專利名稱：一種從貫葉連翹中制備總黃酮的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種從貫葉連翹中制備總黃酮的工藝，特別涉及到以大孔吸附樹脂從貫葉連翹中提取富集總黃酮的制備工藝。
背景技術(shù)：
貫葉連翹(Hypericum perforatum l)又稱貫葉金絲桃、圣約翰草，屬于藤黃科金絲桃屬植物，是一種五瓣黃花多年生草本植物，多生長(zhǎng)于土壤干燥和陽(yáng)光充足之處，地上部分或全草入藥，其性平味澀，有清熱解毒、收斂止血、利濕之功效，主要產(chǎn)于歐洲、美國(guó)及部分亞洲國(guó)家。
長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)貫葉連翹的研究主要集中于其抗輕度至中度抑郁癥的藥理藥效上。在歐洲，尤其是德國(guó)，主要用于治療輕度及中度抑郁癥。其主要成分有苯并二蒽酮類、黃酮類、揮發(fā)油類和間苯三酚類。近年來(lái)，關(guān)于貫葉連翹抗抑郁作用的機(jī)理一直存在著爭(zhēng)議，其成分金絲桃素、偽金絲桃素、貫葉金絲桃素、加貫葉金絲桃素、槲皮苷、astilbin、蘆丁等均認(rèn)為具有抗抑郁作用，但其治療抑郁癥的效果也受到了人們的質(zhì)疑。貫葉連翹富含黃酮類化合物，其含量高達(dá)11.7％，主要為金絲桃苷、槲皮素、槲皮苷及蘆丁。大量的文獻(xiàn)表明，黃酮類成分都具有獨(dú)特的降低膽固醇、甘三酯及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，在心血管方面具有獨(dú)特的療效。但迄今為止，貫葉連翹的應(yīng)用還局限于其甲醇提取物制劑用于治療抑郁癥，以含量極低的金絲桃素作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其富含的黃酮類成分卻未被開發(fā)利用。
樹脂吸附法對(duì)于天然產(chǎn)物的提取分離是一種非常有效的方法。該法生產(chǎn)簡(jiǎn)單、安全，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的目的是提供一種用大孔吸附樹脂富集貫葉連翹中總黃酮的方法，為貫葉連翹的進(jìn)一步開發(fā)利用，特別是在心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化方面的利用提供基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種貫葉連翹中總黃酮的富集方法，且其總黃酮含量不低于85％。
技術(shù)方案一種從貫葉連翹中制備總黃酮的方法，所述的方法包括以下步驟(1)貫葉連翹全草粉碎后，將貫葉連翹與40～80％甲醇溶液的按總重量比為1∶6～12置于提取器中，在70℃回流提取3次，過(guò)濾，合并提取液，減壓濃縮至干，得貫葉連翹浸提物；(2)將由步驟(1)制得的貫葉連翹浸提物加水，超聲使其懸浮，離心過(guò)濾，得澄清溶液，使得貫葉連翹澄清溶液中黃酮濃度為2～4mg/mL；(3)將由步驟(2)制得的貫葉連翹澄清溶液，以1.25～5BV/h的流速緩慢流過(guò)裝有預(yù)處理好的弱極性或中極性大孔吸附樹脂的樹脂柱；(4)用5～10BV的清水洗去樹脂中殘留的溶液及其他雜質(zhì)，然后用30～90％洗脫液以2.25～10BV/h的流速進(jìn)行洗脫，收集部分洗脫液，減壓濃縮至干，得到淺棕色提取物，即貫葉連翹總黃酮；其中所述的樹脂柱內(nèi)徑為1～50cm，樹脂層徑高比為1∶3～30；所述的洗脫液為醇液或酮液，醇液為甲醇或乙醇溶液，酮液為丙酮溶液；所述的樹脂為聚苯乙烯型或交聯(lián)丙烯腈類弱極性或中極性樹脂，粒度為0.3～1.25mm。
所述的貫葉連翹浸提物為自提或市售，深棕色，其黃酮含量為30％左右。
所述的洗脫液濃度優(yōu)選為50～70％。
所述的收集部分洗脫液為0.25～3BV間的洗脫液。
所述的樹脂重復(fù)利用4次后要進(jìn)行再生。再生的過(guò)程為依次用2％鹽酸溶液浸泡，用水洗至中性；再用2％氫氧化鈉溶液浸泡，用水洗至中性。
本發(fā)明所得提取物總黃酮含量的測(cè)定采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH絡(luò)合比色法進(jìn)行測(cè)定，其中總黃酮含量不低于85％。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，但所舉之例并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。
稱取1kg貫葉連翹全草，粉碎成粗粉后，加入70％甲醇溶液，熱回流提取3次，甲醇的總重量為10kg，合并提取液，減壓濃縮至干，得貫葉連翹浸提物223g。
實(shí)施例1稱取30g貫葉連翹浸提物，加入1000mL水，超聲處理30分鐘，使貫葉連翹浸提物懸浮于水中。離心過(guò)濾，濾液經(jīng)絡(luò)合比色法測(cè)定，其黃酮含量為9.1mg/mL，濾液待用。取140mL濾液，用水稀釋至400mL，即可上柱分離。
取一定量預(yù)處理好的弱極性AB-8樹脂，裝入內(nèi)徑為1cm的玻璃柱中，使其床體積為20mL，以2BV/h的流速使400mL貫葉連翹溶液緩慢流過(guò)樹脂床。然后用120mL水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為50％的乙醇溶液以4BV/h的流速流過(guò)樹脂柱，收集0.25～3BV間的洗脫液，減壓濃縮至干，即得淺棕色粉末狀提取物，其總黃酮含量為86.6％。
實(shí)施例2稱取42g貫葉連翹浸提物，加入1400mL水，超聲處理30分鐘，使貫葉連翹浸提物懸浮于水中。離心過(guò)濾，濾液經(jīng)絡(luò)合比色法測(cè)定，其黃酮含量為8.55mg/mL，用水稀釋至3900mL，待用。
取一定量預(yù)處理好的中極性DM-301樹脂，裝入內(nèi)徑為2.6cm的玻璃柱中，使其床體積為180mL，以2.5BV/h的流速使3600mL貫葉連翹溶液緩慢流過(guò)樹脂床。然后用1200mL水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為60％的乙醇溶液以5BV/h的流速流過(guò)樹脂柱，收集0.25-3BV間的洗脫液，減壓濃縮至干，即得淺棕色粉末狀提取物，其總黃酮含量為85.4％。
權(quán)利要求
1.一種從貫葉連翹中制備總黃酮的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟(1)貫葉連翹全草粉碎后，將貫葉連翹與40～80％甲醇溶液按總重量比為1∶6～12置于提取器中，在70℃回流提取3次，過(guò)濾，合并提取液，減壓濃縮至干，得貫葉連翹浸提物；(2)將由步驟(1)制得的貫葉連翹浸提物加水，超聲使其懸浮，離心過(guò)濾，得澄清溶液，使得貫葉連翹澄清溶液中黃酮濃度為2～4mg/mL；(3)將由步驟(2)制得的貫葉連翹澄清溶液，以1.25～5BV/h的流速緩慢流過(guò)裝有預(yù)處理好的弱極性或中極性大孔吸附樹脂的樹脂柱；(4)用5～10BV的清水洗去樹脂中殘留的溶液及其他雜質(zhì)，然后用30～90％洗脫液以2.25～10BV/h的流速進(jìn)行洗脫，收集部分洗脫液，減壓濃縮至干，得到淺棕色提取物，即貫葉連翹總黃酮；其中所述的樹脂柱內(nèi)徑為1～50cm，樹脂層徑高比為1∶3～30；所述的洗脫液為醇液或酮液；所述的樹脂為聚苯乙烯型或交聯(lián)丙烯腈類弱極性或中極性樹脂，粒度為0.3～1.25mm。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的醇液為甲醇或乙醇溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酮液為丙酮溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的洗脫液濃度為50～70％。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的收集部分洗脫液為0.25～3BV間的洗脫液。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的樹脂重復(fù)利用4次后要進(jìn)行再生。再生的過(guò)程為依次用2％鹽酸溶液浸泡，用水洗至中性；再用2％氫氧化鈉溶液浸泡，用水洗至中性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種總黃酮的制備工藝。本發(fā)明采用弱極性或中極性的大孔吸附樹脂從貫葉連翹中提取富集總黃酮，操作簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)，可以方便地得到總黃酮含量不低于85％的淺棕色提取物?？蓮呢炄~連翹直接提取，或者由貫葉連翹提取物進(jìn)一步精制而成。
文檔編號(hào)C07B63/00GK1562919SQ20041001716
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月24日
發(fā)明者魏東芝, 鄒彥平, 盧艷花 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)