專利名稱：一種治療血管系統(tǒng)疾病的新藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為一種藥物，特別是治療血管系統(tǒng)疾病的藥物。
血管收縮性肽(Endothelin，縮寫為ET)，是1988年由柳澤等人從豬動脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中分離鑒定出的由21個氨基酸組成的肽(柳澤等，nature 332，P411-412)。之后，從對ET編碼的遺傳因子研究中發(fā)現(xiàn)了與ET結(jié)構(gòu)類似的肽，分別命名為ET1、ET2、ET3。組成ET1、ET2、ET3的氨基酸均為L型。(井上等，Proc.Natl Acad.Sci.USA.86.2863-2867)。這些ET類的結(jié)構(gòu)如下 -Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHA1 A2 A3 A4 A5A6ET1SerSerSer leuMet PheET2SerSerSer TrpLeu PheET3ThrPheThr TyrLys Tyr上述的ET類物質(zhì)在生物體內(nèi)具有強(qiáng)烈的血管收縮和升壓作用，推測它們?yōu)檠h(huán)系統(tǒng)調(diào)節(jié)的內(nèi)在因子，可引起高血壓、心、腦血液循環(huán)疾病(如心肌梗塞)、腎病(如急性腎功能不全)，以及與血管收縮有關(guān)的疾病(J.Med.Chem.，35，1493(1992))。此外，由于ET類物質(zhì)對支氣管平滑肌有收縮作用，推測與哮喘也有關(guān)。
迄今為止，雖然有對ET類與受體結(jié)合有抑制作用的各種肽的報導(dǎo)，但非肽類化合物只有蒽醌衍生物(日本專利，特開昭3-47163號)和脫鎂葉綠甲酯酸衍生物(日本專利，特開昭5-331063號)。烏宋酸自1963年從烏索酸氧化得到以后(Bull.calcutta School Trop.Med.，11，20(1963))，雖然進(jìn)行了許多研究，但對ET與受體結(jié)合的抑制作用未見報導(dǎo)。
本發(fā)明的目的是提供一種能抑制ET與受體結(jié)合的活性物質(zhì)。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過在受測物質(zhì)存在下檢測放射性標(biāo)記的ET與動脈株化細(xì)胞膜受體結(jié)合后的殘余量來衡量受測物質(zhì)抑制ET與受體結(jié)合的程度，并作為活性篩選指標(biāo)，測試每一步分離出的各個餾分的活性，以此來指導(dǎo)有效成分的分離和純化。經(jīng)過追蹤分離獲得的烏宋酸，具有顯著地抑制ET與受體結(jié)合的活性，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明提出一種通式如下的烏宋酸類 式中R1和R2可以是H或OH，但其中之一必須是H；或R1和R2一起共同為下列基團(tuán)＝O，＝NOH，＝N-NH2， 式中R3和R4可以是H，或者鹵原子；R3和R4也可結(jié)合形成碳碳雙鍵。
烏宋酸類藥理學(xué)允許的鹽，也屬于本發(fā)明的范圍。
通式(I)所表示的化合物的一種—烏宋酸(I′) 是三帖化合物，從中國藥用植物中用一般的方法可以分離純化得到。根據(jù)已知的方法，也可以從烏索酸氧化得到烏宋酸(khim.Farm.Zh.20 172-178，1986)。式(I)中R1和R2共同為下式＝O，＝NOH，＝N-NH2， 所表示的化合物，可以通過從R1和R2為＝O所表示的化合物與羥胺、肼、乙二醇等反應(yīng)得到。
R3和R4為鹵素取代的化合物，可以從R3和R4結(jié)合形成雙鍵的化合物經(jīng)囟化及氫鹵化反應(yīng)得到。R3和R4為H的化合物可通過氫化方法得到。
本發(fā)明所說的烏宋酸類藥理學(xué)允許的鹽，是指與無機(jī)離子、有機(jī)基團(tuán)、氨基酸等形成的鹽。無機(jī)離子是指堿金屬類，如鋰、鈉、鉀等；以及堿土金屬類，如鎂、鈣等；其它金屬，如鋁、鋅、鐵等也包含在本發(fā)明中。有機(jī)基團(tuán)是指氨類，如氨基、伯胺基、仲胺基、叔銨基；含氮類(脂肪族、芳香族)是指甲胺基、二甲胺基、三甲銨基、乙胺基、二乙胺基、三乙銨基、丙胺基、二丙胺基、異丙胺基、二異丙胺基、丁胺基、二丁胺基、異丁胺基、特丁胺基、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、吡咯、吡啶、賴氨酸、精氨酸、組氨酸。
本發(fā)明是關(guān)于將烏宋酸類及其藥理學(xué)允許的鹽類作為有效成份制成ET受體抑制劑，用于哺乳動物(如人、狗、貓、兔、鼠等)由于ET引起的各種疾病，如高血壓、冠心病、心肌病、動脈硬化、心肌梗塞、大腦動脈收縮、大腦缺血、大動脈收縮引起的云狀皮下出血、哮喘、急性腎功能不全等的治療和預(yù)防，作為血管擴(kuò)張劑使用。
本發(fā)明的ET與受體結(jié)合的抑制劑，經(jīng)口服或不經(jīng)口服均可以。劑型可以是片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑、乳化劑、懸濁劑、注射劑等。這些劑型，分別加適當(dāng)?shù)膿?dān)體、成形劑、其它必要的添加劑，按規(guī)定的方法制成。
式(I)所表示的烏宋酸類每天的給藥量，根據(jù)患者的病情、體重、該衍生物的種類、給藥方法等不同而有所不同。例如對于非口服給藥，即皮下、靜脈、肌肉注射和直腸內(nèi)用藥，大約0.01--20mg/公斤體重·日，最好是0.1--10mg/公斤體重·日。如口服，大約0.1--100mg/公斤體重·日，最好是1-10mg/公斤體重·日。
與對ET與受體結(jié)合有抑制作用的各種肽相比，非肽小分子化合物，即本發(fā)明的烏宋酸類，經(jīng)口服給藥不分解，且從自然界中容易得到，這是本發(fā)明的優(yōu)點所在。
下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
實施例1.烏宋酸的分離采自中國四川省的丁座草(Xylanche himalaica)全草干燥粉碎后，在室溫下用95％乙醇提取，所得提取液在60℃下減壓濃縮。提取物30g用乙酸乙酯溶解，溶解物(7.93g)用1000g硅膠柱層析分離，洗脫劑為正己烷/異丙醇/96∶4，得活性部分3.44克，Rf＝0.42(正己烷∶異丙醇＝10∶1)。
活性部分繼續(xù)用180g硅膠柱層析，洗脫液從正己烷∶異丙醇/97∶3開始到90∶10進(jìn)行梯度洗脫分離，得活性部分3.19g，Rf＝0.38(正己烷∶異丙醇/90∶10)。
這部分繼續(xù)用150g硅膠分離，用正己烷∶乙酸乙酯/80∶20--0∶100梯度洗脫，得活性部分257mg，Rf＝0.49(正己烷∶乙酸乙酯＝75∶25)。
繼續(xù)用25g硅膠分離，用CH2Cl2MeOH/99∶1洗脫，得活性部分101mg，Rf＝0.69，(CH2Cl2MeoH＝95∶5)。
最后用HPLC(島津LC-6A型，分離柱Merck Hibar RT250-25 Lichrosorb Si60，7μm，檢測波長254nm，流速9.9ml/min，爐溫20℃，洗脫液為正己烷∶異丙醇/95∶5)分離，得烏宋酸單體16.7mg，Rf＝0.69(CH2Cl2MeOH/95∶5)。
實施例2.活性試驗(1)ET受體標(biāo)準(zhǔn)品從老鼠胎兒胸部大動脈得到的株化細(xì)胞A10(Bmax20.3PM，ATCCCRL 1476)作為測定用的受體細(xì)胞膜標(biāo)準(zhǔn)品。根據(jù)測定規(guī)程，A10細(xì)胞懸濁液5ml加入38ml稀釋液(CaCl2，BSA，含有Bacitracin50mMDoris緩沖液，PH7.4)，作為受體的稀釋標(biāo)準(zhǔn)液。
(2)125I-ET結(jié)合試驗取放射性標(biāo)記的125I-ET ET1(81.4TBq/mmol)8.5KBq，加入受體稀釋標(biāo)準(zhǔn)液175μl和樣品25μl。加入1×10-6M的ET1，測定非特異的結(jié)合量。反應(yīng)在250μl Doris緩中液中于室溫下進(jìn)行2小時。反應(yīng)后，用纖維濾紙在玻璃漏斗上急速過濾，用50mM Doris緩沖液(pH7.4)洗三次，漏斗上留下的放射性物質(zhì)用γ-射線測定儀測定。測定結(jié)果，烏宋酸對ET1與受體結(jié)合的50％抑制濃度(IC50)約為5μg/ml。
權(quán)利要求
1.一種治療血管系統(tǒng)疾病的藥物，其特征是有效成分是烏宋酸類，結(jié)構(gòu)式為 式中R1和R2可以是H或OH，但其中之一必須是H；R1和R2也可以一起共同為下列基團(tuán)＝O，＝NOH，＝N-NH2， R3和R4可以是H，或者囟原子；R3和R4也可以結(jié)合形成碳碳雙鍵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與堿金屬，如鋰、鈉、鉀等形成的鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與堿土金屬，如鎂、鈣等形成的鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與氨類有機(jī)基團(tuán)，如氨基、伯胺基、仲胺基、叔銨基形成的鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與鋁、鋅、鐵等形成的鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與甲胺基、二甲胺基、三甲銨基、乙胺基、二乙胺基、三乙銨基、丙胺基、二丙胺基、異丙胺基、二異丙胺基、丁胺基、二丁胺基、異丁胺基、特丁胺基、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇銨、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、吡咯、吡啶、賴氨酸、精氨酸、組氨酸等形成的鹽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種結(jié)構(gòu)通式為所表示的烏宋酸類及其藥理學(xué)允許的鹽的藥物(式中R
文檔編號A61P9/10GK1114564SQ9511123
公開日1996年1月10日 申請日期1995年1月27日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月24日
發(fā)明者丁立生, 德田昌彥, 川邊紀(jì)雄, 戶上泰彥 申請人:中國科學(xué)院成都生物研究所, 東麗株式會社