三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究。首先在純水體系中模擬三聚氰胺誘導(dǎo)結(jié)石的形成過(guò)程，探究誘導(dǎo)機(jī)理。其次在人工尿液中模擬抑制劑消石作用，并測(cè)量不同抑制劑調(diào)控下，結(jié)石的生長(zhǎng)速率，通過(guò)比較體外的熱力學(xué)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，獲取最佳的消石方法，最終指導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明角度新穎，方法簡(jiǎn)單易行，并實(shí)現(xiàn)了體外模擬對(duì)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)作用，系統(tǒng)模擬的結(jié)石的生長(zhǎng)和抑制過(guò)程。
【專利說(shuō)明】
三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生命醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種三聚氰胺促進(jìn)腎臟尿酸結(jié)石形成的機(jī)理及其消石研究方法。【背景技術(shù)】
[0002]泌尿系結(jié)石是生物體內(nèi)病理礦化的產(chǎn)物，包括腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石、膀胱結(jié)石和尿道結(jié)石。尿酸結(jié)石常見(jiàn)于腎和輸尿管，其發(fā)病率隨國(guó)家與地區(qū)的不同而不同，占泌尿系結(jié)石的5%?40%，僅次于草酸鈣結(jié)石。近年來(lái)隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活水平的提高，人們的飲食習(xí)慣也在起著顯著的變化，其中一個(gè)主要的變化就是魚(yú)肉類食品及乙醇飲料攝取量的增加，尿酸在血液中濃度不斷增加，從而導(dǎo)致尿酸結(jié)石發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。因此，研究尿酸結(jié)石在泌尿系結(jié)石中最新的比例變化并進(jìn)一步探討尿酸結(jié)石的成因，成為泌尿系結(jié)石研究的一個(gè)重要方面。
[0003]2007年的“寵物糧食污染”和2008年“三鹿奶粉”事件爆發(fā)后，人們才開(kāi)始對(duì)于三聚氰胺引起的腎結(jié)石展開(kāi)研究。到目前為止，人們把主要的精力集中在對(duì)三聚氰胺檢測(cè)方法和技術(shù)以及兒童泌尿系結(jié)石的診療研究及預(yù)后上。發(fā)展了重量法、硫酸電位滴定法、HPLC、 HPLC-MS、GC-MS和ELISA試劑盒法，比色法等三聚氰胺檢測(cè)方法。Wu等人(Wu，C.F.;Liu， C.C.；ffu,M.T.Urinary melamine and adult urolithiasis in Taiwan.Clin.Chim.Acta.2010，411，184-189.)研究結(jié)果顯示在小兒腎結(jié)石形成原因中，無(wú)論是尿酸結(jié)石還是媽結(jié)石，低劑量三聚氰胺都起了主要作用。Sun等人(Sun N，Shen Y,Sun Q,et al.Melamine related urinary calculus and acute renal failure in infants ? Zhonghua Erke Zazhi 2008;46:810-815.)第一次研究了結(jié)石成分發(fā)現(xiàn)結(jié)石由三聚氰胺(29.2 % )，尿酸(52.2 % )，剩余物質(zhì)(18.6 % )，沒(méi)有鑒定到三聚氫酸存在。
[0004]而關(guān)于三聚氰胺如何誘導(dǎo)結(jié)石形成的機(jī)理，如何影響納米結(jié)晶與結(jié)石形貌以及改變結(jié)石形成的熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)過(guò)程等方面的研究相對(duì)較少，對(duì)三聚氰胺導(dǎo)致結(jié)石形成過(guò)程的體外模擬還未見(jiàn)報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是從分子化學(xué)的角度去研究三聚氰胺誘導(dǎo)尿酸結(jié)石的機(jī)理，并找到消除結(jié)石的藥物。這一問(wèn)題的解決，不僅能夠?qū)θ矍璋芳捌渌瘜W(xué)物質(zhì)引起腎結(jié)石形成的影響及機(jī)制進(jìn)行闡釋，還能對(duì)現(xiàn)有的結(jié)石理論進(jìn)行論證和補(bǔ)充；不僅能為結(jié)石后續(xù)非手術(shù)性治療提供理論參考，還能對(duì)食品工業(yè)中添加劑的控制和篩選提供指導(dǎo)；不僅能為結(jié)石預(yù)防醫(yī)學(xué)提供新的思路，還可以對(duì)化學(xué)結(jié)晶的形貌與結(jié)構(gòu)控制提供新的方法。
[0006]本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0007]一種三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究，其特征在于，包括以下步驟:
[0008](1)水體系下探究三聚氰胺對(duì)尿酸結(jié)石的形成的誘導(dǎo)作用研究:
[0009]設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，將各組溶液超聲，靜置，形成結(jié)石，洗滌，烘干樣品，通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)水體系下三聚氰胺對(duì)尿酸結(jié)石的形成誘導(dǎo)規(guī)律；
[0010](2)根據(jù)(1)中最佳比例，從動(dòng)力學(xué)角度，進(jìn)一步在人工尿液體系中模擬三聚氰胺-尿酸結(jié)石的形成過(guò)程，并探究結(jié)石抑制劑檸檬酸、酒石酸鈉分別對(duì)結(jié)石形成速率的影響；
[0011](3)根據(jù)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)指導(dǎo)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；
[0012](4)在高尿酸小鼠的基礎(chǔ)上建立三聚氰胺誘導(dǎo)結(jié)石模型；
[0013](5)消石:用不同的抑制劑灌胃，找到合適的抑制劑和使用控制方法。[0〇14]本發(fā)明方法從分子角度、從動(dòng)力學(xué)熱力學(xué)角度出發(fā)，在人工尿液中分別模擬不同抑制劑對(duì)結(jié)石的形成過(guò)程，測(cè)定結(jié)石生長(zhǎng)速率，利用紫外可見(jiàn)分光廣度計(jì)測(cè)得結(jié)石生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，從而綜合比較不同情況下的生長(zhǎng)速率，步驟簡(jiǎn)單，對(duì)體內(nèi)研究有一定的指導(dǎo)作用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果:
[0015]1、本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了體外模擬指導(dǎo)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的技術(shù)，實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、安全。
[0016]2、本發(fā)明的方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，克服了傳統(tǒng)的老鼠體內(nèi)尿酸含量過(guò)低的困難，設(shè)計(jì)了先建立高尿酸模型，再利用三聚氰胺促進(jìn)腎結(jié)石的形成這一思路，并成功實(shí)現(xiàn)。
[0017]3、本發(fā)明的方法較傳統(tǒng)的動(dòng)物模型，結(jié)石形成周期短，傳統(tǒng)的一個(gè)月時(shí)間，本發(fā)明方案僅5天便可批量產(chǎn)生小鼠腎結(jié)石。
[0018]4、本發(fā)明不僅能為結(jié)石后續(xù)非手術(shù)性治療提供理論參考，還能對(duì)食品工業(yè)中添加劑的控制和篩選提供指導(dǎo)；不僅能為結(jié)石預(yù)防醫(yī)學(xué)提供新的思路，還可以對(duì)化學(xué)結(jié)晶的形貌與結(jié)構(gòu)控制提供新的方法。【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為實(shí)施例1所得純水體系中不同比例三聚氰胺誘導(dǎo)尿酸結(jié)石體積比較圖。
[0020]圖2為實(shí)施例1所得產(chǎn)物在不同調(diào)控下的反應(yīng)速率圖。
[0021]圖3為實(shí)施例1步驟(3)中高尿酸模型小鼠腎臟染色切片圖。(是第3天腎臟病理改變 HEX 400)[〇〇22]圖4為實(shí)施例1步驟(4)中小鼠腎臟第3天在HEX400的倍數(shù)下得到的腎臟病理改變照片。(第3天腎臟病理改變HE X 400)【具體實(shí)施方式】[〇〇23]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。[〇〇24] 實(shí)施例1
[0025]本實(shí)施例三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究，包括以下步驟:[〇〇26](1)水體系下探究三聚氰胺對(duì)尿酸結(jié)石的形成的誘導(dǎo)作用研究:稱取168mg尿酸放置于燒杯中，加入l〇〇〇mL蒸餾水，煮沸后形成尿酸的過(guò)飽和溶液(lmM)。將尿酸過(guò)飽和溶液冷卻至體溫(?37.5 °C )，并調(diào)節(jié)pH至6。取一定體積的尿酸飽和溶液，分別向其中加入三聚氰胺粉末，溶解，使三聚氰胺濃度為〇 ? 2mM、0 ? 4mM、0 ? 5mM、0 ? 6mM、0 ? 8mM、1 ? OmM、2 ? OmM。充分混合后，先超聲lOmin，然后置于37.5 °C的恒溫槽中靜置24h，最后將沉淀用3000rmp離心 5min，再分別有蒸餾水、乙醇洗滌數(shù)次，冷凍干燥。[〇〇27]圖1中，尿酸與三聚氰胺在不同摩爾濃度比例下反應(yīng)情況圖:2—7分別是5:1、5:2、 5:3、5:4、1:1、1:2。圖1是純水體系中不同比例三聚氰胺誘導(dǎo)尿酸結(jié)石體積比較圖，通過(guò)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，可以看出，單獨(dú)的尿酸不易形成結(jié)石，而加入三聚氰胺以后可以產(chǎn)生結(jié)石，且隨著三聚氰胺加入量的不斷增大，沉淀體積逐漸增大，當(dāng)三聚氰胺與尿酸的摩爾濃度比達(dá)至ljl:l時(shí)，沉淀體積達(dá)到最大，繼續(xù)增加三聚氰胺，體積不再膨脹。通過(guò)體外模擬找到了上述結(jié)石形成的最有利條件。
[0028](2)根據(jù)(1)中最佳比例，從動(dòng)力學(xué)角度，進(jìn)一步在人工尿液體系中模擬三聚氰胺-尿酸結(jié)石的形成過(guò)程，并探究結(jié)石抑制劑檸檬酸、酒石酸鈉分別對(duì)結(jié)石形成速率的影響:1.不同濃度檸檬酸對(duì)三聚氰胺促進(jìn)尿酸結(jié)石的抑制效果探究:用人工尿液配制10mM濃度的尿酸、10mM三聚氰胺溶液，取4個(gè)錐形瓶，編號(hào)1、2、3、4，分別四只錐形瓶中加入20mL10mM尿酸溶液，再分別向4個(gè)瓶中分別加入蒸餾水、0.5mM檸檬酸、ImM檸檬酸、2mM梓檬酸各lmL，將4瓶溶液在磁力攪拌混合均勻，接著在磁力攪拌下，分別滴加20mL10mM的三聚氰胺溶液，滴加結(jié)束后，立即超聲5min，靜置，每隔20min取上清液，利用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)溶液中尿酸的吸光度，尿酸在紫外光有兩個(gè)吸收峰A = 236nm、A = 291nm，而三聚氰胺在紫外光下沒(méi)有吸收，可以在A = 291nm處測(cè)溶液中尿酸的吸光度值A(chǔ)，由于三聚氰胺會(huì)與尿酸逐漸反應(yīng)生成沉淀，澄清液中尿酸的濃度逐漸降低，吸光度A逐漸減小。根據(jù)朗伯一比耳定律:A = -lgT=e be，吸光度與濃度成正比，因此根據(jù)記錄的吸光度值，可繪制尿酸的吸光度隨時(shí)間的變化曲線。再將時(shí)間t時(shí)刻的A除以t = 0時(shí)的吸光度值A(chǔ)〇,然后對(duì)(A/A〇)取對(duì)數(shù)，同樣根據(jù)朗伯一比耳定律:六=-]^1=￡13(3，111(4/^()) = 111((3/(3())，再做111((3/(3())對(duì)時(shí)間的關(guān)系圖，斜率即為反應(yīng)速率。
[0029]n.酒石酸鈉的抑制效果研究:將檸檬酸換成酒石酸鈉、其他條件不變，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。以上每組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3遍取平均值。
[0030]圖2為實(shí)施例1所得產(chǎn)物在不同調(diào)控下的反應(yīng)速率圖。(a)為檸檬酸調(diào)控下尿酸的吸光度曲線，(b)為酒石酸鈉調(diào)控下的尿酸的吸光度曲線。圖(a)中，相對(duì)于空白組來(lái)說(shuō)，當(dāng)加入少量的尿酸時(shí)，體系中尿酸下降速率較快，結(jié)石產(chǎn)生速率較快，但當(dāng)尿酸濃度為2mM時(shí)， 尿酸迅速與降低，與檸檬酸結(jié)合，體系無(wú)結(jié)石產(chǎn)生。表明高濃度的檸檬酸具有消石作用。圖 (b)中隨著酒石酸鈉的濃度不斷增大，尿酸濃度降低速率相對(duì)于空白對(duì)照組來(lái)說(shuō)，變化不大，因此，酒石酸鈉的抑制效果一般。[〇〇31](3)根據(jù)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，指導(dǎo)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，建立小鼠三聚氰胺-尿酸結(jié)石模型:[〇〇32] 1.分組建模:隨機(jī)將小鼠分為3組，2個(gè)給藥組，1個(gè)溶媒體對(duì)照組，每組20只。各組老鼠每日自由使用飼料和水。配制50mL的10g/L羧甲基纖維素鈉溶液供溶媒體對(duì)照組使用。
[0033]n.腹腔注射:將氧嗪酸鉀加入到10g/L甲基纖維素鈉溶液中，配制成400m/L的穩(wěn)定懸濁液。對(duì)照組每日腹腔注射0.2mL的10g/L羧甲基纖維素鈉溶液，兩個(gè)給藥組分別每日注射、0.2mL尿酸400mg/Kg。隔天取血，測(cè)尿酸含量。每隔5天解剖腎臟，測(cè)小鼠腎體比，腎臟染色切片，觀察腎組織變化。
[0034]圖3為實(shí)施例1種第(3)步高尿酸模型小鼠腎臟染色切片圖，圖(a)是空白老鼠第3 天的腎臟染色切片圖，圖(b)是氧嗪酸鉀組小鼠第三天腎臟染色切片圖。圖片是在400倍的顯微鏡下拍攝獲得的。通過(guò)(a)(b)對(duì)比可以看出，氧嗪酸鉀組腎臟未出現(xiàn)結(jié)石，但腎組織出現(xiàn)損壞，腎小管腫大，大量炎性細(xì)胞在腎小球囊腔、腎小管及間質(zhì)中。表明，單獨(dú)的高尿酸不會(huì)使小鼠腎臟產(chǎn)生結(jié)石，但是會(huì)導(dǎo)致腎組織損壞。[〇〇35](4)三聚氰胺結(jié)石模型的建立
[0036]I ?分組建模:將三聚氰胺設(shè)定為1 OOmg/Kg、150mg/Kg、200mg/Kg，三個(gè)劑量組。同時(shí)設(shè)對(duì)照組進(jìn)行造模預(yù)試驗(yàn)。隨機(jī)將小鼠模型分為三組，第一組為氧嗪酸鉀對(duì)照組20只，第二組為低劑量三聚氰胺誘導(dǎo)組20只，第三組為高劑量三聚氰胺誘導(dǎo)組20只。
[0037]n.腹腔注射和灌胃:對(duì)照組每天腹腔注射0.4mL400mg/Kg的氧嗪酸鉀溶液，低劑量組(A組)每日腹腔注射0.2mL氧嗪酸鉀200mg/Kg后立即灌胃0.2mL100mg/Kg的三聚氰胺溶液。中劑量實(shí)驗(yàn)組(B組)每日腹腔注射0 ? 2mL氧嗪酸鉀300mg/Kg后立即灌胃0 ? 2mL150mg/Kg 的三聚氰胺溶液。高劑量實(shí)驗(yàn)組(C組)每日腹腔注射0.2mL氧嗪酸鉀400mg/Kg后立即灌胃 0.2mL200mg/Kg的三聚氰胺溶液。連續(xù)實(shí)驗(yàn)31天，每隔3天、5天、7天、7天、9天解剖一次，為了方便觀察小鼠腎臟，將腎臟進(jìn)行縱向染色切片，染色后細(xì)胞質(zhì)為紅色，細(xì)胞核為藍(lán)色，再放到顯微鏡下觀察腎組織變化和結(jié)石情況。[〇〇38]圖4為實(shí)施例1步驟(4)小鼠腎臟第3天在HEX400的倍數(shù)下得到的腎臟病理改變照片。(a)(b)低劑量組；(c)(d)中劑量組；(e)(f)高劑量組;從圖可得，向高尿酸小鼠中灌胃低劑量和中劑量的三聚氰胺一段時(shí)間后，小鼠腎臟未均出現(xiàn)結(jié)石，但腎組織損傷十分嚴(yán)重。高劑量組的組織切片中發(fā)現(xiàn)大量的褐色的尿酸結(jié)石，表明高劑量下的誘導(dǎo)效果最佳。
[0039](5)消石:將產(chǎn)生結(jié)石的小鼠分三組，分別灌胃高、中、低劑量的梓檬酸，高劑量為 1500mg/Kg、中劑量1000mg/Kg、低劑量為500mg/Kg。其他抑制劑:檸檬酸、酒石酸鈉、碳酸鈉、 磷酸二氫鈉等抑制劑操作同上。
[0040]實(shí)施例2
[0041]—種三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究，其特征在于，包括以下步驟:[〇〇42](1)水體系下探究三聚氰胺對(duì)尿酸結(jié)石的形成的誘導(dǎo)作用研究:設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，1個(gè)空白組，空白組為ImM的尿酸飽和溶液組;6個(gè)對(duì)照組為不同梯度比例的三聚氰胺和尿酸混合溶液組(對(duì)照組尿酸和三聚氰胺摩爾濃度比依次為:5:1、5:2、5:3、5:4、1:1、1:2)。將各組溶液超聲5min后靜置，形成結(jié)石，洗滌并烘干樣品，通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)的尿酸溶液不形成結(jié)石，加入三聚氰胺后會(huì)促進(jìn)其形成結(jié)石，當(dāng)三聚氰胺與尿酸摩爾濃度比為1:1時(shí)， 產(chǎn)生結(jié)石體積最大。[〇〇43](2)根據(jù)(1)中最佳比例，從動(dòng)力學(xué)角度，進(jìn)一步在人工尿液體系中模擬三聚氰胺-尿酸結(jié)石的形成過(guò)程，并探究結(jié)石抑制劑檸檬酸、酒石酸鈉分別對(duì)結(jié)石形成速率的影響。用人工尿液分別配制10mM的三聚氰胺和尿酸溶液，并向其中加入不同摩爾濃度的檸檬酸溶液 (低劑量組:.5mM;中劑量組:ImM;高劑量組:2mM)。尿酸在紫外光有兩個(gè)吸收峰:A = 236nm、 入= 291nm，而三聚氰胺在紫外光下沒(méi)有吸收，可以在A=291nm處測(cè)溶液中尿酸的吸光度值 A，由于三聚氰胺會(huì)與尿酸逐漸反應(yīng)生成沉淀，澄清液中尿酸的濃度逐漸降低，吸光度A逐漸減小。根據(jù)朗伯一比耳定律:A = -lgT=ebc，吸光度與濃度成正比，因此根據(jù)記錄的吸光度值，可繪制尿酸的吸光度隨時(shí)間的變化曲線。再將時(shí)間t時(shí)刻的A除以t = 0時(shí)的吸光度值A(chǔ)〇， 然后對(duì)(A/Ao)取對(duì)數(shù)，同樣根據(jù)朗伯一比耳定律:A = -lgT=ebc，ln(A/Ao) = ln(c/co)，再做ln(c/CQ)對(duì)時(shí)間的關(guān)系圖，斜率即為反應(yīng)速率。酒石酸鈉調(diào)控操作及濃度同檸檬酸組。 [〇〇44](3)根據(jù)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)指導(dǎo)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，由于小鼠體內(nèi)尿酸含量較低，先建立小鼠高尿酸結(jié)石模型:
[0045] 將小白鼠平均分為4組，一組空白組、三組高尿酸組(A組:低劑量組;B組:中劑量組;C組:高劑量組)
[0046](4)在高尿酸小鼠的基礎(chǔ)上建立三聚氰胺誘導(dǎo)結(jié)石模型:將小鼠分為5組，一組空白對(duì)照組，一組氧嗪酸鉀對(duì)照組，三組三聚氰胺實(shí)驗(yàn)組(低劑量組:l〇〇mg/Kg三聚氰胺+ 200mg/Kg氧嗪酸鉀；中劑量組:150mg/Kg三聚氰胺+300mg/Kg氧嗪酸鉀;高劑量組:200mg/Kg 三聚氰胺+400mg/Kg氧嗪酸鉀)[〇〇47](5)消石:將產(chǎn)生結(jié)石的小鼠分三組，分別灌胃高(1500mg/Kg)、中(1000mg/Kg)、低(500mg/Kg)劑量的檸檬酸，酒石酸鈉實(shí)驗(yàn)操作同上。(5)通過(guò)用不同的抑制劑灌胃，找到合適的抑制劑和使用控制方法。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種三聚氰胺/尿酸結(jié)石的形成與消除方法研究，其特征在于，包括以下步驟:(1)水體系下探究三聚氰胺對(duì)尿酸結(jié)石的形成的誘導(dǎo)作用研究:設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，將各組溶液超聲，靜置，形成結(jié)石，洗滌，烘干樣品，通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) 水體系下三聚氰胺對(duì)尿酸結(jié)石的形成誘導(dǎo)規(guī)律；(2)根據(jù)(1)中最佳比例，從動(dòng)力學(xué)角度，進(jìn)一步在人工尿液體系中模擬三聚氰胺-尿酸 結(jié)石的形成過(guò)程，并探究結(jié)石抑制劑檸檬酸、酒石酸鈉分別對(duì)結(jié)石形成速率的影響；(3)根據(jù)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)指導(dǎo)體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；(4)在高尿酸小鼠的基礎(chǔ)上建立三聚氰胺誘導(dǎo)結(jié)石模型；(5)消石:用不同的抑制劑灌胃，找到合適的抑制劑和使用控制方法。2.如權(quán)利要求1所述的方法，特征在于，步驟(3)中，所述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用小鼠；由于小鼠體內(nèi)尿酸含量較低，先建立小鼠高尿酸結(jié)石模型:將小白鼠平均分為4組，一組空白組、三組高尿酸組(A組:低劑量組;B組:中劑量組；C 組:高劑量組)。3.如權(quán)利要求2所述的方法，特征在于，步驟(4)中，將小鼠分為5組，一組空白對(duì)照組， 一組氧嗪酸鉀對(duì)照組，三組三聚氰胺實(shí)驗(yàn)組(低劑量組:l〇〇mg/Kg三聚氰胺+200mg/Kg氧嗪 酸鉀；中劑量組:150mg/Kg三聚氰胺+300mg/Kg氧嗪酸鉀；高劑量組:200mg/Kg三聚氰胺+ 400mg/Kg氧嗪酸鉀)。4.如權(quán)利要求2所述的方法，特征在于，步驟(5)中，將產(chǎn)生結(jié)石的小鼠分三組，分別灌 胃高(1500mg/Kg)、中(1000mg/Kg)、低(500mg/Kg)劑量的梓檬酸，酒石酸鈉實(shí)驗(yàn)操作同上。
【文檔編號(hào)】A61K31/53GK105997968SQ201610319164
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月13日
【發(fā)明人】吳慶生, 張玉珍
【申請(qǐng)人】同濟(jì)大學(xué)