專利名稱：恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物及其評價方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物及其評價方法，尤其關(guān)于其有效成分的改進(jìn)。
近年來，由于芳香治療(aromatherapy)易于使用以及相對較少的副作用，其作為一種治療方法已經(jīng)引起了人們的興趣。具體地說，已經(jīng)注意到它作為一種有效的方法，用于治療未查明的臨床綜合癥、自主神經(jīng)機(jī)能失調(diào)和其它由于緊張引起的身心失調(diào)病癥。已知有許多香料可作為減輕各種綜合癥的芳香治療試劑。其中有一些香料被認(rèn)為能夠有效地增進(jìn)皮膚功能。
然而，在很大程度上，由于評價試驗(yàn)的原因，它們的作用是不清楚的。已知只有很少的香料具有明顯的特定藥理學(xué)作用。特別地，它們還沒有作為用于恢復(fù)或促進(jìn)皮膚屏障功能非常有效的試劑或藥物。
而且，關(guān)于香料生理學(xué)作用的研究在較經(jīng)常進(jìn)行的同時，對于通過吸入香料的氣味增進(jìn)皮膚功能的研究卻幾乎沒有進(jìn)行，同時也沒有評價其有效性的客觀方法。因此，很難發(fā)現(xiàn)香料可作為用于恢復(fù)或促進(jìn)皮膚屏障功能的有效試劑。
本發(fā)明的目的是解決上面提到的現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的含香料組合物和一種評價其有效性的簡單方法。
本發(fā)明提供了一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量比的至少一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，該試劑選自醋酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯；和(ii)一種可用于化妝品或藥物的載體。
本發(fā)明還提供了一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量比的至少一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，選自纈草香料、紫羅蘭香料和薔薇香料；和(ii)一種可用于化妝品或藥物的載體。
本發(fā)明還提供一種用來評價測試香料恢復(fù)皮膚屏障功能效果的方法，包括在沒有香料的系統(tǒng)中，在試驗(yàn)動物上施加預(yù)定量的緊張，以降低動物皮膚的屏障功能，測定皮膚屏障功能降低后的恢復(fù)程度，得到的數(shù)據(jù)作為評價的指標(biāo)，在應(yīng)用香料的系統(tǒng)中，測定皮膚屏障功能恢復(fù)程度的數(shù)據(jù)，根據(jù)這兩個系統(tǒng)中皮膚屏障功能恢復(fù)程度數(shù)據(jù)的差別評價其效果。
從下面對附圖的描述中可以更好的理解本發(fā)明，其中

圖1表示施加由陌生環(huán)境引起的緊張對皮膚屏障功能恢復(fù)的作用。
圖2表示香料(單個化合物)對降低的皮膚屏障功能的恢復(fù)結(jié)果和對恢復(fù)能力的促進(jìn)結(jié)果。
圖3表示香料(組合物)對降低的皮膚屏障功能的恢復(fù)結(jié)果和對恢復(fù)能力的促進(jìn)結(jié)果。
圖4表示人工芳香紫羅蘭香料的氣相色譜圖。
圖5表示當(dāng)不施加緊張時，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑的效果。
圖6表示不施加緊張時，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑對緊張程度的作用。
圖7表示當(dāng)施加緊張時，本發(fā)明的皮膚功能恢復(fù)和促進(jìn)試劑的效果。
圖8表示當(dāng)施加緊張時，本發(fā)明的皮膚功能恢復(fù)和促進(jìn)試劑對緊張程度的作用。
為了達(dá)到上面目的，本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了認(rèn)真的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)對試驗(yàn)動物施加一定的緊張時，導(dǎo)致皮膚屏障功能的降低，不吸入香料的對照組動物和吸入香料的實(shí)驗(yàn)組動物相比，皮膚屏障功能恢復(fù)的能力有顯著性差異。同時發(fā)現(xiàn)作為恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，有一些特別的香料是非常好的。在此所用的術(shù)語“動物”是指除人之外的動物，典型地包括例如，小鼠、大鼠、荷蘭豬等。
也就是說，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物重量至少0.01％重量比、優(yōu)選0.5-100％重量比的醋酸萜品酯。
或者，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優(yōu)選0.5-100％重量比的苯乙醇。
或者，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優(yōu)選0.5-100％重量比的二甲氧基甲基苯。
或者，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優(yōu)選0.5-100％重量比的纈草香料。
或者，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優(yōu)選0.5-100％重量比的芳香紫羅蘭香料。
或者，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優(yōu)選2.5-100％重量比的薔薇香料。
而且，根據(jù)本發(fā)明，用于評價香料恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能效果的方法所含的步驟有在沒有測試香料的系統(tǒng)中，對試驗(yàn)動物施加預(yù)定量的緊張，然后引起皮膚屏障功能的降低，再應(yīng)用該皮膚屏障功能恢復(fù)程度的數(shù)據(jù)作為指標(biāo)，然后評價其與應(yīng)用測試香料的系統(tǒng)中皮膚屏障功能恢復(fù)程度的數(shù)據(jù)的差別。
并且，根據(jù)本發(fā)明，用于評價香料恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能效果的方法優(yōu)選地包括步驟(A)對小鼠、大鼠或荷蘭豬施加緊張，施加緊張的大小應(yīng)該能是皮膚屏障功能恢復(fù)的延遲程度能顯著識別，因此對于受到緊張的動物，引起定量的皮膚屏障功能的降低；步驟(B)在皮膚屏障功能降低的部位，以固定的時間測定透過表皮的水損失(TEWL)；步驟(C)比較不用測試香料的動物(對照)和應(yīng)用測試香料的動物在步驟(B)中得到的數(shù)據(jù)，評價其差別作為測試香料恢復(fù)皮膚屏障功能的效果。
另外，根據(jù)本發(fā)明，在香料恢復(fù)皮膚屏障功能效果的評價方法中，優(yōu)選的方法是通過吸入法應(yīng)用測試香料。
另外，根據(jù)本發(fā)明，恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑含有經(jīng)上述方法評價認(rèn)為有效的香料作為活性成分。
本發(fā)明的實(shí)施方案現(xiàn)在將進(jìn)行詳細(xì)說明。本發(fā)明提供一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑及其評價方法。因此，說明將分為恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑和它的評價方法兩部分。
恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑含有一種對皮膚屏障功能恢復(fù)和促進(jìn)有效的特別香料，因此通過吸入能刺激味覺感受器的有效量或通過呼吸道吸入體內(nèi)時，該試劑可以減輕由于皮膚屏障功能引起的不良皮膚狀況。作為特定香料，醋酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯的單個化合物可作為例子。它們可以單獨(dú)應(yīng)用或者一起應(yīng)用，還可以與其它香料聯(lián)合應(yīng)用作為多成分香料組合物。
另外，作為多成分香料組合物，纈草、芳香紫羅蘭和薔薇香料可作為例子。在本發(fā)明中，以天然組合物的形式或者基于分析結(jié)果模擬的人工組合物形式，這些物質(zhì)具有恢復(fù)或促進(jìn)皮膚屏障功能的作用。
對于本發(fā)明的纈草香料，有可能應(yīng)用通過已知方法如水蒸氣蒸餾或溶劑提取從植物根或莖中得到的精油，其中的植物為纈草或與它密切相關(guān)的植物寬葉纈草(Valeriana officinalis L.Var latifolia Miq.)(V.Japonilca Makino)，蜘蛛七(valeriana fauriei foram yezoensis)和蜘蛛香(Valeriana wallichii D.C.)等。而且，從纈草和與它密切相關(guān)的植物中提取的精油可從市場上買到，供應(yīng)形式為纈草油和kesso root oil(日本纈草油)。這些物質(zhì)均可以應(yīng)用無論它們是產(chǎn)自日本、中國、歐洲或其它地方。
另外，日本未審查專利出版物(公開)號1-254628公開了從天然組合物中真空蒸餾得到的纈草油組份，該組份也可用作本發(fā)明的纈草香料另外，通過除去帶來不良?xì)馕兜闹舅岷推渌嵝越M份得到改性的纈草油(下面將要說明)，它們也可用作本發(fā)明的纈草香料。
可以通過堿處理從纈草油中除去酸性組份包括脂肪酸得到改性的纈草油。通常地，天然纈草油含有至少一種類型往往為多種類型的脂肪酸。具體地說，它包括乙酸和異戊酸。
改性纈草油的生產(chǎn)方法首先是把含有脂肪酸的纈草油溶于有機(jī)溶劑優(yōu)選乙醚中，然后加入堿的水溶液，再進(jìn)行提取操作以提取和回收含有脂肪酸的酸性成分。對于堿的水溶液，有可能應(yīng)用平常提取操作中通常所用的堿水溶液，可以是有機(jī)堿或無機(jī)堿的水溶液，但優(yōu)選碳酸氫鈉水溶液或氫氧化鈉水溶液。具體地說，優(yōu)選用碳酸氫鈉水溶液進(jìn)行提取，然后用氫氧化鈉水溶液進(jìn)行再提取。這樣得到的有機(jī)溶劑層用無水硫酸鎂等物質(zhì)干燥，然后真空蒸餾除去有機(jī)溶劑得到不含脂肪酸的改性纈草油。
根據(jù)本發(fā)明，改性纈草油對皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)作用并不因堿處理而受到損害，而且其作用比堿處理前的纈草油還強(qiáng)。因此，根據(jù)本方法，有可能更進(jìn)一步地增強(qiáng)纈草油對皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)作用。另外，根據(jù)該生產(chǎn)方法，可能容易地并且廉價地生產(chǎn)這樣一種改性纈草油，還可能提供一種非常有用能恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑。
另外，對于本發(fā)明中的芳香紫羅蘭香料，可能應(yīng)用通過已知方法例如水蒸氣蒸餾或溶劑提取得到的精油，原料來源為香堇菜(Viola odorata L.)的花或葉或者該植物花或葉的頂端收集物。并且，可以應(yīng)用芳香紫羅蘭，不管其產(chǎn)自法國、日本或其它地方。另外，本發(fā)明中，可能應(yīng)用人工模擬的芳香紫羅蘭香料，該香料基于的成分是對天然來源的芳香紫羅蘭精油或其新鮮花或葉頂端收集物進(jìn)行分析得到的成分。
另外，對于本發(fā)明的薔薇香料，可能應(yīng)用已知的精油，也就是說，本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)的商品級。另外，可能應(yīng)用通過蒸餾、提取或其它方法從天然薔薇科植物得到的精油。另外，有可能應(yīng)用人工模擬的薔薇香料，該組合物基于的成分是對天然薔薇植物花中得到的精油進(jìn)行分析得到的成分。
包括上面特別香料的恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑可以通過加入載體、稀釋劑或其它常用于香料產(chǎn)品的活性成分制成一種產(chǎn)品。它可以制成香料產(chǎn)品例如香水、科隆香水、房間清新劑和化妝品如水劑、膏霜、肥皂、牙膏、氣霧劑產(chǎn)品或任意一種其它通用形式和其它通常藥物如香料。另外，它還可用于吸入劑。在恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑中，特別香料的含量應(yīng)該是通過吸入能對恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能起足夠作用的量。該含量可以變化，依據(jù)應(yīng)用形式和藥物(香料)而定。通常地，必須含有至少0.01％重量比。如果低于該含量，有時則達(dá)不到對皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)作用。
根據(jù)本發(fā)明，基于同樣的理由，含有這樣香料的組合物適合治療皮膚屏障功能的降低和治療皮膚病等。另外，應(yīng)用本發(fā)明中促進(jìn)和恢復(fù)皮膚屏障功能的試劑不存在副作用問題。
根據(jù)本發(fā)明，該恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物可以含有任意能用于化妝品或藥物的載體(例如，醇類如苯甲醇、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF))和任選的常規(guī)添加劑如濕潤劑、表面活性劑、紫外吸光劑、抗氧化劑、防腐劑、抗真菌劑、著色顏料和體質(zhì)顏料等。
通過下列方法可以評價本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑的效果。
評價方法本發(fā)明中能應(yīng)用的試驗(yàn)動物是那些除人之外在各種試驗(yàn)中通常所用的試驗(yàn)動物。符合本發(fā)明目的的所有動物均可應(yīng)用，但通常應(yīng)用的動物有大鼠、荷蘭豬和兔等。
施加至這些動物的緊張是指本領(lǐng)域有效方式的緊張，包括約束引起的緊張、擁擠引起的緊張和新環(huán)境引起的緊張。施加約束緊張的方法可基于例如Pare，W.P.，Glavin，G.B.，(1986)，Neurosci.Biobehav-Rev.10，p339-370記載的方法?？偨Y(jié)該用于大鼠的方法，可以通過把各個動物完全包裹在柔線網(wǎng)中和使它們在定量的一段時間維持固定不動來施加緊張，同時注意不能對皮膚造成損害。
另一方面，對于擁擠引起的緊張，如果所用動物為小鼠，一個籠(17×28cm2)中通常飼養(yǎng)5只小鼠?？梢酝ㄟ^增加同一個籠中飼養(yǎng)動物的數(shù)目使動物緊張，具體地說，每個籠中飼養(yǎng)10只動物。
另外，對于新環(huán)境引起的緊張，可以通過把動物從其平常的環(huán)境轉(zhuǎn)移至陌生的環(huán)境使動物緊張，例如對小鼠來說，把一個籠(17×28cm2)中與其它四只小鼠一起飼養(yǎng)的小鼠轉(zhuǎn)移到每籠一只小鼠的環(huán)境中。
施加緊張的持續(xù)時間應(yīng)該足以導(dǎo)致動物的緊張狀態(tài)。然而，如果施加的緊張不足，應(yīng)該注意在有些時候是不能與對照組動物的皮膚屏障的恢復(fù)功能明顯區(qū)別開。
以這種方式承受緊張的動物是在達(dá)到緊張狀態(tài)(即能看出緊張作用的狀態(tài))后皮膚屏障功能降低的手段。這種手段可以是任何能有效降低皮膚屏障功能的方法。這些手段的形式并不重要。為了引起這種皮膚屏障功能的降低，方便的做法是通過膠帶條除去表皮的角膜層或者用表面活性劑(例如十二烷基硫酸鈉(SDS))或有機(jī)溶劑如丙酮除去角膜層。至于處理時間，如果所用動物為大鼠，當(dāng)應(yīng)用緊張結(jié)束后約12小時的時間是優(yōu)選的，這樣能確保試驗(yàn)動物達(dá)到足夠的緊張狀態(tài)。
由上面引起皮膚屏障功能降低所在部位的皮膚屏障功能恢復(fù)程度經(jīng)持續(xù)檢測或經(jīng)確定量的時間間隔后檢測。降低的部位可以是試驗(yàn)動物的任何部位，只要能夠進(jìn)行皮膚屏障功能程度的檢測即可，但通常優(yōu)選耳廓即耳朵突出的外部。
檢測方法可以是測定經(jīng)表皮的水分損失，或經(jīng)表皮的不顯汗(此后稱“TEWL”)——通常認(rèn)為是皮膚屏障功能的一個指標(biāo)，但還可以應(yīng)用能作為指標(biāo)的其它因素?？梢酝ㄟ^市場上可買到的設(shè)備以通常的應(yīng)用來檢測TEWL?？梢蕴岬降牡湫驮O(shè)備有蒸發(fā)計(jì)(Evaporimeter)、Tevameter和Micomoisture檢測器等。
根據(jù)本發(fā)明，在沒有受到緊張的試驗(yàn)動物中重復(fù)上述操作，這樣類似地得到的TEWL值和上面受到緊張的試驗(yàn)動物中得到的TEWL值進(jìn)行比較。注意，例如當(dāng)用大鼠作試驗(yàn)動物時，受到緊張的試驗(yàn)動物和沒有受到緊張的試驗(yàn)動物相比，在皮膚屏障功能降低以前，TEWL和表皮溫度沒有觀測到顯著差異。另外，試驗(yàn)動物的TEWL值不能觀測到性別差異。
也就是說，試驗(yàn)動物的TEWL值與緊張沒有相關(guān)。特別地，根據(jù)本發(fā)明，受到緊張的試驗(yàn)動物與對照組動物相比，TEWL值的恢復(fù)程度明顯延遲。因此，根據(jù)本發(fā)明，基于恢復(fù)程度延遲的現(xiàn)象，有可能評價皮膚屏障功能的恢復(fù)能力。
另外，根據(jù)本發(fā)明，有可能應(yīng)用香料并結(jié)合上述評價方法，通過評價香料對皮膚屏障功能的恢復(fù)程度可以評價香料是如何有助于增強(qiáng)和恢復(fù)皮膚屏障功能。把試驗(yàn)香料用于小鼠的方法可以吸入足夠的量從而能夠在足夠時間內(nèi)起作用，但特別地，如對于由陌生環(huán)境引起的緊張來說，香料滴加到佩特里盤上的濾紙上，然后用線網(wǎng)覆蓋該佩特里盤，將其置于鼠籠中。在轉(zhuǎn)移至陌生環(huán)境前或轉(zhuǎn)移后，使該鼠吸入香料24小時。注意，如果必要，優(yōu)選加入更多的香料。根據(jù)本評價方法，有可能評價某種特定的香料是否對緊張引起的皮膚屏障功能有恢復(fù)作用或者是否能增強(qiáng)皮膚屏障功能，還可能評價可有用地改善皮膚狀況的香料。
實(shí)施例通過下列實(shí)施例將進(jìn)一步闡明本發(fā)明，但本發(fā)明決不限于下列實(shí)施例。下面先說明本發(fā)明恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑的評價方法。
實(shí)施例1施加由新環(huán)境引起的緊張5只裸鼠在一只籠(17×28cm2)中飼養(yǎng)10天。在第9天早晨，把浸滲有香料的濾紙置于該籠中，并用不銹鋼網(wǎng)覆蓋。次日早晨，每只小鼠被分開轉(zhuǎn)移至同樣大小的新籠子中。以同樣方式在新籠子中預(yù)先放入相同的香料。
實(shí)施例2皮膚屏障的降低和恢復(fù)速率轉(zhuǎn)移至新籠子一天后，應(yīng)用蒸發(fā)計(jì)EP-1(ServoMed Co.)測定麻醉后小鼠側(cè)腹(或耳廓)的TEWL值(即此時測定的值定義為“A”)。然后，通過膠條剝脫降低皮膚屏障功能。即把粘性膠帶條粘附于動物的側(cè)腹(或耳廓)(當(dāng)粘附于耳朵時面積為1×1cm2，粘至側(cè)腹(或軀干)時面積為2×3cm2)。在不損害表皮的情況下小心地剝脫膠帶條(即膠帶剝脫)引起皮膚屏障功能的降低。此時再次測量TEWL值(此時測出的值定義為“B”)。3天后，測量TEWL值，將該值定義為“C”。然后，用下式計(jì)算屏障恢復(fù)的速率屏障恢復(fù)速率(％)＝[(B-C)/(B-A)]×100A剛剛在皮膚屏障功能降低的處理(膠帶剝脫)以前的TEWL值B剛剛在皮膚屏障功能降低的處理(膠帶剝脫)后的TEWL值C皮膚屏障功能降低的處理(膠帶剝脫)一段時間后的TEWL值然后，根據(jù)上面實(shí)施例1和2的方法，檢測陌生環(huán)境引起的緊張對皮膚屏障功能恢復(fù)程度的作用。對每籠繼續(xù)飼養(yǎng)1只的動物(即對照組動物)、每籠繼續(xù)飼養(yǎng)5只的動物(對照組)和從每籠飼養(yǎng)5只轉(zhuǎn)移到每籠飼養(yǎng)1只(受到緊張組)的動物進(jìn)行處理以降低它們的皮膚屏障功能。圖1表示處理3小時后的轉(zhuǎn)換的屏障恢復(fù)速率。注意，該試驗(yàn)是在沒有香料的系統(tǒng)中進(jìn)行的。
從圖1可以看出，受到緊張動物組的皮膚屏障功能恢復(fù)程度明顯比對照組動物的恢復(fù)程度明顯慢。
實(shí)施例3香料對皮膚屏障功能恢復(fù)程度的作用在有測試香料的存在下，把實(shí)施例1中的緊張施加至裸鼠后，通過實(shí)施例2中皮膚屏障恢復(fù)速率來評價香料對皮膚屏障功能恢復(fù)和促進(jìn)所起的作用。
然后，按照上面所述方法測定膠帶剝脫3小時后屏障恢復(fù)的速率以檢查其效果。
注意，在對照組試驗(yàn)中，應(yīng)用不含香料的系統(tǒng)，沒有受到緊張繼續(xù)每籠飼養(yǎng)5只的正常小鼠和雖然受到緊張但沒有吸入香料的未處理小鼠以相同的方式測定屏障恢復(fù)速率。
然后，下面再說明經(jīng)上述評價方法確定有效的的香料作為活性成分的恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑。
單一化合物(單一化學(xué)成分)通過實(shí)施例3的評價方法得到的單一化合物的皮膚屏障恢復(fù)速率如圖2所示。其結(jié)果如表1所示。注意，在對照試驗(yàn)中，對茉莉香料的主要成分葉綠醇進(jìn)行相同的步驟。通過在佩特里盤中的濾紙上包覆200μl的各單一化合物使小鼠吸入的香料量基本一致。
表1香料(單一化合物) 皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)作用乙酸萜品酯 有苯乙醇 有二甲氧基甲基苯 有葉綠醇 無圖2明顯表明，與未處理的小鼠相比，用乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯進(jìn)行處理對皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)有作用。另外，用茉莉香料主要成分即葉綠醇進(jìn)行處理對皮膚屏障功能的恢復(fù)沒有作用。
因此，現(xiàn)在認(rèn)識到，乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯作為恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑是有效的。
香料組合物(多種香料化合物)然后，圖3表示通過實(shí)施例3的評價方法得到基于多成分的組合物的皮膚屏障恢復(fù)速率。結(jié)果如表2所示。注意，通過在佩特里盤中的濾紙上包覆200μl的各個單種物質(zhì)使小鼠吸入的香料組合物基本一致。在對照試驗(yàn)中，應(yīng)用以葉綠醇作為主要成分(14-15％)的茉莉，進(jìn)行相同的操作。
表2香料(組合物) 皮膚屏障恢復(fù)和促進(jìn)作用天然纈草 有改性纈草 有天然芳香紫羅蘭 有人工芳香紫羅蘭 有天然薔薇 有人工薔薇 有天然茉莉 無上表中，對于纈草香料，應(yīng)用天然精油和上面說明的改性纈草另外，所用的天然芳香紫羅蘭香料是來源于天然芳香紫羅蘭花中的精油。所用的人工芳香紫羅蘭香料是在對天然芳香紫羅蘭精油進(jìn)行氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)分析的基礎(chǔ)上，模擬天然芳香紫羅蘭精油，組合其所含有的單種化合物得到的組合物。圖4是該模擬香料組合物的氣相色譜圖。表3顯示得到的組合物結(jié)果。注意，GC-MS的測定條件如下GC-MS分析條件型號G1800A GCD(Hewlett-Packard有限公司制造)柱HP-INNOWAX(60m×0.25mm)(Hewlett-Packard有限公司制造)柱溫70→245℃(4℃/分鐘的升溫速率)載氣氦(1.0毫升/分鐘)表3化合物名稱 GC含量(％)檸檬烯 0.16反-2-己烯醛 0.18乙酸1-己烷基酯 0.23乙酸順-3-己烯基酯 3.09乙酸反-2-己烯基酯 0.111-己醇 0.28對異丙基苯甲烷 0.16順-3-己烯醇 0.781-辛烯-3-醇 4.362-乙基己醇0.34里那醇 0.21順，反-2，6-nonadyl 0.211，4-二甲氧基苯23.01橙花基丙酮0.12二氫-β-紫羅蘭酮 0.87α-紫羅蘭酮 13.292-苯乙醇 0.67β-紫羅蘭酮 22.23順-茉莉酮 3.73茉莉酮酸甲酯2.09苯甲酸芐酯4.56總量 80.70
另外，所用的天然薔薇香料是天然的、一般可從市場上買到的薔薇精油。所用的人工薔薇香料是含有二甲氧基甲基苯和苯乙醇的香料組合物，其中的二甲基甲苯和苯乙醇被認(rèn)為對皮膚屏障功能有恢復(fù)和促進(jìn)作用。人工薔薇香料包括下列組合物。注意，其中的含量是指重量份數(shù)。
表4人工薔薇香料 重量份數(shù)二甲氧基甲苯 5苯乙醇200順-3-己烯醇 1乙酸順-3-己烯基酯 2苯甲醇 15香茅醇100橙花醇 25香葉醇600醋酸香葉酯 20醋酸香茅酯 4檸檬醛 3丁子香酚5法呢醇 40總量1020從圖3中明顯看出，與沒有吸入香料的未處理小鼠相比，纈草、芳香紫羅蘭和薔薇的香料組合物對皮膚屏障功能的恢復(fù)速率較高。另外，對于芳香紫羅蘭和薔薇香料的結(jié)果，不管對皮膚屏障功能恢復(fù)起作用的香料組合物是天然的或人工的，均對皮膚屏障功能有恢復(fù)作用。另外，對于纈草，改性纈草的皮膚屏障功能恢復(fù)速率可以達(dá)到與正常小鼠同樣高，并發(fā)現(xiàn)其為非常好的香料。注意，茉莉雖然在芳香治療中對皮膚疾病的治療有效，但沒有顯示皮膚屏障功能的恢復(fù)作用。
因此，已經(jīng)知道，纈草、芳香紫羅蘭和薔薇的香料組合物作為皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)試劑是非常好的。另外，已經(jīng)知道，不管香料是天然的還是人工的，正如芳香紫羅蘭和薔薇香料所示，都是有效的。另一方面，對于茉莉，已經(jīng)知道，雖然其在芳香治療中顯示對皮膚病的治療有效，但并沒有顯示對皮膚屏障功能的恢復(fù)有作用。
其后，本發(fā)明的發(fā)明人還研究了這些恢復(fù)和促進(jìn)度膚屏障功能的試劑對人的作用。分三種情況進(jìn)行了該研究不加入其它香料的正常狀態(tài)下、加入另外一種香料的正常狀態(tài)下和加入另外一種香料并且在皮膚屏障恢復(fù)速率降低的情況下。
沒有加入其它香料的正常狀態(tài)(不施加緊張)的情況測試對象為6例男性(非吸煙者)。測定時，將測試對象分成“香料組”和“無香料組”，每組3人。當(dāng)?shù)谝淮螠y定所有樣品后，將“香料組”和“無香料組”測試對象進(jìn)行交換，再進(jìn)行同樣的測定。香料的應(yīng)用方法是把含有80μl下列樣品1的溶液的棉條粘在鼻下方。對于“無皮膚屏障功能恢復(fù)和促進(jìn)試劑”的情況，僅僅粘上棉條即可。
樣品1二甲氧基甲基苯(DMMB)2.0重量份乙醇(二甲氧基馬錢子堿改性的95％乙醇)98.0重量份總量100.0測定步驟“香料”組的測定步驟從香料的應(yīng)用開始，在22℃溫度和50％濕度的環(huán)境下1小時后，通過膠帶剝脫破壞皮膚屏障，根據(jù)實(shí)施例2在1.5小時后和3小時后測定皮膚屏障恢復(fù)速率。持續(xù)應(yīng)用香料并保持上述環(huán)境直至最后。
“無香料組”的測定步驟是按照測定“香料組”的測定步驟在不應(yīng)用香料的情況下測定皮膚屏障恢復(fù)速率。
結(jié)果如下表所示。
表5組名 0小時后1.5小時后 3小時后平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝6)無香料組 0％ 50.8％ 8.00％ 61.3％ 11.09％香料組 0％ 63.1％ 8.63％ 74.5％ 8.78％
從上表結(jié)果可以看出，皮膚屏障破壞1.5小時和3小時后，DMMB香料組的皮膚屏障恢復(fù)速率均較高。因此，很明顯DMMB對皮膚屏障功能有恢復(fù)和促進(jìn)作用。
加入其它香料的正常狀況(不施加緊張)測試對象為10例健康女性，年齡20-22歲(非吸煙者，月經(jīng)周期正常)，測試時，把她們分成“香料組”和“非香料組”兩組，每組5人。在第一次測定整個樣品后，“香料組”和“非香料組”測試對象相互交換，然后進(jìn)行相同的測定。香料的使用方法是把含有80μl下列樣品2的溶液的棉條粘在鼻下方。對于不用香料的情況，僅僅粘上棉條即可。
樣品2香茅醇 5.0重量份里那醇 4.0乙酸里那酯 4.0二甲氧苯甲苯2.0乙酸香葉酯 1.0茉莉酮酸二羥基甲基酯35.0花香劑香料 49.0總計(jì)100.0測定步驟“香料”組的測定步驟從香料的應(yīng)用開始，在22℃溫度和50％濕度的環(huán)境下1小時后，通過膠帶剝脫破壞皮膚屏障，根據(jù)實(shí)施例2在1.5小時后和3小時后測定皮膚屏障恢復(fù)速率。持續(xù)應(yīng)用香料并保持上述環(huán)境直至最后。
“無香料組”的測定步驟是按照測定“香料組”的測定步驟在不應(yīng)用香料的情況下測定皮膚屏障恢復(fù)速率。
結(jié)果如表6和圖5所示。
表6組名 0小時后1.5小時后 3小時后平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝10)無香料組0％ 58.1％ 14.6％ 67.4％ 14.7％香料組 0％ 63.1％ 10.9％ 78.3％ 11.2％從表6和圖5可以看出，與“非香料組”相比，提供含有DMMB的香料組合物的“香料組”顯示增加的皮膚屏障功能恢復(fù)速率。
然后，通過自我感覺的緊張程度(一般活動對照表(General activitycheck list))研究含有DMMB的香料組合物對緊張程度的作用。
結(jié)果如圖6所示。從圖6可以看出，與“非香料組”相比，按照分?jǐn)?shù)，“香料組”的緊張一點(diǎn)也不減少。因此，恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑對自我感覺的緊張沒有影響。
皮膚屏障功能降低的情況(施加緊張)測試對象為8例20-22歲的健康女性(非吸煙者，月經(jīng)周期正常)。測試時分成(A)對照組、(B)緊張組和(C)香料+緊張組，如表7所示。當(dāng)整個樣品測定一次后，各組測試對象相互交換，最后測試對象進(jìn)行所有(A)、(B)和(C)的測定。
表7組名 緊張 香料(A)對照組 無無(B)緊張組 有無(C)香料+緊張組 有有(樣品22％的DMMB)與上面“加入其它香料的正常狀況”相同的方式應(yīng)用香料。注意所有測試在22℃溫度和50％濕度下進(jìn)行。
測定步驟(A)組的測定步驟是基于上述“加入其它香料的正常狀況”的“無香料組”。
(B)組的測定步驟是基于上述“加入其它香料的正常狀況”的“無香料組”，但從膠帶剝脫引起皮膚屏障破壞1.5小時后的皮膚屏障功能恢復(fù)速率的測定之前1小時開始，進(jìn)行1小時Stroop試驗(yàn)以施加緊張，然后測定皮膚屏障的恢復(fù)速率。
(C)組的測定步驟是基于上述“加入其它香料的正常狀況”的“無香料組”，但從膠帶剝脫引起皮膚屏障破壞1.5小時后的皮膚屏障功能恢復(fù)速率的測定之前1小時開始，進(jìn)行1小時Stroop試驗(yàn)以施加緊張，然后測定皮膚屏障的恢復(fù)速率。
結(jié)果如表8和圖7所示。
表8組名 0小時后 1.5小時后 3小時后平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差 平均值 標(biāo)準(zhǔn)偏差(n＝8)(n＝8)(A)對照組 0％ 73.6％ 8.89％ 81.6％8.80％(B)緊張組 0％ 60.2％ 17.05％ 70.9％11.55％(C)香料+緊張組 0％ 678.2％ 15.95％ 88.5％14.28％從表8和圖7可以看出，與“(B)緊張組”相比，受到緊張并提供含有DMMB的香料組合物“(C)香料+緊張組”顯示增加的皮膚屏障恢復(fù)速率。另外，即使與不受到緊張的“(A)對照組”相比，“(C)香料+緊張組”也顯示較高的皮膚屏障恢復(fù)速率。因此，可以理解，本發(fā)明中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑是非常好的。
然后，通過自我感覺緊張(subjective stress)(一般活動對照表)的程度研究含有DMMB的香料組合物對緊張程度的作用。
結(jié)果如圖8所示，從圖8可以看出，與“(B)緊張組”相比，按照分?jǐn)?shù)，“(C)香料+緊張組”沒有顯示緊張程度的降低。因此，可以看出，恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑對自我感覺的緊張基本上不起作用。
如上所述，本發(fā)明的恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑對皮膚屏障功能的恢復(fù)和促進(jìn)有非常好的作用，這是因?yàn)樗刑貏e香料的結(jié)果。
另外，根據(jù)本發(fā)明的評價方法，提供一種客觀的和簡單的評價方法用于評價香料對皮膚屏障的作用。該評價方法可以用于改善增進(jìn)皮膚狀況的香料。
另外，對于經(jīng)本評價方法驗(yàn)證有效的香料，可以作為有效的恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，并能治療由皮膚屏障功能降低引起的皮膚疾病。
權(quán)利要求
1.一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量的、至少一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，它選自乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯；和(ii)可用于化妝品上或藥品的載體。
2.如權(quán)利要求1所述的恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物，其中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑的含量為0.5-100％重量比。
3.一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量的、至少一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，它選自纈草香料、紫羅蘭香料和薔薇香料；和(ii)可用于化妝品或藥品的載體。
4.如權(quán)利要求3所述的恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的組合物，其中恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑的含量為0.5-100％重量比。
5.一種評價測試香料恢復(fù)皮膚屏障功能的效果的方法，包括在一個不應(yīng)用香料的系統(tǒng)中，對試驗(yàn)動物施加預(yù)定量的緊張，以降低該動物的皮膚屏障功能，測定皮膚屏障功能降低后的恢復(fù)程度，得到的數(shù)據(jù)作為評價的指標(biāo)，和在一個應(yīng)用香料的系統(tǒng)中，測定皮膚屏障功能的恢復(fù)程度的數(shù)據(jù)，根據(jù)這兩個系統(tǒng)中皮膚屏障功能恢復(fù)程度數(shù)據(jù)的差別評價效果。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中進(jìn)行評價效果的步驟是(A)對小鼠、大鼠或荷蘭豬施加緊張，緊張的程度應(yīng)該可以明顯識別皮膚屏障功能恢復(fù)的延遲，從而使受到緊張的動物產(chǎn)生預(yù)定量的皮膚屏障功能降低；(B)以恒定的時間在屏障功能降低的部位測定經(jīng)表皮的水分損失(TEWL)；(C)比較不用測試香料的對照動物組和應(yīng)用測試香料的動物組在步驟(B)中得到的數(shù)據(jù)；和(D)評價其差別，作為測試香料對皮扶屏障功能恢復(fù)能力的效果。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中香料的應(yīng)用方法是吸入法。
8.一種恢復(fù)和促進(jìn)皮膚屏障功能的試劑，含有權(quán)利要求5所述方法評價的香料作為活性成分。
全文摘要
皮膚屏障恢復(fù)和促進(jìn)的組合物,含有有效的香料作為活性成分,其中香料的效果評價方法是:在一個不應(yīng)用香料的系統(tǒng)中,對試驗(yàn)動物施加預(yù)定量的緊張,從而使該動物的皮膚屏障功能降低,應(yīng)用皮膚屏障功能恢復(fù)程度的數(shù)據(jù)作為指標(biāo);再在一個應(yīng)用香料的系統(tǒng)中,測定皮膚屏障功能恢復(fù)的數(shù)據(jù),通過上述兩個數(shù)據(jù)的差別評價該香料的效果。
文檔編號A61K8/33GK1255367SQ9912241
公開日2000年6月7日 申請日期1999年9月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月25日
發(fā)明者傅田光洋, 土屋徹, 谷田正弘, 莊司健 申請人:株式會社資生堂