一種造影劑及其制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種造影劑及其制作方法，涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域。該造影劑主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計：疊氮磷酸二苯酯2～4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8～12份、磷脂3～5份、膽固醇2.5～3.5份、黑色素1.5～2.5份和全氟丙烷8～15份，磷脂是PEG化的磷脂。本發(fā)明提供的造影劑的生物相容性好，而且無毒副作用，造影效果也好。本發(fā)明提供的造影劑的制作方法步驟簡單，操作方便。
【專利說明】
一種造影劑及其制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種造影劑及其制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]醫(yī)學(xué)影像學(xué)在癌癥的診斷中發(fā)揮重要作用。目前臨床應(yīng)用的成像技術(shù)包括傳統(tǒng)的X射線、超聲、計算機X射線斷層掃描(CT)以及近年來發(fā)展起來的磁共振成像(MRI)、光聲成像、單光子發(fā)射計算機斷層成像(SPECT)、正電子發(fā)射斷層成像(PET)等。然而，單一分子影像技術(shù)存在著一些自身難以克服的缺陷，比如在時間和空間分辨率、穿透深度和能量延展度等多方面存在限制。單一的成像方式不足以充分地獲取腫瘤信息，多模式成像技術(shù)的聯(lián)合可實現(xiàn)彼此優(yōu)勢互補，為明確診斷提供更加精確全面的信息。
[0003]而光聲成像技術(shù)就是多模式成像，光聲成像是21世紀發(fā)展起來的新興成像技術(shù)，主要應(yīng)用于物理、化學(xué)等領(lǐng)域。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，光聲成像的研究也取得了顯著進步，并開始應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。光聲成像是利用光聲效應(yīng)，通過生物體對光吸收率的不同，通過測量生物組織吸收脈沖激光后產(chǎn)生的超聲波來進行重構(gòu)成像。它結(jié)合了超聲的高穿透力和光學(xué)的高對比度特性，因此比目前的純超聲具有更高的對比度和分辨率。光聲成像的物理基礎(chǔ)一一光聲效應(yīng)是當短脈沖激光照射生物組織時，組織內(nèi)的吸收體吸收了光能之后發(fā)生局部的升溫，促使組織發(fā)生熱彈性膨脹，產(chǎn)生超聲波的過程，在組織體表面附近被換能器接受，即為光聲信號。
[0004]目前常用的光聲成像技術(shù)均使用對應(yīng)的造影劑，造影劑能夠結(jié)合多種影像功能，主要應(yīng)用于腫瘤早期的檢測和診斷。然而，為了獲得較為全面的信息，往往需要同時使用多種造影劑或復(fù)合造影劑，這大大增加了造影劑在人體內(nèi)的生物安全性風(fēng)險和檢查成本。
[0005]目前，正在研究中的造影劑主要有:納米金顆粒(AuNPs)、量子點、超順磁性氧化鐵納米顆粒、近紅外熒光染料等，但這些造影劑仍不能很好的解決造影性能較弱和生物毒性的問題。因此，開發(fā)一種具有良好生物相容性和生物安全性并擁有多模式成像的造影劑具有非常重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種造影劑，此造影劑的生物相容性好，而且無毒副作用，造影效果也好。
[0007]本發(fā)明的另一目的在于提供一種造影劑的制作方法，以制得上述的造影劑，該方法步驟簡單，制作方便。
[0008]本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
[0009]—種造影劑，主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯2?4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8?12份、磷脂3?5份、膽固醇2.5?3.5份、黑色素1.5?2.5份和全氟丙烷8?15份，磷脂是PEG化的磷脂。
[0010]一種造影劑的制作方法，其包括:
[0011]通過有機溶劑沉淀法將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇制成醚脂溶液，按重量份數(shù)計，疊氮磷酸二苯酯2?4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8?12份、磷脂3?5份、膽固醇2.5?3.5份；
[0012]將醚脂溶液與黑色素溶液混合制粒，然后進行冷凍干燥，黑色素溶液由黑色素1.5?2.5份制得；以及
[0013]填充全氟丙烷8?15份。
[0014]相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明包括以下有益效果:本發(fā)明利用黑色素作為靶標，在疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、全氟丙烷等的作用下制成造影劑。而由于黑色素本身就是一種生物色素，存在于人體中，所以利用其作為靶標的造影劑的生物相容性好，而且該造影劑的整體成分中，都不含有重金屬元素，所以其對人體也無毒副作用。另外，黑色素在近紅色波長處有特異吸收峰的特性，所以利用光聲成像設(shè)備進行檢測，能夠看出以黑色素為原料制作的造影劑的造影效果也非常好。
【附圖說明】
[0015]為了更清楚的說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單的介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0016]圖1是本發(fā)明實施例三提供的造影劑光鏡下觀察的性狀示意圖；
[0017]圖2是本發(fā)明實施例三提供的造影劑電鏡下觀察的示意圖；
[0018]圖3是本發(fā)明實施例三提供的造影劑的粒徑與密度關(guān)系的示意圖；
[0019]圖4是本發(fā)明實施例三提供的造影劑濃度差異導(dǎo)致的不同超聲情況的示意圖；
[0020]圖5是本發(fā)明實施例三提供的造影劑濃度差異導(dǎo)致的不同光聲成像情況的示意圖；
[0021]圖6是本發(fā)明實施例三提供的不同濃度的造影劑的MRITl加權(quán)像示意圖；
[0022]圖7是本發(fā)明實施例三提供的造影劑注射前的皮下腫瘤光聲成像情況示意圖；
[0023]圖8是本發(fā)明實施例三提供的造影劑注射后的皮下腫瘤光聲成像情況示意圖。
【具體實施方式】
[0024]為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品O
[0025]下面對本發(fā)明實施例的造影劑及其制作方法進行具體說明。
[0026]現(xiàn)有技術(shù)中，影響造影劑進一步臨床應(yīng)用的安全性問題在于:①高劑量、高濃度的造影劑對生物組織的生理病理過程的影響。②金屬納米粒子的重金屬毒性，碳納米管、天然或人工染料的生物毒性。③納米粒子不容易被代謝排出。
[0027]本發(fā)明提供的造影劑主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯2?4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8?12份、磷脂3?5份、膽固醇2.5?3.5份、黑色素1.5?2.5份和全氟丙烷8?15份，磷脂是PEG化的磷脂。
[0028]黑色素(melanin)是一種生物色素，在黑色素細胞中，酪氨酸經(jīng)酪氨酸酶作用，羥化生成多巴，后者經(jīng)氧化、脫羧等反應(yīng)轉(zhuǎn)變成吲哚醌，最后吲哚醌聚合為黑色素，由黑色素細胞生成并且儲存在其中，通常是以聚合的方式存在。人類的黑色素主要存在于皮膚、毛囊及眼睛。它有著廣泛的生理功能，對生物體有抗紫外、抗輻射、抗氧化、抗脫水、抗老化、抗高溫、抗感染等保護作用。本發(fā)明利用黑色素在近紅色波長處的特異吸收峰的特性，將其作為光聲成像的理想靶標。本發(fā)明提供的造影劑的生物相容性好，易于從機體中排除，而且無毒副作用，造影效果好，成本也低。
[0029]其中，PEG是指聚乙二醇，PEG化就是將活化的聚乙二醇通過化學(xué)方法偶聯(lián)到蛋白多肽、小分子藥物或脂質(zhì)體上的一種技術(shù)方法。本發(fā)明中主要就是將聚乙二醇偶聯(lián)到磷脂上。由于藥物的PEG化在醫(yī)藥領(lǐng)域中屬于公知技術(shù)，所以在此不再贅述。
[0030]優(yōu)選的，造影劑的原料中，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯2.5?3.5份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿9.5?10.5份、磷脂3.5?4.5份、膽固醇2.8?3.2份、黑色素1.8?2.2份和全氟丙烷10?12份。
[0031 ]上述造影劑的制作方法包括:
[0032]步驟S1:通過有機溶劑沉淀法將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇制成醚脂溶液，按重量份數(shù)計，疊氮磷酸二苯酯2?4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8?12份、磷脂3?5份、膽固醇2.5?3.5份；
[0033]步驟S2:將醚脂溶液與黑色素溶液混合制粒，然后進行冷凍干燥，黑色素溶液由黑色素1.5?2.5份制得；以及
[0034]步驟S3:填充全氟丙烷8?15份。
[0035]上述的造影劑的制作方法步驟簡單，制作方便。
[0036]具體的，在造影劑的制作方法的步驟SI中，利用有機溶劑沉淀法制備醚脂溶液包括:
[0037]將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇混合，得到混合脂，將混合脂溶于乙醚中，混合脂與乙醚的質(zhì)量比為20:6.5?11;以及
[0038]在35?45KHz下超聲震蕩5?30min，得到醚脂溶液。
[0039]本發(fā)明根據(jù)原料的特性進行方法的選擇一一磷脂、膽固醇等脂類不溶于水而能夠溶于乙醚等非極性有機溶劑，所以，根據(jù)相似相溶原理，將磷脂、膽固醇等脂類溶于乙醚中，并在超聲震蕩下形成穩(wěn)定的乳劑，為制作造影劑而做準備。而由于乙醚的揮發(fā)型強，所以在造影劑的制作過程中，乙醚也很容易被除去。另外，超聲震蕩可以利用超聲波清洗儀實現(xiàn)，也可以通過其他設(shè)備實現(xiàn)，如超聲波震蕩器。
[0040]在造影劑的制作方法的步驟S2中，制取黑色素溶液的方法為:
[0041 ]將黑色素溶解于0.08?0.12mol/L的堿性物質(zhì)水溶液中，黑色素與堿性物質(zhì)的質(zhì)量比為2:7?9;
[0042]在35?45KHz下超聲震蕩8?12min;以及
[0043]利用0.008?0.01211101/1的鹽酸在截留分子量為8?141^)&的透析袋的作用下，調(diào)節(jié)溶液pH為7.0?7.4，得到黑色素溶液。
[0044]其中，黑色素可以是酪氨酸衍生的合成黑色素顆粒，但其粒徑、形態(tài)、來源都不進行限定，只要是產(chǎn)品黑色素就行。在進行溶液pH的調(diào)節(jié)時，可以利用pH計來進行監(jiān)測，更加方便、直觀。當然，利用其他器件、設(shè)備進行監(jiān)測也行，只要能夠得知PH值就行。其中堿性物質(zhì)優(yōu)選為氫氧化鈉，還可以為氫氧化鉀。
[0045]制取黑色素溶液主要是利用了黑色素溶于堿性物質(zhì)水溶液的特性。但堿性物質(zhì)溶于水，制成堿性物質(zhì)水溶液后，該水溶液的PH值太高，堿性太強，不利于造影劑的制備，而若單純的加入鹽酸來中和，又會改變?nèi)芤旱捏w積。所以，本發(fā)明中結(jié)合了透析袋一起使用，從透析袋外部加入鹽酸，通過氫離子和氫氧根離子的交換，達到酸堿中和目的，而且又不會改變?nèi)芤后w積，從而也就避免了對黑色素溶液的濃度的改變。其中，鹽酸和堿性物質(zhì)水溶液發(fā)生中和反應(yīng)，生成的氯化鈉溶液或氯化鉀溶液對人體并無毒副作用，甚至在某些情況下，其還具有醫(yī)療特性，所以無需除去。
[0046]在得到黑色素溶液之后，還包括:將黑色素溶液在6 O?7 O °C下水浴加熱1?20min。水浴加熱能夠促進黑色素的溶解，使黑色素溶液成分均勻。黑色素溶液可以倒入10ml的圓底燒瓶中進行水浴加熱，當然，此種選取并不作為限制，也可以選用其他容器來進行水浴加熱，如燒杯、錐形瓶。
[0047]在造影劑的制作方法的步驟S2中，將醚脂溶液與黑色素溶液混合制粒包括:抽取醚脂溶液，然后利用注射栗按照0.15?0.25ml/min的流速滴加到黑色素溶液中，再在20?30r/min的轉(zhuǎn)速下磁力攪拌30?120min，得到黑色素脂質(zhì)微粒。
[0048]—邊慢速滴加溶液一邊攪拌，能夠使醚脂溶液和黑色素溶液之間的混合更加均勻，分散性更好。而通過磁力攪拌，能夠有效促進有機溶劑沉淀法中添加的乙醚的揮發(fā)，使乙醚被除去。另外，在黑色素溶液的水浴加熱過程中，也能夠促進乙醚揮發(fā)，除去乙醚。
[0049]抽取醚脂溶液時，可以利用50ml的玻璃注射器進行抽取，然后利用高精密的注射栗逐滴滴加醚脂溶液，當然，也可以利用其他容量、其他儀器進行抽取和滴加。
[0050]在得到黑色素脂質(zhì)微粒后，還包括:利用功率為10w的超聲探頭處理黑色素脂質(zhì)微粒1.5?2.5min。超聲探頭處理能夠使黑色素脂質(zhì)微粒的包覆性更好，提高其均一性。[0051 ] 在超聲探頭處理后，還包括:將黑色素脂質(zhì)微粒在10000?14000r/s下離心25?35min，然后用處理水洗滌2?4次，處理水為純水、超純水、蒸餾水中的至少一種。制備得到的黑色素脂質(zhì)微粒的粒徑會有差異，而本發(fā)明的造影劑優(yōu)選的黑色素脂質(zhì)微粒的粒徑在600?800nm范圍內(nèi)，所以通過離心操作，高速轉(zhuǎn)動就能夠使大小不同的黑色素脂質(zhì)微粒分開，顆粒較大的黑色素脂質(zhì)微粒在上，顆粒較小的黑色素脂質(zhì)微粒在下，如此，就有助于微粒的篩分和選取。當然，其他大小的黑色素脂質(zhì)微粒也并不棄置，可以保存待用。而利用處理水洗滌，能夠洗去微粒表面的殘留試劑，并且不會引入新的細菌。
[0052]而冷凍干燥包括:將混合制粒得到的黑色素脂質(zhì)微粒用處理水稀釋，然后冷凍45?50h，在1.3?13Pa下干燥12?15h，處理水為純水、超純水、蒸饋水中的至少一種，處理水與黑色素的質(zhì)量比為1.5?2.5:1.5?2.5。冷凍干燥又稱升華干燥，是將含水物料冷凍到冰點以下，使水轉(zhuǎn)變?yōu)楸?，然后在較高真空下將冰轉(zhuǎn)變?yōu)檎魵舛サ母稍锓椒ā?br>[0053]冷凍干燥后，會得到凍干粉，該凍干粉可以先在-20°C下進行保存，不立即填充全氟丙烷，當需要使用造影劑時，再在使用前填充全氟丙烷。凍干粉實際上就是制備好的包含黑色素的實心微球，由于其是在真空下進行凍干，所以微球的內(nèi)部也為真空狀態(tài)，僅含有黑色素顆粒。在造影劑的制作方法的步驟S3中，填充全氟丙烷時，將裝有全氟丙烷的氣瓶瓶口正壓通氣2min后，微球內(nèi)部填充滿全氟丙烷，即得到成品造影劑。通過這一過程，將包含黑色素脂質(zhì)微球轉(zhuǎn)換成包含黑色素顆粒的成品造影劑，可以儲存在室溫下使用。
[0054]本發(fā)明提供的造影劑主要作為腫瘤的多模態(tài)成像的造影劑，其可以用于MR1、光聲成像和常規(guī)超聲顯像。
[0055]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述:
[0056]實施例一
[0057]本實施例提供的造影劑，主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯2份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8份、PEG化的磷脂3份、膽固醇2.5份、黑色素1.5份和全氟丙烷8份。
[0058]上述造影劑的制作方法，包括以下步驟:
[0059]a.將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇混合，得到混合脂，將混合脂溶于乙醚中，然后利用35KHz的超聲波清洗儀作用30min，得到醚脂溶液，其中，混合脂與乙醚的質(zhì)量比為20:6.5;
[0060]b.將黑色素溶解于0.08mol/L的氫氧化鈉溶液中，然后利用35KHz的超聲波清洗儀作用12min，再利用0.008mol/L的鹽酸在截留分子量為8kDa的透析袋的作用下，調(diào)節(jié)溶液pH為7.0，得到黑色素溶液，其中，黑色素與氫氧化鈉的質(zhì)量比為2:7;
[0061]c.抽取步驟a得到的醚脂溶液，然后利用注射栗按照0.15ml/min的流速滴加到步驟b得到的黑色素溶液中，再在20r/min的轉(zhuǎn)速下磁力攪拌30min，得到黑色素脂質(zhì)微粒；
[0062]d.將步驟c得到的黑色素脂質(zhì)微粒用純水稀釋，然后冷凍45h，在1.3Pa下干燥12h，純水與黑色素的質(zhì)量比為1.5:2.5;
[0063]e.往冷凍干燥后的黑色素脂質(zhì)微粒中填充全氟丙烷。
[0064]實施例二
[0065]本實施例提供的造影劑，主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿12份、PEG化的磷脂5份、膽固醇3.5份、黑色素2.5份和全氟丙烷15份。
[0066]上述造影劑的制作方法，包括以下步驟:
[0067]a.將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇混合，得到混合脂，將混合脂溶于乙醚中，然后利用45KHz的超聲波震蕩器作用5min，得到醚脂溶液，其中，混合脂與乙醚的質(zhì)量比為20:11;
[0068]b.將黑色素溶解于0.12mol/L的氫氧化鉀溶液中，然后利用45KHz的超聲波震蕩器作用8min，再利用0.012mol/L的鹽酸在截留分子量為14kDa的透析袋的作用下，調(diào)節(jié)溶液pH為7.4，得到黑色素溶液，其中，黑色素與氫氧化鉀的質(zhì)量比為2:9;
[0069]將黑色素溶液置于60°C下水浴加熱20min;
[0070]c.利用50ml的玻璃注射器抽取步驟a得到的醚脂溶液，接著利用注射栗按照0.25ml/min的流速滴加到步驟b得到的黑色素溶液中，然后在30r/min的轉(zhuǎn)速下磁力攪拌120min，得到黑色素脂質(zhì)微粒；
[0071]利用功率為10w的超聲探頭處理黑色素脂質(zhì)微粒2.5min;
[0072]再將黑色素脂質(zhì)微粒在14000r/s下離心25min，用蒸餾水洗滌4次；
[0073]d.將步驟c得到的黑色素脂質(zhì)微粒用蒸餾水稀釋，然后冷凍50h，在13Pa下干燥15h，蒸饋水與黑色素的質(zhì)量比為2.5:1.5;
[0074]e.往冷凍干燥后的黑色素脂質(zhì)微粒中填充全氟丙烷。
[0075]實施例三
[0076]本實施例提供的造影劑，主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯3份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿10份、PEG化的磷脂4份、膽固醇3份、黑色素2份和全氟丙烷11份。
[0077]上述造影劑的制作方法，包括以下步驟:
[0078]a.將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇混合，得到混合脂，將混合脂溶于乙醚中，然后利用40KHz的超聲波清洗儀作用20min，得到醚脂溶液，其中，混合脂與乙醚的質(zhì)量比為20:7.2;
[0079]b.將黑色素溶解于0.lmol/L的氫氧化鈉溶液中，然后利用40KHz的超聲波清洗儀作用I Omin，再利用0.0 Imo 1/L的鹽酸在截留分子量為12kDa的透析袋的作用下，調(diào)節(jié)溶液pH為7.4，得到黑色素溶液，其中，黑色素與氫氧化鉀的質(zhì)量比為2:8;
[0080]利用IOOml的圓底燒瓶將黑色素溶液置于65 °C下水浴加熱15min;
[0081]c.利用50ml的玻璃注射器抽取步驟a得到的醚脂溶液，接著利用注射栗按照0.2ml/min的流速滴加到步驟b得到的黑色素溶液中，然后在25r/min的轉(zhuǎn)速下磁力攪拌80min，得到黑色素脂質(zhì)微粒；
[0082]利用功率為10w的超聲探頭處理黑色素脂質(zhì)微粒2min;
[0083]再將黑色素脂質(zhì)微粒在12000r/s下離心30min，用去離子水洗滌3次；
[0084]d.將步驟c得到的黑色素脂質(zhì)微粒用去離子水稀釋，然后冷凍48h，在6Pa下干燥13.5h，去離子水與黑色素的質(zhì)量比為1:1 ；
[0085]e.往冷凍干燥后的黑色素脂質(zhì)微粒中填充全氟丙烷。
[0086]將實施例三制作的造影劑進行試驗，光鏡下可見造影劑分布范圍大，而且大小均勻，參見圖1。
[0087]通過透射電鏡高倍顯示單個造影劑，參見圖2，外層透明層為雙分子磷脂膜，其內(nèi)顏色較深為膜內(nèi)包裹的黑色素顆粒;在200nm的標尺下，造影劑尺寸均一。
[0088]制備的造影劑理化性質(zhì)穩(wěn)定，大小均勻，分散性好，平均粒徑為302.5nm。參見圖3，橫坐標為造影劑粒徑大小，縱坐標為所測粒徑在該范圍內(nèi)的密度。即曲線起點至終點距離越窄，那么所測微球的粒徑就越接近。
[0089]構(gòu)建瓊脂糖凝膠圓孔模型:制備2%的瓊脂糖凝膠模塊，中間留有直徑為Icm的圓孔，待其凝固后，每個圓孔中分別加入不同濃度(lmg/mL，2mg/mL，3mg/ mL，4mg/mL，5mg/ mL)的造影劑。
[0090]臨床超聲診斷系統(tǒng)(mylab90、百勝、意大利)配備LA523高頻線陣探頭(頻率范圍，4-13mHz ;孔徑50mm)，B超和超聲造影諧波圖像【機械指數(shù)(MI ),0.19;發(fā)射功率，42 % ;幀速率24Hz】。從圖4可以看出，隨著造影劑濃度的升高，其超聲信號和諧波信號逐步增強，超聲成像的效果越來越好。
[0091 ]構(gòu)建瓊脂糖凝膠圓孔模型:制備2 %的瓊脂糖凝膠模塊，中間留有直徑為Icm的圓孔，待其凝固后，每個圓孔中分別加入不同濃度(lmg/mL，2mg/mL，3mg/ mL，4mg/mL，5mg/ mL)的造影劑。
[0092]Vevo LAZR光聲成像設(shè)備(VisualSonics公司、多倫多、加拿大)配備1ζ250(光纖束，25.4 X I.25mm;震源深度1mm ；中心頻率，21mHz ；軸向分辨率，75μπι)探頭獲得的光聲和超聲圖像。激發(fā)波長為700nm、激光能量密度小于20mJ/cm2。每個樣本的光聲信號強度通過Vevo Zr軟件分析量化。
[0093]從圖5中可以看出，隨著黑色素顆粒濃度的升高，其光聲信號逐步增強，光聲成像的效果越來越好。
[0094]不同濃度(lmg/mL，2mg/mL，3mg/mL，4mg/mL，5mg/mL)的造影劑，裝在I.5ml 的小離心管中。檢測MRI Tl加權(quán)像。從圖6可以看出，隨著造影劑濃度的升高，其Tl加權(quán)信號逐步增強，MRI成像的效果越來越好。
[0095]制備的造影劑注入小鼠靜脈內(nèi)，在光聲成像儀下觀察其增強皮下腫瘤的聲像學(xué)特點。請參見圖7，注射前，小鼠皮下腫瘤內(nèi)回聲均勻等回聲，自身成分光聲信號極少;結(jié)果可見圖8，注射后，小鼠皮下腫瘤內(nèi)回聲較注射前增強，光聲信號明顯增多，且分布范圍增大。
[0096]另外，將其它實施例制作的造影劑用于進行上述實驗和檢測，獲得的結(jié)果與上述試驗結(jié)果一致。
[0097]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種造影劑，其特征在于，主要由以下原料制成，按重量份數(shù)計:疊氮磷酸二苯酯2?.4份、二棕櫚酰磷脂酰膽堿8?12份、磷脂3?5份、膽固醇2.5?3.5份、黑色素1.5?2.5份和全氟丙烷8?15份，所述磷脂是PEG化的磷脂。2.一種造影劑的制作方法，其特征在于，其包括: 通過有機溶劑沉淀法將疊氮磷酸二苯酯、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂和膽固醇制成醚脂溶液，按重量份數(shù)計，所述疊氮磷酸二苯酯2?4份、所述二棕櫚酰磷脂酰膽堿8?12份、所述磷脂3?5份、所述膽固醇2.5?3.5份； 將所述醚脂溶液與黑色素溶液混合制粒，然后進行冷凍干燥，所述黑色素溶液由黑色素1.5?2.5份制得;以及 填充全氟丙烷8?15份。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的造影劑的制作方法，其特征在于，利用所述有機溶劑沉淀法制備所述醚脂溶液包括: 將所述疊氮磷酸二苯酯、所述二棕櫚酰磷脂酰膽堿、所述磷脂和所述膽固醇混合，得到混合脂，將所述混合脂溶于乙醚中，所述混合脂與所述乙醚的質(zhì)量比為20:6.5?11;以及 在35?45KHz下超聲震蕩5?30min，得到所述醚脂溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的造影劑的制作方法，其特征在于，制取所述黑色素溶液的方法為: 將所述黑色素溶解于0.08?0.12mol/L的堿性物質(zhì)水溶液中，所述黑色素與所述堿性物質(zhì)的質(zhì)量比為2:7?9; 在35?45KHz下超聲震蕩8?12min;以及 利用0.008?0.01211101/1的鹽酸在截留分子量為8?141^)&的透析袋的作用下，調(diào)節(jié)溶液PH為7.0?7.4，得到所述黑色素溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的造影劑的制作方法，其特征在于，所述堿性物質(zhì)為氫氧化鈉。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的造影劑的制作方法，其特征在于，在得到所述黑色素溶液之后，還包括:將所述黑色素溶液在60?70°C下水浴加熱10?20min。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的造影劑的制作方法，其特征在于，將所述醚脂溶液與黑色素溶液混合制粒包括:抽取所述醚脂溶液，然后利用注射栗按照0.15?0.25ml/min的流速滴加到所述黑色素溶液中，再在20?30r/min的轉(zhuǎn)速下磁力攪拌30?120min，得到黑色素脂質(zhì)微粒。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的造影劑的制作方法，其特征在于，在得到所述黑色素脂質(zhì)微粒后，還包括:利用功率為10w的超聲探頭處理所述黑色素脂質(zhì)微粒1.5?2.5min。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的造影劑的制作方法，其特征在于，在所述超聲探頭處理后，還包括:將所述黑色素脂質(zhì)微粒在10000?14000r/s下離心25?35min，然后用處理水洗滌2?4次，所述處理水為純水、超純水、蒸餾水中的至少一種。10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的造影劑的制作方法，其特征在于，所述冷凍干燥包括:將混合制粒得到的微粒用處理水稀釋，然后冷凍45?50h，在1.3?13Pa下干燥12?15h，所述處理水為純水、超純水、蒸餾水中的至少一種，所述處理水與所述黑色素的質(zhì)量比為1.5?2.5:.1.5?2.5o
【文檔編號】A61K49/00GK105833302SQ201610395776
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年6月6日
【發(fā)明人】王冬, 楊珂, 姚遠志, 張亮, 李婭莎, 鐘英, 鄭妍
【申請人】重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院