一種提取游離氨基酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提取游離氨基酸的方法，特別涉及一種應(yīng)用陽離子樹脂提取氨基 酸的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氨基酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)并同生命活動(dòng)有關(guān)的最基本的物質(zhì)，是在生物體內(nèi)構(gòu) 成蛋白質(zhì)分子的基本單位，與生物的生命活動(dòng)有著密切的關(guān)系。它在抗體內(nèi)具有特殊的生 理功能，是生物體內(nèi)不可缺少的營養(yǎng)成分之一。
[0003] 氨基酸在醫(yī)藥上主要用來制備復(fù)方氨基酸輸液，也用作治療藥物和用于合成多肽 藥物。目前用作藥物的氨基酸有一百幾十種，其中包括構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸有20種和構(gòu)成 非蛋白質(zhì)的氨基酸有100多種。
[0004] 由多種氨基酸組成的復(fù)方制劑在現(xiàn)代靜脈營養(yǎng)輸液以及"要素飲食"療法中占有 非常重要的地位，對維持危重病人的營養(yǎng)，搶救患者生命起積極作用，成為現(xiàn)代醫(yī)療中必不 可少的醫(yī)藥品種之一。
[0005] 谷氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、胱氨酸、L 一多巴等氨基酸單獨(dú)作用治療一些疾病， 主要用于治療肝病疾病、消化道疾病、腦病、心血管病、呼吸道疾病以及用于提高肌肉活力、 兒科營養(yǎng)和解毒等。此外氨基酸衍生物在癌癥治療上出現(xiàn)了希望。
[0006] 但是，目前對于從植物或蔬菜中提取游離氨基酸的研究，卻存在很大的缺陷，現(xiàn)有 的技術(shù)操作復(fù)雜，多為實(shí)驗(yàn)室分離提取，制備量小，很難滿足市場的需求，因此，需要提供一 種新的提取游離氨基酸的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種從蘆根中提取游離氨基酸的方法，該方法具有操作簡 單、制作簡單和樣品用量少等特點(diǎn)。
[0008] 本發(fā)明提供了一種提取游離氨基酸的方法，該方法步驟如下： (1) 將新鮮氨基酸供體用水沖洗干凈，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎， 過濾，過濾后的粉末備用； (2) 稱取粉碎后的氨基酸供體粉末，加入一定比例的提取溶劑，水浴回流提??； (3) 提取液過濾，加入高濃度乙醇至終濃度為75%，除去水溶性多糖和蛋白質(zhì)； 所述高濃度乙醇為95%乙醇； (4) 離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素;沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾 除脂肪； (5) 濾液定容至50ml，加入5g活性炭攪拌lOmin，過濾，即得游離氨基酸提取液，4°C保 存?zhèn)溆茫崛壬z測游離氨基酸含量。
[0009] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中所述烘干條件為60°C，恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干6h~12h。
[0010] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中所述粉碎的氨基酸供體經(jīng)40目篩子過濾，過濾后的粉末 備用。
[0011] 優(yōu)選的，所述步驟（2)中所述提取溶劑為水、95%乙醇溶液、75%乙醇溶液、50%乙 醇溶液中的一種或多種。
[0012] 優(yōu)選的，所述步驟（2)中氨基酸供體粉末與提取溶劑的比例為1:15-1:30 ;水浴 回流提取的條件為50-90°C，水浴回流提取l_5h。
[0013] 更優(yōu)選的，所述步驟（2)中提取溶劑為水。
[0014] 更優(yōu)選的，所述步驟（2)中氨基酸供體粉末與水的比例為1:15,水浴回流提取的 條件為60°C，水浴回流提取時(shí)間為2h。
[0015] 進(jìn)一步的，所述步驟（5)中茚三酮比色法檢測氨基酸供體中游離氨基酸的含量， 以天冬氨酸為對照品。
[0016] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明通過采用回流提取的方法，操作簡單、制作簡單和樣 品用量少，不會(huì)破壞氨基酸的結(jié)構(gòu)，獲得了游離氨基酸，經(jīng)茚三酮比色法測定，游離氨基酸 含量為8. 24mg/g。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面的實(shí)施例將對本發(fā)明予以進(jìn)一步的說明，但并不因此而限制本發(fā)明。
[0018] 以新鮮蘆根為例進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0019] 實(shí)施例1 1. 蘆根的前處理： (1)將新鮮蘆根用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗一次，淋干水后，60 °C恒溫鼓風(fēng)干燥 箱內(nèi)烘干6h。
[0020] (2)然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，粉碎的蘆根經(jīng)40目篩子過濾，過濾后的粉末備 用。
[0021] 2.提取溶劑的選擇： 水 95%乙醇溶液 75%乙醇溶液 50%乙醇溶液 2. 提取游離氨基酸的步驟： a)將新鮮蘆根用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗一次，淋干水后，60 °C恒溫鼓風(fēng)干燥箱 內(nèi)烘干6h~12h，然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎；b)稱取一定量的蘆根粉末，加入一定比例 的提取溶劑，水浴回流提??；c)提取液過濾，加入95%乙醇至終濃度為75%，除去水溶性多糖 和蛋白質(zhì)；d)離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素，沉淀加水加熱溶解，趁熱 過濾除脂肪；e)濾液定容至50ml，加入5g活性炭攪拌lOmin，過濾，即得游離氨基酸提取液。 4 °C保存?zhèn)溆谩?br>[0022] 4.檢測： 茚三酮比色法檢測游離氨基酸含量。
[0023] 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：準(zhǔn)確吸取lmg/mL的天冬氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0. 0、0. 05、0 . 1、0 . 2、0 . 3、 0· 4、0· 5mL (相當(dāng)于0、50、100、200、300、400、500 ug氨基酸），分別置于5mL刻度試管中， 各加水補(bǔ)充至體積為800 ul，然后加入2%茚三酮乙醇溶液和磷酸鹽緩沖溶液（pH為8.04) 各200 ul，混合均勻，于沸水浴上加熱15min，冷卻至室溫，靜置15min，加水定容至5ml，搖 勻。在570nm波長下，以試劑空白為對照測定其余各溶液的吸光度A。得回歸方程 Y=0. 2669X+0. 0041 (R2=O. 9974)，結(jié)果表明在100 - 500ug范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 [0024] 5.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)： 豐1田妄平豐
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，該方法包括的步驟如下： (1) 將新鮮氨基酸供體用水沖洗干凈，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎， 過濾，過濾后的粉末備用； (2) 稱取粉碎后的氨基酸供體粉末，加入一定比例的提取溶劑，水浴回流提??； (3) 提取液過濾，加入高濃度乙醇至終濃度為75%，除去水溶性多糖和蛋白質(zhì)； 所述高濃度乙醇為95%乙醇； (4) 離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素，沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾 除脂肪； (5) 濾液定容至50ml，加入5g活性炭攪拌lOmin，過濾，即得游離氨基酸提取液，4°C保 存?zhèn)溆茫崛壬z測游離氨基酸含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（1)中 所述烘干條件為60°C，恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)烘干6h~12h。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（1) 中所述粉碎的氨基酸供體經(jīng)40目篩子過濾，過濾后的粉末備用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（2)中 所述提取溶劑為水、95%乙醇溶液、75%乙醇溶液、50%乙醇溶液中的一種或多種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（2) 中氨基酸供體粉末與提取溶劑的比例為1:15-1:30 ;水浴回流提取的條件為50-90°C，水浴 回流提取l_5h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（2)中 提取溶劑為水。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（2)中 氨基酸供體粉末與水的比例為1:15,水浴回流提取的條件為60°C，水浴回流提取時(shí)間為 2h〇
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取游離氨基酸的方法，其特征在于，所述步驟（5)中 茚三酮比色法檢測氨基酸供體中游離氨基酸的含量，以天冬氨酸為對照品。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提取游離氨基酸的方法，該方法步驟如下：（1）將新鮮氨基酸供體用水洗凈，烘干，剪成小段，用粉碎機(jī)粉碎，過濾，粉末備用；（2）稱取粉碎后的氨基酸供體粉末，加入一定比例的提取溶劑，回流提?。唬?）提取液過濾，加入高濃度乙醇至終濃度為75%；（4）離心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脫脂和色素，沉淀加水加熱溶解，趁熱過濾除脂肪；（5）濾液定容，加入活性炭攪拌，過濾，即得游離氨基酸提取液，4℃保存?zhèn)溆?，茚三酮比色法檢測游離氨基酸含量。本發(fā)明通過采用回流提取的方法，操作簡單、制作簡單和樣品用量少，不會(huì)破壞氨基酸的結(jié)構(gòu)，獲得了游離氨基酸，經(jīng)茚三酮比色法測定，游離氨基酸含量為8.24mg/g。
【IPC分類】A61P21-00, A61P11-00, A61P39-02, A61P9-00, A61K36-899, A61P1-16, A61P1-00, A61P25-00, A61P35-00, A61P3-02, A61K31-198
【公開號】CN104689106
【申請?zhí)枴緾N201510071401
【發(fā)明人】戴祖新
【申請人】海門市潤圣紡織品有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月11日