本發(fā)明涉及生物藥品，具體而言，涉及一種水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、帶狀皰疹和水痘都是由水痘-帶狀皰疹病毒(vzv)引起，其中帶狀皰疹多見于50歲以上中老年人群，表現(xiàn)為呈帶狀分布的疼痛性皮疹?；颊叱醮胃腥緑zv病毒時表現(xiàn)為水痘，痊愈后仍然有部分病毒潛伏于感覺神經(jīng)節(jié)內(nèi)，呈休眠狀態(tài)，多年后復(fù)發(fā)表現(xiàn)為帶狀皰疹癥狀。近年來vzv全基因組序列已經(jīng)完成測序，這大大促進(jìn)了vzv的分子生物學(xué)和疫苗學(xué)的研究。vzv為雙鏈dna病毒，全長約125kb，整個vzv基因組約有71個開放讀碼框。在其病毒表面，含有多種糖蛋白，其中糖蛋白e(glycopotein?e,ge)具有較高的保守性，表達(dá)量最高，是vzv主要的表面結(jié)構(gòu)蛋白，在病毒傳播和感染過程中發(fā)揮重要作用，可誘導(dǎo)強烈的體液免疫和細(xì)胞免疫。

2、傳統(tǒng)類型的疫苗包括滅活疫苗、弱毒疫苗和嵌合病毒滅活苗等。1974年日本研究出了vzv減毒株oka株疫苗。由于病毒的不斷變異和可能的新病毒的出現(xiàn)，傳統(tǒng)弱毒疫苗的保護(hù)率在下降，由于vzv的高潛伏能力，使用弱毒株也可能導(dǎo)致散毒發(fā)生。ge作為水痘-帶狀皰疹表面的結(jié)構(gòu)蛋白，同時具有高度保守性。近年來成為了vzv疫苗研發(fā)的重點。近年來出現(xiàn)了利用vzv表面ge作為抗原的亞單位疫苗。葛蘭素史克公司生產(chǎn)的欣安立適(shingrix)是一種重組蛋白疫苗，具有較高的免疫保護(hù)性和安全性，也是目前唯一獲批可用于預(yù)防帶狀皰疹的疫苗。

3、mrna疫苗技術(shù)的發(fā)展為研發(fā)新型安全有效的疫苗提供了一個新的契機。mrna又被稱為信使核糖核酸，是由dna的一條鏈作為模板轉(zhuǎn)錄而來的、攜帶遺傳信息并能指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的一類單鏈核糖核酸。mrna疫苗是將編碼靶點特異性抗原的mrna引入體內(nèi)，利用宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成機制產(chǎn)生抗原，從而觸發(fā)免疫應(yīng)答。近年來，隨著mrna合成、修飾和遞送技術(shù)的發(fā)展，其穩(wěn)定性和翻譯效率大幅提高，免疫原性逐步可控，因此重獲業(yè)界高度關(guān)注，成為藥物研發(fā)的熱門領(lǐng)域。與其他疫苗相比，mrna疫苗具有安全、高效、易生產(chǎn)等優(yōu)點：

4、(1)安全：mrna僅在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，避免整合基因組的風(fēng)險，表達(dá)效率高、免疫原性高、半衰期短，體內(nèi)存在天然代謝降解機制；

5、(2)高效：mrna疫苗可以通過體液和t細(xì)胞雙重免疫，達(dá)到預(yù)防病毒感染的目的，還可對抗病毒變異；

6、(3)易生產(chǎn)：mrna疫苗技術(shù)難度高，但和需要細(xì)胞培養(yǎng)、病毒提取和滅活等一系列生產(chǎn)過程的滅活病毒疫苗相比，生產(chǎn)過程簡單，甚至可以不使用細(xì)胞，直接體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生，因此可以提供大批量供應(yīng)，能對抗突然爆發(fā)的疫情；

7、(4)其他：mrna疫苗具有較高的免疫原性，不需要與其他疫苗佐劑聯(lián)合作用，減少可能由其他物質(zhì)引起的副作用。

8、但是mrna疫苗要發(fā)揮功能首先需要被細(xì)胞攝取，由于mrna屬帶負(fù)電的生物大分子，很難透過同樣帶負(fù)電的細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮療效，因此mrna需借助相應(yīng)的遞送系統(tǒng)，才能進(jìn)入細(xì)胞。

9、環(huán)狀rna同樣擁有mrna疫苗相較于傳統(tǒng)疫苗的優(yōu)勢，還具有比mrna更加穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，可以耐受rna酶的降解，大大降低了保存和運輸?shù)某杀?；由于環(huán)狀rna具有天然的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，使其不需核苷酸修飾即可高翻譯蛋白，避免機體內(nèi)先天免疫的影響。依托微流控制備lnp可實現(xiàn)對環(huán)狀mrna的包裹，并能夠在細(xì)胞水平和動物水平評價lnp遞送mrna的效率。環(huán)狀mrna疫苗有望為vzv疫苗的研發(fā)提供一種新的思路。

10、鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其包括表達(dá)水痘-帶狀皰疹病毒ge蛋白的環(huán)狀mrna，轉(zhuǎn)錄環(huán)狀mrna的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4、第二方面，本發(fā)明提供了上述水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗的制備方法，其包括：將seq?id?no.1所示的核酸分子連接到質(zhì)粒上，獲得重組質(zhì)粒；然后使用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行線性化處理，以線性化的dna為模板轉(zhuǎn)錄制備環(huán)狀mrna；將上述脂質(zhì)納米顆粒溶解于無水乙醇，獲得脂質(zhì)混合溶液；再將環(huán)狀mrna與脂質(zhì)混合溶液，并用緩沖液稀釋，超濾、濃縮后即得水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗。

5、第三方面，本發(fā)明提供了上述水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗在制備預(yù)防或改善水痘和/或帶狀皰疹的藥物中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明具有以下有益效果：

7、本發(fā)明提供的用于預(yù)防帶狀皰疹的環(huán)狀mrna疫苗能夠針對帶狀皰疹提供有效的免疫保護(hù)，并且本發(fā)明提供的環(huán)狀mrna疫苗相比線性mrna無需加帽和加尾，成本更低，流程縮短，可顯著降低成本；因此本發(fā)明的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗具有較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其特征在于，包括表達(dá)水痘-帶狀皰疹病毒ge蛋白的環(huán)狀mrna。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其特征在于，編碼所述水痘-帶狀皰疹病毒ge蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其特征在于，所述水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗中還包括負(fù)載所述環(huán)狀mrna的脂質(zhì)納米粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其特征在于，所述脂質(zhì)納米粒的成分包括：陽離子脂質(zhì)體、二硬脂?；字Ｄ憠A(dspc)、聚乙二醇脂質(zhì)(peg2000-dmg)和膽固醇；

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其特征在于，所述陽離子脂質(zhì)體、二硬脂?；字Ｄ憠A、聚乙二醇脂質(zhì)和膽固醇的摩爾比為50:10:38.5:1.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗，其特征在于，所述水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗的施用方式為肌內(nèi)、皮內(nèi)或皮下給藥。

7.如權(quán)利要求1-6任一項所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗的制備方法，其特征在于，包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述重組質(zhì)粒中包括t7啟動子序列、3’內(nèi)含子區(qū)、5’utr區(qū)、seq?id?no.1所示的核苷酸序列、3’utr區(qū)、5’內(nèi)含子區(qū)，所述5’內(nèi)含子區(qū)末端保留一個xho?i限制性內(nèi)切酶位點。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述環(huán)狀mrna與脂質(zhì)混合溶液的體積比為1:3。

10.如權(quán)利要求1-7任一項所述的水痘-帶狀皰疹病毒環(huán)狀mrna疫苗在制備預(yù)防或改善水痘和/或帶狀皰疹的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種水痘?帶狀皰疹病毒環(huán)狀mRNA疫苗及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的用于預(yù)防帶狀皰疹的環(huán)狀mRNA疫苗能夠針對帶狀皰疹提供有效的免疫保護(hù)；并且本發(fā)明提供的環(huán)狀mRNA疫苗相比線性mRNA無需加帽和加尾，成本更低，流程縮短，可顯著降低成本；因此本發(fā)明的水痘?帶狀皰疹病毒環(huán)狀mRNA疫苗具有較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：安海謙,王凱,車廣勝,況斌,蔣黎剛,楊德強,宋見,田凡
受保護(hù)的技術(shù)使用者：金普諾安生物技術(shù)（上海）有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21