一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，由質量比1:10～20:1～10的重樓總皂苷提取物、姜黃提取物和山藥提取物組成。經(jīng)體外MTT法活性實驗證明，本發(fā)明的中藥組合物對LA795肺癌細胞株和HepG2肝癌細胞株均具有抑制生長作用，IC50分別可達20mg/mL(生藥量)以下。體內(nèi)實驗證明，本發(fā)明的中藥組合物對小鼠T739肺癌轉移小鼠，HepA肝癌和H22肝癌均具有顯著抑制生長作用，腫瘤抑制率分別可達到53%、55%和57%。本發(fā)明的組合物抑瘤效果與組成組合物的組份給藥相比具有協(xié)同增效作用。
【專利說明】一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物及其制備方法，屬于中藥【技術領域】【背景技術】[0002]中藥重樓為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七葉一枝花 Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖,具有清熱解毒，消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風抽搐等癥，是中成藥云南白藥、宮血寧膠囊、季德勝蛇藥片等的主要組成藥物?，F(xiàn)代藥理研究表明重樓具有細胞毒活性、抑菌抗炎、鎮(zhèn)痛、止血、鎮(zhèn)靜、抗早孕、殺精、對呼吸系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)作用等，在臨床應用于治療肺系疾病、功能性子宮出血、淋巴結結核潰瘍、神經(jīng)性皮炎和外科炎癥以及治療腫瘤等療效顯著。目前有重樓入藥的上市中成藥復方有金復康口服液、軟堅口服液、樓蓮膠囊、肝復樂片等。近年來，重樓及其抗腫瘤有效成分重樓總皂苷的文獻報道日益增多。中國中藥雜志，2008，33 (16) =2057-2060公開了滇重樓皂苷對10種腫瘤細胞株的細胞毒譜及構效關系研究；黃賢校等在中草藥雜志2009，40 (3) =483-489發(fā)表了重樓屬藥用植物皂苷類化學成分及其生源途徑的研究進展；陳志紅等考察了重樓總皂苷對人肺癌細胞A549的增殖抑制作用及對細胞周期的影響；朱麗麗等對重樓皂苷抑制SGC-7901細胞增殖及誘導凋亡進行了研究；林云華研究發(fā)現(xiàn)重樓和奧沙利鉬在體外、體內(nèi)實驗中可能具有一定抗血管生成的作用，兩者聯(lián)合應用可能具有協(xié)同增效作用。賈科等發(fā)現(xiàn)重樓總皂苷可顯著抑制MGC-803細胞的生長并呈時間-劑量依賴關系，可阻滯細胞于S期，誘導細胞凋亡率的升高；可顯著抑制EphA2、Survivin蛋白的表達，同時上調(diào)Caspase_3蛋白的表達,進而得出結論其作用機制可能與下調(diào)EphA2和Survivin的表達以及促進Caspase_3的表達有關。中國專利200610052223.8公開了重樓總皂苷的制備方法，200810052092.2也公開了以重樓總皂苷為有效成分的藥物制劑及其制備方法。
[0003]姜黃始載于《唐本草》,為姜科植物姜黃Curcuma longa L.的干燥根莖,其性味辛、苦、溫，歸脾、肝經(jīng)，具有破血行氣，通經(jīng)止痛之功效，可用于胸脅刺痛，胸痹心痛，痛經(jīng)經(jīng)閉，癥瘕，風濕肩臂疼痛，跌撲腫痛等病癥的治療。姜黃含有多種化學成分，主要成分為姜黃素類化合物:姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素、二氫姜黃素等；倍半萜類化合物:姜黃新酮、姜黃酮醇A、B等；揮發(fā)油(4.2%):姜黃酮、姜黃烯、莪術醇等。姜黃素等有效成分的藥理作用廣泛，其抗炎、抗氧化、抗動脈粥樣硬化、抗抑郁、抗腫瘤等作用已被普遍認可，其中抗腫瘤作用自1985年首次提出后，已有大量的實驗研究證實，作用機制主要包括誘導腫瘤細胞凋亡，抑制血管生成，阻滯細胞周期進程和逆轉腫瘤細胞多藥耐藥等。黃東生等研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素能夠增強Caspase-8的表達，從而啟動外源性凋亡途徑，誘導人肺癌細胞凋亡。方悅等報道姜黃素具有抗食道癌、胃癌、肝癌、結腸癌等消化系統(tǒng)腫瘤的作用。中國專利CN1931353A公開了姜黃素提取及其藥物組合物制備方法。
[0004]山藥(Rhizama Dioscoreae)為薯菌科植物薯菌的干燥塊莖，屬多年生纏繞草本植物。又名薯蕷。山藥是我國傳統(tǒng)保健食品之一，其性味甘、平。歸脾、肺、腎經(jīng)。具有健脾胃，益肺腎，補虛羸等功效。山藥是衛(wèi)生部公布的藥食兩用的植物之一，其所含化學成分有脂肪酸、蛋白質和氨基酸、酯類、多糖類和多種微量元素?，F(xiàn)代藥理研究表明山藥具有抗氧化，降血糖、血脂，保護腎缺血再灌注損傷，保護肝損傷，調(diào)節(jié)免疫作用。近年研究發(fā)現(xiàn)山藥多糖具有抗腫瘤、抗突變作用。趙國華等在藥學學報2003，38 (1):37-41中報道用小鼠移植性實體瘤研究了山藥多糖RDPS-1的體內(nèi)抗腫瘤作用，結果表明，50mg/kg的RDPS-1對Lewis肺癌有顯著地抑制作用，而對B16黑色素瘤沒有明顯作用，150mg/kg的RDPS-1對B16黑色素瘤和Lewis肺癌都有顯著的抑制效果。山藥是傳統(tǒng)補益類中藥，含有多種對人體有益的營養(yǎng)成分，對機體免疫功能調(diào)節(jié)存在廣泛影響，有健脾養(yǎng)胃、補肺益腎、止瀉利濕的功效，是養(yǎng)生健身，藥食兼用的佳品。山藥多糖雖有抗腫瘤作用，但其單獨使用效果微弱，無法達到理想效果。
[0005]至今關于抗肝癌和抗肺癌的中藥報道很多，將任意三種具有抗肝癌、肺癌效果的中藥隨意進行配比很難達到預想的療效疊加效果。而本專利涉及的三種藥物配伍后在抗肝癌、肺癌和提高生活質量，改善免疫功能方面的作用提高并非易得。如今，肝癌和肺癌均已
成為我國發(fā)病率前三的癌癥，因此，抗肝癌和肺癌組合物療效的提高，無疑會使更多患者受.、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目 的在于提供一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物。
[0007]本發(fā)明的技術方案概述如下:
[0008]一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，是由質量比1:10~20:1~10的重樓總皂苷提取物、姜黃提取物和山藥提取物組成。
[0009]重樓總皂苷提取物、姜黃提取物和山藥提取物的質量比優(yōu)選為1:15:5。
[0010]重樓總皂苷提取物用下述方法提取:將過4~5目篩的重樓粉用4~10質量倍的體積比60%~80%的乙醇水溶液浸泡I~3小時，加熱回流提取2~3次，每次2~3小時，過濾，合并提取液并濃縮至重樓份質量的1/6~1/3，將濃縮液加入到相當于濃縮液體積50~100倍的體積比為1%~30%乙醇水溶液中，分散均勻，離心，收集上清液，將上清液經(jīng)過大孔吸附樹脂層析柱，干大孔吸附樹脂的量按照與上述濃縮液的質量比為4~10:1計算，上柱流速為I~3BV/h，流出液棄去；然后用體積濃度為30%~40%乙醇水溶液洗脫，流速為I~2BV/h，洗脫2~4小時，棄去洗脫液；再以體積濃度為60%~80%乙醇水溶液洗脫，流速為2~5BV/h，洗脫3~5小時，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥后即可得到重樓總皂苷提取物。
[0011]大孔吸附樹脂的型號優(yōu)選為D101、AB-8、ADS-17、ADS-5、ADS-7、NKA-9 或 X-5。
[0012]姜黃提取物用下述方法提取:將姜黃粉碎成Scm3以下的小塊，用6~10質量倍的蒸餾水浸泡I~2小時，加熱回流提取2~3次，每次2~3小時，過濾，合并提取液，濃縮、干燥得姜黃提取物。
[0013]山藥提取物用下述方法提取:將山藥飲片，用4~8質量倍的蒸餾水浸泡I~2小時，加熱回流提取2~3次，每次2~3小時，過濾，合并提取液，靜置18~24小時，過濾，濾液濃縮至干燥，干燥物粉碎，過100~200目篩，即得山藥提取物。[0014]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0015]經(jīng)體外MTT法活性實驗證明，本發(fā)明的中藥組合物對LA795肺癌細胞株和H印G2肝癌細胞株均具有抑制生長作用，IC5tl分別可達20mg/mL(生藥量)以下。體內(nèi)實驗證明，該中藥組合物對小鼠T739肺癌轉移小鼠，HepA肝癌和H22肝癌均具有顯著抑制生長作用，腫瘤抑制率分別可達到53%、55%和57%。本發(fā)明的中藥組合物抑瘤效果與組成組合物的組份給藥相比具有協(xié)同增效作用，實驗結果根據(jù)Webb氏分數(shù)乘積法計算，Webb氏分數(shù)乘積公式如下:(fa) h2 = l-[l-(fa)J [l_(fa)2]，(fa)。(fa) 2分別為兩藥的抑瘤率，(fa)。為計算的理論相加效應。如果合并用藥的效應大于理論相加效應，則表示協(xié)同。結果顯示組合物組的實測抑瘤值大于理論抑瘤值，證明三味藥物組合具有協(xié)同增效作用。并且在提高小鼠免疫功能器官(脾指數(shù)、胸腺指數(shù))方面與單味藥給藥組相比具有顯著性差異(P < 0.05)。更重要的是，姜黃水提物與山藥水提物單獨抑制LA795肺癌細胞株、HepG2肝癌細胞株生長及抑制小鼠T739肺癌，HepA肝癌和H22肝癌的生長作用非常弱，而其與重樓總皂苷提取物組合后療效提高、毒副作用明顯降低，這一效果并非任意三味具有抗肝癌和肺癌作用的中藥進行組合就能達到的效果。
【具體實施方式】
[0016]下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0017]下面的實施 例是為了使本領域的技術人員能夠更好地理解本發(fā)明，但并不對本發(fā)明作任何限制。
[0018]實施例1
[0019]重樓總皂苷提取物用下述方法提取:
[0020]將過4目篩的重樓粉用8質量倍的體積比60%的乙醇水溶液浸泡1.5小時，加熱回流提取2次，每次2小時，過濾，合并提取液并濃縮至重樓份質量的1/5，將濃縮液加入到相當于濃縮液體積80倍的體積比為15%乙醇水溶液中，分散均勻，離心，收集上清液，將上清液經(jīng)過DlOl型大孔吸附樹脂層析柱，干大孔吸附樹脂的量按照與上述濃縮液的質量比為7:1計算，上柱流速為2BV/h，流出液棄去；然后用體積濃度為35%乙醇水溶液洗脫，流速為1.5BV/h,洗脫3小時，棄去洗脫液；再以體積濃度為70%乙醇水溶液洗脫，流速為4BV/h，洗脫4小時，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥后即可得到重樓總皂苷提取物。
[0021]實施例2
[0022]重樓總皂苷提取物用下述方法提取:
[0023]將過5目篩的重樓粉用4質量倍的體積比70%的乙醇水溶液浸泡I小時，加熱回流提取3次，每次2小時，過濾，合并提取液并濃縮至重樓份質量的1/6，將濃縮液加入到相當于濃縮液體積50倍的體積比為30%乙醇水溶液中，分散均勻，離心，收集上清液，將上清液經(jīng)過ADS-17型大孔吸附樹脂層析柱，干大孔吸附樹脂的量按照與上述濃縮液的質量比為4:1計算，上柱流速為lBV/h，流出液棄去；然后用體積濃度為30%乙醇水溶液洗脫，流速為lBV/h，洗脫2小時，棄去洗脫液；再以體積濃度為60%乙醇水溶液洗脫，流速為2BV/h，洗脫3小時，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥后即可得到重樓總皂苷提取物。
[0024]實施例3
[0025]重樓總皂苷提取物用下述方法提取:[0026]將過5目篩的重樓粉用10質量倍的體積比80%的乙醇水溶液浸泡3小時，加熱回流提取2次，每次3小時，過濾，合并提取液并濃縮至重樓份質量的1/3，將濃縮液加入到相當于濃縮液體積100倍的體積比為1%乙醇水溶液中，分散均勻，離心，收集上清液，將上清液經(jīng)過AB-8型大孔吸附樹脂層析柱，干大孔吸附樹脂的量按照與上述濃縮液的質量比為10:1計算，上柱流速為3BV/h，流出液棄去；然后用體積濃度為40%乙醇水溶液洗脫，流速為2BV/h，洗脫4小時，棄去洗脫液；再以體積濃度為80%乙醇水溶液洗脫，流速為5BV/h，洗脫5小時，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥后即可得到重樓總皂苷提取物。
[0027]實驗證明可用ADS-5、D101、ADS-7、NKA_9或X-5型大孔吸附樹脂替代本實施例的AB-8型大孔吸附樹脂，制備重樓總皂苷提取物。
[0028]實施例4
[0029]姜黃提取物用下述方法提取:將姜黃粉碎成Scm3以下的小塊，用8質量倍的蒸餾水浸泡1.5小時，加熱回流提取3次，每次3小時，過濾，合并提取液，濃縮、干燥得姜黃提取物。
[0030]實施例5
[0031]姜黃提取物用下述方法提取:將姜黃粉碎成Scm3以下的小塊，用6質量倍的蒸餾水浸泡2小時，加 熱回流提取2次，每次3小時，過濾，合并提取液，濃縮、干燥得姜黃提取物。
[0032]實施例6
[0033]姜黃提取物用下述方法提取:將姜黃粉碎成Scm3以下的小塊，用10質量倍的蒸餾水浸泡I小時，加熱回流提取3次，每次2小時，過濾，合并提取液，濃縮、干燥得姜黃提取物。
[0034]實施例7
[0035]山藥提取物用下述方法提取:將山藥飲片，用6質量倍的蒸餾水浸泡1.5小時，加熱回流提取3次，每次3小時，過濾，合并提取液，靜置21小時，過濾，濾液濃縮至干燥，干燥物粉碎，過200目篩，即得山藥提取物。
[0036]實施例8
[0037]山藥提取物用下述方法提取:將山藥飲片，用4質量倍的蒸餾水浸泡2小時，加熱回流提取2次，每次3小時，過濾，合并提取液，靜置18小時，過濾，濾液濃縮至干燥，干燥物粉碎，過200目篩，即得山藥提取物。
[0038]實施例9
[0039]山藥提取物用下述方法提取:將山藥飲片，用8質量倍的蒸餾水浸泡I小時，加熱回流提取3次，每次2小時，過濾，合并提取液，靜置24小時，過濾，濾液濃縮至干燥，干燥物粉碎，過100目篩，即得山藥提取物。
[0040]實施例10
[0041]一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，由質量比1:10:1的重樓總皂苷提取物(實施例1制備)、姜黃提取物(實施例4制備)和山藥提取物(實施例7制備)組成。
[0042]實施例11
[0043]一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，由質量比1:15:5的重樓總皂苷提取物(實施例2制備)、姜黃提取物(實施例5制備)和山藥提取物(實施例8制備)組成。[0044]實施例12
[0045]一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，由質量比1:20:10的重樓總皂苷提取物(實施例3制備)、姜黃提取物(實施例6制備)和山藥提取物(實施例9制備)組成。
[0046]實施例13
[0047]本發(fā)明的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物的藥效試驗:
[0048]一.抗腫瘤活性試驗方法
[0049]1.體外抗腫瘤活性試驗
[0050]1.1細胞株及培養(yǎng)
[0051]BEL-7402肝癌細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100μ g/mL鏈霉素的RPM1-1640培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，4天傳代一次。
[0052]HepG2肝癌細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，4天傳代一次。
[0053]小鼠肺腺癌LA795細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的RPM1-1640培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，4天傳代一次。 [0054]人肺腺癌A549細胞株，培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100 μ g/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37°C，5%C02培養(yǎng)箱及飽和濕度條件下培養(yǎng)，4天傳代一次。
[0055]1.2藥物抗腫瘤活性測定
[0056]MTT法:將對數(shù)生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為3X IO4個/mL的細胞懸液，接種于96孔酶標板，每孔加200 μ L0 24h后換不含血清培養(yǎng)液使細胞同步化生長，每孔200 μ L。第三天向孔中加入受試藥，即分別加入重樓總皂苷提取物(實施例1制備)水溶液，姜黃提取物(實施例4制備)水溶液，山藥提取物(實施例7制備)水溶液和按實施例10、實施例11、實施例12制備的組合物水溶液；另設對照組:0.1% 二甲基亞砜(DMS0)，每孔加200 μ L0受試藥每組分別設0.01,0.1,1,10,100,1000 μ g/mL六個濃度，每個濃度設8個平行孔，于37°C下培養(yǎng)24h后，每孔加無血清無酚紅培養(yǎng)液新鮮配制的0.5mg/mL MTT100 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后，每孔加IOOyL DMSO溶解MTT甲臜顆粒，用微型振蕩器振蕩混勻后，在酶標儀上測定光密度值(0D)，實驗重復三次，取平均值。以溶劑對照處理腫瘤細胞為對照組，由OD值計算抑制率，公式為:細胞生長抑制率=(對照組OD值一實驗組OD值)/對照組OD X 100%，并以藥物濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制細胞生長曲線，并求得IC5tl (半數(shù)抑制率)，IC50 (生藥量)=細胞生長抑制率為50%的藥物濃度。結果見表1。
[0057]表1體外抗腫瘤活性試驗結果
[0058]
【權利要求】
1.一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物,其特征是由質量比1:10~20:1~10的重樓總皂苷提取物、姜黃提取物和山藥提取物組成。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于所述重樓總皂苷提取物、姜黃提取物和山藥提取物的質量比為1: 15:5。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于所述重樓總皂苷提取物用下述方法提取:將過4~5目篩的重樓粉用4~10質量倍的體積比60%~80%的乙醇水溶液浸泡1~3小時，加熱回流提取2~3次，每次2~3小時，過濾，合并提取液并濃縮至重樓份質量的1/6~1/3，將濃縮液加入到相當于濃縮液體積50~100倍的體積比為1%~30%乙醇水溶液中，分散均勻，離心，收集上清液，將上清液經(jīng)過大孔吸附樹脂層析柱，干大孔吸附樹脂的量按照與上述濃縮液的質量比為4~10:1計算，上柱流速為1~3BV/h，流出液棄去；然后用體積濃度為30%~40%乙醇水溶液洗脫，流速為I~2BV/h，洗脫2~4小時，棄去洗脫液；再以體積濃度為60%~80%乙醇水溶液洗脫，流速為2~5BV/h，洗脫3~5小時，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥后即可得到重樓總皂苷提取物。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于所述大孔吸附樹脂的型號為 D101、AB-8、ADS-17、ADS-5、ADS-7、NKA-9 或 X-5。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于所述姜黃提取物用下述方法提取:將姜黃粉碎成Scm3以下的小塊，用6~10質量倍的蒸餾水浸泡I~2小時，加熱回流提取2~3次，每次2~3小時，過濾，合并提取液，濃縮、干燥得姜黃提取物。
6.根據(jù)權利要求1或2所述的一種抗肝癌和肺癌的中藥組合物，其特征在于所述山藥提取物用下述方法提取:將山藥飲片，用4~8質量倍的蒸餾水浸泡I~2小時，加熱回流提取2~3次，每次2~3小時，過濾，合并提取液，靜置18~24小時，過濾，濾液濃縮至干燥，干燥物粉碎，過100~200目篩，即得山藥提取物。
【文檔編號】A61K36/9066GK103933472SQ201410135948
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權日:2014年4月4日
【發(fā)明者】高文遠, 李紅法, 劉振, 滿淑麗, 張瑤 申請人:天津大學