一種制備磁性囊泡的方法及其在藥物載體上的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物新材料領(lǐng)域，特別涉及一種制備磁性囊泡的方法及其在藥物載體上的應(yīng)用，將脂肽和磁性表面活性劑混合于氯仿中，旋蒸至膜層出現(xiàn)；將所述膜層溶解于HEPES緩沖液后，從液氮至60℃的水浴中凍融循環(huán)數(shù)次；擠囊泡，即制得磁性囊泡。本發(fā)明制備的磁性囊泡性質(zhì)穩(wěn)定，方法簡單；本發(fā)明制備的囊泡具有較好的生物相容性，實(shí)現(xiàn)囊泡多樣的功能化；同時(shí)，本發(fā)明磁性囊泡，藥物釋放量受到磁場(chǎng)的定向控制，是一類磁控的藥物釋放載體，對(duì)人體靶向藥物治療具有科學(xué)意義。
【專利說明】
一種制備磁性囊泡的方法及其在藥物載體上的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物新材料領(lǐng)域，特別涉及一種制備磁性囊泡的方法及其在藥物載體 上的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 很多疾病的治療通過藥物完成。在此過程中，過低的藥物濃度不能起到治療作用； 過高的藥物濃度則會(huì)產(chǎn)生副作用，甚至?xí)p害正常的組織器官。此外，治療效果還取決于藥 物能否在患病部位保持足夠的時(shí)間。為提高藥物療效，往往要增加藥物濃度和給藥次數(shù)，但 過多藥物會(huì)損害正常的組織和器官。
[0003] 囊泡有較強(qiáng)的增溶能力，其雙層膜具有較好的牢固性和穩(wěn)定性，作為藥物載體給 藥途徑較廣，載藥穩(wěn)定性、藥物增溶量以及藥物生物利用度較高。近十多年來囊泡作為藥物 載體已有注射劑、口服懸浮液或乳劑、滴眼液、滴鼻液及外用劑型等許多報(bào)道，大多仍處于 動(dòng)物試驗(yàn)階段，也有一些臨床觀察報(bào)告。非離子表面活性劑囊泡是一種有效的藥物輸送載 體，它能大大提高藥物療效，降低藥物毒副作用，又能緩慢緩慢釋放藥物，改變藥物的體內(nèi) 動(dòng)力學(xué)，同時(shí)還具有靶向性能。
[0004] 目前，有關(guān)磁性囊泡的制備主要基于磁性納米顆粒的參雜，這種方法制備相對(duì)復(fù) 雜，而且納米顆粒毒性未知，用于載藥存在潛在風(fēng)險(xiǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種使用生物相容性良好的脂肽表面活性劑 與少量磁性表面活性劑復(fù)配制備用于藥物載體的磁性囊泡的方法。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0007] -種制備磁性囊泡的方法，包括如下步驟，將脂肽和磁性表面活性劑混合于氯仿 中，旋蒸至膜層出現(xiàn);將所述膜層溶解于HEPES緩沖液后，從液氮至60°C的水浴中凍融循環(huán) 數(shù)次;擠囊泡，即制得磁性囊泡。
[0008] 優(yōu)選的，所述的脂肽為含有脂質(zhì)與氨基酸的化合物或復(fù)合體。
[0009] 其中，所述的磁性表面活性劑指的是反離子帶有鐵配基團(tuán)的表面活性劑
[0010] 優(yōu)選的，所述的脂肽為油酸(0A)與絲氨酸⑶分子的化合物，分子式如式1所示，
[0012]優(yōu)選的，所述的脂肽為如下化合物，分子是如式2、式3、式4或式5所示：
[0011] σ
[0017]優(yōu)選的，所述的磁性表面活性劑的制備方法為等摩爾比的CTAB和無水FeCl3混合 于無水甲醇，攪拌反應(yīng)12h;旋蒸40°C，再進(jìn)行真空干燥箱中，45°C的條件下真空干燥12h，制 得磁性表面活性劑。
[0018]優(yōu)選的，所述的脂肽和磁性表面活性劑按照質(zhì)量比5:1混合。
[0019]優(yōu)選的，所述的旋蒸溫度為45~50°C。
[0020]優(yōu)選的，所述的凍融循環(huán)5次，每個(gè)循環(huán)為6min。
[0021] 優(yōu)選的，所述的擠囊泡時(shí)，選用200nm濾膜。
[0022] 本發(fā)明另一個(gè)目的在于上述的磁性囊泡在藥物載體上的應(yīng)用，所述的磁性囊泡可 通過磁控進(jìn)行輸送。
[0023]本發(fā)明的有益效果是：
[0024] 1、本發(fā)明制備的磁性囊泡的方法，磁性囊泡性質(zhì)穩(wěn)定，方法簡單；
[0025] 2、本發(fā)明使用脂肽表面活性劑與磁性表面活性劑共同形成囊泡，脂肽形成的囊泡 具有較好的生物相容性；由于脂肽可以充分與如磁性表面活性劑結(jié)合，實(shí)現(xiàn)囊泡多樣的功 能化；
[0026] 3、本發(fā)明制備的磁性囊泡，藥物釋放量受到磁場(chǎng)的定向控制，是一類磁控的藥物 釋放載體，對(duì)人體靶向藥物治療具有科學(xué)意義。
【附圖說明】
[0027] 附圖1為磁性囊泡溶液a，b，c取樣點(diǎn)位置示意圖；
[0028] 附圖2為磁場(chǎng)對(duì)本發(fā)明磁性囊泡的作用；
[0029] 附圖3為本發(fā)明具體實(shí)施例制備磁性囊泡電鏡照片；
[0030] 其中，（a)為制備一天后的電鏡照片；（b)為制備一個(gè)月后的電鏡照片；
[0031] 附圖4為調(diào)節(jié)脂肽與磁性表面活性劑比例的電鏡照片；
[0032] 其中，（a)為脂肽與磁性表面活性劑質(zhì)量比為10 :1; (b)為脂肽與磁性表面活性劑 質(zhì)量比為10:3;
[0033] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例1磁性囊泡對(duì)CF藥物分子釋放效果；
[0034] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例2-5磁性囊泡對(duì)CF藥物分子釋放效果。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施 例僅僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普 通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的 范圍。
[0036] 本發(fā)明實(shí)施例的一方面提供了一種制備磁性囊泡的方法，包括如下步驟，
[0037] S1:將脂肽和磁性表面活性劑混合于氯仿中，旋蒸至膜層出現(xiàn)；
[0038] 在本步驟中，所述的脂肽含有脂質(zhì)與氨基酸的化合物或復(fù)合體。所述的磁性表面 活性劑指的是頭部是鐵原子，能夠?qū)Υ艌?chǎng)產(chǎn)生響應(yīng)的表面活性劑。
[0039] S2:將所述膜層溶解于HEPES緩沖液后，從液氮至60°C的水浴中凍融循環(huán)數(shù)次；
[0040]在本步驟中，HEPES緩沖液(pH=7.41)將所制得的膜層溶解，難以溶解時(shí)使用超聲 清洗儀將膜完全溶解。通過液氮至60°C的水浴中循環(huán)數(shù)次凍融，可以得到尺寸較為均一的 囊泡。
[0041] S3:擠囊泡，即制得磁性囊泡。
[0042] 在本步驟中，可以采用擠膜器擠囊泡。
[0043]在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述的脂肽為油酸與絲氨酸分子的化合物，分子式如 式1所示，
[0044]
式1
[0045] 在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述的脂肽為如下化合物，分子是如式2、式3、式4或式 5所示：
[0046] 脂質(zhì)分子為油酸(0A)與蘇氨酸(T)的化合物：
[0047]
[0048] 脂質(zhì)分子為油酸(0A)與酪氨酸(Y)的化合物：
[0049]
式3;
[0050] 脂質(zhì)分子為油酸(0Α)與谷氨酸(Ε)的化合物：
[0051]
式4 ;
[0052]脂質(zhì)分子為油酸(0Α)與天冬氨酸(D)的化合物：
[0053]
式
[0054]本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】如下：
[0055]在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述的磁性表面活性劑的制備方法為等摩爾比的CTAB 和無水FeCl3混合于無水甲醇，攪拌反應(yīng)12h;旋蒸40°C，再進(jìn)行真空干燥箱中，45°C的條件 下真空干燥12h，制得磁性表面活性劑。
[0056] 在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述的脂肽和磁性表面活性劑按照質(zhì)量比5:1混合。通 過附圖3和4可知，脂肽和磁性表面活性劑按照質(zhì)量比5:1混合時(shí)，形成的囊泡最多，纖維等 雜質(zhì)最少，同時(shí)隨著時(shí)間的推移，囊泡具有較好的穩(wěn)定性。而當(dāng)脂肽和磁性表面活性劑按照 質(zhì)量比10:1混合時(shí)，出現(xiàn)較多纖維和管狀聚集體，當(dāng)脂肽和磁性表面活性劑按照質(zhì)量比10: 3混合時(shí)，未形成明顯聚集體。
[0057] 下面將結(jié)合下述具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明實(shí)施例所提供的磁性囊泡的制備 方法及其應(yīng)用。
[0058] 實(shí)施例1:
[0059] 1、磁性表面活性劑的制備：
[0060] 稱量等摩爾比的CTAB和無水FeCl3(100mM)置于250mL的圓底燒瓶中，加入適量的 無水甲醇溶解。蓋上玻璃塞后，攪拌反應(yīng)12h。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40°C條件下蒸發(fā)溶劑甲醇， 得到初步的粗產(chǎn)品。將圓底燒瓶中的粗產(chǎn)品轉(zhuǎn)移至表面皿中并鋪展均勻，然后置于真空干 燥箱中，45°C的條件下真空干燥12h。即可制得磁性表面活性劑。
[0061 ] 2、磁性囊泡的制備
[0062] 稱量10mg脂肽，本實(shí)施了采用的脂肽類型是油酸鏈接兩個(gè)絲氨酸分子式為：
[0063]
U ?.? Ο
[0064] 可表示為(0ASS)和2mg上述合成的磁性表面活性劑樣品于EP管中，用移液槍移取 6mL氯仿溶解并轉(zhuǎn)移至50mL的圓底燒瓶中。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50 °C下將樣品旋蒸至圓底燒 瓶中出現(xiàn)一層均勻的膜層。用真空栗抽真空8h，將液體抽干。利用5mL的HEPES緩沖液(pH = 7.41)將所制得的膜層溶解，難以溶解時(shí)使用超聲清洗儀將膜完全溶解，然后轉(zhuǎn)移至離心管 中。將樣品從液氮至60°C的水浴中凍融5個(gè)循環(huán)，每個(gè)環(huán)境為6min。用擠膜器擠囊泡，所用用 濾膜為200nm，即可制得磁性囊泡。
[0065] 3、藥物裝載
[0066]當(dāng)需要藥物裝載時(shí)，將上述旋蒸后的膜層，層用溶于HEPES緩沖液(pH=7.41)的CF 溶液(100mM)溶解，可適當(dāng)超聲，然后轉(zhuǎn)移至離心管。再同樣進(jìn)行上述液氮和60°C循環(huán)凍融。 將已凍融后的樣品通過裝有交聯(lián)葡聚糖凝膠G-100的層析柱，收集最先流出的樣品，然后用 錫箱紙包裹，即裝載完畢。
[0067]圖5所示，說明本發(fā)明制備的磁性囊泡對(duì)CF藥物分子緩釋效果，說明該磁性囊泡能 對(duì)藥物起到6小時(shí)緩釋效果。
[0068] 實(shí)施例2:
[0069] 脂質(zhì)分子為油酸(0A)與蘇氨酸(T)的化合物，分子式如下：
[0070]
式2
[0071] 其他的步驟如實(shí)施例1所述。
[0072] 實(shí)施例3:
[0073] 脂質(zhì)分子為油酸(0A)與酪氨酸(Y)的化合物，分子式如下：
[0074]
[0075]其他的步驟如實(shí)施例1所述。
[0076] 實(shí)施例4:
[0077] 脂質(zhì)分子為油酸(0A)與谷氨酸(E)的化合物，分子式如下：
[0078]
[0079]其他的步驟如實(shí)施例1所述。
[0080] 實(shí)施例5:
[0081] 脂質(zhì)分子為油酸(0A)與天冬氨酸(D)的化合物，分子式如下：
[0082]
[0083]其他的步驟如實(shí)施例1所述。
[0084] 圖6所示，說明本發(fā)明實(shí)施例2-5制備的磁性囊泡對(duì)CF藥物分子緩釋效果，說明該 磁性囊泡能對(duì)藥物均起到6小時(shí)緩釋效果。
[0085] 為了進(jìn)一步說明本發(fā)明的磁性囊泡的磁控性及毒性，我們做了系列實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)如 下圖1、圖2、表1和表2所不。
[0086]從圖1和圖2可以看出，磁場(chǎng)本發(fā)明磁性囊泡的作用，我們?cè)诖判阅遗萑芤篴，b，c三 點(diǎn)取樣，通過紫外分光光度計(jì)發(fā)現(xiàn)靠近磁鐵的a點(diǎn)，囊泡濃度最大，b點(diǎn)次之，c點(diǎn)最小，說明 磁場(chǎng)對(duì)囊泡有富集作用。
[0087]表1:不同磁場(chǎng)距離6小時(shí)后藥物釋放量
[0088]
[0089]~表1說明距離磁體距離越遠(yuǎn)，其藥物釋放量越小;距離磁體越近，其藥物釋放量越-大，說明磁場(chǎng)對(duì)囊泡有富集作用，在囊泡富集區(qū)域就會(huì)有較高的藥物釋放量。
[0090] 表2:囊泡細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果）
[0091]
[0092] ~表2說明不同濃度囊泡^寸正常細(xì)胞(NIH 3T3)和癌細(xì)^(Hela)毒性均較低，但是隨1 囊泡濃度加大，細(xì)胞毒性還是有略微增大的趨勢(shì)。（102 %說明在緩沖液中培養(yǎng)細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì) 胞少量增殖，屬正?，F(xiàn)象）。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種制備磁性囊泡的方法，其特征在于，包括如下步驟，將脂肽和磁性表面活性劑混 合于氯仿中，旋蒸至膜層出現(xiàn);將所述膜層溶解于HEPES緩沖液后，從液氮至60°C的水浴中 凍融循環(huán)數(shù)次;擠囊泡，即制得磁性囊泡。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的脂肽為含有脂質(zhì)與 氨基酸的化合物或復(fù)合體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的脂肽為油酸與絲氨 酸分子的化合物，分子式如式1所示，4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的脂肽為如下化合 物，分子是如式2、式3、式4或式5所不：5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的磁性表面活性劑的 制備方法為等摩爾比的CTAB和無水FeCl 3混合于無水甲醇，攪拌反應(yīng)12h;旋蒸40°C，再進(jìn)行 真空干燥箱中，45 °C的條件下真空干燥12h，制得磁性表面活性劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的脂肽和磁性表面活 性劑按照質(zhì)量比5:1混合。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的旋蒸溫度為45~50 cC。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備用于藥物載體的磁性囊泡的方法，其特征在于，所述的凍 融循環(huán)5次，每個(gè)循環(huán)為6min。9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的制備用于藥物載體的磁性囊泡的方法，其特征在于， 所述的擠囊泡時(shí)，選用200nm濾膜。10. 權(quán)1所述的磁性囊泡在藥物載體上的應(yīng)用，其特征在于，所述的磁性囊泡可通過磁 控進(jìn)行輸送。
【文檔編號(hào)】A61K9/127GK105997882SQ201610618766
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月29日
【發(fā)明人】王棟, 王繼亁, 曹美文, 孫亞偉
【申請(qǐng)人】中國石油大學(xué)(華東)