貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物 及其組合物制備方法以及它在治療阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。
【背景技術】
[0002] 貫葉金絲桃為金絲桃科（Clusiaceae)，貫葉金絲桃是我 國的傳統(tǒng)用藥，其主要成分為金絲桃素、偽金絲桃素等具有抗抑郁、抗病毒、治療創(chuàng)傷等多 種作用。貫葉金絲桃浸膏制劑已經(jīng)在德國上市，并已占德國抗中、輕度抑郁癥藥物市場的將 近50%，許多國家也已將貫葉金絲桃制劑作為外用藥和抗抑郁癥的鎮(zhèn)靜藥。
[0003] 在高通量篩選的過程中，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)大葉貫葉金絲桃具有很好的抑制丁酰 膽堿酯酶的活性，該活性提取物及其組合物有望應用于治療阿爾茨海默病（AD)等方面的 醫(yī)藥用途。
【發(fā)明內容】
[0004] 本發(fā)明所解決的技術問題是提供一種貫葉金絲桃提取物。
[0005] 本發(fā)明還提供了以貫葉金絲桃提取物為主要活性成分的組合物。
[0006] 本發(fā)明同時提供了貫葉金絲桃提取物及其組合物的制備和其在制備丁酰膽堿酯 酶抑制活性的應用。
[0007] 本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的： 維吾爾藥貫葉金絲桃經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO2)柱分離，上樣后的 硅膠柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚-丙酮，比例見表1 )，各石油醚-丙酮比 例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性，意外 地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100: 3,體積比)洗脫，繼用石油醚-丙酮 混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫得到的石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙 酮，100:12,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而 其他比例的洗脫部位，沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地，優(yōu)選為先用石油醚-丙 酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑 (石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫25倍柱體積，洗脫液為本發(fā)明丁酰膽堿酯酶抑制活 性的提取物。丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜 質類成分分離開。該貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層色 譜（TLC)分析結果見圖1，TLC分析條件：GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮 =6:1:1，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0008] 維吾爾藥貫葉金絲桃經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚-丙酮，比例見表1 )，各石油醚-丙酮比例混 合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發(fā) 現(xiàn)先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:100,體積比）洗脫，繼用甲醇洗脫得到， 甲醇洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫 部位，沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。即，丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物，可以通過 以上方法得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性 提取物從未見文獻報道，其薄層色譜（TLC)分析結果見圖2, TLC分析條件：GF254硅膠板，展 開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0009] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下： 1、貫葉金絲桃經(jīng)甲醇超聲提取物的制備 取維吾爾藥貫葉金絲桃20 g，經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，得提取物SN0012AB，樣品 1. 0015,留樣0. 0502g，上柱0. 9513g，拌樣硅膠I. 4 g，空白硅膠5g，石油醚-丙酮系統(tǒng)。
[0010] 2、石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結果 取維吾爾藥貫葉金絲桃20 g，經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，得提取物SN0012AB，1. 0015 g，留樣0.0502g，上柱0.9513g，丙酮溶解，共用甲醇15 mL。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠1.4 g，空白硅膠5 g，玻璃柱內徑I. 5cm，石油醚-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫(條件見表1 )，柱體積12. 5 mL，每個梯度洗脫lOOmL，得到各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙 酮梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖3和圖4, TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1及石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1顯色方法：香草醛-硫酸顯 色。
[0011] 表 1
【主權項】
1. 一種貫葉金絲桃提取物，其特征為貫葉金絲桃經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅 膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比 100:12的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體 積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物；其中，提取溶劑可以為甲醇、石 油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
2. -種貫葉金絲桃提取物，其特征為貫葉金絲桃經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅 膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:100的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用純甲 醇洗脫，用純甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物；其中，提取用溶劑可 以為甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
3. 如權利要求1所述貫葉金絲桃提取物，其特征為貫葉金絲桃經(jīng)溶劑超聲提取，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙 酮，100:3,體積比）洗脫，洗脫2-50倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙 酮，100:12,體積比）洗脫，洗脫2-50倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:12,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。
4. 如權利要求2所述貫葉金絲桃提取物，其特征為貫葉金絲桃經(jīng)溶劑超聲提取，提取 液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:100,體積比）洗脫，洗脫2-50倍柱體積，繼用純甲醇洗脫，洗脫2-50倍柱體積，用純甲 醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。
5. 權利要求1所述提取物的制備方法，其特征為：貫葉金絲桃經(jīng)有機溶劑超聲提取，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:3,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12， 體積比）洗脫2-50倍柱體積，用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:12,體積比）洗 脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物；以上條件最優(yōu)為先用石油醚-丙酮混合 溶劑(石油醚-丙酮，100:3,體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油 醚-丙酮，100:12,體積比）洗脫25倍柱體積。
6. 權利要求2所述提取物的制備方法，其特征為：貫葉金絲桃經(jīng)有機溶劑超聲提取， 提取濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮， 100:100,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用純甲醇洗脫2-50倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫 液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該提取物。
7. 以上條件最優(yōu)為先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚-丙酮，100:100,體積比)洗脫 25倍柱體積，繼用甲醇洗脫5倍柱體積。
8. -種藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-6任何一項所述的提取物和藥學上 可接受的載體。
9. 一種藥物制劑，其特征在于，包含權利要求1-6任何一項所述的提取物或權利要求6 所述的藥物組合物。
10. 權利要求1-6任何一項所述的貫葉金絲桃提取物或權利要求7所述的組合物或權 利要求8所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應用。
11. 如權利要求9所述維吾爾藥貫葉金絲桃提取物，其特征為，所述丁酰膽堿酯酶抑制 活性，可用于治療阿爾茨海默病（AD)等方面的醫(yī)藥用途 權利要求3和要求4中，貫葉金絲桃提取物組合物，其特征在于，用TLC檢測法；其色 譜條件=GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1及石油醚：乙酸乙酯：丙酮 =3:1:1，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫(yī)藥用途。所述的提取物通過如下方法獲得：先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:3，體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:12，體積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:12，體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機溶劑，干燥，即為該丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。
【IPC分類】G01N30-90, A61P35-00, A61P25-28, A61K36-185
【公開號】CN104666375
【申請?zhí)枴緾N201510058757
【發(fā)明人】熱娜·卡斯木, 王金輝, 黃健, 李國玉, 孫富周, 王曉梅, 曹苑, 張珂
【申請人】新疆醫(yī)科大學
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年2月4日