高純度海綿骨針的制備方法
【專利摘要】高純度海綿骨針的制備方法，涉及海綿骨針。將海綿洗凈，干燥，粉碎，過篩，去除大顆粒物質(zhì)，得海綿粉末；在海綿粉末中加入酸、次氯酸鹽中的至少一種，攪拌，同時(shí)加熱到30～110℃并保溫0.5～6h，停止加熱后沉淀，收集沉淀的骨針，清洗后得骨針粗產(chǎn)品；配制濃度為1％～10％的粘稠劑，將骨針粗產(chǎn)品與粘稠劑混合，同時(shí)加入濃度為1％～30％的過氧化氫溶液，過氧化氫與骨針粗產(chǎn)品中的海綿角蛋白反應(yīng)，在角蛋白表面產(chǎn)生氣泡；將含有過氧化氫、骨針粗產(chǎn)品的粘稠劑放入真空容器中，通過調(diào)節(jié)真空度的高低調(diào)節(jié)角蛋白表面氣泡的大小及逃逸時(shí)間，靜置后，雜質(zhì)與骨針分層，平衡壓力后打開真空容器，將上層雜質(zhì)去除，清洗下層沉淀，即得產(chǎn)物。
【專利說明】
高純度海綿骨針的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及海綿骨針，尤其是涉及一種高純度海綿骨針的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]海綿動(dòng)物屬于多孔動(dòng)物門，俗稱海綿，是最簡(jiǎn)單的多細(xì)胞動(dòng)物，它們沒有明確的器官結(jié)構(gòu)，但中膠層發(fā)達(dá)，其中的細(xì)胞具有全能性。海綿中與其它后生動(dòng)物相比，海綿細(xì)胞呈現(xiàn)出高度的獨(dú)立性。海綿主要營固著生活，體內(nèi)有一套特有的水溝系統(tǒng)，是其攝食、呼吸、排泄、生殖等生命活動(dòng)的主要通道。由于成體海綿營固著或附著生活，不具備運(yùn)動(dòng)能力。
[0003]海綿動(dòng)物在地球上分布廣泛，生物量巨大，估計(jì)約有15，000種現(xiàn)生種，已記錄了約8，500種海綿，除了 150種淡水海綿外，其余的都是海洋種類(Hooper，2002)。它們大量存活在包括深海和極地海域在內(nèi)的所有的海域中。大部分沿海種類的海綿披覆生長在巖石，貝殼的外殼，海水中的木頭或珊瑚礁等堅(jiān)硬物質(zhì)的表面，這樣能夠降低它們被海浪剝離、拆散的危險(xiǎn)。而直立生長的海綿在水流緩慢的深海中較常見，直立生長也可以避免它們?cè)谏詈Ｖ斜淮罅康某练e物所覆蓋。大部分海綿種類生活在較淺的水域，也有一些種類包括大部分的六放海綿是棲息在深海中。而未污染的沿海以及熱帶珊瑚礁海域則是海綿主要的生活區(qū)域。
[0004]骨針(spiculers)是由海綿動(dòng)物體內(nèi)一種具有富集并有條理地沉淀娃或I丐能力的造骨細(xì)胞(sclerocytes)分泌產(chǎn)生，它們是一種特殊中膠層細(xì)胞，分布于中膠層中。
[0005]海綿的骨針形態(tài)多樣，是海綿分類鑒定的重要依據(jù)。骨針主要成分為二氧化硅的尋常海綿綱的種類占海綿生物種類80%以上，其主要分布區(qū)域?yàn)闇\海。
[0006]由于海綿骨針形態(tài)隨種類而異，粒徑一致，數(shù)量眾多且成分穩(wěn)定，其利用價(jià)值逐漸為人們所重視。目前僅有以科研為目的的海綿骨針提取方法為科研工作者所熟知(參考文獻(xiàn):王德祥，沈銘輝，海綿骨針的制備方法，廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2006)，但是該方法存在處理量少、成本尚、海綿骨針提取純度不尚等缺點(diǎn)，特別是海綿角蛋白等特殊蛋白去除不徹底，因此該方法僅適用于以形態(tài)分類為目的的海綿骨針提取。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于針對(duì)傳統(tǒng)的海綿骨針批量制備上存在的上述不足，提供一種高純度海綿骨針的制備方法。
[0008]本發(fā)明包括以下步驟:
[0009]I)將海綿洗凈，干燥；
[0010]2)將干燥后的海綿粉碎，過篩，去除大顆粒物質(zhì)，得海綿粉末；
[0011 ] 3)在海綿粉末中加入酸、次氯酸鹽中的至少一種，攪拌，同時(shí)加熱到30?110 °C并保溫0.5?6h，停止加熱后沉淀，收集沉淀的骨針，清洗后得骨針粗產(chǎn)品;粗產(chǎn)品中最主要的固體雜質(zhì)是海綿角蛋白；
[0012]4)配制質(zhì)量百分濃度為1%?10%的粘稠劑，將步驟3)得到的骨針粗產(chǎn)品與粘稠劑混合，同時(shí)加入質(zhì)量百分濃度為I %?30 %的過氧化氫溶液，過氧化氫與骨針粗產(chǎn)品中的海綿角蛋白反應(yīng)，在角蛋白表面產(chǎn)生氣泡；
[0013]5)將含有過氧化氫、骨針粗產(chǎn)品的粘稠劑放入真空容器中，通過調(diào)節(jié)真空度的高低調(diào)節(jié)角蛋白表面氣泡的大小及逃逸的時(shí)間，靜置后，雜質(zhì)與骨針逐步分層，平衡壓力后打開真空容器，將上層的雜質(zhì)去除，清洗下層沉淀，即得高純度海綿骨針。
[0014]在步驟I)中，所述海綿可采用養(yǎng)殖的海綿，或者自然海區(qū)采集的方式獲得的具有礦物骨針的天然海綿，或者提取活性物質(zhì)剩余的海綿殘?jiān)?所述洗凈可將海綿撕成0.5?
5.0cm3大小，用清水沖洗，去除泥沙、雜質(zhì)及共生生物;所述干燥可采用離心或擠壓方式去除多余水分，再晾干或烘干。
[0015]在步驟2)中，所述過篩可過15?60目的篩網(wǎng)。
[0016]在步驟3)中，所述酸可選自鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸等中的一種;所述沉淀可采用自然沉淀0.5?6h或離心，所述離心的離心力<1000g;所述清洗可采用清水漂洗I?4次。
[0017]在步驟4)中，所述粘稠劑可選自甘油、纖維素類、聚丙烯酸類等中的一種。
[0018]本發(fā)明采用將樣品與酸或次氯酸鹽共熱處理，過氧化氫氣泡懸浮角蛋白等方法，顯著提高海綿骨針的獲取率及純度。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1:
[0020]以海綿活性產(chǎn)物提取剩余的海綿殘?jiān)鼮椴牧?，通風(fēng)櫥中晾干，去除有機(jī)溶劑。通過40目，80目的兩級(jí)套篩過濾，獲得粉末狀的海綿殘?jiān)?。按照海綿殘?jiān)c鹽酸質(zhì)量體積比為1:2的比例加入鹽酸開始消化，密封消化容器，同時(shí)沸水浴加熱。2h后，用清水漂洗消化后的骨針兩遍。取出骨針粗產(chǎn)品。粗產(chǎn)品中，雜質(zhì)的含量約占產(chǎn)品干重的12%。配制2%的纖維素凝膠溶液，將10g骨針粗產(chǎn)品與50mL過氧化氫混合，迅速加入IL新配制的凝膠溶液，攪拌分散后，放入真空容器中抽真空。保持真空狀態(tài)靜置1min后，迅速解除真空狀態(tài)，將浮在表面的雜質(zhì)迅速取出。凝膠溶液底部沉淀的海綿骨針的純度可以達(dá)到95%?98%。
[0021]實(shí)施例2:
[0022]以新鮮獲取的海綿為材料，撕開，清洗，去除其中的雜質(zhì)及其他生物。洗凈后的海綿晾干、粉碎。通過20目以及60目的兩級(jí)套篩，獲得粉末狀的海綿殘?jiān)?。按照海綿粉末與次氯酸鈉的質(zhì)量體積比為1:4的比例加入次氯酸鈉溶液，在通風(fēng)系統(tǒng)中加熱至60?70°C，消化過程不斷攪拌。4h后停止加熱，自然冷卻，沉淀。將上清倒出，清洗沉淀2?3次。此時(shí)獲得的海綿骨針的純度約為8 2 %.配制6 %的海藻酸凝膠溶液2 L，將海綿骨針的粗產(chǎn)品5 O O g與10mL的過氧化氫攪拌，迅速放入凝膠溶液中，攪拌分散后置于真空容器中抽真空。保持真空狀態(tài)20min后，迅速解除真空狀態(tài)，將漂浮在表面的雜質(zhì)取出。經(jīng)顯微鏡檢測(cè)，骨針的純度可以達(dá)到97%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于包括以下步驟: 1)將海綿洗凈，干燥； 2)將干燥后的海綿粉碎，過篩，去除大顆粒物質(zhì)，得海綿粉末； 3)在海綿粉末中加入酸、次氯酸鹽中的至少一種，攪拌，同時(shí)加熱到30?110°C并保溫0.5?6h，停止加熱后沉淀，收集沉淀的骨針，清洗后得骨針粗產(chǎn)品;粗產(chǎn)品中最主要的固體雜質(zhì)是海綿角蛋白； 4)配制質(zhì)量百分濃度為1%?10%的粘稠劑，將步驟3)得到的骨針粗產(chǎn)品與粘稠劑混合，同時(shí)加入質(zhì)量百分濃度為1%?30%的過氧化氫溶液，過氧化氫與骨針粗產(chǎn)品中的海綿角蛋白反應(yīng)，在角蛋白表面產(chǎn)生氣泡； 5)將含有過氧化氫、骨針粗產(chǎn)品的粘稠劑放入真空容器中，通過調(diào)節(jié)真空度的高低調(diào)節(jié)角蛋白表面氣泡的大小及逃逸的時(shí)間，靜置后，雜質(zhì)與骨針逐步分層，平衡壓力后打開真空容器，將上層的雜質(zhì)去除，清洗下層沉淀，即得高純度海綿骨針。2.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述海綿采用養(yǎng)殖的海綿，或者自然海區(qū)采集的方式獲得的具有礦物骨針的天然海綿，或者提取活性物質(zhì)剩余的海綿殘?jiān)?.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述洗凈是將海綿撕成0.5?5.0cm3大小，用清水沖洗，去除泥沙、雜質(zhì)及共生生物。4.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述干燥是采用離心或擠壓方式去除多余水分，再晾干或烘干。5.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述過篩是過15?60目的篩網(wǎng)。6.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述酸選自鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸中的一種。7.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述沉淀采用自然沉淀0.5?6h或離心，所述離心的離心力<1000g。8.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述清洗采用清水漂洗I?4次。9.如權(quán)利要求1所述高純度海綿骨針的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述粘稠劑選自甘油、纖維素類、聚丙烯酸類中的一種。
【文檔編號(hào)】C01B33/12GK105858669SQ201610267764
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月27日
【發(fā)明人】王德祥, 陳銘
【申請(qǐng)人】廈門大學(xué)