
17.權(quán)利要求8中，pH值為4.8-5.5，優(yōu)選為5.2。
18.一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于: 一種液體含水藥物制劑，其包含
(1)50mg/ml有效量的抗TNF- α人源抗體，
(2)12mg/ml 己六醇， (3)lmg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)1.3mg/ml2-羥基丙羧酸， (5)0.3mg/ml2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉， (6)1.5mg/ml 二水合磷酸二鈉， (7)0.9mg/ml 二水合磷酸一鈉，
(8)6.2mg/ml 氯化鈉， (9)注射用水，
(10)pH 約為 5.2， 其中抗TNF-a人源抗體為重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406。
19.一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，所述抗體針對(duì)TNF- α。
20.一種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分，能結(jié)合人TNF- a，并且是重組人抗TNF- α單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。
21.一種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，主要用于制備治療其中由TNF-a引起的病癥的藥物。
22.—種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，不僅適合于進(jìn)行皮下注射，還適合進(jìn)行靜脈注射，藥代基本保持一致。
23.一種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，該制劑能夠增強(qiáng)含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)其在含水制劑中的保存周期。
24.一種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，該制劑能夠并且在室溫下保存二個(gè)月。
25.一種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，該制劑在2-8 °C下保存36個(gè)月。
26.一種治療TNF-a相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，該制劑在冷凍條件下延長(zhǎng)保質(zhì)期。
27.一種治療TNF-α相關(guān)疾病的人抗體的制劑，其特征在于如權(quán)利要求1-18中，該制劑在至少4次凍 融循環(huán)后保存穩(wěn)定性。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK103446583SQ201310093009
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年3月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月21日
【發(fā)明者】林鍵, 包財(cái), 裴樹軍, 章淑妹, 朱煒, 李勝峰 申請(qǐng)人:百奧泰生物科技(廣州)有限公司