Il-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑及其制備方法和應(yīng)用。該對(duì)比劑為包封釓螯合物的脂質(zhì)體，且脂質(zhì)體表面經(jīng)過IL-13修飾。其制備方法是先制備脂質(zhì)體薄膜，然后將釓螯合物加入到含有脂質(zhì)體薄膜的容器里，超聲波的協(xié)助下，脂質(zhì)體薄膜將釓螯合物包裹以形成含釓螯合物的多室脂質(zhì)體；包封了釓螯合物的多室脂質(zhì)體表面經(jīng)硫醇化的IL-13修飾。本發(fā)明的對(duì)比劑可以穿過血腦屏障，傳遞到腫瘤病變部位并與之特異性結(jié)合。所以此對(duì)比劑具備靶向性，能夠檢測(cè)到小于2mm腫瘤病灶，可用于腫瘤的早期檢測(cè)。
【專利說明】
IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，用于腫瘤診斷的技術(shù)主要包括計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)、正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描(PET)、光學(xué)成像以及超聲成像等。因磁共振成像(MRI)沒有電離輻射，并可借助對(duì)比劑對(duì)深部組織進(jìn)行較準(zhǔn)確的定位、定量分析等特性，已成為臨床上常用的檢測(cè)和診斷手段之一。
[0003]腸癌，也稱為結(jié)腸直腸癌，其發(fā)生在結(jié)腸或直腸，在美國(guó)屬診斷到的第三種最為常見癌癥，并屬于癌癥致死的第三大癌癥。其危害性在于，一旦晚期腸癌發(fā)生肝轉(zhuǎn)移時(shí)，部分肝切除僅有25%存活率，再發(fā)率卻有75%，而這75%再發(fā)率大多數(shù)最終導(dǎo)致死亡，在這75%再發(fā)率中，約有50%的轉(zhuǎn)移會(huì)轉(zhuǎn)移到肝以外的組織。惡性腸癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞里有IL-13a 2受體高度表達(dá)，并在腸癌的轉(zhuǎn)移過程中粘連、迀移、進(jìn)住，轉(zhuǎn)移性移殖期間扮演了一個(gè)重要的角色，且導(dǎo)致晚期腸癌預(yù)后難以理想。
[0004]腎上腺皮質(zhì)癌相對(duì)罕見，但它是一種具有侵襲性而暫無有效治療方法的惡性腫瘤。研究結(jié)果顯示腎上腺皮質(zhì)癌具有IL-13 α 2受體高度表達(dá)，IL-13 α 2起到調(diào)節(jié)惡性腎上腺皮質(zhì)癌腫瘤細(xì)胞進(jìn)住、再生繁殖。腎上腺皮質(zhì)癌IL-13 α 2受體高度表達(dá)是檢測(cè)和化療腎上腺皮質(zhì)癌的一個(gè)新穎的靶向目標(biāo)。
[0005]腦膠質(zhì)瘤是一種生長(zhǎng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)性惡性腫瘤，其對(duì)腦組織具有很強(qiáng)的侵襲性，并可細(xì)分為星形細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、髓母細(xì)胞瘤和多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。腦膠質(zhì)瘤的常規(guī)治療方式是手術(shù)后追加放療或化療，非常遺憾的是常規(guī)治療方式之預(yù)后極差，平均生存率僅約14個(gè)月。造成如此低生存率的主要原因之一是目前我們?nèi)狈σ环N靈敏的早期檢測(cè)手段，常規(guī)檢測(cè)手段無法檢出小于2_的病灶，當(dāng)腦癌小于2_時(shí)，常規(guī)檢測(cè)手段失靈，這是由目前臨床上廣泛應(yīng)用磁共振成像對(duì)比劑(如釓噴酸葡胺等含釓螯合物)的機(jī)制所決定的。磁共振釓噴酸葡胺僅能夠檢測(cè)到大于2mm以上的腫癌，其往往已屬于腫瘤晚期。腫瘤晚期血腦屏障受損，釓噴酸葡胺可以通過受損的血腦屏障而進(jìn)入腫瘤的生長(zhǎng)部位并大量累積于此，使核磁共振儀能捕捉到釓噴酸葡胺所產(chǎn)生的信號(hào)變化。而釓噴酸葡胺的局限性在于腫瘤小于2_時(shí)的早期病變時(shí)血腦屏障相對(duì)完整，釓噴酸葡胺受限于血腦屏障從而無法累積于腫瘤病灶部位，因而無法提供核磁共振成像所需信號(hào)變化，致使核磁共振儀無法檢測(cè)到早期腫瘤及浸潤(rùn)性病灶。同時(shí)，常規(guī)對(duì)比劑不能與腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生特異性結(jié)合，即屬非標(biāo)靶性對(duì)比劑，無法準(zhǔn)確區(qū)分病灶部位與正常組織，導(dǎo)致病灶在手術(shù)時(shí)無法被完全切除，繼而復(fù)發(fā)頻生。因此，腫瘤早期的浸潤(rùn)性病灶診斷，尤其是小于2_以下癌病灶部位的有效檢出，對(duì)提高腫瘤治療效果或根除腫瘤都起著關(guān)鍵作用。
[0006]但是常規(guī)磁共振成像(MRI)即使使用對(duì)比劑也無法檢測(cè)到早期腦腫瘤。因此，開發(fā)一種可通過血腦屏障并與腫瘤組織特異性結(jié)合、能檢出早期侵襲性腫瘤組織的新型對(duì)比劑具有非常重要的臨床意義。
[0007]許多腫瘤在其細(xì)胞表面高度表達(dá)白細(xì)胞介素13 α 2受體(IL_13Ra 2)，例如上述的腦膠質(zhì)瘤和直腸癌轉(zhuǎn)移所行成的肝癌等都具有IL-13 a 2高度表達(dá)。
[0008]為了提高釓(Gd)造影劑的靶向性，研究人員利用腫瘤細(xì)胞表面IL_13Ra 2高度表達(dá)的特性，讓腫瘤細(xì)胞表面IL-13Ra 2與載有藥物的配位體IL-13相結(jié)合。當(dāng)腫瘤細(xì)胞上的IL-13Ra 2與載有藥物的配位體IL-13發(fā)生特異性結(jié)合后，脂質(zhì)體所載之載體釓被遞送至受體IL_13Ra 2高度表達(dá)的腫瘤細(xì)胞部位，從而達(dá)到標(biāo)靶的作用。
[0009]中國(guó)專利201110312974.X公開了一種基于生物素化單克隆抗體及鏈霉親和素結(jié)合包載釓的空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體兩種復(fù)合物的靶向膠質(zhì)瘤磁共振對(duì)比劑；所述單克隆抗體為Endoglin (⑶105)，用于腦膠質(zhì)瘤新生血管的檢測(cè)。該對(duì)比劑使用時(shí)分兩步注射，即需先給予生物素化單克隆抗體，再給予鏈霉親和素結(jié)合包載釓的空間穩(wěn)定免疫脂質(zhì)體。
[0010]中國(guó)專利201410252588.X公開了一種由核酸適配體類似物和包載釓的脂質(zhì)體構(gòu)成的磁共振成像對(duì)比劑，所述核酸適配體類似物選自巰基修飾的、氨基修飾的或位點(diǎn)修飾的 GB1-10、AS1411、A10、MUCl、sgc8、sgc3、sgd3、KHlCl、KD05、S6、AGR0100、A30 和 STRG2 中的一種或多種，用于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，其中GB1-10可用于腦膠質(zhì)瘤的診斷。但是在脂質(zhì)體制備過程中擠出過膜多達(dá)20次。
[0011]中國(guó)專利201010286508.4公開了一種以多肽為靶向頭基，樹枝狀高分子材料為基礎(chǔ)高分子載體，表面連接小分子磁共振成像對(duì)比劑，制成腫瘤靶向磁共振成像對(duì)比劑，即利用可特異性結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面Tf受體的多肽T7肽修飾高分子材料，連接磁共振成像對(duì)比劑制成腫瘤靶向磁共振造影劑。
[0012]中國(guó)專利200910196477.0公開了一種納米脂質(zhì)體化和靶向多肽修飾的釓對(duì)比劑，達(dá)到腫瘤識(shí)別和造影劑延緩，靶向多肽修飾選自⑶10多肽分子、F56多肽、K237多肽分子。所述的對(duì)比劑粒徑在20?200nm，粒度分布寬。
[0013]中國(guó)專利201080026113.9公開了一種普魯蘭多糖和DTPA( 二亞乙基三胺五乙酸二酐)通過酯鍵形成的普魯蘭多糖-DTPA接合體中釓配位結(jié)合于DTPA而形成的釓造影劑，用于肝臟MRI影像。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]為了提高檢測(cè)精度，解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題，本發(fā)明提供了一種IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑。
[0015]本發(fā)明提供的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑，為包封釓螯合物的脂質(zhì)體，且脂質(zhì)體表面經(jīng)過IL-13修飾。
[0016]白細(xì)胞介素IL-13修飾了脂質(zhì)體表面，而脂質(zhì)體又包封了釓螯合物。白細(xì)胞介素IL-13具有高度均質(zhì)性，可與腫瘤病變部位過度表達(dá)的白細(xì)胞介素13Ra 2受體特異性結(jié)合。例如，對(duì)于惡性腦腫瘤來說，每一個(gè)惡性腦腫瘤細(xì)胞約有16000?22000個(gè)IL-13Ra 2受體結(jié)合位點(diǎn)，故該磁共振成像對(duì)比劑對(duì)高度表達(dá)白細(xì)胞介素13Ra 2受體的癌細(xì)胞具有很強(qiáng)的親和力。
[0017]優(yōu)選地，上述IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑中，所述釓螯合物為釓噴酸葡胺或釓特酸葡胺。
[0018]釓噴酸葡胺(Gd-DATP)，又名二乙烯三胺五醋酸釓雙葡甲胺，是目前最為廣泛使用的對(duì)比劑。釓特酸葡胺(Gd-DOTA)也是比較常用的釓對(duì)比劑，同樣適用于本發(fā)明。
[0019]優(yōu)選地，上述IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑中，所述脂質(zhì)體的制備原料包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)、膽固醇(CHOL)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物(DSPE-PEG-Mal)。這幾種材料混合可以制成多室脂質(zhì)體，可有效包封釓螯合物，并順利穿過血腦屏障到達(dá)病灶。
[0020]優(yōu)選地，上述IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑中，二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇、膽固醇和二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物的摩爾比為10:5:5:0.5。這一用量配比的材料制備的脂質(zhì)體，包封率高、成品率高，且被用來抑制腦膠質(zhì)癌療效理想。
[0021]本發(fā)明還提供一種以上任一所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑的制備方法，步驟如下:
[0022](I)將二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇、膽固醇和二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物溶解于體積比1:1的甲醇氯仿混合溶劑中，40°C旋轉(zhuǎn)真空減壓條件下溶劑被揮發(fā)而形成薄膜，薄膜在氮?dú)饫锔稍?0?20min，然后被封存于4°C干燥器里14?16h ;釓螯合物被加入到含有脂質(zhì)體薄膜的容器里，在超聲波的協(xié)助下，脂質(zhì)體薄膜將釓螯合物包裹以形成含釓螯合物的多室脂質(zhì)體；該多室脂質(zhì)體在-80°C條件下被凍融四次，然后被氮?dú)鈹D壓穿過孔徑200nm的聚碳酸酯膜四次，再被氮?dú)鈹D壓穿過孔徑10nm的聚碳酸酯膜四次；
[0023](2)將IL-13溶解于含有EDTA的磷酸鹽緩沖液中，加入終濃度L 4mM的2-亞氨氫氯化硫醇水溶液，然后在4°C條件下攪拌使IL-13硫醇化；將經(jīng)過硫醇化的IL-13溶液經(jīng)過G25交聯(lián)葡聚糖凝膠柱子進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物被濃縮到lmL，再被加入到步驟(I)所得產(chǎn)物里，在4°C條件下攪拌12h，得到IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑。
[0024]IL-13蛋白質(zhì)硫醇化過程產(chǎn)生的是硫醇化的IL-13和未被硫醇化的自由游離的IL-13的混和物，未除去自由的未硫醇化的IL-13，過G25交聯(lián)葡聚糖凝膠柱是必不可少的操作。
[0025]優(yōu)選地，上述IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑的制備方法，還包括純化步驟(3):步驟(2)獲得的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑先過瓊脂糖CL-2B柱子以除去未結(jié)合的硫醇化的IL-13，然后在4°C磷酸鹽緩沖液中透析以交換溶劑；透析4h后換一次磷酸鹽緩沖液，總透析時(shí)間為16?20h ;然后，在4°C條件下離心濃縮，即得純化的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑。
[0026]本發(fā)明上述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑在檢測(cè)腫瘤中的應(yīng)用，所述腫瘤的IL-13 α 2表達(dá)量高于健康人正常值(例如腦膠質(zhì)瘤，惡性腸癌轉(zhuǎn)移，腎上腺皮質(zhì)癌)。
[0027]優(yōu)選地，所述腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、腸癌和/或腎上腺皮質(zhì)癌。
[0028]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
[0029]1.1L-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑可以協(xié)助對(duì)比劑穿過血腦屏障；
[0030]2.1L-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑可將包載的磁共振影像對(duì)比劑傳遞到腫瘤病變部位并與癌細(xì)胞產(chǎn)生特異性結(jié)合，具備靶向性；
[0031]3.1L-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑可以檢測(cè)到小于2mm腫瘤病灶，可用于腫瘤的早期檢測(cè)。
【附圖說明】
[0032]圖1 為 IL-13-Liposomes-Gd-DTPA 掃描電鏡照片。
[0033]圖2為裸鼠靜脈注射IL-13-Liposomes-Gd-DTPA MRI檢測(cè)效果。
[0034]圖3為裸鼠靜脈注射Gd-DTPA MRI檢測(cè)效果。
[0035]圖4為裸鼠靜脈注射IL-13-Liposomes-Gd-DTPA腦部切片MRI檢測(cè)效果。
[0036]圖5為裸鼠靜脈注射Gd-DTPA腦部切片MRI檢測(cè)效果。
【具體實(shí)施方式】
[0037]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的理解本發(fā)明并能予以實(shí)施，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0038]實(shí)施例1 IL-13-liposomes-Gd-DTPA 的制備。
[0039]將二棕櫚酰磷脂酰膽堿80mg、二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇13mg、膽固醇20mg和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物1mg(摩爾比為10:5:5:0.5)溶解于40mL甲醇氯仿(二者體積比為1:1)混合溶劑中，40°C旋轉(zhuǎn)真空減壓條件下溶劑被揮發(fā)而形成薄膜，薄膜在氮?dú)饫锔稍?0?20min，然后被封存于4°C干燥器里14?16h。釓噴酸葡胺被加入到含有脂質(zhì)體薄膜的容器里，在超聲波的協(xié)助下，脂質(zhì)體薄膜將磁共振成像對(duì)比劑包裹以形成含磁共振成像對(duì)比劑的多室脂質(zhì)體。該脂質(zhì)體在-80°C條件下被凍融四次，然后被氮?dú)鈹D壓穿過孔徑200nm的聚碳酸酯膜四次，再被氮?dú)鈹D壓穿過孔徑10nm的聚碳酸酯膜四次。
[0040]將IL-13蛋白質(zhì)2mg溶解于6mL含有0.67mM乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)的磷酸鹽緩沖液中，再加入最終濃度為1.4mM的2-亞氨氫氯化硫醇水溶液，然后在4°C條件下攪拌30min，使IL-13蛋白質(zhì)硫醇化。硫醇化后的IL-13蛋白質(zhì)通過G-25交聯(lián)葡聚糖凝膠柱以分離自由游離的IL-13，得到純硫醇化的IL-13，純硫醇化的IL-13洗脫液濃縮至lmL。將硫醇化IL-13加入到含有釓噴酸葡胺的脂質(zhì)體里，在4°C條件下攪拌12h，得到IL-13修飾的脂質(zhì)體對(duì)比劑。
[0041]所制備的IL-13修飾的脂質(zhì)體對(duì)比劑先過瓊脂糖CL-2B柱子以除去未結(jié)合的硫醇化的IL-13，然后在4°C磷酸鹽緩沖液中透析以交換溶劑。透析4h后換一次磷酸鹽緩沖液，總透析時(shí)間為16?20h。然后，在4 °C離心濃縮至8.0mL,即得，命名為IL-13-liposomes-Gd-DTPAo
[0042]所制備的IL-13-liposomes-Gd-DTPA呈球形，大小尺寸為80?140nm，平均尺寸為131mn，脂質(zhì)體多分散性指數(shù)(PDI)為0.1?0.2nm，見圖1。
[0043]實(shí)施例2 IL-13-liposomes-Gd-DTPA可穿過血腦屏障
[0044]為證明的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑IL-13-liposomes-Gd-DTPA可穿過血腦屏障，我們選用正常的、無腦癌的裸鼠為模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，無腦癌的裸鼠注射給予馬根維顯對(duì)比劑(Magnevist)Gd-DTPA 30min后，裸鼠腦垂體信號(hào)噪聲比(信噪比)提高了 25%，相反，腦實(shí)質(zhì)信噪比卻保持不變。表明馬根維顯對(duì)比劑無法穿過活裸鼠的血腦屏障以到達(dá)腦實(shí)質(zhì)區(qū)域。相比之下，無腦癌的裸鼠注射給予IL-13-liposomes-Gd-DTPA 30min后，不但裸鼠腦垂體部位的信噪比增加了 20%，與此同時(shí)，腦實(shí)質(zhì)信噪比也增加了 15%。這是由于IL-13-liposomes-Gd-DTPA可穿過活體無胸腺裸鼠血腦屏障，并滲透到大腦實(shí)質(zhì)區(qū)域。證明脂質(zhì)體作為藥物載體可以協(xié)助對(duì)比劑穿越完整的血腦屏障到達(dá)腦實(shí)質(zhì)腦組織。
[0045]實(shí)施例3 IL-13-liposomes-Gd-DTPA 的革巴向性
[0046]用異硫氰酸熒光素氰基標(biāo)記IL-13修飾的脂質(zhì)體磁共振對(duì)比劑(FITC-1L-13-liposomes-Gd-DTPA)與不含 IL-13 脂質(zhì)體造影劑(FITC-1 iposomes-Gd-DTPA)，以便在神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251和GSC T3691細(xì)胞胞漿中觀察細(xì)胞吸收對(duì)比劑的效果，我們做了細(xì)胞吸收實(shí)驗(yàn)。生物細(xì)胞組織學(xué)結(jié)果表明，在膠質(zhì)癌干細(xì)胞GSCT3691胞漿中觀察到細(xì)胞吸收了更多的IL-13修飾的FITC-1L-13-liposomes-Gd-DTPA。其提示IL-13與GSC T3691細(xì)胞中的IL_13Ra 2受體具有高度的親和性，可最大程度地促進(jìn)特定腫瘤細(xì)胞對(duì)IL-13-1 iposomes-Gd-DTPA的吸收。
[0047]實(shí)施例4 IL-13-lipsomes-Gd-DTPA檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的效果
[0048]為證明IL-13修飾的IL-13-liposomes-Gd-DTPA可檢測(cè)到幼小腦膠質(zhì)瘤，為此進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，正常裸鼠被接種腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，四周后，裸鼠腦內(nèi)生長(zhǎng)出成熟的和早期的腦膠質(zhì)瘤，以此作為腦內(nèi)膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型。給予含有腦內(nèi)膠質(zhì)瘤裸鼠注射馬根維顯對(duì)比劑(Magnevist)Gd-DTPA，通過加權(quán)7T核磁共振儀獲取圖像，見圖3。24h后給予同一只裸鼠注射IL-13-liposomes-Gd-DTPA，通過加權(quán)7T核磁共振儀獲取圖像，見圖2。結(jié)果顯示，IL-13-liposomes-Gd-DTPA可以檢測(cè)到裸鼠成熟期病灶以外，微小病灶的浸潤(rùn)性膠質(zhì)瘤也可被顯示出來，而馬根維顯對(duì)比劑則僅顯示了大腦部位成熟的腫瘤，因?yàn)榇藭r(shí)血腦屏障已遭破壞，故磁共振對(duì)比劑可以進(jìn)入腦組織以顯示被病變破壞的腦組織而不是腫瘤細(xì)胞組織本身。
[0049]為了進(jìn)一步確定檢測(cè)結(jié)果，對(duì)靜脈注射Gd-DTPA(Magnevist)和IL-13-1 iposomes-Gd-DTPA后的裸鼠進(jìn)行腦部更深層次切片檢測(cè)。深層次切片結(jié)果顯示，靜脈注射Gd-DTPA后，裸鼠微小病灶無法顯示，見圖5 ;靜脈注射IL-13-1 iposomes-Gd-DTPA的裸鼠同一大腦部位浸潤(rùn)性幼小腦癌被清晰顯示，見圖4。因此，高靈敏度的IL-13-liposomes-Gd-DTPA對(duì)比劑用于腫瘤的早期檢測(cè)、早期治療至關(guān)重要。
[0050]以上所述實(shí)施例僅是為充分說明本發(fā)明而所舉的較佳的實(shí)施例，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑，其特征在于，為包封釓螯合物的脂質(zhì)體，且脂質(zhì)體表面經(jīng)過IL-13修飾。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑，其特征在于，所述釓螯合物為釓噴酸葡胺或釓特酸葡胺。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑，其特征在于，所述脂質(zhì)體的制備原料包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇、膽固醇和二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑，其特征在于，二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、膽固醇和二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物的摩爾比為10:5:5:0.5。5.一種權(quán)利要求1?4任一所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)將二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇、膽固醇和二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-馬來酰亞胺交聯(lián)物溶解于體積比1:1的甲醇氯仿混合溶劑中，40°C旋轉(zhuǎn)真空減壓條件下溶劑被揮發(fā)而形成薄膜，薄膜在氮?dú)饫锔稍?0?20min，然后被封存于4°C干燥器里14?16h ;釓螯合物被加入到含有脂質(zhì)體薄膜的容器里，在超聲波的協(xié)助下，脂質(zhì)體薄膜將釓螯合物包裹以形成含釓螯合物的多室脂質(zhì)體；該多室脂質(zhì)體在-80°C條件下被凍融四次，然后被氮?dú)鈹D壓穿過孔徑200nm的聚碳酸酯膜四次，再被氮?dú)鈹D壓穿過孔徑10nm的聚碳酸酯膜四次； (2)將IL-13溶解于含有EDTA的磷酸鹽緩沖液中，加入終濃度1.4mM的2-亞氨氫氯化硫醇水溶液，然后在4°C條件下攪拌使IL-13硫醇化；將經(jīng)過硫醇化的IL-13溶液經(jīng)過G25交聯(lián)葡聚糖凝膠柱子進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物被濃縮到lmL，再被加入到步驟(I)所得產(chǎn)物里，在4°C條件下攪拌12h，得到IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑的制備方法，其特征在于，還包括純化步驟(3):步驟(2)獲得的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑先過瓊脂糖CL-2B柱子以除去未結(jié)合的硫醇化的IL-13，然后在4°C磷酸鹽緩沖液中透析以交換溶劑；透析4h后換一次磷酸鹽緩沖液，總透析時(shí)間為16?20h ;然后，在4°C條件下離心濃縮，即得純化的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑。7.權(quán)利要求1?4任一所述的IL-13修飾的含釓螯合物脂質(zhì)體靶向磁共振成像對(duì)比劑在檢測(cè)腫瘤中的應(yīng)用，所述腫瘤的IL-13 α 2表達(dá)量高于健康人正常值。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、腸癌和/或腎上腺皮質(zhì)癌。
【文檔編號(hào)】A61K49/14GK105983106SQ201510319595
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年6月11日
【發(fā)明人】楊慶憲
【申請(qǐng)人】楊慶憲