一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成：殼聚糖124?140；硝酸銀0.06?0.08；甘油磷酸納7?11；絲素蛋白42?60；丙烯酸酯28?36，碳酸鋅17?21；賴氨酸8?16；十大功勞根12?20；荊芥穗9?13；桉葉油12?18；兒茶7?13；細(xì)辛5?12；防風(fēng)6?9。本發(fā)明的優(yōu)良效果還表現(xiàn)在：本發(fā)明所得溫敏水凝膠抗菌譜廣、無細(xì)胞毒性，高效低毒；在藥力滲透、透氣性、促進(jìn)傷口愈合等方面具有顯著優(yōu)勢(shì)，且制備成本低、制備工藝簡(jiǎn)單等。
【專利說明】
-種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥材料領(lǐng)域，特別是設(shè)及一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠及其制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 殼聚糖是自然界唯一大量存在的堿性多糖，是甲殼素經(jīng)脫乙酷化后形成的一種陽(yáng) 離子多糖。殼聚糖廣泛存在于節(jié)肢動(dòng)物的外殼、真菌和酵母的細(xì)胞壁中，資源量非常豐富， 同時(shí)具有可生物降解性、無毒、抑菌等特性。殼聚糖分子上具有大量的徑基和氨基，易被化 學(xué)修飾，能與金屬離子結(jié)合形成配合物，形成一系列新型殼聚糖衍生物，具有了更多的生物 學(xué)功能，因此在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)領(lǐng)域得到了深入的研究和廣泛的應(yīng)用。
[0003] 銀離子在早期就由于其優(yōu)異的抗菌殺菌性能被人們所廣泛關(guān)注，其在醫(yī)藥材料和 抗菌材料等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。用低濃度銀離子處理后的細(xì)胞沒有明顯的細(xì)胞聚 集、細(xì)胞變形、細(xì)胞溶解等的變化。由此可見少量的銀離子對(duì)人體沒有明顯的傷害作用，同 時(shí)銀具有很好的殺菌作用。納米銀是W納米技術(shù)為基礎(chǔ)研制而成的新型抗菌產(chǎn)品，比Ag + 具有更穩(wěn)定的物理化學(xué)特性，納米銀由于量子效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)，不易產(chǎn)生耐藥性，加速傷 口的愈合，在醫(yī)藥材料和抗菌材料等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 溫度敏感型水凝膠是指隨著外界溫度的變化而產(chǎn)生刺激響應(yīng)性的智能材料。溫度 敏感型水凝膠結(jié)構(gòu)中具有一定比例的親水和疏水基團(tuán)，溫度的變化可W影響運(yùn)些基團(tuán)的疏 水作用和大分子鏈間的氨鍵作用，從而影響其形態(tài)變化。最常見的溫敏性水凝膠是聚N- 異丙基丙締酷胺水凝膠，運(yùn)種水凝膠的體系內(nèi)既有疏水基團(tuán)又有親水基團(tuán)，運(yùn)些基團(tuán)可W 在分子內(nèi)與水分子作用，在分子外也與水分子發(fā)生作用。與合成高分子相比，天然高分子凝 膠具有低毒性、生物相容性和可降解性等優(yōu)點(diǎn)。溫敏性殼聚糖水凝膠可根據(jù)溫度變化處于 不同物理形態(tài)。常溫下為液態(tài)，進(jìn)入人體組織后，在體溫作用下凝膠化而固定在局部組織 中。殼聚糖只在酸性環(huán)境下保持溶液狀態(tài)，當(dāng)pH值升高到6.2時(shí)，殼聚糖溶液開始出現(xiàn)沉 淀，若加入甘油憐酸鋼，該系統(tǒng)可在中性條件下保持溶液狀態(tài)，該系統(tǒng)具有溫度敏感性，在 體溫W下保持溶液狀態(tài)，溫度升高到體溫時(shí)可形成凝膠。它具有生物相容性好、體內(nèi)降解時(shí) 間及凝固時(shí)間可調(diào)節(jié)控制等優(yōu)點(diǎn)，在工程等領(lǐng)生物工程、醫(yī)藥領(lǐng)域已經(jīng)得到廣泛關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠及其制備方法，該溫敏水 凝膠對(duì)W大腸桿菌為代表的革蘭氏陰性菌，W金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽(yáng)性菌，對(duì) W白色念珠菌為代表的真菌，均具有較好的抑菌作用，抗菌譜廣、無細(xì)胞毒性，高效低毒;在 藥力滲透、透氣性、促進(jìn)傷口愈合等方面具有顯著優(yōu)勢(shì)，且制備成本低、制備工藝簡(jiǎn)單等。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案是： 一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成:殼聚糖124-140;硝 酸銀0.06-0.08;甘油憐酸納7-11;絲素蛋白42-60;丙締酸醋28-36，碳酸鋒17-21;賴氨酸8- 16;十大功勞根12-20;荊芥穗9-13;按葉油12-18;兒茶7-13;細(xì)辛5-12;防風(fēng)6-9。
[0007] 優(yōu)選的方案是:殼聚糖130-134;硝酸銀0.065-0.075;甘油憐酸納8-10;絲素蛋白 48-54;丙締酸醋30-34,碳酸鋒18-20;賴氨酸10-14;十大功勞根14-18;荊芥穗10-12;按葉 油14-16;兒茶9-11;細(xì)辛7-10;防風(fēng)7-8。
[0008] 更加優(yōu)選的：殼聚糖132;硝酸銀0.07;甘油憐酸納9;絲素蛋白50;丙締酸醋32，碳 酸鋒19;賴氨酸12;十大功勞根16;荊芥穗11;按葉油15;兒茶10;細(xì)辛8.5;防風(fēng)7.5。
[0009] -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法，步驟如下： (1) 將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燭 15-35分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥 面，浸泡1-2小時(shí)(優(yōu)選浸泡1.3-1.7小時(shí)），然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮26-44分鐘， 過濾，濾液減壓濃縮至原體積的1/5,加入按葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨1-3小時(shí)(優(yōu)選充分研磨1.5-2.5小時(shí)）， 紫外光照射4-8小時(shí)，然后加入碳酸鋒混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用0.05-0.15mol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì) 量濃度為1.5%-2.5%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液(優(yōu)選制成質(zhì)量濃度為1.7%-2.3%的殼聚糖 納米銀復(fù)合物溶液），向該溶液中加入步驟(1)所得中藥濃縮液，混勻，得混合溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油憐酸鋼、丙締酸醋和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攬拌20-50分鐘(優(yōu)選于室溫下機(jī)械攬拌30-40分鐘），然后經(jīng)抑調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)抑至6.2-7.0; 巧)將(4)所得的溶液放入35-38Γ恒溫水浴鍋中（優(yōu)選放入36-37Γ恒溫水浴鍋中），3- 6分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的膠體溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。
[0010] 上述溫敏水凝膠的制備方法，優(yōu)選的方案是，步驟(1)隔水燭20-30分鐘(優(yōu)選隔水 燭25分鐘）。
[0011] 上述溫敏水凝膠的制備方法，優(yōu)選的方案是，步驟(1)每次各煎煮30-40分鐘(優(yōu)選 每次各煎煮35分鐘）。
[0012] 上述溫敏水凝膠的制備方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)紫外光照射5-7小時(shí)(優(yōu)選紫 外光照射6小時(shí)）。
[0013] 上述溫敏水凝膠的制備方法，優(yōu)選的方案是，步驟(3)用0.08-0.12mol/L的醋酸水 溶液溶解(優(yōu)選用0.1mol/L的醋酸水溶液溶解）。
[0014] 上述溫敏水凝膠的制備方法，優(yōu)選的方案是，步驟(4)所述pH調(diào)節(jié)劑為憐酸氨二 鋼。
[0015] 上述溫敏水凝膠的制備方法，優(yōu)選的方案是，步驟(4)調(diào)節(jié)抑至6.4-6.8(優(yōu)選調(diào)節(jié) 抑至6.6)。
[0016] 各原料的藥理功效或理化性質(zhì)分別為： 殼聚糖:殼聚糖是甲殼素脫N-乙酷基的產(chǎn)物，一般而言，N-乙酷基脫去55%W上的就可 稱之為殼聚糖，或者說，能在1%乙酸或1%鹽酸中溶解1%的脫乙酷甲殼素，運(yùn)種脫乙酷甲殼素 被稱之為殼聚糖。生理活性：1、控制膽固醇;2、抑制細(xì)菌活性:殼聚糖在弱酸溶劑中易于溶 解，特別值得指出的是溶解后的溶液中含有氨基(NH2+)，運(yùn)些氨基通過結(jié)合負(fù)電子來抑制細(xì) 菌。殼聚糖的抑制細(xì)菌活性，使其在醫(yī)藥、紡織和食品等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。3、預(yù)防和控 制高血壓;4、吸附和排泄重金屬;5、免疫效果:殼聚糖具有更高的蛋白吸附能力;在降解酶 (溶解酵素)的作用下，殼聚糖具降解性;殼聚糖很容易加工成線，適合做成線狀或片狀的醫(yī) 用材料;殼聚糖具有親和力和溶解性，適用于生產(chǎn)各類衍生物；殼聚糖具有更高的化學(xué)活 性;殼聚糖的持水性高;在血清中，殼聚糖易降解吸收;殼聚糖具有更高的生物降解性;殼聚 糖表現(xiàn)出有選擇性的高度抑制口腔鏈球菌生長(zhǎng)的作用，同時(shí)并不影響其他有益細(xì)菌的生 長(zhǎng)。
[0017] 硝酸銀:無色透明斜方晶系片狀晶體，易溶于水和氨水，溶于乙酸和甘油，微溶于 無水乙醇，幾乎不溶于濃硝酸。其水溶液呈弱酸性。硝酸銀溶液由于含有大量銀離子，故氧 化性較強(qiáng)，并有一定腐蝕性，醫(yī)學(xué)上用于腐蝕增生的肉芽組織，稀溶液用于眼部感染的殺菌 劑。烙化后為淺黃色液體，固化后仍為白色。用途:分析化學(xué)用于沉淀氯離子，工作基準(zhǔn)的硝 酸銀用于標(biāo)定氯化鋼溶液。無機(jī)工業(yè)用于制造其他銀鹽。電子工業(yè)用于制造導(dǎo)電粘合劑、新 型氣體凈化劑、A8X分子篩、鍛銀均壓服和帶電作業(yè)的手套等。感光工業(yè)用于制造電影膠片、 X光照相底片和照相膠片等的感光材料。電鍛工業(yè)用于電子元件和其他工藝品的鍛銀，也大 量用作鏡子和保溫瓶膽的鍛銀材料。電池工業(yè)用于生產(chǎn)銀鋒電池。醫(yī)藥上用作殺菌劑、腐蝕 劑。日化工業(yè)用于染毛發(fā)等。分析化學(xué)中用于測(cè)定氯、漠、艦氯化物和硫氯酸鹽。
[0018] 甘油憐酸納:為無色結(jié)晶或白色結(jié)晶狀粉末;無臭，味咸。本品在水中易溶，在乙醇 或丙酬中不溶。單純的殼聚糖只在酸性環(huán)境下保持溶液狀態(tài)，當(dāng)pH值升高到6.2時(shí)，殼聚糖 溶液開始出現(xiàn)沉淀，但在弱堿甘油憐酸鋼參與下，該系統(tǒng)可在中性條件下保持穩(wěn)定的溶液 狀態(tài)，運(yùn)為該系統(tǒng)加載蛋白質(zhì)類的藥物甚至活的細(xì)胞提供了便利條件。最后是該系統(tǒng)具有 溫敏特性，在室溫W下呈溶液狀態(tài)，溫度升高到體溫時(shí)可固化形成凝膠，從而可W緩釋加載 藥物的效果。
[0019] 絲素蛋白：是從蠶絲中提取的天然高分子纖維蛋白，含量約占蠶絲的70%~80%，含 有18種氨基酸，其中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和絲氨酸(Ser)約占總組成的80%W上。絲素 本身具有良好的機(jī)械性能和理化性質(zhì)，如良好的柔初性和抗拉伸強(qiáng)度、透氣透濕性、緩釋性 等，而且經(jīng)過不同處理可W得到不同的形態(tài)，如纖維、溶液、粉、膜W及凝膠等。絲素蛋白具 有很好的生物相容性，能制備成膜、凝膠、微膠囊等多種形態(tài)的材料，由于它獨(dú)特的理化性 能，絲素蛋白材料在生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域被廣泛的研究，如固定化酶材料、細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)、藥 物緩釋劑、人工器官等。
[0020] 丙締酸醋：純品為白色針狀結(jié)晶。難溶于水和一般有機(jī)溶劑，能溶于熱乙醇中，稍 溶于熱水中，易溶于稀酸、稀堿水溶液。在酸堿中穩(wěn)定。丙締酸類的聚合物具有一系列共同 的特點(diǎn)，透明、低毒，易于配制，廣泛的黏接性，耐水性，耐久性。使丙締酸樹脂在醫(yī)用黏合劑 中得到廠泛的應(yīng)用。特性:①安全、可靠、無毒性、去Ξ致(致癌、致崎、致突變）;②具有良好 的生物相容性，不妨礙人體組織的自身愈合;③無菌，且可在一定時(shí)期內(nèi)保持無菌;④在有 血液和組織液的條件下可W使用;⑤在常溫、常壓下可W實(shí)現(xiàn)快速黏合;⑥具有良好的黏合 強(qiáng)度及持久性，黏合部分具有一定的彈性和初性;⑦在使用過程中對(duì)人體組織無刺激性;⑧ 具有良好的使用狀態(tài)并易于保存。
[0021] 碳酸鋒：白色細(xì)微無定形粉末。無臭、無味。相對(duì)密度4.42-4.45。不溶于水和醇。微 溶于氨。能溶于稀酸和氨氧化鋼中。
[0022] 賴氨酸:賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提 高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。作用：1.提高智力、促進(jìn)生長(zhǎng)、增強(qiáng) 體質(zhì)。2.增進(jìn)食欲、改善營(yíng)養(yǎng)不良狀況。3.改善失眠，提高記憶力。4.幫助產(chǎn)生抗體、激素和 酶，提高免疫力、增加血色素。5 .幫助巧的吸收，治療防止骨質(zhì)疏松癥6.降低血中甘油Ξ醋 的水平，預(yù)防屯、腦血管疾病的產(chǎn)生。
[0023] 十大功勞根:基源:為小築科十大功勞屬植物闊葉十大功勞、細(xì)葉十大功勞的根。 成分:1。闊葉十大功勞根含生物堿、小築堿。2。華南十大功勞根含生物堿、異粉防己堿、小築 堿、掌葉防己堿、藥根堿及小築胺。藥性:《四川中藥志》I960年版："性寒，味苦。"功用主治： 清熱燥濕，解毒消腫。主治濕熱頻疾，腹瀉，黃痘，肺瘦咳血，咽喉痛，牙痛，目赤腫痛，跌打損 傷，瘡瘍，濕疹，燙傷等。宜忌:脾胃虛寒者慎服。
[0024] 荊芥穗:基源:本品為唇形科植物荊芥的干燥花穗。性味：辛，微溫。歸經(jīng)：歸肺、肝 經(jīng)。功效:解表散風(fēng)，透疹。主治:解表散風(fēng)，透疹。用于感冒，頭痛，麻疹，風(fēng)疹，瘡瘍初起。炒 炭治便血，崩漏，產(chǎn)后血暈。
[0025] 按葉油:無色或微黃色液體。呈特有清涼尖刺按葉香氣并帶幾分精腦氣味，帶些藥 氣，有辣口清涼感，香氣強(qiáng)烈而不持久。有一定防霉及殺菌防腐作用。幾乎不溶于水，溶于乙 醇、無水乙醇、油和脂肪中。用途:按葉油具有殺菌作用，大量用于醫(yī)藥制品，也可作止咳糖 漿、膠姆糖、含漱劑、牙膏、空氣清凈劑等的賦香劑。
[0026] 兒茶:基源:本品為豆科植物兒茶的去由枝、干的干燥煎膏。冬季采收技、干，除去 外皮，砍成大塊，加水煎煮，濃縮，干燥。性狀:本品呈方形或不規(guī)則塊狀，大小不一。表面棟 褐色或黑褐色，光滑而稍有光澤。質(zhì)硬，易碎，斷面不整齊，具光澤.有細(xì)孔，遇潮有蝕性。性 味:苦、澀，微寒。歸經(jīng)：歸肺經(jīng)。功效:收濕生肌斂瘡。主治：用于潰瘍不斂，濕疹，口瘡，跌撲 傷痛.外傷出血。藥理作用：1。保肝、利膽作用；2。抗病原微生物作用；3。抑制腸道運(yùn)動(dòng)及抗 腹瀉作用;4。降血糖作用。
[0027] 細(xì)辛:基源:本品為馬兜鈴科植物北細(xì)辛、漢城細(xì)辛或華細(xì)辛的根及根莖。化學(xué)成 份:迂細(xì)辛含揮發(fā)油約3%，揮發(fā)油的主要成分是甲基下香油酪，其他有黃精酸、β-羨締、優(yōu) 葛縷酬、酪性物質(zhì)等。性味：辛，溫。歸經(jīng)：歸屯、、肺、腎經(jīng)。藥理作用：①局部麻醉作用，②解 熱、鎮(zhèn)痛作用，③抑菌作用。功效：桂風(fēng)散寒，通資止痛，溫肺化飲。主治：用于風(fēng)寒感冒，頭 痛，牙痛。鼻塞鼻淵，風(fēng)濕搏痛，疲飲Ρ而咳。
[0028] 防風(fēng):基源:本品為傘形科植物防風(fēng)的干燥根。性狀:本品呈長(zhǎng)圓錐形或長(zhǎng)圓柱形， 下部漸細(xì)，有的略彎曲。面灰棟色，粗糖、有縱皺紋、多數(shù)橫長(zhǎng)皮孔樣突起及點(diǎn)狀的細(xì)根痕。 根頭部有明顯密集的環(huán)紋，有的環(huán)紋上殘存棟褐色毛狀葉基?；瘜W(xué)成份:防風(fēng)含揮發(fā)油、甘 露醇、苦味武等。性味:辛、甘.溫。歸經(jīng):歸膀脫、肝、脾經(jīng)。功效:解表桂風(fēng)，勝濕，止疫。主治： 用于感冒頭痛.風(fēng)濕搏痛，風(fēng)疹痊癢，破傷風(fēng)。
[0029] 本發(fā)明提供的一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠組方科學(xué)，制備方法簡(jiǎn)單。除此之 夕h本發(fā)明的優(yōu)良效果還表現(xiàn)在： 7本發(fā)明W固相法制成殼聚糖納米銀復(fù)合物，并加載多味中藥原料，制備具有抗炎殺 菌功效的納米銀溫敏水凝膠，在室溫條件下為可流動(dòng)膠體溶液，溫度升高到體溫時(shí)可固化 形成凝膠，從而可W緩釋加載藥物的效果； 本發(fā)明溫敏水凝膠不僅具備納米銀抗菌性，還具備殼聚糖促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，減少瘤痕 生成的作用;能快速有效的促進(jìn)創(chuàng)面愈合、止血、止痛、抗炎殺菌； ?5本發(fā)明溫敏水凝膠具有較好的抑菌作用，抗菌譜廣、無細(xì)胞毒性，高效低毒;均勻噴 灑后可在創(chuàng)傷表面形成一層凝膠薄膜，抑菌作用持久、透氣性和吸濕性良好。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面結(jié)合實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。
[0031] 實(shí)施例1 一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成(45g/ 份）：殼聚糖124份;硝酸銀0.06份;甘油憐酸納7份;絲素蛋白42份;丙締酸醋28,碳酸鋒17 份;賴氨酸8份;十大功勞根12份;荊芥穗9份;按葉油12份;兒茶7份;細(xì)辛5份;防風(fēng)6份。
[0032] -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法是： (1) 將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燭 15分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥面， 浸泡1小時(shí)，然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮26分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的1/ 5，加入按葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨1小時(shí)，紫外光照射4小時(shí)，然后加入碳酸 鋒混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用0.05mol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì)量濃度 為1.5%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液，向該溶液中加入步驟（1)所得中藥濃縮液，混勻，得混 合溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油憐酸鋼、丙締酸醋和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攬拌20分鐘，然后經(jīng)抑調(diào)節(jié)劑憐酸氨二鋼調(diào)節(jié)抑至6.2; 巧)將(4)所得的溶液放入35°C恒溫水浴鍋中，6分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的膠體 溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。
[0033] 實(shí)施例2 -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成(25g/ 份）:殼聚糖140份;硝酸銀0.08份;甘油憐酸納11份;絲素蛋白60份;丙締酸醋36,碳酸鋒21 份;賴氨酸16份;十大功勞根20份;荊芥穗13份;按葉油18份;兒茶13份;細(xì)辛12份;防風(fēng)9份。
[0034] -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法是： (1) 將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燭 35分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥面， 浸泡2小時(shí)，然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮44分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的1/ 5，加入按葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨3小時(shí)，紫外光照射8小時(shí)，然后加入碳酸 鋒混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用0.15mol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì)量濃度 為2.5%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液，向該溶液中加入步驟（1)所得中藥濃縮液，混勻，得混 合溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油憐酸鋼、丙締酸醋和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攬拌50分鐘，然后經(jīng)抑調(diào)節(jié)劑憐酸氨二鋼調(diào)節(jié)抑至7.0; 巧)將(4)所得的溶液放入38°C恒溫水浴鍋中，3分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的膠體 溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。
[0035] 實(shí)施例3 -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成(40g/ 份）:殼聚糖130份;硝酸銀0.065份;甘油憐酸納8份;絲素蛋白48份;丙締酸醋30,碳酸鋒18 份;賴氨酸10份;十大功勞根14份;荊芥穗10份;按葉油14份;兒茶9份;細(xì)辛7份;防風(fēng)7份。
[0036] -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法是： (1) 將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燭 20分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥面， 浸泡1.3小時(shí)，然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的 1 /5，加入按葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨1.5小時(shí)，紫外光照射5小時(shí)，然后加入碳 酸鋒混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用0.08mol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì)量濃度 為1.7%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液，向該溶液中加入步驟（1)所得中藥濃縮液，混勻，得混 合溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油憐酸鋼、丙締酸醋和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攬拌30分鐘，然后經(jīng)抑調(diào)節(jié)劑憐酸氨二鋼調(diào)節(jié)抑至6.4; 巧)將(4)所得的溶液放入36°C恒溫水浴鍋中，5分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的膠體 溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。
[0037] 實(shí)施例4 一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成(30g/ 份）:殼聚糖134份;硝酸銀0.075份;甘油憐酸納10份;絲素蛋白54份;丙締酸醋34,碳酸鋒20 份;賴氨酸14份;十大功勞根18份;荊芥穗12份;按葉油16份;兒茶11份;細(xì)辛10份;防風(fēng)8份。
[0038] -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法是： (1) 將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燭 30分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥面， 浸泡1.7小時(shí)，然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮40分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的 1 /5，加入按葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨2.5小時(shí)，紫外光照射7小時(shí)，然后加入碳 酸鋒混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用0.12mol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì)量濃度 為2.3%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液，向該溶液中加入步驟（1)所得中藥濃縮液，混勻，得混 合溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油憐酸鋼、丙締酸醋和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攬拌40分鐘，然后經(jīng)抑調(diào)節(jié)劑憐酸氨二鋼調(diào)節(jié)抑至6.8; 巧)將(4)所得的溶液放入37°C恒溫水浴鍋中，4分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的膠體 溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。
[0039] 實(shí)施例5 -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，取下列重量份的原料制備而成(35g/ 份）：殼聚糖132份;硝酸銀0.07份;甘油憐酸納9份;絲素蛋白50份;丙締酸醋32,碳酸鋒19 份;賴氨酸12份;十大功勞根16份;荊芥穗11份;按葉油15份;兒茶10份;細(xì)辛8.5份;防風(fēng)7.5 份。
[0040] -種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法是： (1)將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燭 25分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥面， 浸泡1.5小時(shí)，然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮35分鐘，過濾，濾液減壓濃縮至原體積的 1 /5，加入按葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨2小時(shí)，紫外光照射6小時(shí)，然后加入碳酸 鋒混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用O.lmol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì)量濃度 為2%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液，向該溶液中加入步驟（1)所得中藥濃縮液，混勻，得混合 溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油憐酸鋼、丙締酸醋和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攬拌35分鐘，然后經(jīng)抑調(diào)節(jié)劑憐酸氨二鋼調(diào)節(jié)抑至6.6; 巧)將(4)所得的溶液放入36.5°C恒溫水浴鍋中，4.5分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的 膠體溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。
[0041 ]試驗(yàn)例1本發(fā)明一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的抑菌作用試驗(yàn) 1試驗(yàn)用材料 測(cè)試樣品:A樣品：0.05%含納米銀的溫敏水凝膠;B樣品：0.025%含納米銀的溫敏水凝 膠;C樣品:0.01%含納米銀的溫敏水凝膠;D樣品:殼聚糖溫敏水凝膠。
[0042] 培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基、血清培養(yǎng)基。
[0043] 供試菌株：（1)細(xì)菌:革蘭氏染色陽(yáng)性菌化+):金黃色葡萄球菌臨床菌(聊城市中醫(yī) 醫(yī)院提供）、金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25923(聊城市人民醫(yī)院提供）。
[0044] 革蘭氏染色陰性菌（GO:大腸桿菌臨床菌株、肺炎克雷伯菌臨床菌株、陰溝腸桿 菌臨床菌株、肺炎鏈球菌臨床菌株、銅綠假單胞菌臨床菌株(均由聊城市中醫(yī)醫(yī)院提供）;大 腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922、銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853、流感嗜血桿菌臨床菌株(均 由聊城市人民醫(yī)院提供）。
[0045] (2)真菌：白色念珠菌（由聊城市中醫(yī)醫(yī)院提供）、紅色毛癖菌(購(gòu)置于上海北諾生 物科技有限公司）、絮狀表皮癖菌(購(gòu)置于上海豐壽生物科技有限公司）。
[0046] 2.實(shí)驗(yàn)方法 2.1各樣品對(duì)10種細(xì)菌的抑菌作用 將保存的各菌種分別進(jìn)行活化培養(yǎng)，長(zhǎng)出單菌落后，用接種環(huán)挑取少許菌體于裝有9ml 無菌生理鹽水的試管內(nèi)，振蕩均勻，分別制備1〇7 C化/ml的懸浮液。在無菌條件下，在90mm的 培養(yǎng)皿中加適量的培養(yǎng)基，凝固后加100微升菌液，涂布均勻，靜置20-30min。將制備的溫敏 水凝膠樣品分別做成直徑為0.4cm的圓形，放置在固體培養(yǎng)基上，同一培養(yǎng)皿上依次放置殼 聚糖溫敏、0.01%含納米銀的溫敏水凝膠、0.025%含納米銀的溫敏水凝膠、0.05%含納米銀的 溫敏水凝膠，重復(fù)6次，在37Γ的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;觀察樣品與培養(yǎng)基的接觸面有無細(xì) 菌生長(zhǎng)，并測(cè)量抑菌圈的大小，采用SPSS vll.5軟件統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)W均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S) 表不。
[0047] 2.2各樣品對(duì)巧巾真菌的抑菌作用 將保存的各菌種分別進(jìn)行活化培養(yǎng)，分別制備濃度為IX l〇6c化/ml的菌液，其它操作 同上，37Γ的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4她，觀察樣品與培養(yǎng)基的接觸面有無細(xì)菌生長(zhǎng)，測(cè)量抑菌 圈的大小。采用SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料W均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示。
[004引3結(jié)果與分析 3.1含納米銀溫敏水凝膠對(duì)10種細(xì)菌:大腸桿菌臨床菌株及其標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922、金 黃色葡萄球菌臨床菌株及其標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25923、銅綠假單胞菌臨床菌株及其標(biāo)準(zhǔn)菌株 ATCC27853、陰溝腸桿菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、產(chǎn)酸克雷伯菌抑菌圈直徑見表1。 [0049] 表1各樣品對(duì)10種細(xì)菌的接觸抑菌抑菌圈直徑(單位:cm;樣品直徑0.4cm)
由表1數(shù)據(jù)可知，含納米銀的溫敏水凝膠及殼聚糖溫敏水凝膠對(duì)實(shí)驗(yàn)所用 10種細(xì)菌均具有較好的接觸抑菌作用，樣品與培養(yǎng)基的接觸面均無細(xì)菌生長(zhǎng)。隨著納 米銀含量的增加，抑菌效果增強(qiáng)，說明納米銀增強(qiáng)了殼聚糖溫敏水凝膠的抑菌作用。
[0化0] 3.2各樣品對(duì)Ξ種真菌：白色念珠菌、紅色毛癖菌、絮狀表皮癖菌的接觸抑菌抑菌 圈直徑見表2。
[0051 ]表2各樣品對(duì)Ξ種真菌的接觸抑菌抑菌圈直徑(單位:cm;樣品直徑0.4cm)
含納米銀的溫敏水凝膠及殼聚糖溫敏水凝膠對(duì)實(shí)驗(yàn)所用Ξ種真菌均具有較好的接觸 抑菌作用，凝膠樣品與培養(yǎng)基的接觸面均無真菌生長(zhǎng)，隨著納米銀含量的增加，抑菌作用增 強(qiáng)。含納米銀的溫敏水凝膠對(duì)絮狀表皮癖的的抑菌作用最明顯，其次是紅色毛癖菌，對(duì)白色 念珠菌的抑菌作用明顯弱于前兩種真菌。
[0化2] 4.結(jié)果與討論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:含納米銀的溫敏水凝膠對(duì)W大腸桿菌為代表的革蘭氏陰性菌，對(duì)W金 黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽(yáng)性菌，對(duì)W白色念珠菌為代表的真菌，均具有較好的接觸 抑菌作用。含納米銀溫敏水凝膠的抑菌作用優(yōu)于殼聚糖溫敏水凝膠的抑菌作用;對(duì)細(xì)菌的 抑菌作用優(yōu)于對(duì)真菌的抑菌作用;隨著納米銀含量的增加，抑菌作用增強(qiáng)，納米銀增強(qiáng)了殼 聚糖溫敏水凝膠的抑菌作用。
[0053]試驗(yàn)例2:本發(fā)明所得一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠(實(shí)施例5)的細(xì)胞相容性試 驗(yàn) 1樣品制備 取本發(fā)明所得溫敏水凝膠，按照水凝膠樣品：細(xì)胞培養(yǎng)液=0.2 g:l mL的比例浸泡，37 °C浸泡48 h得浸提液，濾膜過濾除菌，DMEM培養(yǎng)液依次稀釋，獲得稀釋5倍、10倍、20倍、50 倍、100倍的水凝膠浸提液。
[0化4] 2、試驗(yàn)方法 通過Μ?Τ法測(cè)定不同稀釋倍數(shù)的水凝膠浸提液對(duì)NIH-3T3細(xì)胞的毒性。
[0055] 方法：于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)NIH-3T3細(xì)胞長(zhǎng)至80%的狀態(tài)，棄掉舊的培養(yǎng)液，用37 °C的 PBS溶液沖洗2兩遍，加入1ml 0.25%的膜酶，輕輕晃動(dòng)，把培養(yǎng)皿置于倒置顯微鏡下觀察細(xì) 胞的形態(tài)，等大部分細(xì)胞趨于變圓時(shí)，移至潔凈工作臺(tái)上，吸出膜酶，加入2ml 37°C的DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化，制成細(xì)胞懸液。按1:4比例傳入新培養(yǎng)皿中，在37°C，5%0)2的飽和濕 度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞按4000個(gè)/孔種植到96孔板，在37 °C，5% 0)2的細(xì) 胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞長(zhǎng)到80%W上，用浸提4她不同稀釋倍數(shù)的浸提液處理后，棄去細(xì)胞培 養(yǎng)液，固定1 h，用SRB染色10 min,然后用乙酸沖洗，驚干，每孔加入100微升化is堿溶解， 在492nm處測(cè)吸光值。細(xì)胞存活率(％)=(處理組0D值/對(duì)照組0D值）X 100%。結(jié)果如表3所示。
[0056] 表3水凝膠浸提液48h毒性測(cè)試結(jié)果
毒性的判定標(biāo)準(zhǔn):〇級(jí)和I級(jí)為合格，Π 級(jí)結(jié)合形態(tài)分析綜合評(píng)價(jià)，虹~IV級(jí)為不合格。 由表3數(shù)據(jù)可W看出不同濃度的水凝膠浸提液對(duì)NIH-3T3細(xì)胞RGR均在75 % W上，毒性等級(jí) 為0和I級(jí)，表明所有樣品浸提液沒有明顯細(xì)胞毒性，具有良好的細(xì)胞相容性。
[0057] 最后應(yīng)說明的是，實(shí)施例只是本發(fā)明最優(yōu)的【具體實(shí)施方式】而已，并不用于限制本 發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依 然可W對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替 換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明 的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，其特征在于，取下列重量份的原料制備而成:殼聚 糖124-140;硝酸銀0.06-0.08;甘油磷酸納7-11;絲素蛋白42-60;丙烯酸酯28-36，碳酸鋅 17-21;賴氨酸8-16;十大功勞根12-20;荊芥穗9-13;桉葉油12-18;兒茶7-13;細(xì)辛5-12;防 風(fēng) 6_9 〇2. 如權(quán)利要求1所述的一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，其特征在于，取下列重量份的 原料制備而成:殼聚糖130-134;硝酸銀0.065-0.075;甘油磷酸納8-10;絲素蛋白48-54;丙 烯酸酯30-34,碳酸鋅18-20;賴氨酸10-14;十大功勞根14-18;荊芥穗10-12;桉葉油14-16; 兒茶9-11;細(xì)辛7-10;防風(fēng)7-8。3. 如權(quán)利要求1所述的一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠，其特征在于，取下列重量份的 原料制備而成:殼聚糖132;硝酸銀0.07;甘油磷酸納9;絲素蛋白50;丙烯酸酯32,碳酸鋅19; 賴氨酸12;十大功勞根16;荊芥穗11;桉葉油15;兒茶10;細(xì)辛8.5;防風(fēng)7.5。4. 如權(quán)利要求1-3任一所述的一種納米銀抗炎殺菌溫敏水凝膠的制備方法，其特征在 于，步驟如下： (1) 將十大功勞根加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的黃酒和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的姜汁拌勻，密閉，隔水燉 15-35分鐘，至顏色變深，取出，與荊芥穗、兒茶、細(xì)辛和防風(fēng)一同置于煎鍋內(nèi)，加冷水沒過藥 面，浸泡1-2小時(shí)(優(yōu)選浸泡1.3-1.7小時(shí)），然后文火加熱煎煮兩次，每次各煎煮26-44分鐘， 過濾，濾液減壓濃縮至原體積的1 /5，加入桉葉油，混勻，得中藥濃縮液，備用； (2) 將殼聚糖、硝酸銀和谷氨酸混合，充分研磨1-3小時(shí)(優(yōu)選充分研磨1.5-2.5小時(shí)）， 紫外光照射4-8小時(shí)，然后加入碳酸鋅混勻，得殼聚糖納米銀復(fù)合物，備用； (3) 將步驟(2)所得殼聚糖納米銀復(fù)合物用0.05-0.15mol/L的醋酸水溶液溶解制成質(zhì) 量濃度為1.5%-2.5%的殼聚糖納米銀復(fù)合物溶液(優(yōu)選制成質(zhì)量濃度為1.7%-2.3%的殼聚糖 納米銀復(fù)合物溶液），向該溶液中加入步驟(1)所得中藥濃縮液，混勻，得混合溶液，備用； (4) 向步驟(3)所得混合溶液中加入甘油磷酸鈉、丙烯酸酯和絲素蛋白，于室溫下機(jī)械 攪拌20-50分鐘(優(yōu)選于室溫下機(jī)械攪拌30-40分鐘），然后經(jīng)pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH至6.2-7.0; (5) 將(4)所得的溶液放入35-38Γ恒溫水浴鍋中（優(yōu)選放入36-37Γ恒溫水浴鍋中），3_ 6分鐘后即發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由可流動(dòng)的膠體溶液轉(zhuǎn)變?yōu)椴涣鲃?dòng)的水凝膠。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的溫敏水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(1)隔水燉20-30分 鐘(優(yōu)選隔水燉25分鐘）。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的溫敏水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟（1)每次各煎煮30-40分鐘(優(yōu)選每次各煎煮35分鐘）。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的溫敏水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(2)紫外光照射5-7 小時(shí)(優(yōu)選紫外光照射6小時(shí)）。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的溫敏水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟（3)用0.08- 0.12mol/L的醋酸水溶液溶解(優(yōu)選用0. lmol/L的醋酸水溶液溶解）。9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的溫敏水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述pH調(diào)節(jié)劑 為磷酸氫二鈉。10. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的溫敏水凝膠的制備方法，其特征在于，步驟(4)調(diào)節(jié)pH至6.4-6.8(優(yōu)選調(diào)節(jié)pH至6.6)。
【文檔編號(hào)】A61K31/722GK105878394SQ201610220822
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月11日
【發(fā)明人】桑青, 秦東風(fēng), 李高青, 崔凱
【申請(qǐng)人】聊城大學(xué)