一種鏈格孢菌y1309-1在制備納米金方面的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鏈格孢菌Y1309-1在制備納米金方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]納米金不僅具備納米微粒的通性如表面效應(yīng)、量子效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)以及宏觀量子隧道效應(yīng)等，還具有自己獨特的物理化學性能，在納米器件、生物醫(yī)學、腫瘤治療、細胞成像和藥物載體等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。
[0003]納米金屬的生物合成是指利用微生物或植物在常溫常壓下合成納米金屬，無需使用有毒化學原料或不產(chǎn)生有毒副產(chǎn)品，是一種綠色的環(huán)境友好的納米材料合成方法。生物合成方法制備的納米顆粒具有尺寸分布窄、穩(wěn)定性高、生物相容性好、產(chǎn)率高、成本低等優(yōu)點，在納米生物技術(shù)、醫(yī)藥和催化等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用潛力。
[0004]已有的一些研究結(jié)果表明，微生物能夠合成金屬納米材料的原因是其產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)包括蛋白質(zhì)、還原糖、還原性谷胱甘肽等可將金屬離子如金、鎘、鈀、鉬等進行富集還原成納米材料，或?qū)Ⅲw系內(nèi)的兩種金屬離子還原成納米合金，且生物分子對納米金屬穩(wěn)定起著重要作用。因此，本發(fā)明中的鏈格孢菌也具有將金、鎘、鈀、鉬等離子還原組裝為納米粒子或合金的能力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種鏈格孢菌Y1309-1在制備納米金方面的應(yīng)用。制備納米金的方法條件溫和，無需使用多種化學試劑，反應(yīng)成本低，環(huán)境友好。
[0006]技術(shù)方案:為實現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種鏈格孢菌Y1309-1在制備納米金方面的應(yīng)用。
[0007]上述的應(yīng)用，所述鏈格孢菌Y1309-1，其分類命名為鏈格孢菌Y1309-lU7ter/?ariasp.Y1309-1A該菌株已于2014年7月3號保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC No:M 2014311。保藏地址:湖北省武漢市武昌區(qū)武漢大學保藏中心(武漢大學第一附屬小學對面)。
[0008]該鏈格孢菌菌落初白色，漸變?yōu)榛液稚?，菌絲稀疏，基質(zhì)黑褐色。分生孢子梗單枝，長短不一，頂生不分枝，分生孢子有縱橫隔膜，倒棍棒形、卵形。
[0009]上述鏈格孢菌Y1309-1的篩選方法如下:
1)取實驗室保藏的分離自東南大學校園土壤的35株真菌，分別在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)3-5天；
2)將35株菌種分別接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；
3)收集菌體并用無菌水洗滌,將20g濕菌體加入10ml無菌去離子水中，于28°C、pH7、150rpm 培養(yǎng) 48h ；
4)離心除去步驟3)中的菌體，收集上清液。將終濃度0.5-2.0 mmol/L的氯金酸溶液加入步驟4)的上清液中，于28°C、150rpm反應(yīng)3_48h，根據(jù)反應(yīng)后溶液的顏色判斷是否生成納米金(生成納米金的溶液為紫色至深紫色)，對發(fā)生反應(yīng)的體系重復(fù)篩選實驗并對生成的納米金進行確證；
5)收集步驟3)中的菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml終濃度0.5-2.0mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)3_48h,根據(jù)反應(yīng)后菌體的顏色判斷其胞內(nèi)是否生成納米金(生成納米金的細胞為紫色至深紫色)，對發(fā)生反應(yīng)的體系重復(fù)篩選實驗并對生成的納米金進行確證；將篩選得到的能夠生成納米金的菌株選取一株保藏，并命名為鏈格孢菌Y1309-1。
[0010]所述鏈格孢菌Y1309-1制備納米金的具體步驟如下:將鏈格孢菌Y1309-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)4天后，接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml濃度0.5-2.0mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)6h后,破碎菌體,收獲納米金顆粒。
[0011]上述納米金顆粒粒徑為30~40nm。
[0012]有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:本發(fā)明采用鏈格孢菌Y1309-1制備的納米金顆粒，其制備納米金的反應(yīng)于常溫常壓進行，反應(yīng)成本低，反應(yīng)后的菌體細胞收集方便，易于放大制備規(guī)模。本發(fā)明鏈格孢菌Y1309-1制備的納米金顆?？蓪ο嚓P(guān)行業(yè)的含重金屬廢液及土壤進行修復(fù)并再生利用。
【附圖說明】
[0013]圖1為實施例1的鏈格孢菌Y1309-1制備的金納米顆粒的效果圖；
圖2為實施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的掃描電鏡照片；
圖3為實施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的EDS譜圖；
圖4為實施例2的抑制大腸桿菌的效果圖；
圖5為實施例2的抑制金黃色葡萄菌的效果圖。
【具體實施方式】
[0014]以下結(jié)合附圖與具體實施進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015]實施例1:鏈格孢菌Y1309-1的培養(yǎng)條件
鏈格孢菌Y1309-1在PDA固體培養(yǎng)基(馬鈴薯20%，葡萄糖2%，去離子水lOOOmL，pH自然121°C滅菌30min待用)上于28°C培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基(PDA固體培養(yǎng)基:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，瓊脂1.5%，去離子水100mL,pH自然，121°C滅菌30min待用)中于28°C、150rpm培養(yǎng)。
[0016]實施例2鏈格孢菌Y1309-1制備納米金的具體步驟
將鏈格孢菌Y1309-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)4天后，接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、150rpm培養(yǎng)2天；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml無菌氯金酸溶液(濃度0.5-2.0 mmol/L)中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)6h后,破碎菌體，收獲納米金顆粒。
[0017]附圖1左為加氯金酸之前的菌體，右為加入氯金酸反應(yīng)6h后的包裹了納米金的深紫色菌體，說明鏈格孢菌可在胞內(nèi)快速合成納米金。
[0018]附圖2和附圖3分別為鏈格孢菌胞內(nèi)制備的納米金顆粒的透射電鏡照片和EDS圖譜，可以清晰的顯示胞內(nèi)生成的納米金顆粒。
[0019]實施例3本發(fā)明所合成的金納米顆粒對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用步驟I將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌涂布于固體培養(yǎng)基(牛肉膏0.5%，NaCl 0.5%，蛋白胨 1%，pH 7.6-7.8)；
步驟2在固體培養(yǎng)基上放置一張已滅菌濾紙，其上添加實施例2所制備的金納米顆粒溶液5μ1 ；
步驟3將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌于37°C培養(yǎng)24h，分別測量其抑菌圈直徑并取平均值，確定大腸桿菌在納米金作用下的抑菌圈直徑為1.21cm,金黃色葡萄球菌在納米金作用下的抑菌圈直徑為1.42 cm。
[0020]附圖4和附圖5是實施例2所合成的納米金對大腸桿菌和銀黃色葡萄球菌抑菌圈大小，說明鏈格孢菌制備的納米金對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌都具有抑制作用。
【主權(quán)項】
1.一種鏈格孢菌Y1309-1在制備納米金方面的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的的應(yīng)用，其特征在于，所述鏈格孢菌Y1309-1，其分類命名為鏈格孢菌Y1309-1 (Wieraaria sp.Y1309-1A該菌株已于2014年7月3號保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC No:M 2014311。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述鏈格孢菌Y1309-1制備納米金的具體步驟如下:將鏈格孢菌Y1309-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)4天后，接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml濃度0.5-2.0 mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)6h后，破碎菌體，收獲納米金顆粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述納米金顆粒粒徑為30~40nm。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鏈格孢菌Y1309-1在制備納米金方面的應(yīng)用。本發(fā)明采用鏈格孢菌Y1309-1制備的納米金顆粒，其制備納米金的反應(yīng)于常溫常壓進行，反應(yīng)成本低，反應(yīng)后的菌體細胞收集方便，易于放大制備規(guī)模。本發(fā)明鏈格孢菌Y1309-1制備的納米金顆?？蓪ο嚓P(guān)行業(yè)的含重金屬廢液及土壤進行修復(fù)并再生利用。CCTCC No：M 201431120140703
【IPC分類】C12R1-645, C12P3-00, B82Y40-00, B22F9-24
【公開號】CN104551001
【申請?zhí)枴緾N201410819613
【發(fā)明人】陳峻青, 戚文秀, 吉民, 李黎
【申請人】東南大學
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月25日