專(zhuān)利名稱(chēng)：生物相關(guān)物質(zhì)微陣列及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及其上固定有作為探針的生物相關(guān)物質(zhì)的微陣列，以及制備該微陣列的方法。所述微陣列可以用于臨床檢測(cè)和食品檢測(cè)等領(lǐng)域。
目前公開(kāi)了制備這些DNA微陣列的幾種方法，其中一種方法是將DNA區(qū)室化并固定于玻璃基片上，另一種方法是在硅基片上在分隔開(kāi)的區(qū)域內(nèi)采用生產(chǎn)半導(dǎo)體芯片的照相平板印刷技術(shù)一個(gè)接一個(gè)地合成核酸(美國(guó)專(zhuān)利US 5,445,934；US 5,774,305)。
此外，還披露了如下獲得DNA微陣列的方法，其中將DNA固定在由玻璃或高分子構(gòu)成的線(xiàn)性體上，使這些線(xiàn)性體和粘合劑一起形成卷起的片狀，然后沿著這些纖維的橫斷面方面切片(日本專(zhuān)利申請(qǐng)JP11-108928)；另一種公開(kāi)的獲得DNA微陣列的方法是，將其上固定有如DNA等物質(zhì)的多個(gè)纖維聚集成束，然后沿著與該纖維縱向相交叉的方向?qū)⒗w維束切成DNA微陣列(日本專(zhuān)利公開(kāi)(未審查的申請(qǐng))JP2000-245461)；再一種公開(kāi)的獲得DNA微陣列的方法是，在一樹(shù)脂塊中制成多個(gè)通孔，然后使這些通孔都攜帶上如DNA等物質(zhì)，然后將該樹(shù)脂塊切成片(日本專(zhuān)利公開(kāi)文本(未審查的申請(qǐng))JP2000-78998)。由于這些制備方法允許通過(guò)重復(fù)切片制成多個(gè)微陣列，因此這些方法對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)具有同樣序列的芯片而言是尤其優(yōu)選的方法。
例如，一般來(lái)說(shuō)，上述DNA微陣列對(duì)分析物中特定DNA的檢測(cè)是通過(guò)如下方式進(jìn)行的用熒光對(duì)固定在芯片上的DNA探針或分析物DNA進(jìn)行標(biāo)記，探針或分析物通過(guò)諸如雜交等操作形成雜合物，然后用來(lái)自于外部光源的熒光激發(fā)光照射已經(jīng)形成雜合物的探針或分析物，然而檢測(cè)激發(fā)這些熒光分子所產(chǎn)生的熒光。
然而，當(dāng)檢測(cè)在分析物中以痕量存在的生物相關(guān)物質(zhì)如DNA時(shí)，由探針或分析物之外的物質(zhì)所發(fā)出的熒光，特別是如帶有探針的基片等物質(zhì)的自身熒光(self-fluorescence)，將作為噪聲被檢測(cè)出來(lái)。因此，就存在這樣一個(gè)問(wèn)題，即可能檢測(cè)不到以痕量存在的生物相關(guān)物質(zhì)。
另外，通過(guò)重復(fù)切片生產(chǎn)多個(gè)微陣列的方法在大規(guī)模生產(chǎn)具有同樣排列的微陣列方面具有優(yōu)勢(shì)。但是，目前存在一個(gè)問(wèn)題，即微陣列會(huì)發(fā)生彎曲。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及提供一種微陣列，其能夠減少探針或分析物之外的物質(zhì)所發(fā)出的噪聲熒光，由此使得可以檢測(cè)出痕量成分。此外，本發(fā)明涉及提供通過(guò)重復(fù)切片制備多個(gè)微陣列的方法，該方法制備微陣列的效率高而且所制備的微陣列不存在如彎曲之類(lèi)的缺陷。
本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述問(wèn)題進(jìn)行了周密的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)在構(gòu)成微陣列的材料中加入能夠減少自身熒光的物質(zhì)即能夠檢測(cè)出痕量分析物。此外，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在制備微陣列的方法中，通過(guò)在構(gòu)成微陣列的材料中加入能夠減少自身熒光的物質(zhì)將能夠有效地制備出不具有如彎曲之類(lèi)缺陷的微陣列。
也就是說(shuō)，本發(fā)明包括以下方面1.微陣列，其可通過(guò)將含有多個(gè)線(xiàn)性體或通孔的塊沿著與上述線(xiàn)性體或通孔的縱向相交叉的方向切成片得到，其中上述線(xiàn)性體或通孔帶有生物相關(guān)物質(zhì)，而且上述線(xiàn)性體和/或塊含有能夠減少其自身熒光的物質(zhì)。
2.制備微陣列的方法，包括在塊中形成多個(gè)通孔，其中該塊含有能夠減少該塊的自身熒光的物質(zhì)，使上述通孔攜帶生物相關(guān)物質(zhì)，沿著與上述通孔的縱向相交叉的方向?qū)⒃搲K切成片。
3.制備微陣列的方法，包括用樹(shù)脂固定帶有生物相關(guān)物質(zhì)的一束線(xiàn)性體以制備塊，其中該樹(shù)脂包含能夠減少自身熒光的物質(zhì)，然后，沿著與上述線(xiàn)性體縱向相交叉的方向?qū)⒃搲K切成片。
4.制備微陣列的方法，包括用樹(shù)脂固定一束線(xiàn)性體以制備塊，其中該樹(shù)脂包含能夠減少自身熒光的物質(zhì)，然后，在使所有的線(xiàn)性體都帶上生物相關(guān)物質(zhì)后，沿著與上述線(xiàn)性體縱向相交叉的方向?qū)⒃搲K切成片。
5.上述3或4的方法，其中線(xiàn)性體包含能夠減少自身熒光的物質(zhì)。
在上述微陣列以及制備上述微陣列的方法中，線(xiàn)性體的例子包括纖維，如中空纖維，塊的例子包括含有樹(shù)脂的塊。此外，減少自身熒光的物質(zhì)包括吸收劑(如，無(wú)機(jī)顏料)和/或淬滅劑。
無(wú)機(jī)顏料優(yōu)選為炭黑，其含量例如按質(zhì)量計(jì)為0.5％至10％。
下面將對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)地闡述。申請(qǐng)?zhí)枮?000-184393的日本專(zhuān)利申請(qǐng)的說(shuō)明書(shū)和/或附圖的內(nèi)容構(gòu)成本申請(qǐng)優(yōu)先權(quán)的基礎(chǔ)，將其并入本文。
在本發(fā)明中，生物相關(guān)物質(zhì)的例子是選自下述(1)至(3)的物質(zhì)(1)核酸，氨基酸，糖或脂；(2)包含至少一類(lèi)上述(1)中的物質(zhì)的聚合物；
(3)與上述(1)或(2)中的物質(zhì)相互作用的物質(zhì)。
例如，當(dāng)核酸作為生物相關(guān)物質(zhì)時(shí)，可以通過(guò)已知方法從細(xì)胞中制備DNA或RNA。例如，可以根據(jù)Blin等(Nucleic Acids Res.3，2303，1976)的方法提取DNA，可以根據(jù)Favaloro等(Methods.Enzymol.65，718，1980)的方法提取RNA。此外，還可以使用線(xiàn)性或環(huán)狀質(zhì)粒DNA或染色體DNA。對(duì)于DNA，可以使用通過(guò)化學(xué)方法或限制性酶裂解得到的DNA片段、體外通過(guò)如酶等方法合成的DNA或者化學(xué)合成的寡核苷酸等。
在本發(fā)明中，塊由線(xiàn)性體或通孔和除這些線(xiàn)性體或通孔之外的塊體構(gòu)成。也就是說(shuō)，塊可以由塊體和其中所攜帶的線(xiàn)性體構(gòu)成，或者，塊可以由塊體和其中所形成的通孔構(gòu)成。
對(duì)于用作塊體的材料，可以使用已知的樹(shù)脂組合物，如聚酰胺類(lèi)，聚酯類(lèi)，丙烯類(lèi)，聚氨基甲酸酯類(lèi)，酚類(lèi)，氟類(lèi)樹(shù)脂組合物。
在本發(fā)明中，線(xiàn)性體或通孔為攜帶生物相關(guān)物質(zhì)提供了空間。這些線(xiàn)性體或通孔的結(jié)構(gòu)基本上呈線(xiàn)性，各線(xiàn)性體或通孔基本上按相互平行的方式排列。線(xiàn)性體或通孔的橫斷面可以是任何形狀。橫斷面最優(yōu)選的形狀為圓形。通常，排列多個(gè)線(xiàn)性體或通孔。
對(duì)線(xiàn)性體或通孔的排列密度并沒(méi)有特別的限制。如果要在一次分析中獲得大量的數(shù)據(jù)，則線(xiàn)性體或通孔的優(yōu)選排列密度為一個(gè)微陣列上100-1,000,000個(gè)/cm2。此外，線(xiàn)性體的優(yōu)選排列方式為相鄰線(xiàn)性體之間具有相同大小的間隔。
線(xiàn)性體可以由例如實(shí)心纖維，多孔纖維，金屬絲，中空纖維，多孔中空纖維，或玻璃管等構(gòu)成。此外，當(dāng)將多個(gè)細(xì)的線(xiàn)性體聚集成束后，這些線(xiàn)性體可發(fā)生纏繞以致整個(gè)形成一個(gè)線(xiàn)性體。
每個(gè)獨(dú)立的線(xiàn)性體或通孔可以攜帶有不同種類(lèi)的生物相關(guān)物質(zhì)?；蛘?，多個(gè)線(xiàn)性體或通孔可以攜帶同一種類(lèi)的生物相關(guān)物質(zhì)。
在本發(fā)明中，線(xiàn)性體或塊包含能夠減少該線(xiàn)性體和/或塊發(fā)出的自身熒光的物質(zhì)。這種物質(zhì)包括一種，例如，吸收自身熒光的物質(zhì)(吸收劑)和使自身熒光去激發(fā)(de-excitation)的物質(zhì)(淬滅劑)。
吸收劑包括，例如，有機(jī)和無(wú)機(jī)顏料。具體地，黑色顏料包括炭黑，乙炔黑，鐵黑；黃色顏料包括鉻黃，鋅黃，赭石，漢撒黃，永固黃，苯并黃；橙色顏料包括橘紅，鉬橙以及苯并橙；紅色顏料，包括氧化鐵紅，鎘紅，銻朱，永久紅，立索紅，色淀紅，亮猩紅以及硫靛紅；藍(lán)色顏料包括佛青，鈷藍(lán)，銅酞菁藍(lán)和靛青；綠色顏料包括鉻綠，萘酚綠，銅酞菁綠。
具體地，由吸收劑引起的自身熒光強(qiáng)度的減弱取決于熒光光波與位于線(xiàn)性體和/或塊體中的吸收劑之間發(fā)生碰撞的次數(shù)和頻率，還取決于熒光的波長(zhǎng)。因此，為了使吸收劑的效果達(dá)到最大，優(yōu)選使用顆粒盡可能小的吸收劑并且使這些吸收劑分布均勻。尤其優(yōu)選的吸收劑為炭黑。
對(duì)于吸收劑，應(yīng)選擇那些可以減少自身熒光、同時(shí)在檢測(cè)時(shí)不干擾待測(cè)熒光物質(zhì)所發(fā)出的熒光的吸收劑。例如，當(dāng)檢測(cè)與異硫氰酸熒光素(FITC)結(jié)合的物質(zhì)時(shí)，應(yīng)選用黃色和綠色顏料之外的顏料。
當(dāng)例如在雙熒光檢測(cè)方法中使用多種熒光標(biāo)記時(shí)，優(yōu)選選擇吸收較寬范圍的可見(jiàn)光的吸收劑。例如，黑色顏料。
淬滅劑的例子包括順磁離子，如Fe(III)、Ni(II)、Cr(III)、Cu(II)以及Ti(I)。其它例子包括不帶有電荷的分子，如丙烯酰胺等等。
對(duì)于上述的吸收劑和/或淬滅劑，通常要么使用吸收劑，要么使用淬滅劑。但是，也可以同時(shí)使用這兩種物質(zhì)。
另外，在本發(fā)明中，可以根據(jù)要求對(duì)一些或全部的線(xiàn)性體進(jìn)行染色。通過(guò)對(duì)一些或全部的線(xiàn)性體進(jìn)行染色，在檢測(cè)分析物時(shí)，染色的線(xiàn)性體可以用作平行標(biāo)準(zhǔn)。
根據(jù)本發(fā)明，微陣列的厚度優(yōu)選為5mm或更低(例如，50μm至5mm)，更優(yōu)選為1mm或更低(如，100μm至1mm)。
使用上述材料制備微陣列的方法的例子描述如下通過(guò)物理或化學(xué)的方法將生物相關(guān)物質(zhì)攜帶在線(xiàn)性體的外表面，或線(xiàn)性體中空部分的內(nèi)壁上，或線(xiàn)性體的多孔部分中。另外，可以通過(guò)物理或化學(xué)的方法將生物相關(guān)物質(zhì)攜帶在通孔的中空部分中或其內(nèi)壁上。適當(dāng)?shù)剡x擇攜帶生物相關(guān)物質(zhì)的方法、需攜帶的生物相關(guān)物質(zhì)的種類(lèi)、以及線(xiàn)性體或通孔的材料和形狀。例如，通過(guò)將線(xiàn)性體浸泡在含有生物相關(guān)物質(zhì)的溶液中，然后對(duì)其進(jìn)行烘烤或紫外線(xiàn)照射，從而可使該線(xiàn)性體攜帶該生物相關(guān)物質(zhì)。此外，如果該線(xiàn)性體為中空纖維，可以通過(guò)如下方法使該纖維攜帶生物相關(guān)物質(zhì)，該方法包括用適宜的包被劑(例如，聚L-賴(lài)氨酸)處理纖維中空部分的內(nèi)壁，然后將生物相關(guān)物質(zhì)引入該中空部分；或在中空部分填入含有生物相關(guān)物質(zhì)的高分子聚合物，如丙烯酸類(lèi)聚合物(acrylide polymer)或瓊脂糖。
將線(xiàn)性體束固定于塊體中的方法包括，例如，涉及如下步驟的方法將多個(gè)線(xiàn)性體平行排列并固定于一薄片上，如粘附片，然后將該薄片卷成螺旋形，并在其縫隙處倒入樹(shù)脂等物；另一種固定線(xiàn)性體束的方法是，將2個(gè)打有多個(gè)孔的板重疊起來(lái)，將線(xiàn)性體穿過(guò)這些有孔板上的每個(gè)孔，然后使兩個(gè)有孔板拉開(kāi)一定的距離，將樹(shù)脂等物倒入該間隔中。
在塊體中形成多個(gè)通孔的方法包括涉及如下步驟的方法，即制備由樹(shù)脂等構(gòu)成的塊體，然后使用鉆孔機(jī)或激光等在該塊體中形成通孔；另一種方法涉及，制備包含多個(gè)金屬絲的塊，然后將金屬絲從該塊中抽出，從而形成通孔。
將減少自身熒光的物質(zhì)并入線(xiàn)性體的方法包括，例如，當(dāng)將纖維用作線(xiàn)性體時(shí)，預(yù)先將吸收劑和/或淬滅劑混合在纖維的原材料中，然后抽制成纖維從而使吸收劑和/或淬滅劑分布并結(jié)合在纖維中。
此外，將減少自身熒光的物質(zhì)并入塊體中的方法包括，例如在形成塊體的過(guò)程中摻入吸收劑和/或淬滅劑。
可以將上述獲得的含有多個(gè)線(xiàn)性體或通孔的塊沿與線(xiàn)性體或通孔縱向相交叉的方向切成片以制備微陣列，其中所述的線(xiàn)性體或通孔攜帶有生物相關(guān)物質(zhì)。對(duì)切割的角度沒(méi)有特別的限制，但是為了在檢測(cè)分析物時(shí)充分利用厚的部分中攜帶的生物相關(guān)物質(zhì)，優(yōu)選垂直于線(xiàn)性體或通孔的縱向?qū)K切成片。
根據(jù)本發(fā)明的制備方法，在線(xiàn)性體和/或塊中加入能減少自身熒光的物質(zhì)將在切片的時(shí)侯具有有益的效果，所述物質(zhì)優(yōu)選為無(wú)機(jī)顏料，更優(yōu)選為炭黑。
例如，由于樹(shù)脂中含有分布均勻的炭黑而炭黑可充當(dāng)假交聯(lián)點(diǎn)，故這種樹(shù)脂要比在同等硬化條件下硬化的樹(shù)脂更硬。因此，就有可能控制樹(shù)脂的變形、包含在樹(shù)脂中的線(xiàn)性體的變形、以及切片時(shí)微陣列的彎曲。由于微陣列厚度越薄，上述效果就越顯著，因此，本發(fā)明方法適合于制備厚度為1mm或更低，優(yōu)選500μm或更低(100至500μm)的微陣列。
此外，在使用炭黑時(shí)，可降低線(xiàn)性體和/或塊的粘性并進(jìn)一步可以減少靜電。因此，當(dāng)重復(fù)切割塊時(shí)，可以防止微陣列之間發(fā)生粘附。此外，在制備微陣列以及進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可以防止吸附飄浮在空氣中的灰塵、生物體或孢子。
當(dāng)炭黑分散在線(xiàn)性體中時(shí)，該線(xiàn)性體呈黑色。因此，由于線(xiàn)性體聚集成束時(shí)可見(jiàn)度提高，線(xiàn)性體的排列會(huì)變得簡(jiǎn)單。
此外，當(dāng)線(xiàn)性體的中空部分或通孔通過(guò)凝膠攜帶生物相關(guān)物質(zhì)時(shí)，由于加入無(wú)機(jī)顏料使線(xiàn)性體的內(nèi)壁表面或塊體面朝通孔的表面粗糙化，故可以提高凝膠的粘附性。由此，在切片時(shí)，可以防止凝膠從微陣列上脫落。
為了獲得諸如上述的效果，優(yōu)選將無(wú)機(jī)顏料完全分散在整個(gè)線(xiàn)性體和/或塊中。此外，為了徹底減少來(lái)自于線(xiàn)性體和/或塊的自身熒光，優(yōu)選加入大量的無(wú)機(jī)顏料，而為了在線(xiàn)性體和/或塊中進(jìn)行充分的分散，優(yōu)選加入少量的無(wú)機(jī)顏料。如果顏料是炭黑，則相對(duì)于線(xiàn)性體和/或塊，優(yōu)選加入的炭黑的質(zhì)量百分比為0.5％-10％。
實(shí)施例1將兩條長(zhǎng)度為10cm，直徑為2mm的鋼絲平行排列，然后制備樹(shù)脂塊以便將上述鋼絲包含在里面。樹(shù)脂使用聚氨基甲酸酯樹(shù)脂粘合劑(Nippon聚氨基甲酸酯工業(yè)有限公司，nippolan4276，coronate4403)。首先，相對(duì)于nippolan4276/coronate4403的總重量(nippolan4276與coronate4403的配制比例為62/38)，在nippolan4276中分別加入質(zhì)量百分比為0.5％，1.0％或2.5％的炭黑(MA-100，Mitsubishi化學(xué)公司生產(chǎn))，用勻化器分散3小時(shí)；然后，加入coronate4403，使該混合物在室溫下硬化約1周。制備成2cm×2cm×7cm分散有炭黑的、含有鋼絲的聚氨基甲酸酯塊；然后將鋼絲抽出，則在該塊中形成兩個(gè)長(zhǎng)度為7cm的通孔。
沿著與通孔縱向相垂直的方向用切片機(jī)將所獲得的塊切成片，得到10個(gè)厚度約為500μm的薄片。所有的薄片均沒(méi)有發(fā)生彎曲，炭黑也完全分散在該塊內(nèi)。
從所獲得的薄片中任意選出3個(gè)薄片，用Nikon熒光顯微鏡E600/Hamamatsu Photonicks冷卻的C488-37 CCD照相機(jī)進(jìn)行觀察。使用Cy3濾光器(入射光側(cè)535±25nm，檢測(cè)光側(cè)610±75nm)通過(guò)曝光30秒，檢測(cè)薄片的熒光強(qiáng)度。測(cè)量后，計(jì)算3個(gè)薄片的熒光強(qiáng)度的平均值。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1

實(shí)施例2(1)制備中空纖維陣列將兩塊分別具有49個(gè)孔的穿孔板(水平地和垂直地，7×7)重疊在一起，每個(gè)孔的直徑為0.32mm，軸間距為0.42mm。將49個(gè)中空的聚乙烯中空纖維(外徑0.3mm，內(nèi)徑0.2mm)穿過(guò)兩塊板上的每個(gè)洞。然后，使兩塊板間的間隔達(dá)到50mm，使纖維處于伸直狀態(tài)并將它們的兩端固定。如實(shí)施例1，加入相對(duì)于聚氨基甲酸酯樹(shù)脂粘合劑總重而言質(zhì)量百分比為2.5％的炭黑并混合。將該樹(shù)脂原料倒入，使其圍繞中空的纖維陣列，然后使樹(shù)脂硬化。接著將這兩塊板移開(kāi)，則形成了含有中空纖維的樹(shù)脂塊。
(2) 制備熒光標(biāo)記的具有甲基丙烯酸酯基團(tuán)的寡核苷酸使用PE生物系統(tǒng)自動(dòng)DNA/RNA合成儀(型號(hào)394)合成寡核苷酸。合成序列為GCAT的寡核苷酸并在合成DNA的最后一步中將Cy3引入5’端，得到Cy3-GCAT。然后用常規(guī)方法對(duì)它們進(jìn)行去保護(hù)及純化。
為了制備具有甲基丙烯酸酯基團(tuán)的熒光顏料，將50μl獲得的Cy3-GCAT(500nmol/ml)，5μl甲基丙烯酸縮水甘油酯，以及5μl二甲基甲酰胺(DMF)混合，使其在70℃下反應(yīng)2小時(shí)。加入190μl水后，就得到了具有甲基丙烯酸酯基團(tuán)的100nmol/ml熒光顏料(GMA修飾的Cy3-GCAT)。
(3)制備纖維陣列以及帶有其中固定有核酸的凝膠的薄片根據(jù)以下相對(duì)質(zhì)量比例通過(guò)混合制備單體溶液以及引發(fā)劑溶液。
(a)單體溶液丙烯酰胺 0.76份亞甲基雙丙烯酰胺 0.04份水 4.2份(b)引發(fā)劑溶液2，2’-氮雜二(2-脒基丙烷)二鹽酸鹽 0.01份水 4.99份根據(jù)上述(2)所制備的GMA修飾的Cy3-GCAT與單體溶液(a)和起始劑溶液(b)混合，得到如表2所示的濃度。(聚合物溶液1-5)使(1)中所得到的樹(shù)脂塊中的中空纖維的中空部分充滿(mǎn)所得到的聚合物溶液。將該塊轉(zhuǎn)移至水蒸氣飽和的密封玻璃容器中，在80℃下放置4小時(shí)進(jìn)行聚合反應(yīng)。
表2

聚合反應(yīng)完成以后，沿著與中空纖維縱向相垂直的方向，重復(fù)用切片機(jī)將塊切成片，得到30個(gè)厚度約為750μm的薄片。獲得的所有薄片均沒(méi)有發(fā)生彎曲。此外，炭黑完全分布在整個(gè)塊中。
隨機(jī)從所得到的薄片中選取3個(gè)薄片。用Nikon熒光顯微鏡E600/Hamamatsu Hotnicks冷卻的C488-37 CCD照相機(jī)進(jìn)行觀察。用類(lèi)似于實(shí)施例1中的濾光器測(cè)量微陣列的熒光強(qiáng)度。然后計(jì)算3個(gè)薄片的熒光強(qiáng)度的平均值。其結(jié)果為，可以檢查到0.005nmol/l的Cy3。比較實(shí)施例1除了沒(méi)有混合炭黑外，采用類(lèi)似于實(shí)施例2的方法制備薄片。測(cè)定所得到的薄片的熒光強(qiáng)度。其結(jié)果是，當(dāng)Cy3濃度為0.005nmol/L時(shí)，檢測(cè)是不可能的，當(dāng)Cy3濃度高達(dá)0.05nmol/L時(shí)，檢測(cè)也是不可能的。表3

N.T.＝?jīng)]有檢測(cè)相對(duì)熒光強(qiáng)度是通過(guò)將實(shí)施例2中聚合物溶液5的熒光強(qiáng)度以及比較實(shí)施例中聚合物溶液3的熒光強(qiáng)度定義為1來(lái)計(jì)算的。實(shí)施例3如實(shí)施例2制備樹(shù)脂塊，但其中不使用中空的聚乙烯纖維，而使用中空的聚甲基丙烯酸甲酯纖維(PMMA)(外徑0.3mm，內(nèi)徑0.2mm)，該纖維中含有1.6份質(zhì)量的炭黑。10天后，根據(jù)JIS K 7215，在該樹(shù)脂塊上施加表面壓力，5秒后測(cè)定該樹(shù)脂塊的硬度。測(cè)定結(jié)果是，硬度為95。將該塊切成薄片，得到30個(gè)薄片。所有的薄片均沒(méi)有彎曲。比較實(shí)施例2在如實(shí)施例3制備樹(shù)脂塊時(shí)，沒(méi)有在中空纖維和樹(shù)脂中加入炭黑。10天后，根據(jù)JIS K 7215，測(cè)定樹(shù)脂的硬度，其為72。將該樹(shù)脂塊切成厚度為500μm的薄片，所得到的每個(gè)薄片均有有彎曲。(見(jiàn)

圖1)本發(fā)明中所引用的所有公開(kāi)專(zhuān)利以及專(zhuān)利申請(qǐng)都全部結(jié)合在本發(fā)明中作為參考。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供微陣列以及制備這種微陣列的方法。通過(guò)在線(xiàn)性體和/或塊中加入減少自身熒光的物質(zhì)，可以顯著地降低檢測(cè)時(shí)的本底以及干擾，從而提高了檢測(cè)的靈敏度。此外，通過(guò)在線(xiàn)性體和/或塊中加入減少自身熒光的物質(zhì)，可以在制備微陣列時(shí)，在切片過(guò)程中穩(wěn)定地產(chǎn)生沒(méi)有彎曲的微陣列。
權(quán)利要求
1.微陣列，其可以通過(guò)將包含多個(gè)線(xiàn)性體或通孔的塊沿著與該線(xiàn)性體或通孔縱向相交叉的方向切成片而得到，其中所述線(xiàn)性體和/或通孔帶有生物相關(guān)物質(zhì)，并且線(xiàn)性體和/或塊中含有能減少其自身熒光的物質(zhì)。
2.如權(quán)利要求1所述的微陣列，其中線(xiàn)性體為纖維。
3.如權(quán)利要求2所述的微陣列，其中纖維為中空纖維。
4.如權(quán)利要求1-3中任一所述的微陣列，其中塊由樹(shù)脂組成。
5.如權(quán)利要求1-4中任一所述的微陣列，其中能減少自身熒光的物質(zhì)為吸收劑和/或淬滅劑。
6.如權(quán)利要求5所述的微陣列，其中吸收劑為無(wú)機(jī)顏料。
7.如權(quán)利要求6所述的微陣列，其中無(wú)機(jī)顏料是炭黑。
8.如權(quán)利要求7所述的微陣列，其中炭黑含量為0.5-10％質(zhì)量。
9.制備微陣列的方法，其包括，在塊中形成多個(gè)通孔，其中所述塊含有能夠減少該塊的自身熒光的物質(zhì)，使上述通孔攜帶生物相關(guān)物質(zhì)，然后沿著與所述通孔縱向相交叉的方向?qū)⑺鰤K切成薄片。
10.制備微陣列的方法，其包括，用樹(shù)脂將一束攜帶有生物相關(guān)物質(zhì)的線(xiàn)性體固定從而制備成塊，其中所述樹(shù)脂含有能夠減少自身熒光的物質(zhì)，然后沿著與所述線(xiàn)性體縱向相交叉的方向?qū)⑺鰤K切成薄片。
11.制備微陣列的方法，其包括，用樹(shù)脂將一束線(xiàn)性體固定從而制備成塊，其中所述樹(shù)脂含有能夠減少自身熒光的物質(zhì)，使上述每個(gè)線(xiàn)性體攜帶生物相關(guān)物質(zhì)，然后沿著與所述線(xiàn)性體縱向相交叉的方向?qū)⑺鰤K切成薄片。
12.如權(quán)利要求10或11所述的方法，其中線(xiàn)性體中含有能減少自身熒光的物質(zhì)。
13.如權(quán)利要求9-12中任一所述的制備方法，其中線(xiàn)性體為纖維。
14.如權(quán)利要求13所述的制備方法，其中纖維為中空纖維。
15.如權(quán)利要求9-14中任一所述的制備方法，其中能減少自身熒光的物質(zhì)為吸收劑和/或淬滅劑。
16.如權(quán)利要求15所述的制備方法，其中吸收劑為無(wú)機(jī)顏料。
17.如權(quán)利要求16所述的制備方法，其中無(wú)機(jī)顏料是炭黑。
18.如權(quán)利要求17所述的制備方法，其中炭黑含量為0.5-10％質(zhì)量。
全文摘要
本發(fā)明涉及微陣列，其可通過(guò)將包含多個(gè)線(xiàn)性體或通孔的塊沿著與該線(xiàn)性體或通孔縱向相交叉的方向切成片而得到，其中所述線(xiàn)性體或通孔帶有生物相關(guān)物質(zhì)，并且線(xiàn)性體和/或塊中含有能減少其自身熒光的物質(zhì)。
文檔編號(hào)C07B61/00GK1443308SQ01813041
公開(kāi)日2003年9月17日 申請(qǐng)日期2001年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月20日
發(fā)明者高橋厚, 秋田隆, 伊藤千穗, 宮內(nèi)陽(yáng)子, 村瀬圭 申請(qǐng)人:三菱麗陽(yáng)株式會(huì)社