一種用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物及其制劑的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物及其制劑，該組合物包含以下重量百分比的組分：DHA?10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，還包括人脂肪干細(xì)胞作為藥物組合物的載體，所述的藥物組合物可以根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體，按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法，制備成片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服劑，相比傳統(tǒng)的靶向方法具有更強(qiáng)的主動(dòng)性和靶向性，能夠使原藥的功效顯著增強(qiáng)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物及其制劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，具體涉及一種DHA和蜜蜂唾液酶混合，用人脂肪干細(xì)胞作為載體的藥物組合物及其制劑。
【背景技術(shù)】
[0002]DHA即二十二碳六烯酸，是一種對(duì)人體非常重要的多不飽和脂肪酸，屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。DHA是神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞生長(zhǎng)及維持的一種主要元素，是大腦和視網(wǎng)膜的重要構(gòu)成成分，在人體大腦皮層中含量高達(dá)20%，在眼睛視網(wǎng)膜中所占比例最大，約占50%。人的記憶、思維能力取決于控制信息傳遞的腦細(xì)胞、突觸等神經(jīng)組織的功能，即信息在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的傳遞范圍、方向和作用。DHA在神經(jīng)組織中約占其脂肪含量的25%，突觸是控制信息傳遞的關(guān)鍵部位，是由突觸膜和間隙組成，DHA有助于其結(jié)構(gòu)完整、功能發(fā)揮。DHA具有影響胎兒大腦發(fā)育、促進(jìn)視網(wǎng)膜光感細(xì)胞成熟、增進(jìn)大腦細(xì)胞發(fā)育等作用，還可以用于癌癥、心血管病以及炎癥、老人癡呆等病癥的治療。
[0003]蜜蜂唾液酶是源于蜜蜂唾液中的多種酶類(lèi)的總稱(chēng)，除了蜜蜂的胃以外，主要存在于蜂蜜和蜂膠中。蜜蜂唾液酶的主要作用主要體現(xiàn)在蜜蜂采蜜釀蜜的過(guò)程中，工蜂利用巢脾內(nèi)的唾液酶，將花蜜、植物分泌物進(jìn)行轉(zhuǎn)化、脫水、貯存至成熟，從而得到各種蜂蜜。正因?yàn)榉涿壑泻忻福攀垢鞣N口味和類(lèi)型的蜂蜜具有藥食兩用的特殊功能。這些酶是蜜蜂在釀蜜過(guò)程中添加進(jìn)去的，來(lái)源于蜜蜂唾液，主要是蔗糖酶，這種酶能把花蜜中的蔗糖轉(zhuǎn)化成葡萄糖和果糖；另外還有淀粉酶、葡萄糖氧酶、還原酶、轉(zhuǎn)化酶、磷酸酶、類(lèi)蛋白酶等。蜜蜂可以根據(jù)采集的花蜜不同而分泌出不同作用的唾液酶，從而使得釀造出的蜂蜜及蜂膠等產(chǎn)物含有不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥用成分。
[0004]本發(fā)明是在前期試驗(yàn)基礎(chǔ)上將人脂肪干細(xì)胞作為藥物組合物的載體，具有靶向運(yùn)輸車(chē)的作用，使藥物成分像子彈一樣追蹤并殺死目標(biāo)物，相比傳統(tǒng)的靶向方法具有更強(qiáng)的主動(dòng)性和靶向性，能夠使原藥的功效顯著增強(qiáng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種用人脂肪干細(xì)胞作為載體的藥物組合物用途治療或預(yù)防治療老年癡呆。將人脂肪干細(xì)胞作為藥物組合物的載體使藥物成分像子彈一樣追蹤并殺死目標(biāo)物，相比傳統(tǒng)的靶向方法具有更強(qiáng)的主動(dòng)性和靶向性，能夠使原藥的功效顯著增強(qiáng)。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供了該藥物組合物的制劑。
[0007]本發(fā)明的藥物組合物及其制劑是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:
[0008]該組合物包含以下重量百分比的組分:DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1_2.0份，還包括人脂肪干細(xì)胞，作為藥物組合物的載體。
[0009]更進(jìn)一步的，包含以下重量百分比的組分:DHA為25份，蜜蜂唾液酶為1.6份。
[0010]蜜蜂唾液酶是將重量比的原料:夜寧糖漿20-60份、DHA5-15份、水35_75份，混合攪拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到。
[0011]本發(fā)明治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，制備方法包括以下步驟:
[0012](I)藥物混合溶液的制備:首先收集蜜蜂唾液酶，和DHA按處方比例混合，溶于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中，充分混合；
[0013](2)人脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng):采用分離、純化、培養(yǎng)的方法獲得人脂肪干細(xì)胞，并將其重懸在藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中；
[0014](3)藥物制劑的制備:將上述藥物混合溶液與人脂肪干細(xì)胞重懸液混合，即得發(fā)明產(chǎn)物。
[0015]更進(jìn)一步的，步驟(I)中的蜜蜂唾液酶的收集具體步驟為用夜寧糖漿、DHA和水混合攪拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到的蜜蜂唾液酶。
[0016]更進(jìn)一步的，步驟(I)、(2)中的藥學(xué)上可接受的介質(zhì)選自緩沖液、生理鹽水、平衡鹽溶液或其組合；步驟(2)中采用質(zhì)量與體積比為0.1-0.3%的混合膠原酶對(duì)脂肪組織進(jìn)行消化，用含有10-15%胎牛血清、103-105U/mlLIF的MCDB-201培養(yǎng)液對(duì)提取分離后的干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)；步驟(3)中藥物混合溶液與人脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)液的比例為1:1~3。
[0017]更進(jìn)一步的，步驟(2)中的混合膠原酶由I型膠原酶和IV型膠原酶組成，所述混合膠原酶的質(zhì)量與體積比為1%的母液配制方法為=IOOmlD-Hanks平衡鹽溶液中加入0.7g I型膠原酶、0.3g IV型膠原酶。
[0018]更進(jìn)一步的，制備方法包括以下步驟:
[0019](I)取處方量DHA、 蜜蜂唾液酶溶于磷酸鹽緩沖液中，制備成濃度為5_15mg/ml的混合溶液；
[0020](2)取采集的脂肪組織，剔除肉眼可見(jiàn)的血管和纖維部分，剪碎，用pH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液洗滌多次，去除殘留的血液，加入與脂肪組織等體積的0.2-0.4% (m/v)混合膠原酶，均勻震蕩消化40-80分鐘，再置于離心機(jī)中離心4_10分鐘，去除表層脂肪，將底層細(xì)胞用PH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液反復(fù)清洗，經(jīng)100目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾液離心5-10分鐘，棄去上清液，將獲得的干細(xì)胞按照2-3 X IOVcm2的密度接種于培養(yǎng)瓶，加入IOmL含有10-15%胎牛血清、103_105U/mlLIF的MCDB-201培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，每隔1-2天更換新鮮的培養(yǎng)液，待細(xì)胞生成達(dá)到80%融合，在培養(yǎng)瓶中加0.25%胰酶-EDTA進(jìn)行消化，按1:3傳代，獲得傳代培養(yǎng)后的人脂肪干細(xì)胞；將2 X IO5個(gè)脂肪干細(xì)胞重懸在200 μ I等滲磷酸鹽緩沖液中，得到濃度為1.0XlOfVml的干細(xì)胞懸液；
[0021](3)將上述藥物混合溶液和人脂肪干細(xì)胞懸液按照1:1~5的比例混合，即得發(fā)明產(chǎn)物。
[0022]本發(fā)明的藥物組合物可以根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體，按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法，制備成片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服液。
[0023]更進(jìn)一步的，口服劑型為片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服液。
[0024]本發(fā)明所述益神健腦的藥物中，DHA具有增進(jìn)大腦細(xì)胞發(fā)育以及癌癥、心血管病、炎癥、老人癡呆等病癥的治療作用；蜜蜂唾液酶中含有蔗糖酶、淀粉酶、葡萄糖氧酶、還原酶、轉(zhuǎn)化酶、磷酸酶、類(lèi)蛋白酶等多種酶。本發(fā)明研究人員在研究的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)在用夜寧糖漿和DHA混合喂食蜜蜂后獲得的蜜蜂唾液酶，比普通的蜜蜂唾液酶中含有對(duì)人體有益的酶更多，并增強(qiáng)了原夜寧糖漿的治療作用；這些酶與DHA混合制備成藥劑后，作用協(xié)同相加，增強(qiáng)了其在提高免疫力、延緩衰老、養(yǎng)心安神的功效，對(duì)失眠、多夢(mèng)、神經(jīng)衰弱、健忘等癥狀具有良好的治療效果。[0025]本發(fā)明的有益效果是:可提高人體免疫力、延緩衰老、促進(jìn)腦部發(fā)育、改善睡眠等作用，對(duì)改善發(fā)育不良、食欲降低、失眠、多夢(mèng)、神經(jīng)衰弱、健忘等癥狀具有良好的效果，相比之前申請(qǐng)專(zhuān)利的藥物組合物，具有更好的治療效果。[0026]以下采用效果實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物及其制劑的有益效果:[0027]試驗(yàn)例對(duì)老年癡呆模型(AD)大鼠記憶的影響[0028]1、材料和方法建議增加不采用脂肪干細(xì)胞作為載體的對(duì)比藥物，表明增加載體有明顯效果[0029]1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重250_350g，6月大，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。[0030]1.2藥物A -M DHA5g、蜜蜂唾液酶0.8g，按照實(shí)施例6的方法制成口服液；藥物B:取DHA45g、蜜蜂唾液酶2.5g，按照實(shí)施例6的方法制成口服液；藥物C:采用藥物A的配方，不采用脂肪干細(xì)胞作為載體的對(duì)比藥物；藥物D:健腦膠囊，江西廣信藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，每粒裝0.3g，批號(hào)110801。[0031]1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器Morris水迷宮(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室)、電子天平、數(shù)顯恒溫水槽、低速離心機(jī)等。[0032]2、實(shí)驗(yàn)方法[0033]2.1動(dòng)物分組選取60只SD大鼠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組、模型組、藥物A、B、C和D組，每組10只，分籠飼養(yǎng)。[0034]2.2動(dòng)物模型制備除正常對(duì)照組外，其余各組采用每天腹腔注射0.5%D-半乳糖50mg/kg，一日I次，連續(xù)6周。[0035]2.3給藥方法造模20天后開(kāi)始給藥，藥物A、B、C組每日均給藥13.3ml/kg (相當(dāng)于臨床用量10倍)灌胃一次；D組每日給予健腦膠囊0.3g/kg (相當(dāng)于臨床用量10倍)灌胃一次；連續(xù)給藥28d。[0036]3、觀察指標(biāo)[0037]3.1跳臺(tái)試驗(yàn):自制跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)箱，箱底鋪有銅柵作為刺激電極，箱內(nèi)右后側(cè)放置一個(gè)橡皮墊作為大鼠逃避電擊的安全區(qū)。先放入大鼠適應(yīng)5min，隨后通入70V，0.5A~0.7A電流，大鼠遭到電擊后正常反應(yīng)是跳上平臺(tái)以躲避傷害性刺激。記錄大鼠從開(kāi)始通電到完全上臺(tái)所用的時(shí)間。24h后重測(cè)驗(yàn)一次以測(cè)記憶能力。[0038]3.2Morris水迷宮試驗(yàn):在水迷宮的圓形水池邊緣上等距離設(shè)置東西南北4個(gè)標(biāo)記，將水池等分。水池中加入奶粉使水渾濁，不見(jiàn)低于水面的平臺(tái)，每天將大鼠從4個(gè)不同分隔固定入水中各I次，直至找到并站在平臺(tái)上為止，游泳超過(guò)60s后人為將大鼠放至平臺(tái)上IOs進(jìn)行訓(xùn)練。6天后正式試驗(yàn)，將平臺(tái)位置轉(zhuǎn)移到對(duì)面，記錄爬上平臺(tái)潛伏期的時(shí)間。[0039]4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)以(I土s)表示，以P〈0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[0040]5、結(jié)果[0041]5.1各組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)及迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)、記憶能力的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1、表2。[0042]表1跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力的比較(5 土s)
【權(quán)利要求】
1.一種用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:該組合物包含以下重量百分比的組分:DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，還包括人脂肪干細(xì)胞作為藥物組合物的載體。
2.如權(quán)利要求1所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:包含以下重量百分比的組分:DHA為25份，蜜蜂唾液酶為1.6份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:蜜蜂唾液酶是將重量比的原料:夜寧糖漿20-60份、DHA5-15份、水35-75份，混合攪拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到。
4.如權(quán)利要求1所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:制備方法包括以下步驟: (O藥物混合溶液的制備:首先收集蜜蜂唾液酶，和DHA按處方比例混合，溶于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中，充分混合； (2)人脂肪干細(xì)胞的分離培養(yǎng):采用分離、純化、培養(yǎng)的方法獲得人脂肪干細(xì)胞，并將其重懸在藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中； (3)藥物制劑的制備:將上述藥物 混合溶液與人脂肪干細(xì)胞重懸液混合，即得發(fā)明產(chǎn)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:步驟(I)中的蜜蜂唾液酶的收集具體步驟為用夜寧糖漿、DHA和水混合攪拌制成蜜蜂采食蜜，喂食蜜蜂后收集得到的蜜蜂唾液酶。
6.如權(quán)利要求4所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:步驟(1)、(2)中的藥學(xué)上可接受的介質(zhì)選自緩沖液、生理鹽水、平衡鹽溶液或其組合；步驟(2)中采用質(zhì)量與體積比為0.1-0.3%的混合膠原酶對(duì)脂肪組織進(jìn)行消化，用含有10-15%胎牛血清、103-105U/mlLIF的MCDB-201培養(yǎng)液對(duì)提取分離后的干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)；步驟(3)中藥物混合溶液與人脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)液的比例為1:1~3。
7.如權(quán)利要求6所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:步驟(2)中的混合膠原酶由I型膠原酶和IV型膠原酶組成，所述混合膠原酶的質(zhì)量與體積比為1%的母液配制方法為:IOOmlD-Hanks平衡鹽溶液中加入0.7g I型膠原酶、0.3g IV型膠原酶。
8.如權(quán)利要求4-7任一所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物，其特征在于:制備方法包括以下步驟: (1)取處方量DHA、蜜蜂唾液酶溶于磷酸鹽緩沖液中，制備成濃度為5-15mg/ml的混合溶液； (2)取采集的脂肪組織，剔除肉眼可見(jiàn)的血管和纖維部分，剪碎，用pH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液洗滌多次，去除殘留的血液，加入與脂肪組織等體積的0.2-0.4% (m/v)混合膠原酶，均勻震蕩消化40-80分鐘，再置于離心機(jī)中離心4-10分鐘，去除表層脂肪，將底層細(xì)胞用PH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液反復(fù)清洗，經(jīng)100目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾液離心5-10分鐘，棄去上清液，將獲得的干細(xì)胞按照2-3 X IOVcm2的密度接種于培養(yǎng)瓶，加入IOmL含有10-15%胎牛血清、103-105U/mlLIF的MCDB-201培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，每隔1_2天更換新鮮的培養(yǎng)液，待細(xì)胞生成達(dá)到80%融合，在培養(yǎng)瓶中加0.25%胰酶-EDTA進(jìn)行消化，按1:3傳代，獲得傳代培養(yǎng)后的人脂肪干細(xì)胞；將2 X IO5個(gè)脂肪干細(xì)胞重懸在200 μ I等滲磷酸鹽緩沖液中，得到濃度為1.0X 106/ml的干細(xì)胞懸液； (3)將上述藥物混合溶液和人脂肪干細(xì)胞懸液按照1:1~5的比例混合，即得發(fā)明產(chǎn)物。
9.如權(quán)利要求1所述的用于治療或預(yù)防治療老年癡呆的藥物組合物的制劑，其特征在于:所述的藥物組合物可以根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體，按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法，制備成 片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服液。
【文檔編號(hào)】A61K31/202GK103463628SQ201310338270
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月5日
【發(fā)明者】張芝庭, 張濤濤 申請(qǐng)人:貴州神奇藥物研究院