一種水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種水稻專用的有機復(fù)合生物肥，其通過將粉碎的秸稈和牛糞作為固體有機物料，再添加5‰比例的具有特定腐熟功效的有機物料腐熟劑并加適量的水，與有機物料混合后，保持含水量為60％左右，自然室外溫度下發(fā)酵5?10天腐熟形成初肥。再添加適當比例的各類營養(yǎng)元素與發(fā)酵物料混合均勻后，添加4‰比例的水稻專用的促生長復(fù)合菌劑均勻混合后獲得的生物肥料。本發(fā)明解決了單純施用化肥、普通有機肥、農(nóng)家肥以及純微生物菌肥所存在的種種弊端，并充分結(jié)合了水稻各個時期的生長特點及對養(yǎng)分的需求，注意調(diào)節(jié)其營養(yǎng)生長與生殖生長的矛盾，是一種尤其適用于水稻生長、高效、優(yōu)質(zhì)的有機復(fù)合生物肥。在水稻生產(chǎn)種植方面具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】
-種水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種有機復(fù)合生物肥及其制備方法，尤其適用于水稻，屬于農(nóng)業(yè)生物 有機肥制備的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前我國化肥年使用量在一億Ξ千萬噸左右，廣大農(nóng)民一直W來都是使用化肥， 然而長期使用化肥產(chǎn)生的弊端隨之而來，±地板結(jié)、化學(xué)元素殘留、環(huán)境污染等等一系列問 題浮出水面。化肥已經(jīng)不能滿足可持續(xù)發(fā)展的需要，更不能成為綠色農(nóng)業(yè)的支柱，各國都在 尋找對策。生物有機肥就此而誕生，成為化肥的第二次革命。生物有機肥是指特定功能微生 物與主要W動植物殘體(如畜禽糞便、農(nóng)作物賴桿等)為來源并經(jīng)無害化處理、腐熟的有機 物料復(fù)合而成的一類兼具微生物肥料和有機肥效應(yīng)的肥料。
[0003] 而水稻，是一年生禾本科植物，水稻所結(jié)稻粒去殼后稱大米或米。世界上近一半人 口，都W大米為食。水稻分葉期植株的生長中屯、是大量生根、生葉、分葉，需要較多的氮素來 形成氮化物。運段時期的營養(yǎng)生理特點，W氮代謝為主，碳水化合物的積累較少，對氮的需 求量大于憐、鐘的吸收量。從穗開始分化到抽穗期，W莖的伸長、穗的形成為生長發(fā)育的中 屯、，此階段的營養(yǎng)特點是前期碳、氮代謝旺盛，后期碳的代謝逐漸占優(yōu)勢，則吸收較多的氮 肥長葉、長莖和幼穗分化，又要積累大量的碳水化合物，供出穗后向穗部轉(zhuǎn)運，所W對氮、 憐、鐘吸收都較多。抽穗后，莖葉和根的生長基本停止，植株生長中屯、轉(zhuǎn)向巧粒的形成，其營 養(yǎng)特點是W碳素代謝為主，制造積累大量的碳水化合物，向巧粒中轉(zhuǎn)運膽藏，所W對憐鐘的 吸收較多。此外，水稻對微量元素娃的需求量比較大。要解決上述問題就要改變現(xiàn)有的生產(chǎn) 模式，從而使養(yǎng)分釋放符合水稻養(yǎng)分吸收要求。隨著科學(xué)的發(fā)展，生物有機肥在農(nóng)業(yè)中的作 用漸漸顯露出來。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥是指利用微生物技術(shù)，選配具有特定腐 熟功能的菌種制成菌劑，用此菌劑將固體有機物料發(fā)酵成初肥，再按適宜的比例添加各類 營養(yǎng)元素，再配W水稻專用促生長復(fù)合菌劑所制成的肥料。本發(fā)明產(chǎn)品充分利用了具有腐 熟功能菌種的特性，將各類廢棄的固體有機物料發(fā)酵腐熟成肥料，變廢為寶，節(jié)省資源，大 大減少了環(huán)境污染;又添加水稻專用的促生長菌劑，此促生長復(fù)合菌劑是經(jīng)查閱大量的資 料，進行研究總結(jié)，根據(jù)實際要求選擇幾種針對水稻有特殊功效的有益微生物，然后通過實 際反復(fù)實驗，最后確定各微生物的最佳比例，保證水稻各階段的營養(yǎng)需求。通過各菌種之間 的相互作用，起到刺激植物生長、緩解±地板結(jié)、改良±壤生態(tài)環(huán)境、防病抗病等作用，從而 達到增產(chǎn)、高產(chǎn)的目的。
[0005] 本發(fā)明產(chǎn)品所選用腐熟菌劑，其采用枯草芽抱桿菌（Bacillus subtil is) CICC10088,米曲霉（Aspergillus nige;r)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete c虹ysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449等具有特殊腐熟功 效的菌種，按適當?shù)谋壤龔?fù)合發(fā)酵而成的微生物菌劑。所選用各菌種均能夠產(chǎn)生纖維素酶、 木質(zhì)素酶、半纖維素酶、蠟質(zhì)素酶、果膠酶等多種生物酶，通過中溫菌和耐高溫菌的協(xié)同作 用，快速將各類廢棄的有機物料發(fā)酵腐熟成肥料，變廢為寶，節(jié)省資源，大大減少了環(huán)境污 染。
[0006] 本發(fā)明所選用水稻專用的促生長復(fù)合菌劑，其含有大量的對水稻生長發(fā)育有特殊 功效的有益微生物，其采用枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183、巨大芽抱桿菌 (Bacillus megateriunOACCC 10010、地衣芽抱桿菌（Bacillus licheniformis) CICC10037、膠質(zhì)芽抱桿菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153等菌種發(fā)酵液混合后作 為混合菌劑，經(jīng)再次發(fā)酵而制備的微生物復(fù)合菌劑。本發(fā)明選取各菌種是經(jīng)查閱大量的文 獻資料，進行研究總結(jié)，根據(jù)實際要求選擇幾種針對水稻生長發(fā)育有特殊功效的有益微生 物，然后通過實際反復(fù)實驗，最后確定各微生物的最佳比例，從而保證水稻各階段的營養(yǎng)需 求。
[0007] 具體的本發(fā)明所述水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，該方法包括如下步 驟：
[0008] (一)有機物料腐熟劑的制備
[0009] 將菌種數(shù)量分別達到108個/mLW上的枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis) CICC10088,米曲霉（Aspergillus nige;r)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete chrysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei )ACCC30449的菌種發(fā)酵液按 1.5~2.0:0.8~1.3:0.8~1.3:0.8~1.3的體積比混合均勻后，接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng) 基A的發(fā)酵罐中，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A總體積的5%，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A的pH 6.0~ 8.0,30°C下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到108個/mL，即得到有機物料腐熟劑；
[0010] 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為：玉米面0.5~1.5g/L、玉米賴桿粉15~17g/L、教皮 0.2~0.4g/L、豆餅粉0.2~0.4g/L、Vogel' S母液4mL/100mL，抑值6.0~8.0;
[0011] 步驟(一)的具體制備過程為：
[001 ^ 1.菌種活化:將所述各菌種接于斜面培養(yǎng)基上;枯草芽抱桿菌28~32 °C，pH為7.2 ~7.4,培養(yǎng)時間為1~3天;米曲霉培養(yǎng)溫度25~28°C，抑為6.0~6.5,培養(yǎng)時間為4~7天； 白腐菌培養(yǎng)溫度25~28°C，培養(yǎng)時間為4~7天；
[001引2.-級菌種培養(yǎng):將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng) 基pH為6.0~8.0，錐形瓶放入搖床振蕩培養(yǎng)，溫度為30°C，振蕩24~48h;采用血球計數(shù)板計 數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到108個/mL;
[0014] 3.二級發(fā)酵:將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的lOOOmL錐形瓶中，培養(yǎng)基 pH6.0~8.0，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;從而獲得菌種數(shù)量分別達到108個/ mLW上的枯草芽抱桿菌（Bacillus subtil is )CICC10088,米曲霉（Aspergillus niger) CICC2436，白腐菌（Phanerochaete ch;rysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei)ACCC30449。
[0015] 所述斜面培養(yǎng)基配方為：
[0016] 1.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:牛肉浸液1.化，蛋白腺lOg，化C15.0g， 瓊脂20.0-20.5g，PH7.2-7.4，牛肉浸液的制備：瘦牛肉洗凈，切碎，稱取550g浸泡于1375mL 水中，浸泡一夜，過濾，過濾分裝后0.化奸/cm2 40min備用。
[0017] 2.米曲霉采用的斜面培養(yǎng)基配方為：5 OBe麥芽汁瓊脂，5 OBe麥芽汁1.化，瓊脂 15.0g，自然PH。
[0018] 3.白腐菌的斜面培養(yǎng)基配方為:PDA培養(yǎng)基，取去皮的馬鈴馨200克，切成小塊，加 水1000毫升煮沸30分鐘濾去馬鈴馨塊，將濾液補足至1000毫升，加葡萄糖20克，瓊脂15克， 溶化后分裝，15磅滅菌30分鐘；自然PH。
[0019] 4.里氏木霉的斜面培養(yǎng)基配方:同白腐菌。
[0020] 所述液體培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂即可。
[0021] (二)混拌、發(fā)酵
[0022] 將步驟(一）制備好的有機物料腐熟劑按發(fā)酵物料總質(zhì)量的5%。比例混合，再兌入 適量的水，使總水分控制在60 %左右，在發(fā)酵池經(jīng)過5-10天發(fā)酵，即制得初肥；
[0023] 所述發(fā)酵具體為:將混合攬拌均勻的發(fā)酵物料放進發(fā)酵設(shè)施，壓實填滿排去空氣， 發(fā)酵池頂部覆蓋一層塑料薄膜，上蓋密封發(fā)酵、適時翻煤，翻堆時補充水分，將總水分控制 在60%左右，原料手握成團，指縫有水但不滴，而松手即散為好。
[0024] 在優(yōu)選的技術(shù)方案中，步驟(二）的發(fā)酵時間是指:一般夏天4-5天，春秋6-7天，冬 季10天。
[0025] (Ξ)深加工
[0026] 將初肥進行粉碎、烘干，按初肥質(zhì)量百分比，具體添加如下營養(yǎng)元素：
[0027] 氮3.0-4.0 %、憐1.0-2.5 %、鐘1.5-3.0 %、娃2.0-5.0 %、腐植酸類肥料5.0~ 10.0%;
[00%]優(yōu)選情況下，添加營養(yǎng)元素的比例為：
[0029] a.大量元素(氮、憐、鐘)的添加比例:氮3.0%、憐1.5%、鐘2.0%;
[0030] b.微量元素(娃)的添加比例:3.0% ;
[0031] C.腐植酸類肥料的添加比例:5.0%。
[0032] (四）水稻專用促生長復(fù)合菌劑的制備
[0033] 將菌種數(shù)量分別達到108個/mLW上的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183、巨大芽抱桿菌（Baci 1 lus megateriunOACCC 10010、地衣芽抱桿菌（Baci 1 lus lichenifo;rmis)CICC10037、膠質(zhì)芽抱桿菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153的菌種 發(fā)酵液，按(30~40% ): (10~20% ):巧~10% ): (30~40% )的比例混合均勻后作為混合菌 劑，接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的發(fā)酵罐中，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B總體積的5%，復(fù) 合菌劑培養(yǎng)基B的pH 6.5~7.5，30°C下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到6~10X 108個/ mL，即得到水稻專用微生物復(fù)合菌劑，抑為6.8，總有效活菌數(shù)為9 X 108個/mM
[0034] 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為：玉米粉15~18g/100mU豆粗粉5~8g/100mL、酵 母膏0.1 ~0.2g/100血、K出P〇4 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7出0 0.001 ~0.02g/100mL、NaCl 0.5~0.8g/100mL、（NH4)2S04 0.001 ~0.0 lg/lOOmL，其余為蒸饋水；
[0035] 所述步驟（四）的具體過程如下：
[0036] 1.接種:將所述各菌種(膠質(zhì)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、巨大芽抱桿菌、枯草芽抱桿 菌)分別接于斜面培養(yǎng)基上;膠質(zhì)芽抱桿菌(鐘細菌)培養(yǎng)溫度25~35°C，pH為7.5~8.0,培 養(yǎng)時間為5天;地衣芽抱桿菌培養(yǎng)溫度25~30°C，pH為7.0~8.0,培養(yǎng)時間為5天；巨大芽抱 桿菌為27~37°C，pH為6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天;枯草芽抱桿菌培養(yǎng)溫度27~37°C，pH為 6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天；
[0037] 2.-級菌種培養(yǎng):將所述步驟1制備的菌種分別按接種環(huán)一環(huán)的量接種于盛有相 應(yīng)液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH為6.5~7.5，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C， 振蕩24~4她;采用血球計數(shù)板計數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到108個;
[0038] 3.二級發(fā)酵:將所述步驟2制備的菌種分別按5%接種于盛有液體培養(yǎng)基的lOOOmL 錐形瓶中，培養(yǎng)基抑6.5~7.5，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;使菌種數(shù)量分別 達到108個/mLW上，從而制得菌種數(shù)量分別達到108個/mLW上的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183、巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010、地衣芽抱桿菌 (Bacillus licheniformis)CICC10037、膠質(zhì)芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153的菌種發(fā)酵液。
[0039] 所述水稻微生物復(fù)合菌劑制備過程中用到的斜面培養(yǎng)基配方為：
[0040] 1.膠質(zhì)芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:K出Κ)4 0.06g、MgS化· 7出0 0.05g、 [0041 ] CaS〇4 ·甜2〇 0.004g、蛋白腺5g、玉米漿（50%干重）2.5g、乳糖 15g、化Cl 4g、蒸饋 水lOOOmL、瓊脂25g、抑 7.1;
[0042] 2.地衣芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為：
[0043] 蛋白腺lO.Og，牛肉浸取物3.0g，氯化鋼5.0g，、瓊脂15g、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0044] 3.巨大芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為：牛肉膏3g、蛋白腺5g、瓊脂15g、化C1 5邑、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0045] 4.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:牛肉膏l(xiāng)Og、蛋白腺10g、NaCl 5g、葡萄 糖lOg，瓊脂15g，蒸饋水lOOOmL，抑7.0;
[0046] 所述液體培養(yǎng)基配方為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂制得。
[0047] (五）按步驟(Ξ)深加工所獲得的發(fā)酵物料總質(zhì)量的3~5%。比例添加步驟（四）獲 得的水稻專用的促生長復(fù)合菌劑獲得終產(chǎn)品，將物料混合均勻后，經(jīng)造粒機造粒或成粉，檢 測合格后，包裝入庫。
[0048] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟(一)所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為：玉 米面0.5g/L、玉米賴桿粉 15g/L、教皮0.25g/L、豆餅粉0.25g/L、Vogel' S 母液4mL/100mL，抑 8.5〇
[0049] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟（一）所述枯草芽抱桿菌（Bacillus subtil is )CICC10088,米曲霉（Aspergillus η ige;r)CICC2436，白腐菌（Phanerochaete c虹ysospo;rium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449的菌種發(fā)酵液按2: 1:1:1的比例混合均勻。
[0050] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟(二)所述發(fā)酵有機物料為粉碎的玉米 賴桿與動物糞便按1~2:0.5~2質(zhì)量比混合，所述動物糞便通常為雞糞或牛糞。
[0051] 對于上述技術(shù)方案，在優(yōu)選的情況下，步驟(Ξ)所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為： 玉米粉 16g/100mL、豆粗粉7g/100mL、酵母膏0 . lg/100mL、K出P〇4 lg/100mL、K2冊〇4 Ig/ 100血、MgS〇4.7出0 O.Olg/lOOmL、化Cl 0.6g/100血、（NH4)2S04 O.Olg/100血，其余為蒸饋 水。
[0052] 本發(fā)明的技術(shù)方案是經(jīng)過近幾年的不懈努力，結(jié)合水稻各個時期的生長特點及對 養(yǎng)分的需求，注意調(diào)節(jié)其營養(yǎng)生長與生殖生長的矛盾，最終研制出一種高效優(yōu)質(zhì)的生物有 機肥。其綜合運用了微生物技術(shù)、化肥工業(yè)和農(nóng)業(yè)技術(shù)等最新成果，優(yōu)先制備了一種高效的 富含有機質(zhì)、N · P · K營養(yǎng)元素和某些微量元素、植物生長調(diào)節(jié)劑等物質(zhì)有機結(jié)合起來，由 特定工藝最終形成了W有機質(zhì)為主體的營養(yǎng)合理、N ·P · K比例適當?shù)念w粒狀營養(yǎng)源。該種 肥料不僅具有高利用率、肥效期長的優(yōu)點，而且具有改良±壤、提高農(nóng)作物品質(zhì)，增強作物 抗逆性，增加產(chǎn)量，減少污染，刺激作物生長發(fā)育等特點，省時省工，具有良好的社會效益和 經(jīng)濟效益。
[0化3]有益效果
[0054] 本發(fā)明所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥是選用具有特定具有腐熟功能的菌種 制成菌劑，用此菌劑將有機固體物料發(fā)酵腐熟成初肥，再按適宜的比例添加大量元素(氮、 憐、鐘）、微量元素(娃)及其他特殊物質(zhì)，再配W功效相應(yīng)的促進水稻生長的菌劑及其他特 殊物質(zhì)所制成的肥料。腐熟劑中含有大量的枯草芽抱桿菌、米曲霉、里氏木霉、白腐菌等，能 夠產(chǎn)生纖維素酶、木質(zhì)素酶、半纖維素酶、蠟質(zhì)素酶、果膠酶等多種生物酶，通過中溫菌和耐 高溫菌的協(xié)同作用，快速將各類廢棄的固體有機物料發(fā)酵腐熟成肥料，變廢為寶，節(jié)省資 源，大大減少了環(huán)境污染;又添加各類營養(yǎng)元素及水稻專用的促生長復(fù)合菌劑，通過對水稻 有特殊功效的有益微生物枯草芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、巨大芽抱桿菌、膠質(zhì)芽抱桿菌等各 菌種之間的相互作用，起到刺激植物生長、緩解上地板結(jié)、改良上壤生態(tài)環(huán)境、從而達到增 產(chǎn)、高產(chǎn)的目的。
【具體實施方式】
[0055] 本發(fā)明的下述非限制性實施例可W使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā) 明，但不W任何方式限制本發(fā)明。實施例中所用的生物材料均可W由商業(yè)途徑獲得。
[0056] 實施例一:水稻專用生物有機肥的制備
[0057] 本發(fā)明水稻專用的有機復(fù)合生物肥產(chǎn)品是指利用微生物技術(shù)，選配具有特定腐熟 功能的菌種制成菌劑，用此菌劑將有機固體物料發(fā)酵腐熟成初肥，再配W各種營養(yǎng)元素及 水稻專用的促生長復(fù)合菌劑所制成的生物肥料。其【具體實施方式】如下：
[0058] (一)有機物料腐熟劑的制備
[0059] 采用枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)CICC10088,米曲霉（Aspergillus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysospor ium) ACCC30414、里氏木霉 (化ichoderma reesei)ACCC30449等具有高效腐熟作用的菌種按適當?shù)谋壤龔?fù)合發(fā)酵而成 的腐熟困劑。
[0060] 1.菌種活化:將所述各菌種接于斜面培養(yǎng)基上;枯草芽抱桿菌28~32 °C，pH為7.2 ~7.4,培養(yǎng)時間為1~3天;米曲霉培養(yǎng)溫度25~28°C，抑為6.0~6.5,培養(yǎng)時間為4~7天； 白腐菌培養(yǎng)溫度25~28°C，培養(yǎng)時間為4~7天；
[0061] 2.-級菌種培養(yǎng):將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng) 基pH為6.0~8.0，錐形瓶放入搖床振蕩培養(yǎng)，溫度為30°C，振蕩24~48h;采用血球計數(shù)板計 數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到1〇8個/mL;
[0062] 3.二級發(fā)酵:將所述菌種分別接種于盛有液體培養(yǎng)基的lOOOmL錐形瓶中，培養(yǎng)基 PH6.0~8.0,放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;使菌種數(shù)量分別達到108個/mLW 上，將各菌種按所述菌種的質(zhì)量百分比混合；
[0063] 4.Ξ級發(fā)酵：分別將枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)CICC10088,米曲霉 (Aspergillus nige;r)CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysospo;rium)ACCC30414、、里 氏木霉（Trichoderma reesei)ACCC30449的菌種發(fā)酵液按2:1: : 1:1的比例混合均勻后，接 種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基pH 6.0~8.0，接種量為5%，30°C下 培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中菌數(shù)達到108個/mL，即得到有機物料賴桿腐熟劑。
[0064] 所述斜面培養(yǎng)基配方為：
[0065] 1.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:普通瓊脂:牛肉浸液1.化，蛋白腺lOg， NaC15. Og，瓊脂20.0-20.5g，PH7.2-7.4，牛肉浸液的制備:瘦牛肉洗凈，切碎，稱取550g浸泡 于1375mL水中，浸泡一夜，過濾，過濾分裝后0.化奸/cm240min備用。
[0066] 2 .米曲霉采用的斜面培養(yǎng)基配方為：5° Be麥芽汁瓊脂，5° Be麥芽汁1.0L，瓊脂 15.0g，自然PH。
[0067] 3.白腐菌的斜面培養(yǎng)基配方為:PDA培養(yǎng)基，取去皮的馬鈴馨200克，切成小塊，加 水1000毫升煮沸30分鐘濾去馬鈴馨塊，將濾液補足至1000毫升，加葡萄糖20克，瓊脂15克， 溶化后分裝，15磅滅菌30分鐘。自然PH。
[0068] 4.里氏木霉的斜面培養(yǎng)基配方為：同白腐菌配方。
[0069] 所述液體培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂即可。
[0070] 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基配方為：玉米面0.5g/L、玉米賴桿粉15g/L、教皮0.25g/L、豆 餅粉0.25g/L、4mL/100mL Vogel'S母液，pH值8.5。
[OOW 仁)混拌、發(fā)酵
[0072] 準備500kg粉碎的玉米賴桿與200kg牛糞作為發(fā)酵的原始有機物料，將制備好的有 機物料腐熟劑按發(fā)酵物料總質(zhì)量的5%。兌入適量的水中，與有機物料均勻混拌，原料手握成 團，指縫有水但不滴，而松手即散為好(總水分在60%左右）。將混合攬拌均勻的發(fā)酵物料放 進發(fā)酵設(shè)施，壓實填滿排去空氣，發(fā)酵池頂部覆蓋一層塑料薄膜，上蓋密封發(fā)酵、適時翻煤， 翻堆時補充水分，將總水分控制在60%左右。經(jīng)過10天發(fā)酵，即制得初肥。
[0073] (Ξ)各類營養(yǎng)元素的添加
[0074] 物料發(fā)酵完成后，按肥劑型要求進行粉碎、烘干，而后添加各類營養(yǎng)元素，包括大 量元素(氮、憐、鐘）、微量元素(娃），按發(fā)酵物料質(zhì)量計算，具體添加比例如下：
[00對 a.大量元素(氮、憐、鐘)的添加比例:氮3.0%、憐1.5%、鐘2.0%;
[0076] b.微量元素(娃)的添加比例:3.0% ;
[0077] C.腐植酸錠的添加比例:5.0%。
[0078] (四）水稻專用促生長復(fù)合菌劑制備及添加
[00巧]采用膠質(zhì)芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153，褐色球形固氮菌 (Azotobacter chroococcunOCGMCC 1.142，巨大芽抱桿菌（Bacillus megateriunOACCC 10010,枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183等具有特殊功效的菌種發(fā)酵液混合 后作為混合菌劑，經(jīng)再次發(fā)酵而制備的微生物復(fù)合菌劑。
[0080] 所述的水稻微生物復(fù)合菌劑制備步驟如下：
[0081] 1.接種:將所述各菌種(膠質(zhì)芽抱桿菌、地衣芽抱桿菌、巨大芽抱桿菌、枯草芽抱桿 菌)分別接于斜面培養(yǎng)基上;膠質(zhì)芽抱桿菌(鐘細菌)培養(yǎng)溫度25~35°C，pH為7.5~8.0,培 養(yǎng)時間為5天;地衣芽抱桿菌培養(yǎng)溫度25~30°C，pH為7.0~8.0,培養(yǎng)時間為5天；巨大芽抱 桿菌為27~37°C，pH為6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天;枯草芽抱桿菌培養(yǎng)溫度27~37°C，pH為 6.5~7.5，培養(yǎng)時間為4天；
[0082] 2.-級菌種培養(yǎng):將所述步驟1制備的菌種分別按接種環(huán)一環(huán)的量接種于盛有相 應(yīng)液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH為6.5~7.5，錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為30°C， 振蕩24~4她;采用血球計數(shù)板計數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達到108個;
[0083] 3.二級發(fā)酵:將所述步驟2制備的菌種分別按5%接種于盛有液體培養(yǎng)基的lOOOmL 錐形瓶中，培養(yǎng)基抑6.5~7.5，放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h;使菌種數(shù)量分別 達到108個/mLW上，從而制得膠質(zhì)芽抱桿菌(鐘細菌)發(fā)酵液、褐色球形固氮菌發(fā)酵液、巨大 芽抱桿菌發(fā)酵液和枯草芽抱桿菌發(fā)酵液。
[0084] 將各菌種按質(zhì)量百分比混合后進行再次發(fā)酵：膠質(zhì)芽抱桿菌（鐘細菌）發(fā)酵液 35%、巨大芽抱桿菌發(fā)酵液25%、地衣芽抱桿菌發(fā)酵液10%、枯草芽抱桿菌發(fā)酵液30%。
[0085] 4.Ξ級發(fā)酵:將所述步驟3制備的混合后的菌液接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基的發(fā) 酵罐中，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基抑6.5~7.5，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基總質(zhì)量的5%，3(TC下培養(yǎng) 4~7天，使發(fā)酵液中菌數(shù)達到6~10 X108個/mL，即得到水稻專用微生物復(fù)合菌劑，pH為 5.0，菌數(shù)含量均達到109個/mL。
[0086] 所述斜面培養(yǎng)基配方為：
[0087] 1.膠質(zhì)芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:K肥P04 0.06g、MgS04 · 7肥0 0.05g、
[0088] CaS〇4 ·甜2〇 0.004g、蛋白腺5g、玉米漿（50%干重）2.5g、乳糖 15g、化Cl 4g、蒸饋 水lOOOmL、瓊脂25g、抑 7.1;
[0089] 2.地衣芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:蛋白腺10.Og，牛肉浸取物3.Og，氯化 鋼5.0g，、瓊脂15g、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0090] 3.巨大芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為：牛肉膏3g、蛋白腺5g、瓊脂15g、化C1 5邑、蒸饋水lOOOmL、抑7.0;
[0091] 4.枯草芽抱桿菌采用的斜面培養(yǎng)基配方為:牛肉膏l(xiāng)Og、蛋白腺10g、NaCl 5g、葡萄 糖lOg，瓊脂15g，蒸饋水lOOOmL，抑7.0;
[0092] 所述液體培養(yǎng)基配方為斜面培養(yǎng)基不加瓊脂制得。
[0093] 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基配方為:玉米粉2~20g/100血、豆粗粉1~lOg/100血、酵母膏 0.05~0.2g/100血、K出P04 0.2~2g/100mL、K抽P〇4 0.5~2g/100血、MgS〇4.7出0 0.001 ~ 0.02g/100mL、NaCl 0.5~0.8g/100mL、（NH4)2S04 0.001 ~0.Olg/100血，其余為蒸饋水。
[0094] 按發(fā)酵物料總質(zhì)量的4%。比例添加水稻專用的促生長復(fù)合菌劑，再次混合均勻。 [00M](五)造?；虺煞?，檢測、包裝、入庫
[0096] 將物料混合均勻后，經(jīng)造粒機造?；虺煞?，檢測合格后，包裝入庫。
[0097] 實施例二:水稻專用有機復(fù)合生物肥在水稻上的應(yīng)用效果
[0098] 采用本發(fā)明制備的水稻專用有機復(fù)合生物肥在水稻種植中應(yīng)用的效果試驗：
[0099] 1.試驗?zāi)康?br>[0100] 水稻專用有機復(fù)合生物肥是大連Ξ科生物工程有限公司最新研制的針對水稻生 長有特殊功效的生物肥料，為明確其對水稻幼苗生長發(fā)育的影響，2015年我公司在水稻田 進行了田間小區(qū)試驗。
[0101] 2.試驗條件:試驗地點為粘壤±，地報勢平整，排灌方便，已種植水稻多年，有機質(zhì) 含量2.6%，pH值7.0，±壤肥力中等。
[0102] 3.試驗材料與方法
[0103] 供試品種:秀水11〇(梗稻）
[0104] 試驗方法:試驗設(shè)置為兩組，采用隨機排列，分別Ξ次重復(fù)，每個試驗小區(qū)面積500 平方米。
[01化]所述的兩組處理：
[0106] ①對照組，常規(guī)施肥;②試驗組，嚴格按照有機復(fù)合生物肥產(chǎn)品使用說明施用。
[0107] 經(jīng)實際調(diào)查，2015年水稻生育期自然條件較好，無特殊惡劣天氣，有利于水稻的生 長。
[0108] 4.調(diào)查記錄方法
[0109] ①水稻秩苗素質(zhì)調(diào)查:移栽前5月5日在每處理小區(qū)取25株秩苗，做秩苗素質(zhì)分析 (苗高、葉齡、根數(shù)、鮮重、充實度等）。
[0110] ②作物產(chǎn)量調(diào)查:水稻收獲后考種測產(chǎn)，分小區(qū)取樣估測產(chǎn)量，并且同時記錄水稻 千粒重及水稻株高。
[0111] 5.水稻畝產(chǎn)量計算方式:按下式進行
[0112] 水稻畝產(chǎn)量(公斤/畝）=每畝有效穗數(shù)X每穗實數(shù)X千粒重(克)/1000 X 1000
[0113] 6.本發(fā)明制備的水稻專用有機復(fù)合生物肥在水稻種植中應(yīng)用的試驗結(jié)果見表1和 表2:
[0114] 表1.水稻專用有機復(fù)合生物肥對水稻秩苗素質(zhì)的影響
[0115]
[0116] 從表1數(shù)據(jù)可W看出，試驗組的水稻秩苗株高、根數(shù)、葉齡、鮮重及充實度都明顯高 于對照組，因此說明施用水稻專用有機復(fù)合生物肥能夠使水稻秩苗根系發(fā)達、莖變粗，能提 局提局水稚秩苗的素質(zhì)。
[0117] 表2.水稻專用有機復(fù)合生物肥對水稻產(chǎn)量及形狀影響
[011 引
[0119] 從表2數(shù)據(jù)可W看出，試驗組水稻株高、穗數(shù)千粒重等都明顯高于對照組，畝產(chǎn)量 也顯著提高，比對照組增加13.7%。因此說明，施用水稻專用有機復(fù)合生物肥不僅能提高水 稻的秩苗素質(zhì)還能顯著提高水稻的產(chǎn)量。
[0120] 7.結(jié)論
[0121] 水稻施用水稻專用有機復(fù)合生物肥后，植株生長健壯，根系發(fā)達，葉片深綠，葉面 積增加，光合能力增強，水稻仔粒飽滿，且增產(chǎn)效果明顯，能顯著提高經(jīng)濟效益和社會效益。
[0122] 水稻專用有機復(fù)合生物肥在水稻上的試驗效果證明，該產(chǎn)品可在水稻生產(chǎn)中擴大 示范面積，并進行大面積推廣使用。
【主權(quán)項】
1. 一種水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于： (一) 有機物料腐熟劑的制備 將菌種數(shù)量分別達到1〇8個/mL以上的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CICC10088， 米曲霉（Aspergi 1 lus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium) ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei )ACCC30449的菌種發(fā)酵液按1 · 5~2 · 0:0 · 8~ 1.3:0.8~1.3:0.8-1.3的體積比混合均勻后，接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A的發(fā)酵罐中，接 種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A總體積的5%，復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A的pH 6.0~8.0，30°C下培養(yǎng)4~7 天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到1〇8個/mL，即得到有機物料腐熟劑； 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為：玉米面0.5~1.5g/L、玉米猜桿粉15~17g/L、麩皮0.2~ 0 · 4g/L、_a 餅粉0 · 2 ~0 · 4g/L、Vogel ' s母液4mL/100mL，pH 值6 · 0 ~8 · 0; (二) 混拌、發(fā)酵 將步驟(一）制備好的有機物料腐熟劑按發(fā)酵有機物料總質(zhì)量的5%。比例混合，再兌入 適量的水，使總水分控制在60 %左右，在發(fā)酵池經(jīng)過5-10天發(fā)酵，即制得初肥； (三) 深加工 將初肥進行粉碎、烘干，按初肥質(zhì)量百分比，具體添加如下營養(yǎng)元素： 氮3.0-4.0%、磷 1.0-2.5%、鉀1.5-3.0%;硅2.0-5.0%;腐植酸類肥料5.0~10.0%; (四） 水稻專用促生長復(fù)合菌劑的制備 將菌種數(shù)量分別達到1 〇8個/mL以上的枯草芽孢桿菌(Baci 11 us subti 1 i s)ACCC 01183、 巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010、地衣芽抱桿菌（Bacillus licheniformis)CICC10037、膠質(zhì)芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1 · 153的菌種 發(fā)酵液，按(30~40% ): (10~20% ): (5~10% ): (30~40% )的比例混合均勻后作為混合菌 劑，接種于盛有復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的發(fā)酵罐中，接種量為復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B總體積的5%，復(fù) 合菌劑培養(yǎng)基B的pH 6.5~7.5，30°C下培養(yǎng)4~7天，使發(fā)酵液中總菌數(shù)達到6~10 X 108個/ mL，即得到水稻專用微生物復(fù)合菌劑，pH為6.8，總有效活菌數(shù)為9 X 108個/mL; 所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為：玉米粉15~18g/100mL、豆栢粉5~8g/100mL、酵母膏 0.1 ~0.2g/100mL、KH2P04 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7H20 0.001 ~ 0 · 02g/100mL、NaCl 0 · 5~0 · 8g/100mL、（NH4)2S〇4 0 · 001 ~0 · 01g/100mL，其余為蒸餾水； (五） 按步驟(三)深加工所獲得的發(fā)酵物料總質(zhì)量的3~5%。比例添加步驟（四）獲得的 水稻專用的促生長復(fù)合菌劑獲得終產(chǎn)品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于，步驟 (一)所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基A配方為:玉米面0.5g/L、玉米秸桿粉15g/L、麩皮0.25g/L、豆餅粉 0·25g/L、Vogel's母液4mL/100mL，pH 7·2。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于，步驟 (一） 所述枯草芽抱桿菌（Bacillus subtil is )CICC10088,米曲霉(Aspergillus niger) CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414，里氏木霉（Trichoderma reesei )ACCC30449的菌種發(fā)酵液按2:1:1:1的比例混合均勻。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于，步驟 (二) 所述發(fā)酵有機物料為粉碎的玉米秸桿與動物糞便按0.5~1.5:0.2~1.0質(zhì)量比混合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于，步驟 (三)所述營養(yǎng)元素為氮3.0%、磷1.5%、鉀2.0%;硅3.0%;腐植酸類肥料5.0%，腐植酸類 肥料為腐植酸銨或者腐植酸鉀。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水稻專用的有機復(fù)合生物肥的制備方法，其特征在于，步驟 (三）所述復(fù)合菌劑培養(yǎng)基B的配方為：玉米粉16g/100mL、豆栢粉7g/100mL、酵母膏0. lg/ 100mL、KH2P〇4 lg/100mL、K2HP〇4 lg/100mL、MgS〇4.7H20 0.01g/100mL、NaCl 0.6g/100mL、 (NH4)2S〇4 0.01g/100mL，其余為蒸餾水。
【文檔編號】C05F17/00GK106083444SQ201610383049
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月1日 公開號201610383049.9, CN 106083444 A, CN 106083444A, CN 201610383049, CN-A-106083444, CN106083444 A, CN106083444A, CN201610383049, CN201610383049.9
【發(fā)明人】崔昌娜, 崔國臣
【申請人】大連三科生物工程有限公司