用于傷口治療的藥物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于再生性治療特別是傷口愈合的藥物領域。
【背景技術】
[0002] 傷口愈合構成復雜、動態(tài)和精心策劃的過程，當皮膚組織破裂出現(xiàn)時，所述過程被 激活。貫穿傷口愈合過程，發(fā)生一系列事件，包括血小板聚集、凝血級聯(lián)活化、細胞迀移、細 胞增殖、炎性浸潤、細胞分化和組織重塑。盡管這些事件的級聯(lián)看起來良好區(qū)分且分成三個 時期，即炎癥、增殖以及傷口收縮和重塑，但它們實際上彼此重疊，并且繼續(xù)或更新的組織 損傷可以在現(xiàn)有傷口內的受影響部位處再起始所述序列。
[0003] 皮膚組織損傷和血管破壞之后是纖維蛋白凝塊形成，其提供了細胞迀移到傷口內 的基底。受一系列分子吸引的嗜中性粒細胞，吞噬異物和細菌，逐步替換為分化為巨噬細胞 的單核細胞。巨噬細胞吞噬微生物、細胞外基質的碎片、纖維蛋白、嗜中性粒細胞、紅細胞及 其他碎片，并且分泌對于有效傷口修復視為關鍵的多種分子。在慢性傷口中，該時期的一種 或多種組分看起來是失調的，導致延遲的傷口愈合。來自角質化細胞、成纖維細胞和平滑肌 細胞的生長因子表達在糖尿病傷口中減少，負面影響初始止血栓子的形成。另外，已觀察到 對細胞因子釋放、趨化性、粘連和吞活性的尚血糖癥以及尚脂血癥相關的損害。
[0004] 受損的傷口愈合與增加的發(fā)病率和死亡率相關。不愈合的傷口通常導致截肢術。 然而，盡管深入研宄，但確切潛在發(fā)病機制仍未完全闡明。它看起來是微血管和大血管疾病 的凈結果。
[0005] 傷口愈合通常在糖尿病中是延遲的，并且血管病看起來顯著參與。另外，神經病以 及支持間充質細胞迀移和活化的生長因子的缺乏已公認為延遲的糖尿病傷口愈合的原因 之一。看起來是糖尿病狀態(tài)自身固有的其他因素，例如細胞形態(tài)和功能中的變化已牽涉其 發(fā)病機理。
[0006]MistrySucharitaJ等人（2007)描述了在用抗stathmin核酶處理后減少的 HUVEC細胞增殖。據(jù)說核酶干擾微管代謝且使微管聚合和解聚之間的平衡朝向聚合微管轉 變，這干擾細胞生長且具有抗血管生成效應。
[0007]WO2008/039390A2描述了在癌癥治療中的腫瘤相關抗原和殼聚糖的疫苗綴合 物。一種可能的抗原是stathmin。
[0008]WO2007/089151Al(EP1815863Al)將stathmin鑒定為TLR3 活化物質且提議在 神經變性病癥例如阿爾茨海默氏病中的變性炎癥過程的治療。還提及了傷口的治療。
[0009] 另一方面，US6, 429, 304Bl教導具有抗有絲分裂活性的化合物，其可以用于治療 多種增殖性疾病例如癌癥或"異常傷口愈合"。作用模式是阻止細胞生長。化合物的抗有絲 分裂活性基于所謂的微管解聚能力。一種此類化合物是stathmin，也稱為0P18。
[0010] WO2004/113561A2是陳述stathmin或癌蛋白18阻止由于微管蛋白減少而不受 控制的細胞生長的另外的文件。
[0011] 這些文件無一研宄了Stathmin在實際中的傷口愈合中的作用。這些專利文件的 作者進一步提及關于在傷口愈合中的可能作用的相反陳述。因此仍有待闡明stathmin是 否在傷口愈合中具有任何有益作用。
[0012]目前的傷口愈合治療旨在給傷口清潔且清創(chuàng)，治療可能的感染以減少傷口的炎癥 期，并且任選施加迀移或生長因子例如roGF。另外，目前的傷口治療制劑并非令人滿意，并 且存在改良的傷口愈合組合物的當前需要。
[0013] 發(fā)明簡沐
[0014] 本發(fā)明提供了stathmin、編碼stathmin的核酸或表達stathmin的細胞在傷口 治療中或減少傷口結瘢的用途。在相關方面，本發(fā)明還涉及用于傷口治療的stathmin、 編碼stathmin的核酸或表達stathmin的細胞。進一步地，本發(fā)明涉及stathmin、編碼 stathmin的核酸或表達stathmin的細胞在制備傷口治療中的藥物中的用途。還提供了包 含stathmin的藥物組合物。本發(fā)明進一步提供了增加或誘導間充質細胞、表皮細胞和/或 干細胞，特別是基質干細胞和/或造血干細胞的增殖和/或迀移，用于刺激免疫細胞優(yōu)選天 然殺傷細胞，用于刺激成纖維細胞，用于刺激上皮細胞優(yōu)選表皮的上皮細胞，或用于刺激血 管生成，特別是用于刺激所述細胞尤其是間充質細胞和/或成纖維細胞中的IL-8產生，用 于刺激單核細胞和/或巨噬細胞的體外或體內方法?？梢哉T導單核細胞和/或巨噬細胞以 產生細胞因子，例如IL-6、IL-8、MIP-l、MIP-2。所有這些方面是等價的，并且所有優(yōu)選實施 方案同樣涉及這些方面中的每一個。
[0015] 本發(fā)明人已將stathmin鑒定為非常有力的傷口愈合加速劑，其甚至超過常見藥 物例如roGF制劑。特別令人驚訝的是在減少的或受損的傷口愈合的情況下的效果，其中 stathmin可以以出乎意料快的速率實現(xiàn)傷口閉合。本發(fā)明的主題在權利要求中進一步限 定。
[0016] 發(fā)明詳沐
[0017]Stathmin是具有已知序列（NCBI數(shù)據(jù)庫NP_005554 和CAD19057 或SEQID N0:l(stathmina)或SEQIDN0:2(stathminb))的蛋白質。Stathmin及其同工型由上文 提及的【背景技術】進一步已知。它是在哺乳動物中的大多數(shù)組織中發(fā)現(xiàn)的遍在表達的蛋白 質。取決于可以磷酸化的位點的特異性組合，觀察到許多不同的磷酸化形式。在Ser-16處 的磷酸化看起來是神經元極化所需的。在Ser-63處的磷酸化使微管蛋白結合減少10倍， 且抑制MT聚合抑制活性。
【主權項】
1. Stathmin、編碼所述stathmin的核酸或表達stathmin的細胞，其用于治療患者中的 慢性傷口或者疾病依賴性或藥物療法依賴性受損的傷口愈合和/或減少傷口結瘢。
2. 用生物相容性基質配制或與生物相容性基質偶聯(lián)的stathmin，其用于治療患者中 的傷口，優(yōu)選慢性傷口或者疾病依賴性或藥物療法依賴性受損的傷口愈合，所述生物相容 性基質優(yōu)選包含膠原、明膠、殼聚糖和/或透明質酸。
3. 根據(jù)權利要求1或2使用的stathmin、核酸或細胞，其中所述stathmin是人 stathmin。
4. 根據(jù)權利要求1、2或3使用的stathmin或細胞，其中所述stathmin是重組 stathmin。
5. 根據(jù)權利要求1-4中任一項使用的stathmin、核酸或細胞，其中所述stathmin包含 SEQ ID NO: 1的氨基酸1至126,或與SEQ ID NO: 1的氨基酸1至126的序列具有至少70% 序列同一性的氨基酸序列。
6. 根據(jù)權利要求1-5中任一項使用的stathmin，所述stathmin在水凝膠中配制。
7. 根據(jù)權利要求1-6中任一項使用的stathmin、核酸或細胞，其中所述患者需要誘導 血管生成、需要刺激先天性免疫應答和/或需要誘導細胞因子/生長因子和TMP用于免疫 調節(jié)或瘢痕減少。
8. 根據(jù)權利要求1-7中任一項使用的stathmin、核酸或細胞，其中所述疾病依賴性受 損的傷口愈合是由于選自下述的疾病：糖尿病或代謝綜合征，慢性靜脈功能不全（CVI)，外 周動脈閉塞性疾?。≒AOD)，癌癥，自身免疫尤其是選自類風濕性關節(jié)炎、狼瘡和青斑樣血管 病變的自身免疫，造口術，長期炎癥過程，褥瘡，優(yōu)選地其中所述患者患有糖尿病或代謝綜 合征。
9. 根據(jù)權利要求1-8中任一項使用的stathmin、核酸或細胞，其中所述藥物療法依賴 性受損的傷口愈合是由于選自使用以下進行治療的藥物療法：皮質類固醇、尼古丁、抗生 素、免疫抑制劑、抗凝血劑、細胞毒性藥劑、抗風濕病藥劑、血管收縮劑。
10. 根據(jù)權利要求1-9中任一項使用的stathmin、核酸或細胞，其中所述傷口選自慢性 或不愈合的糖尿病足傷口，潰瘍特別是靜脈潰瘍、褥瘡或壓力性潰瘍，燒傷優(yōu)選三度燒傷， 外科傷口，意外傷口，壞死傷口，感染傷口。
11. 藥物組合物，其包含用生物相容性基質配制或與生物相容性基質偶聯(lián)的 stathmin，所述stathmin任選如權利要求3-6中任一項進一步定義，所述生物相容性基質 優(yōu)選包含膠原、明膠、殼聚糖和/或透明質酸，特別是水凝膠基質，優(yōu)選海藻酸鹽。
12. 根據(jù)權利要求11的藥物組合物，其用作藥物。
13. 根據(jù)權利要求11的藥物組合物，其用于治療傷口或瘢痕，優(yōu)選如權利要求1、7-10 中任一項中進一步定義的。
14. 一種體外方法，其用于增加或誘導間充質細胞、表皮細胞和/或干細胞，特別是基 質干細胞的增殖和/或迀移，刺激免疫細胞優(yōu)選天然殺傷細胞，刺激成纖維細胞，刺激上皮 細胞優(yōu)選表皮的上皮細胞，或刺激血管生成，特別是刺激所述細胞尤其是間充質細胞和/ 或成纖維細胞中的IL-8產生，刺激單核細胞和/或巨噬細胞， 所述體外方法包括給所述細胞施用stathmin、編碼所述stathmin的核酸或表達 stathmin的細胞的步驟。
15. -種方法，其用于在患者中增加或誘導間充質細胞和/或干細胞，特別是基質干細 胞的增殖和/或迀移，刺激免疫細胞優(yōu)選天然殺傷細胞，刺激成纖維細胞，刺激上皮細胞優(yōu) 選表皮的上皮細胞，或刺激血管生成，特別是刺激所述細胞尤其是間充質細胞和/或成纖 維細胞中的IL-8產生，刺激單核細胞和/或巨噬細胞， 所述方法包括給所述患者施用stathmin、編碼所述stathmin的核酸或表達stathmin 的細胞的步驟，優(yōu)選通過在傷口上的局部施用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及stathmin、編碼所述stathmin的核酸或表達stathmin的細胞，其用于治療患者中的慢性傷口或者疾病或藥物療法依賴性受損的傷口愈合，或者用于增加或誘導間充質細胞、干細胞的增殖和/或遷移，用于刺激免疫細胞優(yōu)選天然殺傷細胞，用于刺激成纖維細胞，用于刺激上皮細胞優(yōu)選表皮的上皮細胞，或用于刺激血管生成。
【IPC分類】A61P17-02, A61K47-36, A61K38-17
【公開號】CN104755095
【申請?zhí)枴緾N201380048505
【發(fā)明人】R·貝格爾
【申請人】西姆貿易咨詢有限責任公司租賃兩合公司
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2013年7月18日
【公告號】CA2879472A1, EP2687224A1, EP2874644A1, US20150202258, WO2014013027A1