專利名稱：氨基苯氧基乙酰胺衍生物和含有它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有氨基苯氧基乙酰胺衍生物和它們可藥用的鹽作為活性組分的大腦功能或器官疾病改善和治療劑，它們通過(guò)誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+-結(jié)合蛋白中的一種，的產(chǎn)生而具有神經(jīng)保護(hù)作用，本發(fā)明還涉及選擇這些神經(jīng)保護(hù)性氨基苯氧基乙酰胺衍生物的方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及用于各種大腦機(jī)能障礙的治療和改善劑，所述機(jī)能障礙是由各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化引起的。此外，本發(fā)明涉及用于由于老年性癡呆、腦損傷或外科手術(shù)后遺癥、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化和杭廷頓氏舞蹈病等引起的各種腦器官疾病的治療和改善劑。
背景技術(shù)：
人們認(rèn)為在腦損傷和腦血管疾病，例如腦內(nèi)出血、短暫腦局部缺血和腦梗塞中觀察到的神經(jīng)細(xì)胞的進(jìn)行性和延遲死亡主要是由于細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加引起，其中與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的各種因素會(huì)引起，例如由于過(guò)度釋放谷氨酸鹽導(dǎo)致的是內(nèi)部應(yīng)激性的受體異?；罨?、離子通道的活化和反應(yīng)氧物質(zhì)/游離基的誘導(dǎo)[F.B.Meyer，Brain Res.Rev.，14，227(1989)；E.Boddeke等，Trends Pharmacol.Sci.，10，397(1989)；J.M.McCall等，Ann.Rep.Med.Chem.，27，31(1992)]。
由此觀點(diǎn)，用于谷氨酸鹽受體的拮抗劑，鈣通道阻滯劑、抗氧化劑等已應(yīng)用于預(yù)防或抑制神經(jīng)變性的藥物。然而，這些臨床使用的藥物僅抑制與增加細(xì)胞鈣離子濃度有關(guān)的少量途徑，因此仍不足以用于預(yù)防或抑制神經(jīng)變性。
與之相反，鈣結(jié)合蛋白D-28k的內(nèi)部產(chǎn)生通過(guò)許多生理活性物質(zhì)，例如FGF、NT-3、NT-4/5、BDNF、IGF-I/II、PDGF、雌激素等的受體的活化引起，以及通過(guò)FGF受體的活化引起，所述FGF受體是神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體之一[C.V.-Abejon等，Neuron，15，105(1995)；A.Silva等，Brain Res.Bull.，1，35(2000)]。并且鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+-結(jié)合蛋白中的一種，主要分布在腦神經(jīng)系統(tǒng)中對(duì)抗局部缺血疾病的易損位置，它已知顯示對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加的緩解作用[A.M.Lacopino等，Neurodegeneration，3，1(1994)；M.P.Mattson等，Neuron，6，41(1991)]。
因此，如果鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+-結(jié)合蛋白本身的一種，能夠供給于細(xì)胞中，預(yù)期可獲得對(duì)抗由各種途徑引起的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加的充分的神經(jīng)保護(hù)效果。也就是，人們預(yù)期含有鈣結(jié)合蛋白D-28k的藥物將是對(duì)腦功能和歸于各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化的非常有效的治療和改善劑。人們同樣預(yù)期對(duì)歸于老年性癡呆、腦損傷或外科手術(shù)的后遺癥、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化等引起的腦局部缺血疾病導(dǎo)致的腦機(jī)能障礙是有效的。
然而，考慮到由于鈣結(jié)合蛋白D-28k本身是28Kd(千道爾頓)分子量的不穩(wěn)定的大分子量蛋白質(zhì)在藥理學(xué)和藥學(xué)方法中存在的限制，非常困難并因而不可能向人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的所需位置直接給藥鈣結(jié)合蛋白D-28k蛋白質(zhì)。
另一方面，能夠包括產(chǎn)生鈣結(jié)合蛋白D-28k蛋白質(zhì)的較低分子量化合物可用常規(guī)技術(shù)容易地制備成不同種類的藥物組合物。因此，這些較低分子量的化合物一旦容易地給藥至人體內(nèi)時(shí)，將誘導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)性鈣結(jié)合蛋白D-28k蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，顯示對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加的緩解作用。即，這些較低分子量的化合物可以是用于改善和治療腦功能和器官疾病的有效藥物化合物。
在這些情況下，本發(fā)明的一項(xiàng)目的是選擇和提供經(jīng)不同生理學(xué)活性物質(zhì)的受體磷酸化作用能夠誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種，產(chǎn)生的較低分子量神經(jīng)保護(hù)化合物，以及提供在合適制劑，例如靜脈注射溶液中的低毒性藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于由于各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化引起的腦功能疾病以及腦器官疾病，例如老年性癡呆、腦損傷或外科手術(shù)的后遺癥、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化的治療和改善劑。
發(fā)明公開(kāi)作為本發(fā)明的一個(gè)方面，它提供了如下式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物 其中，R1、R2、R3和R4分別是氫原子或可以被取代的低級(jí)烷基；R5、R6、R7和R8分別是氫原子或可以被取代的低級(jí)烷基；E1是基團(tuán)-NR9(其中R9是氫原子或可以被取代的低級(jí)烷基)；E2是氧原子或基團(tuán)-NR10(其中R10是氫原子；可以被取代的烷基；可以被取代的芳基；可以被取代的芳烷基)；Q是基團(tuán)-X-Y-Q′，其中X是連接鍵、低級(jí)烷基、低級(jí)烯基或低級(jí)炔基；Y是連接鍵或選自C＝O、C(＝O)NH、NHC(＝O)、-O-、-S-、CH(OH)、-O-CH(OH)和-O-CH2-CH(OH)的基團(tuán)，其中酰氨基的氫原子可以被低級(jí)烷基取代；和Q’是氫原子或選自芳基、雜芳基、飽和或不飽和環(huán)狀烴基和飽和或不飽和雜環(huán)基的環(huán)狀基團(tuán)，其中在Q′環(huán)狀基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子可以被取代；其前提是，當(dāng)X和Y均是連接鍵時(shí)，則Q′不是氫原子；或其前提是，當(dāng)X和Y之一是除連接鍵之外的基團(tuán)時(shí)，則E2是基團(tuán)-O-和所有基團(tuán)R1、R2、R3和R4都不是氫原子；或其可藥用的鹽。
在低級(jí)烷基的描述中尤其可以是直鏈或支鏈的碳原子數(shù)為C1-C6的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基等，更優(yōu)選甲基或乙基。在低級(jí)烯基的描述中尤其可以是C1-C6烯基，和低級(jí)炔基尤其可以是C1-C6炔基。
此外，本發(fā)明提供式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，其中R1、R2、R3和R4均是甲基；當(dāng)E1是氧原子時(shí)，E2是基團(tuán)-NR9(其中R9是氫原子；可以被取代的烷基；可以被取代的芳基或可以被取代的芳烷基)；或當(dāng)E1是基團(tuán)-NR10(其中R10是氫原子；可以被取代的烷基；可以被取代的芳基；或可以被取代的芳烷基)；E2是氧原子；
R5、R6、R7和R8分別是氫原子或低級(jí)烷基；Q是基團(tuán)-X-Y-Q′，(其中Q′是氫原子、可以被取代的苯基、可以被取代的吡啶基、可以被取代的喹啉基、可以被取代的異喹啉基、可以被取代的苯并噻唑基或可以被取代的苯并咪唑基)；或其可藥用的鹽。
更具體地說(shuō)，如下化合物組(1)至(4)是本發(fā)明的式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物的具有杰出效果的具體實(shí)施方案。(1)權(quán)利要求1要求保護(hù)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，其中R1、R2、R3和R4分別是氫原子或可以被取代的烷基；R5是氫原子或可以被取代的烷基；E1是-NH-；E2是氧原子；或其可藥用的鹽。(2)權(quán)利要求1要求保護(hù)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，其中R1、R2、R3和R4分別是氫原子或可以被取代的烷基；R5是氫原子或可以被取代的烷基；E1和E2是-NH-；或其可藥用的鹽。(3)權(quán)利要求2要求保護(hù)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，其中R5是氫原子或可以被取代的烷基；E1是-NH-；E2是氧原子；當(dāng)X是連接鍵時(shí)，Y是-CONH-；或當(dāng)X是-CONH-時(shí)，Y是連接鍵；Q′是可以被取代的苯基；或其可藥用的鹽。(4)權(quán)利要求2要求保護(hù)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，其中R5是氫原子或可以被取代的烷基；E1是-NH-；E2是氧原子；X是連接鍵或亞烷基和Y是基團(tuán)-CH(OH)-、-O-CH(OH)-和-O-CH2-CH(OH)-之一；Q′是可以被取代的苯基；或其可藥用的鹽。
根據(jù)本發(fā)明人的研究，已證實(shí)式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物在低濃度下有效地誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k的產(chǎn)生，具有杰出的神經(jīng)保護(hù)效果。此外，這些化合物還證實(shí)具有高的安全界限，適用于制備各種藥物組合物。
因此，作為進(jìn)一步的實(shí)施方案，本發(fā)明提供含有式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的用于腦功能和器官疾病的改善和治療劑。
作為另一實(shí)施方案，本發(fā)明提供選擇(篩選)能夠誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種，產(chǎn)生的較低分子量化合物的有效和簡(jiǎn)單的方法。
選擇低分子量化合物的方法由如下若干評(píng)價(jià)試驗(yàn)組成(1)評(píng)價(jià)試驗(yàn)用于比較在給藥谷氨酸鹽之前給藥試驗(yàn)化合物和同時(shí)給藥之間，試驗(yàn)化合物對(duì)抗谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)變性的神經(jīng)保護(hù)效果。
(2)試驗(yàn)用于證實(shí)上述的神經(jīng)保護(hù)效果是否是通過(guò)不同生理活性物質(zhì)的受體磷酸化作用的神經(jīng)保護(hù)。這些試驗(yàn)通過(guò)對(duì)于每種受體，例如FGF NT-3、NT-4/5、BDNF、IGF-I/II、PDGF或雌激素和MTA(5-脫氧-5-甲基硫代腺苷)的抑制劑的拮抗作用進(jìn)行，所述MTA尤其抑制FGF受體的自磷酸化。
(3)對(duì)于每種試驗(yàn)化合物產(chǎn)生鈣結(jié)合蛋白D-28k的誘導(dǎo)能力的評(píng)價(jià)試驗(yàn)。
(4)使用其反義寡核苷酸通過(guò)抑制作用用于鈣結(jié)合蛋白D-28k的神經(jīng)保護(hù)效果的證實(shí)實(shí)驗(yàn)。
通過(guò)上述評(píng)價(jià)試驗(yàn)，可以選出具有如下特性的有效化合物。評(píng)價(jià)試驗(yàn)(1)該試驗(yàn)通過(guò)在給藥用以誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞損傷的谷氨酸鹽之前或同時(shí)給藥試驗(yàn)化合物，評(píng)價(jià)該試驗(yàn)化合物是否具有對(duì)抗谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)變性的神經(jīng)保護(hù)效果。
如果試驗(yàn)化合物在預(yù)處理的情況下比同時(shí)處理的情況下顯示較大的對(duì)谷氨酸鹽給藥誘導(dǎo)的神經(jīng)變性的神經(jīng)保護(hù)效果，則化合物具有誘導(dǎo)蛋白質(zhì)樣物質(zhì)的效果，它顯示神經(jīng)保護(hù)效果。因此，基于誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)樣物質(zhì)，包括鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種，具有神經(jīng)保護(hù)效果的化合物通過(guò)該評(píng)價(jià)試驗(yàn)選出。評(píng)價(jià)試驗(yàn)(2)在其中神經(jīng)保護(hù)效果通過(guò)將抑制劑向受體，例如FGF、NT-3、NT-4/5、BDNF、IGF-I/II、PDGF和雌激素給藥而消失時(shí)，則證實(shí)該神經(jīng)保護(hù)效果由這些受體的活化引起。此外，在活細(xì)胞中，MTA(5-脫氧-5-甲基硫代腺苷)尤其抑制FGF受體的自磷酸化作用。用MTA處理(用于FGF受體的自磷酸化作用的特異性抑制劑)對(duì)神經(jīng)保護(hù)活性的抑制證實(shí)該神經(jīng)保護(hù)效果涉及FGF受體的磷酸化作用。此外，該評(píng)價(jià)試驗(yàn)將選出其神經(jīng)保護(hù)效果用各種生理活性物質(zhì)的受體活化和通過(guò)FGF受體的磷酸化作用表達(dá)的化合物。評(píng)價(jià)試驗(yàn)(3)具有誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生效果的化合物將用該評(píng)價(jià)試驗(yàn)選擇。評(píng)價(jià)試驗(yàn)(4)保護(hù)蛋白質(zhì)需要通過(guò)各種生理活性物質(zhì)的受體的磷酸化作用經(jīng)細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生以得到化合物的神經(jīng)保護(hù)效果，鈣結(jié)合蛋白D-28k是保護(hù)蛋白質(zhì)的一種。因此，用該評(píng)價(jià)試驗(yàn)，由于產(chǎn)生了鈣結(jié)合蛋白D-28k而具有神經(jīng)保護(hù)活性的化合物通過(guò)使用反義鈣結(jié)合蛋白D-28k受到抑制，在該試驗(yàn)中，具有神經(jīng)保護(hù)效果的化合物基于所產(chǎn)生的鈣結(jié)合蛋白D-28k證實(shí)。
本發(fā)明提供通過(guò)使用所有評(píng)價(jià)試驗(yàn)或使用評(píng)價(jià)試驗(yàn)(1)和(2)、評(píng)價(jià)試驗(yàn)(1)、(2)和(3)、評(píng)價(jià)試驗(yàn)(1)和(3)或評(píng)價(jià)試驗(yàn)(1)、(3)和(4)的組合，基于所誘導(dǎo)的鈣結(jié)合蛋白D-28k的產(chǎn)生，較低分子量神經(jīng)保護(hù)化合物的有效和簡(jiǎn)單的選擇方法。
附

圖1顯示本發(fā)明的選擇方法的流程圖以顯示通過(guò)組合上述的評(píng)價(jià)試驗(yàn)選擇具有基于所誘導(dǎo)的鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)效果的較低分子量化合物的方法的概述。
根據(jù)本發(fā)明的選擇方法，在本發(fā)明的說(shuō)明書中具體描述的化合物被選擇作為具有誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種，的產(chǎn)生作用的較低分子量化合物。然而，這些選擇方法可用于選擇基于生理活性物質(zhì)的受體的活化和涉及FGF受體的自磷酸化作用的鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生誘導(dǎo)效果的神經(jīng)保護(hù)效果的各種化合物，并不限制于選擇本說(shuō)明書中描述的化合物。
附圖的簡(jiǎn)要描述附圖1顯示本發(fā)明具有基于所誘導(dǎo)的鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)效果的較低分子量化合物的選擇方法的流程圖。
進(jìn)行本發(fā)明的最佳方式本發(fā)明的氨基苯氧基乙酰胺衍生物包括氨基苯氧基乙酰胺、氨基苯氨基乙酰胺、氨基硫代苯氧基乙酰胺、氧基苯氨基乙酰胺和硫代苯氨基乙酰胺。因此，在本說(shuō)明書中的“氨基苯氧基乙酰胺衍生物”包括上述所有衍生物，除非另有說(shuō)明。
在本發(fā)明提供的式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物涉及的各種R1-R10的取代基中，“鹵素原子”包括氟原子、氯原子和溴原子。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”表示直鏈或支鏈C1-C5烷氧基，可包括，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
術(shù)語(yǔ)“可以被取代的烷基”表示可以被鹵素取代的直鏈或支鏈C1-C5烷基，可包括，例如甲基、乙基、丙基、三氟甲基等。
“芳基”，術(shù)語(yǔ)“可以被取代的芳基”的部分，表示含有至少一種雜原子，例如氮和氧原子的C4-C14芳基。優(yōu)選的芳基的實(shí)例包括苯基、吡啶基和萘基。所述芳基的合適取代基包括鹵素原子，例如氟原子、氯原子和溴原子；羥基；含有1-5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈C1-C5烷氧基，例如甲氧基和乙氧基；和可以被鹵素原子取代的直鏈或支鏈C1-C5烷基，例如甲基、乙基和三氟甲基。
“芳烷基”，術(shù)語(yǔ)“可以被取代的芳烷基”的部分，表示含有至少一種雜環(huán)原子，例如氮和氧原子的C5-C12芳烷基，實(shí)例包括芐基、苯乙基、吡啶甲基和吡啶乙基。
所述芳烷基的合適取代基包括鹵素原子，例如氟原子、氯原子和溴原子；羥基；直鏈或支鏈C1-C5烷氧基，例如甲氧基和乙氧基；和可以被鹵素原子取代的直鏈或支鏈C1-C5烷基，例如甲基、乙基和三氟甲基。
“芳基”，術(shù)語(yǔ)“可以被取代的芳基”的表示為“Q”的部分表示可含有至少一種雜原子，例如氮和氧原子的C4-C14芳基。實(shí)例包括苯基、吡啶基和萘基。所述芳基的合適取代基包括鹵素原子，例如氟原子、氯原子和溴原子；羥基；含有1-5個(gè)碳原子的直鏈或支鏈C1-C5烷氧基，例如甲氧基和乙氧基；和可以被鹵素原子取代的直鏈或支鏈C1-C5烷基，例如甲基、乙基和三氟甲基。此外，這些取代基還可包括可以被鹵素原子取代，例如氟原子、氯原子和溴原子取代的直鏈或支鏈C1-C5烷基。
“亞烷基”，術(shù)語(yǔ)“可以被羥基取代的亞烷基”的部分是指取代基“X”和“Y”，優(yōu)選表示直鏈或支鏈C1-C6亞烷基，例如亞甲基、甲基亞甲基、亞乙基、三亞甲基、四亞甲基、環(huán)丙基亞甲基等。
術(shù)語(yǔ)“亞環(huán)烷基”優(yōu)選表示C3-C6亞環(huán)烷基，可包括1，1-亞環(huán)丙基、1，2-亞環(huán)丙基、1，1-亞環(huán)丁基、1，1-亞環(huán)戊基、1，1-亞環(huán)己基等。其中1，1-亞環(huán)丙基和1，2-亞環(huán)丙基是更優(yōu)選的。
“亞烯基”，術(shù)語(yǔ)“可以被低級(jí)烷基取代的亞烯基”的部分可包括C2-C4亞烷基，例如亞乙烯基和丁二烯，優(yōu)選使用亞乙烯基。作為亞烯基的取代基的低級(jí)烷基可以是甲基、乙基、丙基、異丙基等。
涉及“X”和“Y”的術(shù)語(yǔ)“連接鍵”是指直接的鍵，因此如果“X”和/或“Y”是連接鍵，“X”和/或“Y”的兩個(gè)相鄰取代基直接連接，這些取代基不作為“X”和/或“Y”存在。
用于“可以被取代的苯基”、“可以被取代的苯氧基”、“可以被取代的苯甲?；?、“可以被取代的吡啶基”、“可以被取代的喹啉基”、“可以被取代的異喹啉基”、“可以被取代的苯并噻唑基”和“可以被取代的苯并咪唑基”的表示為“Q”的合適取代基可包括鹵素原子，例如氟原子、氯原子和溴原子；羥基；直鏈或支鏈C1-C5烷氧基，例如甲氧基和乙氧基等。此外，這些取代基還可包括可以被鹵素原子取代的直鏈或支鏈C1-C5烷基，例如甲基、乙基、三氟甲基等。
應(yīng)理解當(dāng)本發(fā)明的式(I)氨基苯氧基乙酰胺衍生物存在異構(gòu)體形式時(shí)，每個(gè)異構(gòu)體本身以及異構(gòu)體混合物將包括在本發(fā)明的化合物中。即，由于苯環(huán)上的取代基，會(huì)存在結(jié)構(gòu)異構(gòu)體，此外，由于亞烷基的羥基取代的“X”或“Y”的手性碳原子，會(huì)存在旋光異構(gòu)體，這些異構(gòu)體將包括在本發(fā)明的化合物的范圍內(nèi)。
式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物包括通過(guò)如下合成方法得到的化合物(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)，例如這些化合物可通過(guò)如下方法制備。
通過(guò)使化合物(II)與酯衍生物(III)反應(yīng)得到的化合物(IV)被水解以轉(zhuǎn)化為羧酸衍生物(V)。此外，化合物(VIII)通過(guò)使胺衍生物(VI)與化合物(VII)反應(yīng)得到，除去化合物(VIII)的保護(hù)基團(tuán)得到胺衍生物(IX)。隨后將得到的化合物(V)通過(guò)與化合物(IX)的縮合反應(yīng)轉(zhuǎn)化為酰胺化合物(X)。此外，在由此得到的化合物(X)中的保護(hù)基團(tuán)被除去以得到化合物(Ia)，本發(fā)明的權(quán)利要求1中的式(I)化合物(方法1)。
化合物(Ib)，本發(fā)明權(quán)利要求2中的式(I)氨基苯氧基乙酰胺衍生物可通過(guò)如下方法得到。通過(guò)方法1中得到的羧酸衍生物(V′)與化合物(XI)的縮合反應(yīng)得到酰胺化合物(XII)，除去生成物的保護(hù)基團(tuán)(方法2)。
方法2中得到的化合物(Ib)可通過(guò)與化合物(XIII)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為化合物(Ic)(方法3)。
此外，化合物(Id)可通過(guò)使化合物(Ib)與化合物(XIV)反應(yīng)得到(方法4)。
每個(gè)方法將通過(guò)如下反應(yīng)方案進(jìn)一步說(shuō)明。方法1 其中，R1-R8，E1和E2具有如上的相同定義，Q具有權(quán)利要求1中定義的相同含義；和R11是可以被取代的烷基、可以被取代的芳基、可以被取代的芳烷基、叔丁氧基羰基、乙氧基羰基、乙?；?、芐氧基羰基、對(duì)甲氧基芐氧基羰基；R12是直鏈或支鏈C1-C5烷基；L1是可以容易地被氨基、羥基和巰基取代的離去基團(tuán)；L2是可以容易地被氨基和硼酸取代的離去基團(tuán)；p1是叔丁氧基羰基、乙氧基羰基、乙?；?、芐氧基羰基、對(duì)甲氧基芐氧基羰基、芐基或三氟乙?；?br> 根據(jù)方法1，化合物(Ia)可由已知的起始化合物(II)得到。
即，對(duì)于第一步驟，化合物(II)與1.0-1.5摩爾當(dāng)量的酯化合物(III)在惰性溶劑和根據(jù)需要在堿存在下，在攪拌下在-20℃-150℃，優(yōu)選0℃-100℃下反應(yīng)。
在反應(yīng)中使用的惰性溶劑可以是苯、甲苯、四氫呋喃、二噁烷、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙腈、丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇、乙二醇、乙醚等。
上述反應(yīng)中使用的堿可以是有機(jī)堿，例如三乙胺、二異丙基乙胺、吡啶等，或無(wú)機(jī)堿，例如鈉、氫化鈉、鉀、氫化鉀、甲醇鈉、叔丁醇鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氟化銫、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等。這些有機(jī)堿和無(wú)機(jī)堿可結(jié)合使用，碘化鈉、碘化鉀或四丁基碘化銨可加入反應(yīng)混合物中。
酯衍生物(III)中的取代基“L1”可以是能夠容易地被氨基、羥基或巰基取代的離去基團(tuán)，實(shí)例包括鹵素原子，例如氯原子、溴原子、碘原子；烷基磺酰氧基，例如甲基磺酰氧基；芳基磺酰氧基，例如對(duì)甲苯磺酰氧基、3-硝基苯磺酰氧基等。
用于該反應(yīng)的化合物(II)和化合物(III)是商業(yè)上可獲得的和已知的化合物，或可容易地通過(guò)使用已知方法由已知化合物制備。
化合物(II)的實(shí)例包括4-(叔丁氧基羰基氨基)苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯酚、2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，4，5，6-四甲基苯酚、3-(叔丁氧基羰基氨基)-2，4，5，6-四甲基苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5-三甲基苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氯-3，5，6-三甲基苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，6-三甲基苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3-二甲基苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，5-二甲基苯酚、2-(叔丁氧基羰基氨基)-4，6-二甲基苯酚、5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲氧基苯酚、5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯-2-甲氧基苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，6-二氯苯酚、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，4，6-四甲基苯胺、4-甲氧基-2-甲基苯胺、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，5-二甲基苯胺、2-(叔丁氧基羰基氨基)-4，5-二甲基苯胺、3-(叔丁氧基羰基氨基)-2，4，6-三甲基苯胺、2-(叔丁氧基羰基氨基)-4，5-二甲基苯胺、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，5-二氯苯胺、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，6-二氯苯胺、2-(叔丁氧基羰基氨基)-4，5-二氯苯胺、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，5-二甲氧基苯胺、4-(芐氧基羰基氨基)苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯酚、2-(芐氧基羰基氨基)-3，4，5，6-四甲基苯酚、3-(芐氧基羰基氨基)-2，4，5，6-四甲基苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，3，5-三甲基苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2-氯-3，5，6-三甲基苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，3，6-三甲基苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，3-二甲基苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，5-二甲基苯酚、2-(芐氧基羰基氨基)-4，6-二甲基苯酚、5-(芐氧基羰基氨基)-2-甲氧基苯酚、5-(芐氧基羰基氨基)-4-氯-2-甲氧基苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，6-二氯苯酚、4-(芐氧基羰基氨基)-2，3，4，6-四甲基苯胺、4-甲氧基-2-甲基苯胺、4-(芐氧基羰基氨基)-2，5-二甲基苯胺、2-(芐氧基羰基氨基)-4，5-二甲基苯胺、3-(芐氧基羰基氨基)-2，4，6-三甲基苯胺、2-(芐氧基羰基氨基)-4，5-二甲基苯胺、4-(芐氧基羰基氨基)-2，5-二氯苯胺、4-(芐氧基羰基氨基)-2，6-二氯苯胺、2-(芐氧基羰基氨基)-4，5-二氯苯胺、4-(芐氧基羰基氨基)-2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-(芐氧基羰基氨基)-2、5-二甲氧基苯胺等。
式(III)的酯化合物包括，例如溴乙酸乙酯、2-溴丙酸乙酯、2-溴-2-甲基丙酸乙酯等。
隨后，得到的化合物(IV)用常用方法氫化轉(zhuǎn)化為羧酸衍生物(V)。
用于與上述得到的羧酸衍生物(V)縮合反應(yīng)的化合物(IX)可以通過(guò)如下方法得到。
即，用于第一步驟，胺衍生物(VI)與化合物(VII)在惰性溶劑中，和如果需要在堿存在下，在攪拌下在室溫到180℃下進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物(VIII)。
在反應(yīng)中使用的惰性溶劑可以是苯、甲苯、二甲苯、二乙基苯胺、四氫呋喃、乙醚、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、氯仿、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丁醇等。
上述反應(yīng)中使用的堿可以是有機(jī)堿，例如三乙胺、二異丙胺等，或無(wú)機(jī)堿，例如氫化鈉、氫化鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、乙醇鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸銫等。
胺化合物(VI)與化合物(VII)的反應(yīng)還可以在惰性溶劑，例如苯、甲苯、二甲苯和四氫呋喃中，在鈀催化劑，例如三(二亞芐基丙酮)二鈀、二乙酰氧基鈀、氯化鈀等、膦配位化合物，例如三正丁基膦、三叔丁基膦、三鄰甲苯基膦、BINAP等和堿，例如叔丁醇鈉和碳酸銫存在下在攪拌下在50℃-150℃下進(jìn)行。
此外，其中取代基“L2”是硼酸殘基的化合物(VII)與胺化合物(VI)的反應(yīng)可以在惰性溶劑中，在堿和1.0-2.0摩爾當(dāng)量乙酸銅(CuOAc2)存在下，在攪拌下在室溫至100℃下進(jìn)行[D.M.T.Chan等，Tetrahedron Letters，39，2933(1998)]。
用于該反應(yīng)的惰性溶劑可以是二氯甲烷、氯仿等，堿可以是三乙胺、吡啶等。
用于與化合物(VII)反應(yīng)的化合物(VI)是已知化合物[參見(jiàn)R.H.Mach等，J.Med.Chem.，36，3707(1993)]或可通過(guò)EP 0184257A1[R.A.Stokbroekx等]中描述的方法容易地制備。
隨后，除去由此得到的化合物(VIII)的氮原子上的保護(hù)基團(tuán)得到胺衍生物(IX)。
反應(yīng)將根據(jù)化合物(VIII)的氮原子上的保護(hù)基團(tuán)變化。例如，化合物(VIII)用酸，例如乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、鹽酸、硫酸或硝酸在惰性溶劑，例如苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃、二噁烷、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水、甲醇、乙醇等中處理。
此外，除去保護(hù)基團(tuán)還可以通過(guò)在1-5atm氫氣下，在催化劑，例如鈀/炭、氫氧化鈀、鉑或氧化鉑存在下，在惰性溶劑，例如甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯或乙酸中氫解化合物(VIII)進(jìn)行。
隨后式(V)的羧酸衍生物通過(guò)與化合物(IX)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為酰胺衍生物(X)。
該酰胺化反應(yīng)的反應(yīng)條件可根據(jù)在“Compendium for OrganicSynthe sis”(wiley-InterscienceA Division of John Wiley &Sons Ltd.)中描述的方法變化。
例如化合物(V)選擇性地在有機(jī)或無(wú)機(jī)堿存在下，用氰基膦酸二乙酯(DEPC)、二苯基磷?；B氮化物(DPPA)、二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽或2-碘-1-甲基-吡啶鎓碘化物處理，隨后與化合物(IX)反應(yīng)得到酰胺化合物(X)。此外，化合物(V)轉(zhuǎn)化為活化的酯化合物，例如酰基鹵、對(duì)稱酸酐或混合物酸酐，隨后與化合物(IX)反應(yīng)得到酰胺化合物(X)。
由此得到的化合物(X)通過(guò)酰胺化合物(X)的氮原子上的保護(hù)基團(tuán)的除去反應(yīng)轉(zhuǎn)化為式(Ia)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，本發(fā)明的化合物。
雖然在上述方法1中得到的每個(gè)化合物可用于下一步驟，無(wú)需進(jìn)一步純化，但也可以根據(jù)需要用常規(guī)方法，例如重結(jié)晶或柱色譜法等在進(jìn)一步純化后使用。方法2 其中R5-R8和R11具有上述的相同定義，E1和E2具有權(quán)利要求2中定義的相同含義，P2是叔丁氧基羰基、乙氧基羰基、乙酰基、芐氧基羰基、對(duì)甲氧基芐氧基羰基、芐基或三氟乙?；?。
根據(jù)方法2，式(Ib)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物可由在上述方法1中得到的化合物(V’)[其中R1-R4是甲基，E1是氧原子和E2是-NR9；或E1是-NR10和E2是氧原子]合成。
即，化合物(V′)[其中R1-R4是甲基，E1是氧原子和E2是-NR9；或E1是-NR10和E2是氧原子]與化合物(XI)反應(yīng)得到酰胺化合物(XII)，隨后除去生成的化合物(XII)的保護(hù)基團(tuán)得到氨基苯氧基乙酰胺衍生物(Ib)。
該反應(yīng)可用方法1中所述的相同方法進(jìn)行。方法3 其中R5-R8具有上述的相同定義，n、X、Y、Q′、E1和E2具有權(quán)利要求2中定義的相同含義。
根據(jù)方法3，式(Ic)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物可通過(guò)與化合物(XIII)反應(yīng)由化合物(Ib)得到。
即，化合物(Ib)與1.0-1.5摩爾當(dāng)量的化合物(XIII)在惰性溶劑，例如苯、甲苯、四氫呋喃、二噁烷、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙腈、丙酮、乙醚、二氯甲烷、氯仿和四氯化碳中，在堿存在下，在-50℃-120℃，優(yōu)選-20℃-80℃下反應(yīng)。
反應(yīng)中使用的堿可以是有機(jī)堿，例如三乙胺、二異丙基乙胺、吡啶等，或無(wú)機(jī)堿，例如鈉、氫化鈉、鉀、氫化鉀、乙醇鈉、叔丁醇鈉、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氟化銫、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等，碘化鈉、碘化鉀或四丁基碘化銨可加入反應(yīng)混合物中。
化合物(XIII)中的取代基“L3”是能夠容易地被氨基取代的離去基團(tuán)，實(shí)例包括鹵素原子，例如氯原子、溴原子、碘原子；烷基磺酰氧基，例如甲基磺酰氧基；芳基磺酰氧基，例如對(duì)甲苯磺酰氧基等。
在該方法3中，也可生產(chǎn)式(Ic)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物。方法4 其中R5-R8和L3具有上述的相同定義，Q′、E1和E2具有權(quán)利要求2中定義的相同含義，m是0-3的整數(shù)。
根據(jù)方法4，本發(fā)明的式(Id)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物可由上述方法2中得到的化合物(Ib)與化合物(XIVa)或化合物(XIVb)反應(yīng)得到。
例如，化合物(Ib)與0.9-1.5摩爾當(dāng)量的化合物(XIVa)或(XIVb)在惰性溶劑中在室溫至約200℃，優(yōu)選約50℃-約150℃下反應(yīng)產(chǎn)生式(Id)的氨基苯氧基乙酰胺。
用于該反應(yīng)的惰性溶劑可以是苯、甲苯、四氫呋喃、乙醚、乙二醇二甲醚、二噁烷、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、叔丁醇、乙二醇等。
化合物(XIVa)的實(shí)例包括表溴醇、表氯醇、(R)-表氯醇、(S)-表氯醇等，化合物(XIVb)的實(shí)例包括甲苯磺酸縮水甘油酯、甲苯磺酸(R)-縮水甘油酯、甲苯磺酸(S)-縮水甘油酯、3-硝基-苯磺酸(R)-縮水甘油酯、3-硝基-苯磺酸(S)-縮水甘油酯、4-硝基-苯甲酸(R)-縮水甘油酯、4-硝基苯甲酸(S)-縮水甘油酯、縮水甘油基三甲基氯化銨等。
在方法4中，也可以生產(chǎn)式(Id)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物。
由此得到的式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物可用常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、柱色譜法等分離和純化。
此外，在本發(fā)明的式(I)化合物中所包含的每個(gè)異構(gòu)體可通過(guò)用常規(guī)方法，例如重結(jié)晶、柱色譜法、HPLC等或通過(guò)使用旋光試劑，通過(guò)這些化合物的異構(gòu)體混合物的拆分得到。
式(I)表示的本發(fā)明的氨基苯氧基乙酰胺衍生物可以游離堿或合適的可藥用的酸加成鹽形式使用?？伤幱玫柠}可通過(guò)用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸在合適的有機(jī)溶劑，例如醚、四氫呋喃、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、甲醇、異丙醇、乙醇等中處理化合物(I)得到。
無(wú)機(jī)酸的實(shí)例包括鹽酸、硫酸、氫溴酸、磷酸、高碘酸等。此外，有機(jī)酸的實(shí)例包括甲酸、乙酸、丁酸、草酸、丙二酸、丙酸、戊酸、琥珀酸、富馬酸、馬來(lái)酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、苯甲酸、對(duì)甲苯磺酸、甲磺酸等。
式(I)表示的本發(fā)明的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽顯示低毒性，可直接給藥。然而，它可用常規(guī)可藥用的載體轉(zhuǎn)化為可藥用的組合物形式用于由于腦功能或器官障礙引起的各種疾病的改善或治療。
劑量形式可包括含有式(I)化合物本身，或使用常規(guī)賦形劑的口服制劑，例如膠囊、片劑或腸胃外制劑，例如注射溶液。例如，膠囊可通過(guò)混合粉末形式的式(I)化合物與合適的賦形劑，例如乳糖、淀粉或它們的衍生物或纖維素衍生物，隨后充填在明膠膠囊中制備。
同樣，片劑可通過(guò)混合活性組分與上述賦形劑、粘合劑，例如羧甲基纖維素鈉、海藻酸或阿拉伯膠和水制備，隨后如果需要，將得到的混合物制成顆粒。隨后，它可進(jìn)一步與潤(rùn)滑劑，例如滑石或硬脂酸混合，通過(guò)常用壓片機(jī)壓制成片劑。
用于腸胃外途徑的可注射制劑也可通過(guò)將式(I)化合物或其鹽與溶液助劑一起溶解在無(wú)菌蒸餾溶液或無(wú)菌生理鹽水溶液中，裝入安瓿制備。穩(wěn)定劑或緩沖劑可用于可注射的溶液，可注射的制劑可靜脈內(nèi)或點(diǎn)滴給藥。
在通過(guò)誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種，具有神經(jīng)保護(hù)效果的式(I)化合物的給藥中，用于改善腦功能和器官疾病的治療有效量沒(méi)有特殊的限制，會(huì)根據(jù)各種因素變化。這些因素可以是患者的病況、疾病的嚴(yán)重程度、年齡、并發(fā)癥的存在、給藥途徑、制劑以及給藥的次數(shù)。
用于口服給藥的通常建議的日劑量是0.1-1000mg/天/人，優(yōu)選1-500mg/天/人，而用于腸胃外給藥的通常建議的日劑量是口服劑量的1/100-1/2。這些劑量還可根據(jù)年齡以及患者病況改變。
實(shí)施例本發(fā)明通過(guò)如下實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明，但應(yīng)注意的是本發(fā)明不以任何方式受這些實(shí)施例的限制。
在如下實(shí)施例中的化合物編號(hào)與隨后表格中的化合物編號(hào)相同。實(shí)施例12-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-(4-哌啶基)乙酰胺(1)將在乙酸乙酯溶液中的457mg2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氧基]乙酸、363mg1-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基氨基哌啶、2.16g25％丙烷膦酸酐[日本專利公開(kāi)昭55-100346]和985μl三乙胺在5ml二氯甲烷中的溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)后，在反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，混合物用二氯甲烷提取。提取物用鹽水洗滌，干燥和減壓濃縮得到殘余物。將得到的殘余物溶解在8ml二氯甲烷中，在冰冷卻下，向該溶液中加入2ml三氟乙酸，隨后混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。在除去溶劑后，得到的殘余物用胺涂覆的硅膠(Fuji Silysia Chemical Ltd.)柱色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)純化得到192mg(42％)上述化合物(1)。實(shí)施例22-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-(4-哌啶基)丙酰胺(2)通過(guò)實(shí)施例1中的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氧基]丙酸和1-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(2)。實(shí)施例32-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-2-甲基-N-甲基-N-(4-哌啶基)丙酰胺(3)通過(guò)實(shí)施例1中的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氧基]-2-甲基丙酸和1-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(3)。實(shí)施例42-(2-氨基-3，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-(4-哌啶基)乙酰胺(4)通過(guò)實(shí)施例1中的相同方法，由2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，4，5，6-四甲基苯氧基]乙酸和1-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(4)。實(shí)施例52-(3-氨基-2，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-(4-哌啶基)乙酰胺(5)通過(guò)實(shí)施例1中的相同方法，由2-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-2，4，5，6-四甲基苯氧基]乙酸和1-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(5)。實(shí)施例62-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-(1-苯乙基-4-哌啶基)乙酰胺(6)向99mg實(shí)施例1中得到的化合物(1)和42.3μl苯乙基溴在2ml乙腈中的混合物溶液中加入65μl三乙胺，混合物在60℃下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)后，在反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，混合物用乙酸乙酯提取。提取物用鹽水洗滌，干燥和減壓濃縮得到殘余物。得到的殘余物用胺涂覆的硅膠(Fuji Silysia Chemical Ltd.)柱色譜法(二氯甲烷∶乙醚＝1∶1)純化得到86mg(65％)上述化合物(6)。實(shí)施例72-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-[1-(2-苯氨基-2-氧代乙基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(7)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和N-苯基-2-溴乙酰胺得到標(biāo)題化合物(7)。實(shí)施例82-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)-N-甲基乙酰胺(8)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和苯甲酰基氯得到標(biāo)題化合物(8)。實(shí)施例92-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-(1-丁基-4-哌啶基)-N-甲基乙酰胺(9)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和丁基溴得到標(biāo)題化合物(9)。實(shí)施例102-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-[1-(2-苯基-2-氧代乙基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(10)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和苯甲酰甲基溴得到標(biāo)題化合物(10)。實(shí)施例112-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-[1-(2-羥基-2-苯基乙基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(11)向?qū)嵤├?0中得到的化合物(10)在甲醇中的混合物溶液中在0℃下加入1.0當(dāng)量硼氫化鈉，混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)。在反應(yīng)后，減壓除去溶劑，得到的殘余物用胺涂覆的硅膠(Fuji SilysiaChemical Ltd.)柱色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)純化以58％的收率得到上述化合物(11)。實(shí)施例122-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-(1-環(huán)丙基甲基-4-哌啶基)-N-甲基乙酰胺(12)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和環(huán)丙基甲基溴得到標(biāo)題化合物(12)。實(shí)施例132-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(反-2-苯基-1-環(huán)丙基甲基)-4-哌啶基]乙酰胺(13)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和反-2-苯基-1-環(huán)丙基甲基溴得到標(biāo)題化合物(13)。實(shí)施例142-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(2-苯氧基乙基)-4-哌啶基]乙酰胺(14)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和2-苯氧基乙基溴得到標(biāo)題化合物(14)。實(shí)施例152-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-{1-[2-(N-甲基苯氨基)-2-氧代乙基]-4-哌啶基}乙酰胺(15)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和N-甲基-N-苯基-2-溴乙酰胺得到標(biāo)題化合物(15)。實(shí)施例162-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-{1-[2-(4-嗎啉基)乙基]-4-哌啶基}乙酰胺(16)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和N-(2-溴乙基)嗎啉鹽酸鹽得到標(biāo)題化合物(16)。實(shí)施例172-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-{1-[2-(2-羥基-2-苯基乙氧基)乙基]-4-哌啶基}-N-甲基乙酰胺(17)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和2-(氯乙氧基)-1-苯基乙醇得到標(biāo)題化合物(17)。實(shí)施例182-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-[1-(4-氰基芐基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(18)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和4-氰基芐基溴得到標(biāo)題化合物(18)。實(shí)施例194-({4-[[(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)乙酰基]-(甲基)氨基]-1-哌啶基}甲基)苯甲酰胺(19)向82mg在實(shí)施例18中得到的化合物(18)在甲醇中的混合物溶液中在冰冷卻下加入58μl30％過(guò)氧化氫水溶液和150μl3N-氫氧化鈉水溶液，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。反應(yīng)后，在反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷提取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌，干燥和減壓除去溶劑。得到的殘余物用胺涂覆的硅膠(FujiSilysia Chemical Ltd.)柱色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)純化得到66mg(77％)上述化合物(19)。實(shí)施例202-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-{1-[2-(苯硫基)乙基]-4-哌啶基}乙酰胺(20)通過(guò)實(shí)施例6的相同方法，由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和2-(氯乙基)苯基硫得到標(biāo)題化合物(20)。實(shí)施例212-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(2-丙炔基)-4-哌啶基]乙酰胺(21)通過(guò)實(shí)施例6的相同方法，由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和炔丙基溴得到標(biāo)題化合物(21)。實(shí)施例222-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(1-甲基-2-苯基乙基)-4-哌啶基]乙酰胺(22)通過(guò)實(shí)施例6的相同方法，由實(shí)施例1中得到的化合物(1)和2-溴-1-苯基丙烷得到標(biāo)題化合物(22)。實(shí)施例232-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-(1-環(huán)丙基甲基-4-哌啶基)-N-甲基丙酰胺(23)通過(guò)實(shí)施例6的相同方法，由實(shí)施例2中得到的化合物(2)和環(huán)丙基甲基溴得到標(biāo)題化合物(23)。實(shí)施例242-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-(1-丁基-4-哌啶基)-N-甲基丙酰胺(24)通過(guò)實(shí)施例6的相同方法，由實(shí)施例2中得到的化合物(2)和1-溴丁烷得到標(biāo)題化合物(24)。實(shí)施例252-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-{1-[2-(4-嗎啉基)乙基]-4-哌啶基}丙酰胺(25)通過(guò)實(shí)施例6的相同方法，由實(shí)施例2中得到的化合物(2)和N-(2-溴乙基)嗎啉鹽酸鹽得到標(biāo)題化合物(25)。實(shí)施例262-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(反-2-苯基-1-環(huán)丙基甲基)-4-哌啶基]丙酰胺(26)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例2中得到的化合物(2)和反-2-苯基-1-環(huán)丙基甲基溴得到標(biāo)題化合物(26)。實(shí)施例272-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-{1-[2-(N-甲基苯氨基)-2-氧代乙基]-4-哌啶基}丙酰胺(27)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例2中得到的化合物(2)和N-甲基-N-苯基-2-溴乙酰胺得到標(biāo)題化合物(27)。實(shí)施例282-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氧基)-N，2-二甲基-N-[1-(2-苯基乙基)-4-哌啶基]丙酰胺(28)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例3中得到的化合物(3)和苯基乙基溴得到標(biāo)題化合物(28)。實(shí)施例292-(2-氨基-3，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(2-苯基乙基)-4-哌啶基]乙酰胺(29)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例4中得到的化合物(4)和苯基乙基溴得到標(biāo)題化合物(29)。實(shí)施例302-(2-氨基-3，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-[1-(2-苯基-2-氧代乙基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(30)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例4中得到的化合物(4)和苯甲酰甲基溴得到標(biāo)題化合物(30)。實(shí)施例312-(2-氨基-3，4，5，6-四甲基苯氨基)-N-甲基-N-[1-(4-苯氧基苯基)-4-哌啶基]乙酰胺(31)通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，4，5，6-四甲基苯氨基]乙酸和1-(4-苯氧基苯基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(31)。實(shí)施例322-(2-氨基-3，4，5，6-四甲基苯氨基)-N-{1-[4-(4-氟芐基)苯基]-4-哌啶基｝-N-甲基乙酰胺(32)
通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，4，5，6-四甲基苯氨基]乙酸和1-[4-(4-氟芐基)苯基]-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(32)。實(shí)施例332-(3-氨基-2，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-(1-苯甲酰基-4-哌啶基)-N-甲基乙酰胺(33)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例5中得到的化合物(5)和苯甲?；鹊玫綐?biāo)題化合物(33)。實(shí)施例342-(3-氨基-2，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-[1-(4-氰基芐基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(34)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例5中得到的化合物(5)和4-氰基芐基溴得到標(biāo)題化合物(34)。實(shí)施例352-(3-氨基-2，4，5，6-四甲基苯氧基)-N-甲基-N-[1-(2-苯基乙基)-4-哌啶基]乙酰胺(35)用實(shí)施例6中的相同方法由實(shí)施例5中得到的化合物(5)和苯基乙基溴得到標(biāo)題化合物(35)。實(shí)施例362-(4-氨基-2，3，5-三甲基苯氧基)-N-[1-(4-氟苯基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(36)通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5-三甲基苯氧基]乙酸和1-(4-氟苯基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(36)。實(shí)施例372-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氨基)-N-[1-(1，3苯并噻唑-2-基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(37)通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氨基]乙酸和1-(1，3-苯并噻唑-2-基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(37)。實(shí)施例382-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氨基)-N-[1-(4-氟苯基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(38)通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氨基]乙酸和1-(4-氟苯基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(38)。實(shí)施例392-(3-氨基-2，4，6-三甲基苯氨基)-N-[1-(4-氟苯基)-4-哌啶基]-N-甲基乙酰胺(39)
通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-2，4，6-三甲基苯氨基]乙酸和1-(4-氟苯基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(39)。實(shí)施例402-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氨基)-N-甲基-N-[1-(4-苯氧基苯基)-4-哌啶基]丙酰胺(40)通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氨基]丙酸和1-(4-苯氧基苯基)-4-甲基氨基哌啶得到標(biāo)題化合物(40)。實(shí)施例412-(4-氨基-2，3，5，6-四甲基苯氨基)-N-(1-[1，1’-聯(lián)苯基]-4-基-4-哌啶基)-N-甲基丙酰胺(41)通過(guò)實(shí)施例1的相同方法，由2-[4-(叔丁氧基羰基氨基)-2，3，5，6-四甲基苯氨基]丙酸和1-[1，1’-聯(lián)苯基]-4-基-N-甲基-4-哌啶胺得到標(biāo)題化合物(41)。
由上述實(shí)施例得到的化合物的生理化學(xué)數(shù)據(jù)概述在如下表1-7中。表1 表2 表3 表4 表5 表6 表7
式(I)表示的本發(fā)明的氨基苯氧基乙酰胺衍生物的效果由如下生物試驗(yàn)方法評(píng)價(jià)。試驗(yàn)1通過(guò)比較在谷氨酸鹽加入之前給藥試驗(yàn)化合物與同時(shí)給藥試驗(yàn)化合物和谷氨酸鹽，評(píng)價(jià)對(duì)谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)變性的神經(jīng)保護(hù)效果。試驗(yàn)2通過(guò)各種受體抑制劑和MTA[5-脫氧-5-甲基硫代腺苷]的處理評(píng)價(jià)對(duì)細(xì)胞死亡的拮抗作用。試驗(yàn)3評(píng)價(jià)鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生的增加作用。試驗(yàn)4通過(guò)反義寡核苷酸評(píng)價(jià)神經(jīng)保護(hù)抑制效果。試驗(yàn)5評(píng)價(jià)腦水腫抑制效果。
通過(guò)使用上述生物試驗(yàn)，通過(guò)活化FGF受體，由于誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種具有神經(jīng)保護(hù)效果的化合物的選擇分別通過(guò)結(jié)合所有試驗(yàn)1-4，結(jié)合試驗(yàn)1和2，結(jié)合試驗(yàn)1、2和3或結(jié)合試驗(yàn)1、3和4進(jìn)行。
如下是試驗(yàn)方法的詳細(xì)描述。生物試驗(yàn)1評(píng)價(jià)對(duì)谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞死亡的神經(jīng)保護(hù)效果根據(jù)Mattson和Kater[M.P.mattson，Brain Res.Rev.，13，179(1988)]的改進(jìn)方法由胎兒Wistar大鼠(E18)的大腦皮層制備原始培養(yǎng)物。在木瓜蛋白酶解離后，神經(jīng)元以5×104細(xì)胞/孔的密度接種在聚L-賴氨酸涂覆的96孔板(Sumitomo Bakelite Co.Ltd.)上，在100μlDMEM培養(yǎng)基(Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(Gibco)，補(bǔ)加10mMNaHCO3、15mMKCl、1mM丙酮酸鈉和10％(v/v)馬血清)中培養(yǎng)。培養(yǎng)物保持在37℃的90％空氣/10％ CO2潮濕培養(yǎng)器中，在第4天加入谷氨酸鹽至最終濃度1mM。1天后用3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H溴化四唑鎓(MTT)測(cè)定細(xì)胞存活。將MTT以5mg/m1溶解在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH7.4)中，過(guò)濾以滅菌和除去在某些MTT批料中存在的少量不溶解的殘余物，以0.5mg/ml的最終濃度加入培養(yǎng)物中。在培養(yǎng)6小時(shí)后，棄掉培養(yǎng)基以停止反應(yīng)。在每個(gè)孔中加入二甲基亞砜，充分混合以溶解暗藍(lán)色的結(jié)晶。在室溫下幾分鐘后，平板通過(guò)使用Micro ELISA Reader在570nm的試驗(yàn)波長(zhǎng)和650nm的參考波長(zhǎng)下讀數(shù)。
在谷氨酸鹽處理之前24小時(shí)和與谷氨酸鹽同時(shí)加入試驗(yàn)化合物(1μM)。
試驗(yàn)化合物的效果根據(jù)如下方程式作為活細(xì)胞的存活率(％)測(cè)定活細(xì)胞的存活率(％)＝[(試驗(yàn)化合物組-谷氨酸處理組)÷(對(duì)照組-谷氨酸處理組)]×100即，在對(duì)照組培養(yǎng)后的活細(xì)胞的存活率換算為100％，計(jì)算試驗(yàn)化合物的活細(xì)胞的存活率。生物試驗(yàn)2通過(guò)生理活性物質(zhì)的各種受體抑制劑和MTA的處理評(píng)價(jià)對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞死亡的拮抗作用通過(guò)使用用于中和抗體和分別用于FGF、NT-3、NT-4/5、BDNF、IGF-I/II、NGF、PDGF和雌激素的抑制劑的拮抗試驗(yàn)，進(jìn)行該生物試驗(yàn)以測(cè)定試驗(yàn)化合物的神經(jīng)保護(hù)效果是否是由于生理活性物質(zhì)的受體的活化引起。
MTA(5-脫氧-5-甲基硫代腺苷)特異性抑制在活細(xì)胞中的FGF受體的自磷酸化作用[P.A.Mather，J.Bio.Chem.，268，4244(1993)]。因此，試驗(yàn)化合物的神經(jīng)保護(hù)效果通過(guò)MTA的處理抑制，該效果取決于通過(guò)FGF受體的磷酸化作用的信號(hào)傳遞效果。
各種受體的抑制劑以最佳濃度溶解，在使用前將MTA以7.5mM的濃度溶解。在試驗(yàn)化合物處理前30分鐘，加入最佳濃度的每種抑制劑或0.75mMMTA，試驗(yàn)化合物的神經(jīng)保護(hù)效果通過(guò)MTT方法測(cè)定。
每個(gè)生物試驗(yàn)1和2的結(jié)果顯示于如下表8中。
表8

生物試驗(yàn)3評(píng)價(jià)鈣結(jié)合蛋白D-28k誘導(dǎo)效果根據(jù)Mattson和Kater[M.P.Mattson，Brain Res.Rev.，13，179(1988)]的改進(jìn)方法由胎兒Wistar大鼠(E18)的大腦皮層制備原始培養(yǎng)物。在木瓜蛋白酶解離后，神經(jīng)元以5500細(xì)胞/mm2的密度接種在聚L-賴氨酸涂覆的6孔板(Falcon)上，在2ml DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
在開(kāi)始培養(yǎng)后5天和培養(yǎng)后7天加入試驗(yàn)化合物，蛋白質(zhì)用均化的緩沖溶液[含有20mM Tris-HCl(pH＝7.4)、1mMEDTA和0.1mM苯基甲基磺?；鷀提取。
試驗(yàn)化合物的效果通過(guò)使用多克隆抗鈣結(jié)合蛋白D-28kSwant(Swant Co.，Ltd.)作為抗體用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)測(cè)定。
表9顯示試驗(yàn)結(jié)果，在表格中，對(duì)照組(非處理組)誘導(dǎo)的鈣結(jié)合蛋白D-28k的數(shù)量表示為100％。
表9

生物試驗(yàn)4用反義寡核苷酸評(píng)價(jià)神經(jīng)保護(hù)抑制效果對(duì)于試驗(yàn)化合物的神經(jīng)保護(hù)效果，需要產(chǎn)生通過(guò)FGF受體的磷酸化作用用于細(xì)胞信號(hào)傳遞作用的保護(hù)蛋白質(zhì)，鈣結(jié)合蛋白D-28k是具有Ca2+緩沖功能的保護(hù)蛋白質(zhì)的一種。因此，如下試驗(yàn)通過(guò)使用反義寡核苷酸測(cè)定鈣結(jié)合蛋白D-28k是否與試驗(yàn)化合物的神經(jīng)保護(hù)效果有關(guān)。
由胎兒Wistar大鼠(E18)的大腦皮質(zhì)制備原始培養(yǎng)物。在木瓜蛋白酶解離后，神經(jīng)元以4×104細(xì)胞/孔的密度接種在聚L-賴氨酸涂覆的96孔板(Sumitomo Bakelite Co.Ltd.)上，在100μlDMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
從開(kāi)始培養(yǎng)2天至8天，每24小時(shí)，分別加入100μl Neurobasal培養(yǎng)基/2％B-27Supplement和5μM的三種反義寡核苷酸。培養(yǎng)7天后，加入1μM和10μM試驗(yàn)化合物，培養(yǎng)8天后，加入300μM谷氨酸。1天后，使用MTT測(cè)定細(xì)胞存活。在培養(yǎng)6小時(shí)后，棄掉培養(yǎng)基以停止反應(yīng)。在所有孔中加入二甲基亞砜，充分混合以溶解暗藍(lán)色的結(jié)晶。在室溫下幾分鐘后，平板通過(guò)使用Micro ELISA Reader在570nm的試驗(yàn)波長(zhǎng)和650nm的參考波長(zhǎng)下讀數(shù)。
試驗(yàn)化合物的效果根據(jù)生物試驗(yàn)1中所示的方程式作為活細(xì)胞的存活率(％)測(cè)定即，在對(duì)照組培養(yǎng)后的活細(xì)胞的存活率換算為100％，計(jì)算試驗(yàn)化合物的活細(xì)胞的存活率。
在該試驗(yàn)中所使用的反義寡核苷酸的序列如下。
反義鈣結(jié)合蛋白15-TGA CTG CAG GTG GGA TTC TGC-3反義鈣結(jié)合蛋白25-ACC GTC GAA ATG AAG CCA GA-3反義鈣結(jié)合蛋白35-CGT ATC ATC CAC GGT CTT GTT-3表10顯示試驗(yàn)結(jié)果。
表10

生物試驗(yàn)5評(píng)價(jià)腦水腫抑制效果體重210-230g成年雄性Wistar大鼠用于本研究，飼養(yǎng)在12小時(shí)亮/暗周期的人工控制的環(huán)境中。動(dòng)物用戊巴比妥鈉(50mg/kg體重，i.p.，Nembutal，Dinabbott，Japan)麻醉，放置在立體定位裝置中。露出頭顱，在頂骨上打洞；在前囟后1.5mm，其側(cè)面0.8mm。所有的過(guò)程在外科顯微鏡下進(jìn)行以避免過(guò)度刺激腦脊膜和下面的大腦。將一個(gè)帶有鈍尖的黃銅螺釘(1.0mm直徑，3.0mm長(zhǎng)，Biomedica，Japan)插入孔中。螺釘向顱內(nèi)突出約2.5mm，它通過(guò)腦脊膜刺入右腦的顱骨部分。在假外科手術(shù)的大鼠中，封閉頭皮，不在孔中插入螺釘。在手術(shù)后，所有大鼠放置在原先的巢內(nèi)直至殺死，大鼠允許隨意進(jìn)食和飲水。
在麻醉下處理TBI后6天(n＝6)的目標(biāo)大鼠的腦半球的水含量，稱重解剖出的腦半球，在110℃下干燥24小時(shí)，隨后再次稱重。濕重減去干重的重量為目標(biāo)的組織水，用于分析腦水腫。
水含量用如下公式計(jì)算水含量(％)＝[(半球體的濕重-半球體的干重)/半球體的溫重]×100％試驗(yàn)化合物在手術(shù)后即通過(guò)大鼠的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥。
表11顯示試驗(yàn)結(jié)果。
表11

工業(yè)應(yīng)用如上所述，本發(fā)明提供低分子化合物，尤其是式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物，它誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k，Ca2+結(jié)合蛋白的一種，并能容易地給藥。由于由本發(fā)明提供的化合物的給藥引起鈣結(jié)合蛋白D-28k的誘導(dǎo)，導(dǎo)致神經(jīng)保護(hù)效果和腦功能和器官疾病改善和治療效果，可以理解本發(fā)明的試劑十分適用于藥物領(lǐng)域。
序列表<110>SUNTORY LIMITED<120>氨基苯氧基乙酰胺衍生物和含有它們的藥物組合物<130>SN-48<140>PCT/JP01/03198<141>2001-04-13<150>JP 2000-112100<151>2000-4-13<160>3<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223)反義DNA用作產(chǎn)生鈣結(jié)合蛋白D-28K的阻斷劑<300><302>在大鼠PC12嗜絡(luò)細(xì)胞瘤細(xì)胞中通過(guò)生理制激但不是鈣介導(dǎo)的變性中的鈣結(jié)合蛋白-D28K基因誘導(dǎo)和蛋白質(zhì)表達(dá)<303>FEBS Letters<304>352<305>1<306>53-57<307>1994-08-29<400>1tga ctg cag gtg gga ttc tgc<210>2<211>20<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223)反義DNA用作產(chǎn)生鈣結(jié)合蛋白D-28K的阻斷劑<300><302>在大鼠PC12嗜絡(luò)細(xì)胞瘤細(xì)胞中通過(guò)生理制激但不是鈣介導(dǎo)的變性中的鈣結(jié)合蛋白-D28K基因誘導(dǎo)和蛋白質(zhì)表達(dá)<303>FEBS Letters<304>352<305>1<306>53-57<307>1994-08-29<400>2acc gtc gaa atg aag cca ga<210>3<211>21<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223)反義DNA用作產(chǎn)生鈣結(jié)合蛋白D-28K的阻斷劑<300><302>在大鼠PC12嗜絡(luò)細(xì)胞瘤細(xì)胞中通過(guò)生理制激但不是鈣介導(dǎo)的變性中的鈣結(jié)合蛋白-D28K基因誘導(dǎo)和蛋白質(zhì)表達(dá)<303>FEBS Letters<304>352<305>1<306>53-57<307>1994-08-29<400>3cgt atc atc cac ggt ctt gtt
權(quán)利要求
1.如下式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽 其中，R1、R2、R3和R4分別是氫原子或低級(jí)烷基；R5、R6、R7和R8分別是氫原子或低級(jí)烷基；E1是基團(tuán)-NR9-(其中R9是氫原子或低級(jí)烷基)；E2是氧原子或基團(tuán)-NR10-(其中R10是氫原子或可以被取代的低級(jí)烷基)；Q是基團(tuán)-X-Y-Q′，其中X是連接鍵、低級(jí)烷基、低級(jí)烯基或低級(jí)炔基；Y是連接鍵或選自C＝O、C(＝O)NH、NHC(＝O)、-O-、-S-、CH(OH)、-O-CH(OH)和-O-CH2-CH(OH)-的基團(tuán)，其中酰氨基的氫原子可以被低級(jí)烷基取代；和Q′是氫原子或選自芳基、雜芳基、飽和或不飽和環(huán)狀烴基和飽和或不飽和雜環(huán)基團(tuán)的環(huán)狀基團(tuán)，其中在Q′環(huán)狀基團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子可以被取代；在X和Y均是連接鍵的情況下，則Q′不是氫原子；或在X和Y之一是除連接鍵之外的情況下，則E2是基團(tuán)-O-和所有基團(tuán)R1、R2、R3和R4不是氫原子。
2.權(quán)利要求1的式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽，其中X和Y均是連接鍵。
3.權(quán)利要求1的式(I)的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽，其中X和Y之一不是連接鍵，E2是基團(tuán)-O-，所有基團(tuán)R1、R2、R3和R4均不是氫原子，其中X、Y、R1、R2、R3和R4與權(quán)利要求1中的定義相同。
4.含有權(quán)利要求1的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的藥物。
5.含有權(quán)利要求2的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的藥物。
6.含有權(quán)利要求3的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的藥物。
7.含有權(quán)利要求1的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的產(chǎn)生是Ca2+結(jié)合蛋白質(zhì)的鈣結(jié)合蛋白D-28k的誘導(dǎo)劑。
8.含有權(quán)利要求2的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的產(chǎn)生是Ca2+結(jié)合蛋白質(zhì)的鈣結(jié)合蛋白D-28k的誘導(dǎo)劑。
9.含有權(quán)利要求3的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的產(chǎn)生是Ca2+結(jié)合蛋白質(zhì)的鈣結(jié)合蛋白D-28k的誘導(dǎo)劑。
10.含有權(quán)利要求1的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的腦功能和器官功能改善或治療劑。
11.含有權(quán)利要求2的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的腦功能和器官功能改善或治療劑。
12.含有權(quán)利要求3的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分的腦功能和器官功能改善或治療劑。
13.用于治療或改善由于各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化引起的腦功能疾病以及腦器官疾病，例如老年性癡呆、腦損傷或腦外科手術(shù)、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化的藥物，其含有權(quán)利要求1的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分。
14.用于治療或改善由于各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化引起的腦功能疾病以及腦器官疾病，例如老年生癡呆、腦損傷或腦外科手術(shù)、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化的藥物，其含有權(quán)利要求2的式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分。
15.用于治療或改善由于各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化引起的腦功能疾病以及腦器官疾病，例如老年性癡呆、腦損傷或腦外科手術(shù)、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化的藥物，其含有權(quán)利要求3的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽作為活性組分。
16.選擇神經(jīng)保護(hù)化合物的方法，其中所述方法評(píng)價(jià)由于誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生引起的各種生理活性物質(zhì)的受體活化和FGF受體的磷酸化作用。
17.權(quán)利要求16的選擇神經(jīng)保護(hù)化合物的方法，其中所述方法評(píng)價(jià)FGF受體的自磷酸化作用。
18.權(quán)利要求16的選擇神經(jīng)保護(hù)化合物的方法，其中所述方法分別通過(guò)結(jié)合所有試驗(yàn)1-4，結(jié)合試驗(yàn)1和2，結(jié)合試驗(yàn)1、2和3、結(jié)合試驗(yàn)1和3或結(jié)合試驗(yàn)1、3和4進(jìn)行，其中每個(gè)試驗(yàn)1-4分別由如下方法組成試驗(yàn)1評(píng)價(jià)化合物對(duì)谷氨酸鹽誘導(dǎo)的神經(jīng)變性的神經(jīng)保護(hù)效果，試驗(yàn)2通過(guò)抑制FGF受體的自磷酸化作用的MTA[5-脫氧-5-甲基硫代腺苷]的處理評(píng)價(jià)對(duì)化合物神經(jīng)保護(hù)效果的拮抗作用，和通過(guò)各種生理活性物質(zhì)受體，例如神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-3(NT-3)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-4/5(NT-4/5)、腦衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-I/II(IFG-I/II)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、雌激素的抑制劑的處理評(píng)價(jià)拮抗作用以確定神經(jīng)保護(hù)效果是否由FGF受體的受體自磷酸化作用引起，試驗(yàn)3評(píng)價(jià)化合物的鈣結(jié)合蛋白D-28k誘導(dǎo)效果，和試驗(yàn)4通過(guò)鈣結(jié)合蛋白D-28k反義寡核苷酸處理證實(shí)化合物的神經(jīng)保護(hù)效果是由于誘導(dǎo)鈣結(jié)合蛋白D-28k產(chǎn)生的能力引起的。
19.權(quán)利要求16-18的任何一項(xiàng)方法選擇的神經(jīng)保護(hù)化合物。
20.含有權(quán)利要求19的神經(jīng)保護(hù)化合物的藥物。
21.權(quán)利要求20的藥物，用于治療或改善由于各種局部缺血疾病，例如腦梗塞、腦內(nèi)出血和腦動(dòng)脈硬化引起的腦功能疾病以及腦器官疾病，例如老年性癡呆、腦損傷、腦外科手術(shù)、早老性癡呆、帕金森氏病和肌萎縮性側(cè)索硬化。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)表示的氨基苯氧基乙酰胺衍生物或其可藥用的鹽,其中，R
文檔編號(hào)C07D211/58GK1449493SQ01800908
公開(kāi)日2003年10月15日 申請(qǐng)日期2001年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月13日
發(fā)明者竹本尚弘, 案浦洋一, 村山宣人 申請(qǐng)人:第一三得利制藥株式會(huì)社