專利名稱：吲哚、其衍生物和類似物及其用途的制作方法
吲哚、其衍生物和類似物及其用途關(guān)于聯(lián)邦資助研究的聲明本發(fā)明部分在美國(guó)政府支持下通過(guò)國(guó)立衛(wèi)生研究院授予的基金第DK-065227-02 號(hào)進(jìn)行。美國(guó)政府可以擁有本發(fā)明的某些權(quán)益。
背景技術(shù)：
微管蛋白是重要的微管蛋白質(zhì)和用于癌癥化學(xué)治療的有效分子靶。靶向微管的藥 物，包括紫杉烷類和長(zhǎng)春花生物堿類，中斷微管紡錘體介導(dǎo)的染色體分離，在有絲分裂中阻 斷分裂的腫瘤細(xì)胞隨后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這些藥物在多種癌癥例如乳腺癌、卵巢癌、前列腺 癌、肺癌、白血病和淋巴瘤中的潛能、效力和普及的臨床應(yīng)用證明了微管蛋白的重要性和其 在癌癥生長(zhǎng)中的作用。不幸的是，這些藥物也共有藥物耐受性的共同機(jī)制，即P-糖蛋白介 導(dǎo)的或ATP結(jié)合性組件(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物流出，其限制了它們?cè)谠S多腫瘤中的效 力。已經(jīng)測(cè)試了來(lái)源于食物來(lái)源和非食物來(lái)源植物兩者的天然存在的化合物，并且它 們通常已經(jīng)顯示對(duì)抗多種癌癥的抗癌效果。不斷地分離或合成這些植物化合物的衍生物和 類似物以找到更有效的抗癌劑。最近，化合物吲哚-3-甲醇，一種來(lái)源于具有十字花科植 物諸如綠花椰菜、抱子甘藍(lán)或卷心菜的植物營(yíng)養(yǎng)素(phytonutrient)，已經(jīng)被作為對(duì)抗乳腺 癌、宮頸癌、前列腺癌和結(jié)腸癌的潛在抗癌治療劑研究。已經(jīng)合成其它吲哚衍生物。美國(guó)專利第6，638，964號(hào)公開(kāi)由取代的磺胺類衍生 的、用于治療惡性腫瘤和自身免疫性疾病的吲哚。美國(guó)專利第6，812，243號(hào)公開(kāi)了用作治 療細(xì)胞增殖疾病的酪氨酸激酶抑制劑的高度取代的雙吲哚。然而，用作抗癌劑的天然存在的或合成的吲哚化合物可能具有由于大劑量、代謝 分解導(dǎo)致的抗癌活性喪失或毒性引起的缺點(diǎn)。正在持續(xù)地嘗試開(kāi)發(fā)有效的吲哚衍生物，其 可以合理的劑量容易地給藥，其保持抑制與細(xì)胞增殖疾病的發(fā)作相關(guān)的活性的能力，且其 具有改良的穩(wěn)定性、提高的臨床效力、一致的結(jié)果以及最小的毒性和副作用。因此，由于缺 乏用作治療劑的吲哚衍生物和類似物，現(xiàn)有技術(shù)仍是不足的。發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，提供了化合物。該化合物具有以下結(jié)構(gòu)式 其中R1是H、鹵化物、CF3、N02、OH、_0CH3或CN烷基、烯基、0_烷基和0_芳基，且n是0、 1、2、3 或 4 ；
R2 是 H 或 _S02Ph;R3是在C3或C5用R4取代的苯基；R8R9 ；R12R13 ；在C1、C2或C3用2_、3_或6-吲哚 基取代的2-、3_或6-吲哚基，所述吲哚基部分二者中任一個(gè)獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、 C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；或在C5、C6或C7用2_、3_或6-吲哚基取代 的萘基或未取代的萘基，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代， 或者用它們的組合取代；R4 是 R5 ； Ch 亞烷基-R5 ； C (0) R6 ；CH = CH-C (R7) -R6 ；-C (0) -R7-R6 ； _0_C (R7) -R6 ； R8 ； R7R8" (2-、3-或6-吲哚基)；R8- (2_、3-或6-吲哚基)，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取 代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R8R9或R12R13 ；R5 是 OH、N02、NH2、-NH-Ch 烷基、N = N = N、CN 或 OR6 ；R6是H、(V3烷基、或者獨(dú)立地在C2、C3、C4、C5或C6用R1取代的5_或6_元環(huán)；R7 是 0、S 或 NH;R8 是-CH2、-CH20H、C = 0、C = S、C = CH2、C = NOH、C = N (NH2)；R9是獨(dú)立地在C3用取代并在C4和C5用R11取代的苯基；在C4用-C (0) 0CH3 取代的噻唑基或者在C5、C6或C7用2-、3_或6-吲哚基取代的萘基或未取代的萘基，所述 吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R10是H、OH、一0CH3、苯基、萘基或與在C4的R11形成間二氧雜環(huán)戊烯基環(huán)；R11 是 H、0H 或一0CH3 ；R12是吡咯基、呋喃基、噻吩基或環(huán)戊二烯基；R13 是-C(0)-2_、3-或 6_ 卩引哚基、_C(0)_ 咪唑、_C(0)_ 噻唑、_C(0)_ 噁 唑、-c (0)-異噁唑、-c (0)-苯并噁唑、-c (0)-吡咯、-c (0)-呋喃、-c (0)-噁唑啉、-c (0)-噁 唑烷、-C (0)-噁二唑、C (0)-萘基或-C (0)苯基，各自獨(dú)立地在C2、C3、C4、C5或C6用R1取 代。這些化合物也可以是藥理學(xué)上可接受的鹽或水合物的形式。這些化合物可以與藥 學(xué)上可接受的載體一起被配制成藥物組合物。根據(jù)又進(jìn)一步的實(shí)施方案，還提供了抑制個(gè)體的與細(xì)胞增殖疾病相關(guān)的細(xì)胞中微 管蛋白聚合的方法。所述方法可以包括使與所述細(xì)胞增殖疾病相關(guān)的所述細(xì)胞與藥理學(xué)上 有效量的本文所述的化合物或其藥物組合物接觸。在又進(jìn)一步的實(shí)施方案中，提供了治療個(gè)體的癌癥的方法。所述方法可以包括向 所述個(gè)體給藥藥理學(xué)上有效量的本文所述的化合物或其藥物組合物，其中所述化合物抑制 癌細(xì)胞生長(zhǎng)，由此治療所述癌癥。附圖的幾個(gè)視圖的簡(jiǎn)述當(dāng)結(jié)合以下附圖閱讀時(shí)，可以最好地理解以下本發(fā)明的實(shí)施方案的詳細(xì)描述，其 中相似結(jié)構(gòu)用相似的參考數(shù)字表示且其中

圖1A-1J描述了本發(fā)明的化合物的代表性合成路線和代表性結(jié)構(gòu)。在圖1A中顯 示了化合物10、11和13的合成路線。在圖1B中顯示了化合物14-31的結(jié)構(gòu)。在圖1C-1J 中顯示了制備所述結(jié)構(gòu)14-31中至少一種的化合物的合成路線。圖2A-2C表明化合物13在LnCap和PC_3細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(圖2A)，減少抗細(xì) 胞凋亡蛋白(圖2B)并誘導(dǎo)DNA斷裂(圖2C)。
圖3A-3B表明化合物13在LNCaP細(xì)胞中誘導(dǎo)G2/M期阻滯(圖3A)并體外抑制微 管蛋白的聚合(圖3B)。圖4表明50、100和200mg/kg的化合物13對(duì)ICR小鼠的體重的影響。圖5表明化合物13在小鼠中的平均血漿濃度_時(shí)間曲線。圖6表明化合物13在Balb/c小鼠中對(duì)抗PC-3異種移植物的抗腫瘤活性。實(shí)施方案的詳細(xì)描述現(xiàn)將偶爾參照本發(fā)明的特定實(shí)施方案來(lái)描述本發(fā)明。然而，本發(fā)明可以體現(xiàn)為不 同的形式并不應(yīng)被解釋為限于本文中列出的實(shí)施方案。而是，提供這些實(shí)施方案以致本公 開(kāi)內(nèi)容將是徹底的和完全的，且將向本領(lǐng)域技術(shù)人員完整地傳達(dá)本發(fā)明的范圍。除非另外定義，本文中所用的所有技術(shù)術(shù)語(yǔ)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員的通常理解相同的含義。本文中在本發(fā)明的描述中使用的術(shù)語(yǔ)僅用于描述特 定的實(shí)施方案并非意欲限制本發(fā)明。如本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)和所附權(quán)利要求中所用，英文單數(shù) 形式“a”、“an”和“the”也意欲包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文另外清楚地表明。本文中提到的 所有的出版物、專利申請(qǐng)、專利和其它文獻(xiàn)通過(guò)引用將其整體納入本文。除非另外表明，在所有情況下，說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的所有表示成分、性質(zhì) 諸如分子量、反應(yīng)條件等的量的數(shù)字應(yīng)當(dāng)被理解為由術(shù)語(yǔ)“約”修飾。因此，除非另外表明， 在以下的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中列出的數(shù)字性質(zhì)是近似值，其可以取決于本發(fā)明的實(shí)施方 案中尋求獲得的期望的性質(zhì)而變化。雖然描述本發(fā)明的寬泛范圍的數(shù)字范圍和參數(shù)是近似 值，但是在特定實(shí)例中列出的數(shù)值被盡可能地精確地報(bào)道。然而，任何數(shù)值固有地包含一定 的、由于它們各自的測(cè)量中存在的誤差而必然引起的誤差。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“烷基”指任選地取代的直鏈的、支鏈的、環(huán)狀的、飽和的或不 飽和的烴鏈。 如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“鹵素”或“鹵化物”指氟、氯、溴或碘。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“芳基”指任選地取代的芳香性單環(huán)烴或雙環(huán)烴。雜芳基指在 芳香性環(huán)結(jié)構(gòu)中具有一個(gè)或多個(gè)例如氮、硫或氧的雜原子的芳基化合物。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“接觸”指使得抑制性藥劑與細(xì)胞接觸的任何合適的方法。在 一些實(shí)例中，所述細(xì)胞是異常增殖的細(xì)胞。體外或離體時(shí)，這是通過(guò)在合適的介質(zhì)中將所述 細(xì)胞暴露于所述抑制性藥劑而實(shí)現(xiàn)的。對(duì)于體內(nèi)施用，任何已知的給藥方法都是合適的。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“治療”或詞組“治療癌癥”包括但不限于，停止癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、 殺死癌細(xì)胞或包含其的團(tuán)塊、或者減少癌細(xì)胞的數(shù)目或包含其的團(tuán)塊的大小。停止生長(zhǎng)指 停止癌細(xì)胞的大小或數(shù)目的任何增加、或停止包含其的團(tuán)塊的任何增加、或指停止癌細(xì)胞 的分裂。減小大小指減小包含癌細(xì)胞的團(tuán)塊的大小或相同細(xì)胞的數(shù)目或大小。本領(lǐng)域的普 通技術(shù)人員會(huì)明白，術(shù)語(yǔ)“癌癥”或“癌細(xì)胞”或“腫瘤”指贅生性細(xì)胞增殖疾病的實(shí)例且指 惡性贅生性細(xì)胞團(tuán)塊或包含其的惡性組織。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“抑制(inhibiting) ”或“抑制(inhibition) ”與細(xì)胞增殖疾 病相關(guān)的細(xì)胞(例如包括癌癥或腫瘤的細(xì)胞，或者惡性的或異常增殖的細(xì)胞)中微管蛋白 聚合包括部分地或完全地抑制微管蛋白形成，且也旨在包括降低與所述細(xì)胞增殖疾病相關(guān) 的細(xì)胞的增殖或生長(zhǎng)的速率?？梢酝ㄟ^(guò)評(píng)估測(cè)試的成分對(duì)在組織培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)物中的 靶惡性細(xì)胞或靶異常增殖細(xì)胞的微管蛋白聚合的影響、對(duì)動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)的影響、或本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的任何其它方法來(lái)測(cè)定本發(fā)明的組合物的生物學(xué)抑制劑量。如本文中所用，術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”指任何治療目標(biāo)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，提供了吲哚衍生物化合物。所述化合物具有以下結(jié)構(gòu) 式 其中R1是H、鹵化物、CF3、N02、OH、_0CH3或CN烷基、烯基、0_烷基和0_芳基，且n是0、 1、2、3 或 4 ；R2 是 H 或-S02Ph;R3是在C3或C5用R4取代的苯基；R8R9§ ；R12R13 ；在CI、C2或C3用2_、3_或6_吲 哚基取代的2-、3_或6-吲哚基，所述吲哚基部分二者中任一個(gè)獨(dú)立地在C1用R2取代，在 C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；或在C5、C6或C7用2_、3_或6-吲哚基取 代的萘基或未取代的萘基，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取 代，或者用它們的組合取代；R4 是 R5 ； Ch 亞烷基-R5 ； C (0) R6 ；CH = CH-C (R7) -R6 ；-C (0) -R7-R6 ； _0_C (R7) -R6 ； R8 ； R7R8" (2-、3-或6-吲哚基)；R8- (2_、3-或6-吲哚基)，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取 代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R8R9或R12R13 ；R5 是 OH、N02、NH2、-NH-C"烷基、N = N = N、CN 或 OR6 ；R6是H、(V3烷基、或者獨(dú)立地在C2、C3、C4、C5或C6用R1取代的5_或6_元環(huán)；R7 是 0、S 或 NH ；R8 是-CH2、-CH20H、C = 0、C = S、C = CH2、C = NOH、C = N (NH2)；R9是獨(dú)立地在C3用取代并在C4和C5用R11取代的苯基；在C4用-C (0) 0CH3 取代的噻唑基或者在C5、C6或C7用2-、3_或6-吲哚基取代的萘基或未取代的萘基，所述 吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R10是H、OH、一0CH3、苯基、萘基或與在C4的R11形成間二氧雜環(huán)戊烯基環(huán)；R11 是 H、0H 或一0CH3 ；R12是吡咯基、呋喃基、噻吩基或環(huán)戊二烯基；R13 是-C(0)-2_、3-或 6_ 卩引哚基、_C(0)_ 咪唑、_C(0)_ 噻唑、_C(0)_ 噁 唑、-c (0)-異噁唑、-c (0)-苯并噁唑、-c (0)-吡咯、-c (0)-呋喃、-c (0)-噁唑啉、-c (0)-噁 唑烷、-C (0)-噁二唑、C (0)-萘基或-C (0)苯基，各自獨(dú)立地在C2、C3、C4、C5或C6用R1取 代；或其藥理學(xué)上可接受的鹽或水合物。在一些實(shí)例中，R1可以是H，R3可以是在C3或C5用R4取代的苯基，且R4可以是 R8。實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié)構(gòu)的化合物
在其它實(shí)例中，R1可以是H或F，且R3可以是在C3或C5用R4取代的苯基，且R4可
以是-R8-(2-或3-吲哚基)。實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié)構(gòu)的化合物 在另外的其它實(shí)例中，R3可以是在C3或C5用R4取代的苯基，且R4可以是R7R8-(2-、 3-或6-吲哚基)。合適的化合物的實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié)構(gòu)的那些 在又進(jìn)一步的實(shí)例中，R3可以是在C3或C5用R4取代的苯基且R4可以是R8R9。合 適的化合物的實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié)構(gòu)的那些
在一些實(shí)例中，所述化合物可
以具有以下結(jié)構(gòu)在其它實(shí)例中，R3可以是2-、3_或6-吲哚基。合適的化合物的實(shí)例包括但不限于 具有以下結(jié)構(gòu)的那些 在另外的其它實(shí)例中，R3是萘基。合適的化合物的實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié) 構(gòu)的那些
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的那些

在另外其它實(shí)例中，R3是R8R9。合適的化合物的實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié)構(gòu)其中Y獨(dú)立地選自H、OH、OCH3 ；或 在另外的其它實(shí)例中，R3是R12R13。合適的化合物的實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié) 構(gòu)的那些且其中ζ獨(dú)立地選自S、0、NH和CH2。 這些化合物可以任何合適的方式合成。例如，可以使用本文提供的實(shí)施例中描述 的方法合成所述化合物。使用標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程為碳原子編號(hào)，其中吲哚中氮雜原子是Cl且與吲哚 的C2連接的苯基部分中的碳原子是Cl。這種編號(hào)規(guī)程也用于包含這些吲哚或二吲哚衍生 物或類似物的任何取代基環(huán)結(jié)構(gòu)，諸如環(huán)烷基、芳基或雜芳基部分。在一些實(shí)施方案中，所述化合物或化合物的組合，與藥學(xué)上可接受的載體一起，可 以構(gòu)成藥物組合物。在其它實(shí)施方案中，提供了抑制與細(xì)胞增殖疾病相關(guān)的細(xì)胞中微管蛋白聚合的方 法，所述方法包括使與所述細(xì)胞增殖疾病相關(guān)的所述細(xì)胞與藥理學(xué)上有效量的本文所述的 至少一種化合物接觸。在這個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞增殖疾病可以是癌癥。癌癥的代表性 實(shí)例包括前列腺癌、結(jié)腸癌或乳腺癌。在另外的其它實(shí)施方案中，提供了治療個(gè)體的癌癥的方法，所述方法包括向所述 個(gè)體給藥藥理學(xué)上有效量的本文所述的至少一種化合物，其中所述化合物抑制癌細(xì)胞的生 長(zhǎng)，由此治療所述癌癥。在這個(gè)實(shí)施方案中，癌癥的代表性實(shí)例包括前列腺癌、結(jié)腸癌或乳 腺癌。本文提供的化合物可以用作治療劑，其通過(guò)抑制細(xì)胞增殖疾病中異常增殖細(xì)胞中 微管蛋白或微管蛋白聚合，同時(shí)防止ATP結(jié)合性組件轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥性，來(lái)抑制 所述細(xì)胞的生長(zhǎng)。預(yù)期的是所述異常增殖細(xì)胞與所述化合物的接觸有效地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和 /或細(xì)胞周期停滯。因此，本發(fā)明的化合物可以用于治療個(gè)體的癌癥。在一些實(shí)例中，所述 個(gè)體是哺乳動(dòng)物。在其它實(shí)例中，所述個(gè)體是人。癌癥的實(shí)例包括但不限于前列腺癌、結(jié)腸 癌或乳腺癌。這些化合物或其藥理學(xué)上可接受的鹽或水合物的劑量制劑可以包含適合于給藥 方法的常規(guī)的無(wú)毒的、生理學(xué)或藥學(xué)上可接受的載體或媒介物(vehicle)?？梢詫⑦@些化合 物或其藥物組合物獨(dú)立地給藥一次或多次以達(dá)到、維持或提高來(lái)自這些化合物或其它抗癌 藥物或抗癌劑的藥理學(xué)作用或治療作用。確定劑量或確定合適的劑量是否包含單一給藥量 還是多個(gè)給藥量屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)范圍。合適的劑量取決于所述個(gè)體的健康、所
述癌癥的進(jìn)展或緩解、給藥途徑和所用的制劑。以下實(shí)施例是出于說(shuō)明本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案的目的而提供的，而且并非意在以 任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1化合物的合成一般合成路線如圖1所示，使用已知的合成方法來(lái)合成化合物10、11和13。如圖1中合成路線 所示，通過(guò)使用下面描述的一般方法在NaOH乙醇溶液的回流下從相應(yīng)的前體化合物9、8和 12除去保護(hù)基苯磺?；?，制備經(jīng)甲基苯基連接基橋連的目標(biāo)二吲哚10、11和13。中間化合 物8是隨后合成化合物10、11和13的關(guān)鍵。在二異丙基酰胺鋰(LDA)的存在下由被保護(hù) 的吲哚1與被保護(hù)的吲哚苯甲醛化合物5的偶聯(lián)合成化合物8，收率94%。可使用兩個(gè)不 同的Suzuki偶聯(lián)途徑，途徑A和途徑B，來(lái)合成化合物5。對(duì)于途徑A，被保護(hù)的吲哚1被LDA鋰化得到吲哚2，隨后用溴化氰(BrCN)溴化得 到溴吲哚3。將合成的溴吲哚3與醛基苯基硼酸4偶聯(lián)以得到化合物5。對(duì)于途徑B，使用 可商購(gòu)碘苯甲醛6和被保護(hù)的吲哚硼酸7制備化合物5。使用三乙基硅烷和三氟乙酸(TFA)，在室溫下將化合物8中的苯基甲醇連接基加 成還原(additively reduce)為化合物9中的苯基亞甲基，收率67%。在這一還原中，三苯 基硅烷作為另一硅烷基化試劑由于其龐大的基團(tuán)的阻力，而收率較差。通過(guò)一般方法從被 保護(hù)的二吲哚9得到甲基苯基連接的二吲哚化合物10。通過(guò)用氫氧化鈉(10當(dāng)量)在回流 的乙醇下處理化合物820小時(shí)，制備游離的甲醇連接的二吲哚11。通過(guò)用重鉻酸吡啶鐺(PDC)在二甲基甲酰胺(DMF)中氧化化合物8中的苯基甲醇 連接基合成被保護(hù)的苯基甲酮連接的化合物12，收率73%。通過(guò)一般方法從化合物12合 成苯基甲酮連接的化合物13，收率83%。2-溴-1-(苯磺?；?口引哚(3)的合成 通過(guò)Ketcha的方法(1)制備化合物 12。理論質(zhì)量 334. 96，[M-H] 334. IoC14H10BrNO2S 的理論元素分析(Anal. calc.) ；C, H，N。3-(1_(苯磺?；?IH-吲哚-2-基)苯甲醛(5)的合成 使用途徑A或途徑B通過(guò)Suzuki偶聯(lián)制備化合物5。途徑A和途徑B使用使有機(jī) 硼酸與芳基鹵化物偶聯(lián)的相同方法，但途徑A使用如本文所述的芳基鹵化物化合物3和有 機(jī)硼酸化合物4。途徑B使用芳基鹵化物1-碘-3-甲?；?與有機(jī)硼酸1_(苯基磺?；?-IH-吲哚-2-基-硼酸7?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)顯示在圖1中。將2-溴-1-(苯基磺?；?-1Η-吲哚3(330mg，0.99mmol)、四(三苯基膦)鈀(0) (34mg，0. 3ymol)和 3-甲酰基苯基硼酸 4 (177mg，1. 18mmol)在二甲氧基乙烷(DME) (IOml) 中的混合物和碳酸鈉(1ml，2M于脫氧水中)攪拌，并加熱至回流，持續(xù)2hr，直到在TLC上 檢測(cè)不到溴吲哚3。將混合物冷卻至室溫并倒入EtOAc (20ml)中并用EtOAc萃取。將合并 的有機(jī)層用飽和NH4Cl和水洗滌并用MgSO4干燥。在真空中除去溶劑，然后在硅膠上通過(guò) 快速柱色譜純化，使用EtOAc/Hx(l 5)為洗脫液，得到為淡黃色固體的化合物5 (336mg， 94% ) ο Mp 126-138 °C ；C21H15NO3S 理論元素分析；C, H, N。1H NMR(CDCl3) δ 10. l(bs，lH， CH0)，8· 33 (d, J = 8. IHz, 1Η, ArH), 7. 98 (s, 2Η, ArH), 7. 85 (d, J = 7. 2Hz, 1Η, ArH), 7. 63 (t, 1Η, J = 7· 8Ηζ，ArH)，7· 51-7. 29(m，8H，ArH) ,6. 66 (s, 1Η, ArH), 13C NMR(CDCl3) δ 192. 1， 140. 5，138. 6，137. 6，136. 6，136. 1，134. 0，133. 7，131. 1，130. 6，130. 0，129. 0 (2C)，128. 5， 126. 8(2C)，125. 6，1254. 9，121. 2，116. 8，114. 9。(1-苯磺酰基-IH-吲哚-2-基)-[3-(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)苯基]甲醇 (8)的合成在10分鐘內(nèi)在-78°c下，向被保護(hù)的吲哚1(2. 37g，6. 56mmol)在30ml四氫呋喃 (THF)中的溶液加入2. OM LDA的THF溶液(4. 75ml,9. 5mmol)。將該溶液在0°C攪拌30分 鐘，隨后冷卻至-78°C。在此溫度下，加入溶解在干燥THF(IOml)中的醛基吲哚5 (2. 03g， 7. 88mmol)。將所得的混合物攪拌過(guò)夜且允許溫?zé)嶂潦覝?。將溶液倒?00ml EtOAc中。將 合并的有機(jī)層用飽和NH4Cl和水洗滌并用MgSO4干燥。在真空中除去溶劑，然后在硅膠上通 過(guò)快速柱色譜純化，使用EtOAc/Hx(l 3)為洗脫液，得到為淡黃色固體的化合物8(3. 32g， 82%)。理論質(zhì)量618. 13，[M+Na+]641. 2 ；Mp 81_83°C !C35H26N2O5S2 的理論元素分析；C,H,N ；1H 匪R (CDCl3) δ 8. 29 (d，J = 8. 4Hz，1H, ArH)，8. 09 (d，J = 8. 4Hz，1H, ArH) ,7. 73 (d, J = 7. 5Hz， 2H, ArH) ,7. 61 (s, 1H, ArH)，7. 56-7. 06 (m, 17H, ArH)，6. 57 (s, 1H, ArH)，6. 48 (s, 1H, ArH)， 6. 42 (s，1H, CH)，3. 64 (bs, 1H, 0H) ；13C NMR(CDCl3) δ 143. 3，141. 3，140. 0，138. 0，137. 8， 136. 9，136. 8，133. 5，133. 1,132. 1,130. 1,129. 6，128. 9，128. 6 (2C)，128. 5，128. 1 (2C)， 127. 1，126. 9，126. 2 (2C)，125. 9 (2C)，124. 7，124. 5，124. 1，123. 5，121. 0，120. 4,116. 1， 114. 2，113. 7，112. 0,68. 8。(1-苯磺酰基-IH-吲哚-2-基)-[3-(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)苯基]甲烷 (9)的合成 將化合物8(201mg，0. 32mmol)和三乙基硅烷(0. Iml, 0. 65mmol)在 5ml 干燥CH2Cl2 中的溶液攪拌30分鐘，然后加入TFA(0. 16ml，1.95mm0l)。在室溫將溶液攪拌1小時(shí)，向 該溶液加入IOml H2O,并在冰冷卻下用固體Na2COJf該溶液小心地中和。分離有機(jī)相，用 Na2SO4干燥，并濃縮，然后通過(guò)在硅膠上快速柱色譜純化，使用EtOAc/Hx(l 5)為洗脫液， 得到為淡黃色固體的化合物9 (130mg，67% )。理論質(zhì)量602. 13，[M+Na+]625. 2 ；Mp76-78°C； C35H26N2O5S2O. 2C4H802 的理論元素分析；C, H，N ；1H NMR(CDCl3) δ 8. 30 (d，J = 8. IHz，1H， ArH), 8. 16 (d, J = 8. IHz, 1H, ArH), 7. 67 (d, J = 7. 8Hz，2H，ArH), 7. 51-7. 12 (m, 18H, ArH)， 6. 52 (s，1H, ArH), 6. 30 (s, 1H, CH), 4. 34(s，2H，CH2) ；13C NMR(CDCl3) δ 141. 4，140. 1，138. 5， 137. 8，136. 9，136. 7，134. 5，133. 2，133. 0，132. 2，130. 6，130. 2，129. 1，129. 0，128. 7 (2C)， 128. 5(2C)，128. 0，127. 1, 126. 2 (2C)，125. 9 (2C)，124. 4，123. 9，123. 7，123. 1，120. 2， 120. 0，116. 1，114. 2，113. 4，110. 9,34. 6。制備化合物10、11和13的一般方法向化合物被保護(hù)的吲哚(0. 56mmol)在IOml乙醇中的溶液加入10 %的 Na0H(227mg,5. 68mmol)溶液且將該混合物回流20小時(shí)。然后，蒸發(fā)乙醇，加入鹽水和 CH2Cl2，將有機(jī)相用CH2Cl2萃取，然后在硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，用EtOAc/Hx (1 1)或 CH2C12/Hx(1 1)為洗脫液，得到目標(biāo)游離的吲哚化合物(69% 91%)。(1H-吲哚-2-基)-[3-(1Η-吲哚-2-基)苯基]甲烷(10)的合成 通過(guò)上面描述的一般方法從化合物9合成化合物10。棕色固體；收率91 % ；理論質(zhì) 量 322. 15，[Μ-Η]321· 2 ；Mp 193_194°C ；C35H26N2O5S2 的理論元素分析；C, H, N ；1H NMR(CDCl3) d 8. 30 (bs, 1H, NH)，7. 82 (bs, 1H, NH)，7. 63-7. 54 (m, 4H, ArH)，7. 42-7. 37 (m, 2H, ArH)， 7. 27-7. 01(m,6H,ArH),8. 82 (s, ΙΗ,ΑγΗ) ,6. 34 (s，ΙΗ,ΑγΗ) ,4. 19(s，2H，CH2) ； 13C NMR(CDCl3) δ 138. 8，136. 9，136. 8，136. 3，135. 8，132. 4，128. 9，128. 7，128. 1,127. 7，124. 8，123. 2， 121. 9，120. 9，120. 1，119. 9，119. 5，119. 3，110. 4，110. 0，100. 9,99. 7,34. 3。(1Η-吲哚-2-基)-[3-(1Η-吲哚-2-基)苯基]甲醇(11)的合成
通過(guò)上面描述的一般方法從化合物8合成化合物11。收率69% ；棕色固體；理論 質(zhì)量 338. 40，[M-H] 337. 2 ；C23H18N2O 的理論元素分析；C, H, N ；Mp 82-85°C ；1H NMR(CDCl3) δ 8. 37(bs，lH，NH), 8. 26 (bs, 1H, NH)，7. 71 (s，1H，ArH), 7. 60-7. 06(m，llH，ArH), 6. 80 (s, 1H，CH)，6· 32(s，1H，ArH)，5· 97(s，1H，ArH)。13C NMR(CDCl3) d 141. 8,139. 3,136. 9,136. 4, 132. 3，128. 8，128. 6，128. 1，127. 5，125. 4，124. 5，122. 3，122. 0，121. 8，120. 2 (2C) ,119. 8， 119. 5，110. 6，110. 5，100. 7,99. 8,70. 2。(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)-[3-(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)苯基]甲酮 (12)的合成在0°C下，向化合物8(325mg，0. 53mmol)在干燥DMF(IOml)中的溶液加入重鉻酸吡 啶鐺(PDC, 1. 28mg, 3. 4mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。加入H2O和CH2Cl2,分離各層， 并且用CH2Cl2萃取水相。將合并的有機(jī)萃取物用水洗滌且用MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑，然后在 硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，使用EtOAc/Hx(l 3)為洗脫液，得到為淡黃色固體的化合物 12(225mg，70%)。理論質(zhì)量616. 11，[M+Na+]639. 2 ；Mp 189_190°C ;C35H24N205S20. 2C4H8O2 的理 論元素分析；C, H, N ；1H NMR (CDCl3) δ 8. 33 (d, J = 8. 4Hz, 1H, ArH)，8. 20-8. 06 (m, 4H, ArH)， 7. 85 (d, J = 8. 4Hz, 1H, ArH), 7. 84-7. 27 (m, 16H, ArH), 7. 13 (s，1H, ArH), 6. 66 (s, 1H, ArH)； 13C NMR(CDCl3) δ 186. 3，140. 1,137. 9，137. 8，137. 4，137. 2，136. 8，136. 4，135. 1,133. 4， 133. 2，132. 2，130. 9，129. 9，129. 6，128. 5 (2C)，128. 3 (2C)，128. 1, 127. 3，127. 0 (2C)， 126. 7，126. 1 (2C)，124. 7，124. 0，123. 8，122. 2，120. 4，116. 8，116. 1,114. 6，114. 0。(1H-吲哚-2-基)-[3_(lH-吲哚-2-基)苯基]甲酮(13)的合成 通過(guò)上面描述的一般方法從化合物12合成化合物13。收率83% ；棕色固體；理 論質(zhì)量 336. 39，[M-H] 335. 3 ；Mp 206-207°C ；C23H16N2O. 0. 2C4H802 的理論元素分析；；C, H， N ；1H NMR (DMSO) d 8. 38 (bs, 1H, NH) ,8. 18 (bs，1H, NH)，7. 86-7. 04 (m, 13H, ArH), 5. 77 (s, 1H, ArH)。13C NMR(DMSO) δ 186. 0，138. 8，138. 1，137. 3，136. 6，134. 2，129. 1，128. 6，128. 4， 127. 7，127. 0，125. 8，124. 8，123. 0，121. 9，120. 3，120. 2，119. 5，112. 7，112. 4，111. 4,99. 6。用于制備化合物60和5的一般方法A(圖II和1J)將芳基溴丄或化合物2(0.99mmol)、四(三苯基膦)鈀(0) (34mg，0. 3 μ mol)和 3-甲?；交鹚?(177mg，l. 18mmol)在DME(IOmL)中的混合物和碳酸鈉(ImL 2M于脫氧 水中)攪拌，并加熱至回流，持續(xù)2小時(shí)，直到在TLC上檢測(cè)不到芳基溴化物丄或化合物L(fēng) 將混合物冷卻至室溫并倒入EtOAc (20ml)中，用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層用飽和NH4Cl 和水洗滌并用無(wú)水MgSO4干燥。在減壓下除去溶劑，然后在硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，使 用EtOAc/己烷(1/5，ν/ν)為洗脫液，得到目標(biāo)醛化合物。用于制備化合物61和66的一般方法Β(圖II和1J)在氬氣氣氛下向冷卻至-78°C的溴化物迪(1.38mm0l)在干燥THF(IOmL)中的溶 液加入n-BuLi(0.61mL，2. 5M，1. 1當(dāng)量)。將溶液攪拌30分鐘，加入在無(wú)水THF中的醛 60(1. 38mmol)，并將該溶液攪拌16小時(shí)。加入水以終止反應(yīng)。將反應(yīng)溶液用EtOAc萃取， 用無(wú)水MgSO4干燥。在減壓下除去溶劑，然后在硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，使用EtOAc/己 烷(1/1, ν/ν)為洗脫液，得到目標(biāo)化合物。用于制備化合物62、64和67的一般方法D (圖II和1J)在0°C下向化合物豇、迎、巡(0. 53mmol)在干燥DMF(IOmL)中的溶液加入重鉻酸吡 啶鐺(PDC, 1. 28mg, 3. 4mmol)。將混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。然后，加入H2O和CH2Cl2, 分離各層，且將水相用CH2Cl2萃取。將合并的有機(jī)萃取物用水洗滌并用無(wú)水MgSO4干燥，且 蒸發(fā)溶劑，然后在硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，使用EtOAc/己烷(l/3，v/v)為洗脫液，得到 目標(biāo)化合物。用于制備化合物63的一般方法C (圖II)在_78°C下，在10分鐘內(nèi)向被保護(hù)的吲哚丄(6. 56mmol)在30mL THF中的溶液加入 2. OM LDA的THF溶液(4. 75mL, 9. 5mmol)，在0°C攪拌30分鐘，隨后冷卻至-78°C。在此溫 度下，加入溶解在干燥THF(IOml)中的芳基醛迎(7.88mmol)。將所得混合物攪拌過(guò)夜且允 許溫?zé)嶂潦覝?。將溶液倒入IOOmL EtOAc中。將合并的有機(jī)層用飽和NH4Cl和水洗滌并用 無(wú)水MgSO4干燥。在減壓下除去溶劑，然后在硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，使用EtOAc/己 烷(1/3，ν/ν)為洗脫液，得到化合物迎。用于制備化合物65和68的一般方法E (圖II和1J)向化合物被保護(hù)的吲哚M和近(0. 56mmol)在IOml乙醇中的溶液加入10% NaOH溶液(227mg，5. 68mmol)，并將該混合物回流20小時(shí)。然后，蒸發(fā)乙醇，加入鹽水和CH2Cl2, 并且有機(jī)相用CH2Cl2萃取，然后在硅膠上通過(guò)快速柱色譜純化，用EtOAc/己烷(1/1，ν/ν) 或CH2Cl2/己烷(1/1，ν/ν)為洗脫液，得到目標(biāo)游離的吲哚化合物。3'，4'，5'-三甲氧基聯(lián)苯基-3-甲醛(化合物60)的合成方法A (圖 II);收率91%;MS (ESI) m/z 295. 0 ([M+Na]+)；1H 匪R(CDCl3) 10. 10 (bs, 1H, CH0), 8. 07 (t, J = 1. 7Hz, 1H, ArH), 7. 84 (m, 2H, ArH)， 7. 85 (t，J = 7. 8Hz，1H，ArH)，6. 81 (s，2H，ArH)，3. 95 (s，6H，OCH3)，3. 91 (s，3H，OCH3)。(3'，4'，5'-三甲氧基聯(lián)苯基-3-基)-(3，4，5_三甲氧基苯基)甲醇(化合物
61)的合成方法B (圖 II);收率71%;MS (ESI) m/z463. 1( [M+Na]+)；1H 匪R(CDCl3) 7. 60 (s, 1H, ArH)，7. 47-7. 31 (m, 3H, ArH)，6. 76 (s,2H, ArH)，6. 64 (s, 2H, ArH) ,5. 81 (s, 1H, CH-0H)，4. 00(s，6H，OCH3)，3. 90 (s，3H，OCH3) ,3. 81 (s,9H, OCH3),
2.97 (s，1Η, OH)。(3'，4'，5'-三甲氧基聯(lián)苯基-3-基)-(3，4，5_三甲氧基苯基)甲酮(化合物
62)的合成方法C(圖 II);收率85%;MS (ESI)m/z461. 1( [M+Na]+)；1H NMR(300MHz, CDCl3) 8. 00 (t, J=L 5Hz, 1H, ArH), 7. 79 (m, 1H, ArH), 7. 72 (dd, J =7. 5，1. 5Hz，1Η，ArH), 7. 55 (t, J = 7. 5Ηζ，1Η，ArH), 7. 12(s，2H，ArH), 6. 81 (s, 2Η, ArH),
3.96 (s，3Η, OCH3)，3. 94 (s,6H, OCH3)，3. 90 (s, 3Η, OCH3)，3. 89 (s,6H, OCH3)。(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)-(3‘ ,4' ,5'-三甲氧基聯(lián)苯基_3_基)甲醇 (化合物63)的合成方法D (圖 II);收率84%;MS (ESI) m/z552. 2 ([M+Na] +)；1H NMR(300MHz, CDCl3) 8. 00 (t, J=L 5Hz, 1H, ArH), 7. 79 (m, 1Η, ArH), 7. 72 (dd, J =7. 5，1. 5Hz，1Η，ArH), 7. 55 (t, J = 7. 5Ηζ，1Η，ArH), 7. 12(s，2H，ArH), 6. 81 (s, 2Η, ArH), 3. 96 (s，3Η, OCH3)，3. 94 (s,6H, OCH3)，3. 90 (s, 3Η, OCH3)，3. 89 (s,6H, OCH3)。(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)-(3' ,4'，5'-三甲氧基聯(lián)苯基_3_基)甲酮 (化合物64)的合成方法C(圖 II);收率 85%; MS (ESI) m/z528. 3 ([M+H] +)； 1H 匪R (300MHz，CDCl3) 8. 21 (s，1H，ArH)，8. 17-8. 06 (m，3H，AH)，7. 94 (d，J = 7. 8Hz，1H, ArH)，7. 82 (d, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 58-7. 46 (m, 6H, ArH)，7. 34-7. 32 (d, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 01 (s，1H, ArH)，6. 83 (s, 2H, ArH)，3. 95 (s,6H, OCH3)，3. 91 (s，3H, OCH3)。(1H-吲哚-2-基)_(3' ,4' ,5'-三甲氧基聯(lián)苯基_3_基)甲酮(化合物65) 的合成方法E (圖 II);收率75%;MS (ESI) m/z385. 9 ([M-HJO ；1H NMR(300MHz, CDCl3) 9. 62 (bs, 1H, NH)，8. 17 (s，1H, AH), 7. 98 (d, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 82 (d, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 73 (d, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 61 (t, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 52 (d, J = 8. 4Hz, 1H, AH)，7. 40 (t，J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 21-7. 16 (m, 2H, ArH)，
6.86 (s，2H, ArH)，3. 95 (s,6H, OCH3)，3. 93 (s, 3H, OCH3)。[3-(1-苯磺?；?IH-吲哚-2-基)苯基]-(3，4，5_三甲氧基苯基)甲醇(化合 物66)的合成方法B (圖 1J);收率71%; MS (ESI) m/z552. 2 ([M+H] +)；1H NMR(300MHz, CDCl3) 8. 30 (d, J = 8. 1Hz, 1H, ArH) , 7. 63 (s, 1H, ArH),
7.49-7. 16 (m, 12Η, ArH) , 6. 71 (s，2H，ArH) ,6. 56 (s，1Η, CH-OH), 5. 87 (bs, 1H, CH-OH)， 3. 87 (s，6H，OCH3)，3. 85 (s, 3H, OCH3)。[3-(1-苯磺酰基-IH-吲哚-2-基)苯基]-(3，4，5_三甲氧基苯基)甲酮(化合 物67)的合成方法C (圖 1J);收率69%;MS (ESI) m/z550([M+Na]+)；1H 匪R (300MHz，CDCl3) 8. 31 (d，J = 8. 4Hz, 1Η, ArH), 8. 02 (m, 2Η, ArH), 7. 73 (m, 1Η, ArH)，7. 64 (t，J = 7. 5Ηζ，1Η，ArH)，7. 50-7. 31 (m，8Η，ArH)，7. 27 (s，2Η，AH)，6. 65 (s，1Η， AH)，4· 01 (s，3Η, OCH3)，3. 99 (s,6H, OCH3)。[3-(1Η-吲哚-2-基)苯基]-(3，4，5_三甲氧基苯基)甲酮(化合物68)的合成方法E (圖 1J);收率95%;MS (ESI) m/z385. 9 ([M-HJO ；1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 8. 94 (bs, 1H, NH), 8. 17 (s，1H, ArH), 7. 94 (d, J = 7. 8Hz, 1H, ArH)，7. 69 (m, 2H, ArH)，7. 55 (t, J = 7. 6Hz, 1H, ArH)，7. 41 (d, J = 8. IHz, 1Η, ArH)， 7. 25-7. 15 (m, 2H, ArH)，7. 12 (s, 2H, ArH)，6. 92 (s, 1H, ArH)，3. 98 (s, 3H, OCH3)，3. 85 (s,6H, OCH3) ο實(shí)施例2用于一般化合物類似物的其他合成路線化合物類似物14-20二吲哚13的結(jié)構(gòu)類似物顯示在圖IB中。根據(jù)圖1C-1E中顯示的路線2_4(76_78)中描述的一般合成計(jì)劃合成結(jié)構(gòu)類似物化合物14-20。對(duì)于類似物化合物14，如路線2中 所示地制備多種取代的吲哚環(huán)。為完成它，從可商購(gòu)的試劑合成多種N-保護(hù)的吲哚33并 在2-吲哚位置溴化以產(chǎn)生它們相應(yīng)的溴化物，34。繼而使溴化物經(jīng)Suzuki反應(yīng)與醛基硼 酸4偶聯(lián)以得到相應(yīng)的醛基吲哚35——這一方法中的關(guān)鍵中間體。如路線3中顯示，這一類醛基吲哚5A與2-N-保護(hù)的吲哚1在堿性條件下反應(yīng)以 促進(jìn)區(qū)域選擇性的脫質(zhì)子化并以高收率產(chǎn)生羥基亞甲基化合物8A。然后通過(guò)在DMF中用重 鉻酸吡啶鐺(PDC)氧化化合物8A的甲醇鍵制備相應(yīng)的甲基酮12A。N-保護(hù)的基團(tuán)的脫保 護(hù)提供包含在吲哚系統(tǒng)的不同位置處的多種不同取代基的基本結(jié)構(gòu)14的一系列目標(biāo)吲哚 產(chǎn)物。例如，X可以是鹵化物、-OH、-OCH3> CH3> NO2, CN或CF3。對(duì)于圖IB中化合物15和16，如路線4中顯示(圖1D)，通過(guò)溴化物36和37分別 與醛基硼酸4的Suzuki反應(yīng)制備在3-吲哚處連接的醛基吲哚38和在4-、5-、6_或7-吲 哚位連接的醛基吲哚39。如路線4的下部所示，使用類似于上面描述的那些方法(5)的方 法，合成圖IB中顯示的聯(lián)苯基17、β -萘基18、取代的芳基19和3，4_亞甲基二氧基苯基 20類似物。這些方法為所提出的化合物提供了快速、可靠和高收率的合成方法。預(yù)期可以合成在吲哚環(huán)的C3處取代的其它吲哚衍生物。例如，可以在C3處用本 身包含取代的噻唑環(huán)的取代基衍生吲哚。例如化合物59——2-(1Η-吲哚-3-羰基)噻 唑-4-羧酸甲酯具有以下結(jié)構(gòu) 化合物類似物21-23還使用Suzuki反應(yīng)合成了結(jié)構(gòu)類似物21-23，即，化合物21、22和23的未取代的 和取代的衍生物(圖1B)。然而，在這種情況下，鹵化的吲哚被轉(zhuǎn)化成鋰鹽，然后允許與硼 酸三甲酯反應(yīng)以產(chǎn)生需要的硼酸3，然后將其與合適的溴化的醛基噻吩(X = S)、呋喃(X =0)、吡咯(X = NH)或環(huán)戊二烯(X = CH2)衍生物4B反應(yīng)以得到多種雜環(huán)連接的二吲哚 5B (路線5 ；圖1F)。如路線3中所示(圖1D)，使用二異丙基酰胺鋰(LDA)和PDC繼而將這 些衍生物轉(zhuǎn)化成具有相應(yīng)的雜環(huán)鍵的二吲哚。為了確定環(huán)取向和在芐基連接基位置上的雜環(huán)取代的重要性，會(huì)合成在2，4-和2，5-位的鍵。如圖IJ所示地合成類似物68——23的三甲氧基衍生物
化合物類似物24-28合成化合物24-28的類似物(圖1B)以確定甲基酮鍵對(duì)于藥理學(xué)活性是否是絕對(duì) 必需的。合成多種硫酮24、酯25和27以及酰胺26和28以探討氫鍵受體、鍵的長(zhǎng)度和酮的 位置(即鄰近芐基連接基或吲哚環(huán))對(duì)活性的貢獻(xiàn)。使用硫化氫從噻吩類似物24的相應(yīng) 的甲基酮衍生物直接合成噻吩類似物24(路線6 ；圖1G) (6-7)，同時(shí)如前面描述地(8-10)， 通過(guò)2-氨基吲哚47或2-羥基吲哚46與45反應(yīng)制備酯和酰胺衍生物。化合物類似物29-31合成29-31的類似物化合物——取代的和未取代的衍生物(圖1B)，以確定對(duì)于微 管蛋白抑制、抗癌癥活性、轉(zhuǎn)運(yùn)和肝的構(gòu)效關(guān)系。使用路線7(圖1H)中所示的反應(yīng)條件合 成類似物，該反應(yīng)條件幾乎與路線2-6中描述的那些相同(圖1C-1G)，除了將碘代-吲哚 56鋰化并與溴化的醛基化合物55偶聯(lián)以得到相應(yīng)的醇，隨后將其用PDC成甲基酮57。實(shí)施例3體外和體內(nèi)方法在96-孔板中與不同濃度的化合物共孵育96小時(shí)之后，用磺基羅丹明B(SRB)測(cè) 定法定量細(xì)胞生存力(LNCaP、PC-3前列腺癌細(xì)胞系、DU145、PPC-I和TSU-Prl前列腺癌細(xì) 胞系、HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞系和MCF-7乳腺癌細(xì)胞系)。在96-孔板中與不同濃度的化合物 共孵育96小時(shí)之后，通過(guò)MTT測(cè)定法定量白血病細(xì)胞的細(xì)胞生存力(K562和耐多柔比星的 K562/DOX)。通過(guò)抗組蛋白ELISA測(cè)定法和DNA斷裂成梯測(cè)定藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。通過(guò) 碘化丙啶染色和熒光激活細(xì)胞分選(FACS)分析評(píng)估細(xì)胞周期進(jìn)程。根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū) 通過(guò)CytoDYNAMIX Screen TM3 (CDS-03)試劑盒確定體外微管蛋白聚合測(cè)定。在與不同濃 度的化合物13孵育24小時(shí)之后，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡測(cè)定，檢測(cè)LNCaP和PC-3中的抗細(xì)胞凋 亡蛋白(Bcl-2和Bcl-xl)和促細(xì)胞凋亡蛋白(Bax)。通過(guò)持續(xù)2周的50mg/kg、100mg/kg 和150mg/kg靜脈內(nèi)給藥進(jìn)行體內(nèi)PC-3異種移植物研究。實(shí)施例4各種化合物體外對(duì)抗癌細(xì)胞系的作用用化合物13和68處理的不同癌細(xì)胞系的IC5tl在含有10%胎牛血清的細(xì)胞所需的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，根據(jù)細(xì)胞系，以800-5，000個(gè) 細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞接種在96-孔板中。使用多種細(xì)胞密度和孵育時(shí)間用各個(gè)細(xì)胞系進(jìn) 行初步研究以確定合適的接種密度。將關(guān)注的化合物溶解在DMSO中，在細(xì)胞培養(yǎng)基中稀釋 (最終DMSO濃度小于0. 5% ν/ν)，且以0-100 μ M的最終濃度加入到平行四份的孔中。包括僅加入無(wú)藥的媒介物的對(duì)照孔作為陰性對(duì)照。在37 °C在含有5% 二氧化碳的增濕氣氛中，將細(xì)胞孵育96小時(shí)。如National Cancer Institute(Il)所采用的，使用磺基羅丹明B測(cè)定法定量藥物處理結(jié)束時(shí)的細(xì)胞數(shù) 目。將各個(gè)藥物濃度下的細(xì)胞存活率計(jì)算為存在的細(xì)胞相對(duì)于媒介物處理的對(duì)照孔中觀察 到的細(xì)胞的百分比，并使用WinNonLin (Pharsight Corporation)通過(guò)非線性最小二乘法 回歸測(cè)量出相對(duì)于未處理的對(duì)照，將細(xì)胞數(shù)目減少了 50%的濃度(即IC5tl)。還測(cè)試了不同濃度的前體吲哚化合物3和7以及新的二吲哚化合物5、8、10、11、 12、13。還測(cè)試了已知化合物吲哚和二(1H-吲哚-3-基)甲烷以及化合物7的3-基硼酸類 似物的IC5(1。表1表明測(cè)試化合物對(duì)抗各種實(shí)體腫瘤細(xì)胞系的IC5tl和Ki，所述實(shí)體腫瘤細(xì) 胞系包括四種前列腺癌細(xì)胞系(LNCaP、PC-3、DU145、PPC-1)、兩種膀胱癌細(xì)胞系(TSU-Prl 和TCCSUP)、一種結(jié)腸癌細(xì)胞系(HT-29)、一種乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)和成纖維細(xì)胞細(xì)胞系 (CV-I)?；衔?3具有顯著地低于對(duì)照化合物二(1H-吲哚-3-基)甲烷或任何其它測(cè)試 化合物的IC5tlt5 二吲哚13在測(cè)試的所有實(shí)體腫瘤細(xì)胞系中顯示了強(qiáng)力的生長(zhǎng)抑制效力，且 IC5tl值范圍為34-162 μ M(表1)。二吲哚10和11在這些細(xì)胞系中的效力顯著較弱。二吲哚 10的IC5tl值范圍為從在ΗΤ-29細(xì)胞中的0. 72 μ M至在LNCaP、PC_3和PPC-I細(xì)胞系中的> 50 μ Mo同樣，二吲哚11在LNCaP和PC-3細(xì)胞系中的IC5tl值是5. 6 μ M和13. 5 μ Μ，表明了 甲酮鍵和可能在這一位置的存在氫鍵受體對(duì)抗癌活性的重要性。通過(guò)比較，紫杉醇在MCF-7 和ΗΤ-29細(xì)胞中的IC5tl值是約2. 5ηΜ(12)。尚未試驗(yàn)化合物11——吲哚衍生物3_(1Η_吲 哚-2-基)苯基)甲醇、和吲哚類似物2-(1Η-吲哚-3-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(NT)。表1 類似物在各種人類癌細(xì)胞系中的體外IC5tl值 不同藥物在Κ562中的IC5tl對(duì)在K562/D0X白血病細(xì)胞系中的IC5tl將細(xì)胞接種在96-孔板上并與不同濃度的化合物13、68或其它抗癌藥物孵育96 小時(shí)。通過(guò)MTT測(cè)定法定量細(xì)胞生存力。使用WinNonLin通過(guò)非線性最小二乘法回歸測(cè)量 出相對(duì)于未處理的對(duì)照將細(xì)胞生長(zhǎng)抑制了 50%的濃度(IC5tl)。表2是化合物12與其它抗 癌藥物在Κ562和耐多柔比星的K562/D0X細(xì)胞系中的IC5tl的對(duì)比?；衔?3和68在耐多 柔比星的細(xì)胞系中的IC5tl的增加相比于多柔比星、長(zhǎng)春堿和紫杉醇的增加是較小的。表2
化合物 在Κ562中的IC50 (ηΜ)在K562/DOX中的IC50 (ηΜ) 化合物13誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和DNA斷裂將IOOnM的化合物13與LNCaP —起孵育24小時(shí)，與PC-3 —起孵育48小時(shí)?？?組蛋白ELISA檢測(cè)在細(xì)胞系中的細(xì)胞凋亡(圖2Α)。將結(jié)果表示為富集因子(富集因子=處理細(xì)胞的OD/對(duì)照細(xì)胞的0D)。進(jìn)行LNCaP和PC-3細(xì)胞中抗細(xì)胞凋亡蛋白——Bcl-2和 Bcl-xl以及促細(xì)胞凋亡蛋白Bax的蛋白質(zhì)印跡。通過(guò)增加化合物13在兩種細(xì)胞系中的濃 度降低了 Bcl-2 (圖2B)。用不同濃度的藥物處理LNCaP和PC_3持續(xù)不同的時(shí)間段。在孵育結(jié)束時(shí)，采集漂 浮的和粘附的細(xì)胞。將細(xì)胞裂解并通過(guò)1. 2%的瓊脂糖凝膠電泳將低分子量DNA沉淀并分 離。通過(guò)溴化乙錠染色和UV透照顯示DNA?；衔?3誘導(dǎo)細(xì)胞中DNA斷裂(圖2C)?；衔?3使LNCaP細(xì)胞停滯在G2/M期并抑制微管蛋白聚合。將LNCaP細(xì)胞用0nM、50nM、IOOnM和200nM的化合物13處理24小時(shí)(圖3A)。然 后采集細(xì)胞并用70%乙醇固定。細(xì)胞周期分布通過(guò)碘化丙啶(PI)染色來(lái)測(cè)定，并通過(guò)熒光 激活細(xì)胞分類(FACS)分析來(lái)進(jìn)行分析。在4°C下，在不存在或存在化合物12的情況下，將微管蛋白(大于99%純度)懸 浮(每種樣品 300 μ g)于由 80mM PIPES(哌嗪-N，N，-雙(2-乙磺酸))、2mM MgCl2、0. 5mM 依他酸和1. OmM鳥(niǎo)苷三磷酸(GTP)組成的、pH 6. 9的、添加5%甘油的100 μ 1 G-PEM緩沖 液中。將樣品混合物轉(zhuǎn)移至預(yù)熱的96孔板并在37°C下在340nm處檢測(cè)每分鐘的吸光度，持 續(xù)30分鐘。20 μ M的化合物13能夠完全地阻斷微管蛋白聚合(圖3Β)。實(shí)施例5化合物13對(duì)抗癌細(xì)胞系的體內(nèi)作用化合物13在ICR小鼠中的亞慢性毒性水平鑒定了小鼠中的最大耐受量(MTD)。皮下給藥50、100和200mg/kg(在DMSO中溶 解度的極限)的劑量，持續(xù)4周(5天進(jìn)行/2天暫停)，這是研究抗癌劑的初始臨床前研究 的常用方法(12)。將受治療動(dòng)物的體重變化和死亡率用作直接的毒性量度。如圖4所示， 所有的劑量一般是良好耐受的。與僅用媒介物治療的對(duì)照動(dòng)物相比，經(jīng)過(guò)4周的治療時(shí)間， 用50或100mg/kg劑量的二吲哚13治療的動(dòng)物的死亡率或體重增長(zhǎng)速率沒(méi)有顯著的差異， 而最高劑量引起體重增長(zhǎng)減少20%。這些數(shù)據(jù)表明二吲哚13是良好耐受的，或由于快速的 清除率而未達(dá)到可測(cè)量的藥物血漿濃度?；衔?3在小鼠中的平均血漿濃度_時(shí)間曲線使用單一劑量(10mg/kg)和多種給藥途徑(靜脈內(nèi)、口服和皮下)，以接近其體內(nèi) 處置(disposition)，并解釋亞慢性毒性研究和即將進(jìn)行的體內(nèi)異種移植物研究的結(jié)果。向 各種給藥途徑的各組(η = 60)小鼠給藥二吲哚13。在多達(dá)十二個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)(給藥前 和多達(dá)給藥后24小時(shí))將小鼠處死(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)η = 5)，并將血漿樣品貯存在-80°C直到 HPLC分析。設(shè)計(jì)并驗(yàn)證HPLC/UV分析方法以測(cè)定血漿中二吲哚13的濃度，具有0. 02 μ g/ mL至20 μ g/mL的線性范圍并且所有濃度的日內(nèi)和日間變異系數(shù)小于6%。在靜脈注射之后，二吲哚13的血漿濃度快速下降(圖5)，具有小于3小時(shí)的終末 半衰期和約4L/h/kg的清除率(表3)。靜脈給藥二吲哚13之后從小鼠收集的尿和糞便樣品 顯示，小于5%的藥物被無(wú)變化地排泄到尿和糞便中。二吲哚13的血漿濃度在皮下(S. C.) 或口服(S. C.)給藥之后約3小時(shí)達(dá)到峰值，各自具有73%和29%的絕對(duì)生物利用度?？?服給藥之后的終末半衰期類似于靜脈內(nèi)給藥之后觀察到的終末半衰期類，但是比S. C.給 藥之后的長(zhǎng)，可能反映由二吲哚13的有限的水溶解度引起從S. C.注射位點(diǎn)吸收緩慢。這些數(shù)據(jù)，加上小鼠的肝血流量的評(píng)估(5.4L/h/kg)，表明二吲哚13在肝中以超過(guò)0. 75的高度的肝提取被充分代謝。二吲哚13被廣泛地分布，分布體積是全身含水量 (即，0.6L/kg)的約10倍。小鼠中代謝產(chǎn)物的LC/MS/MS分析顯示二吲哚13經(jīng)歷了充分的 氧化代謝和隨后的硫酸酯化作用(數(shù)據(jù)未顯示)。最后，這些數(shù)據(jù)表明保護(hù)二吲哚13免受 經(jīng)肝細(xì)胞色素P450的微粒體氧化的結(jié)構(gòu)修飾，例如芳香性環(huán)的鹵化，可能是有益的。在表 3中提供藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
表 3
參數(shù)
靜脈內(nèi)皮下 口服
化合物13在PC-3異種移植物Balb/c小鼠中的抗腫瘤活性 將PC-3腫瘤細(xì)胞(2xl06細(xì)胞)懸浮在鹽水中并皮下注射到受體小鼠(η = 15) 每隔一天測(cè)量腫瘤大小，并將體積計(jì)算為V= π/6*(長(zhǎng))χ(寬)2(75)。當(dāng)腫瘤達(dá) 到約175mm3的體積時(shí)，用二吲哚13 (50、100或150mg/kg/d)或紫杉醇(15mg/kg/d，僅持續(xù) 4天，這是由于通過(guò)下降的體重而觀察到毒性)開(kāi)始每日治療(5天進(jìn)行/2天暫停)。對(duì)于 研究的剩余部分，每隔一天監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)和體重。15mg/kg/d劑量的紫杉醇(Taxol))強(qiáng)力 地抑制PC-3異種移植物生長(zhǎng)，但是也引發(fā)體重的顯著下降(圖6)。二吲哚13也以劑量依 賴的方式抑制腫瘤生長(zhǎng)，且150mg/kg/d的劑量達(dá)到紫杉醇的抗腫瘤效力和毒性。實(shí)施例6過(guò)度表達(dá)abc轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的細(xì)胞中的體外化學(xué)敏感性研究和細(xì)胞凋亡研究這些研究使用成對(duì)的親代細(xì)胞系和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或維持選擇的細(xì)胞系。對(duì)于P-糖 蛋白研究，使用K562白血病(親代)和耐多柔比星的K562/DOX細(xì)胞系。對(duì)于MRPx研 究，使用卵巢癌2008細(xì)胞系(親代)及其過(guò)度表達(dá)MRPl (2008MRP1)、MRP2(2008MRP2)和 MRP3(2008MRP3)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的變異體。這些細(xì)胞由Netherlands Cancer Institute的 Anton Berns教授提供。對(duì)于BCRP研究，使用HEK-293 (親代)及其過(guò)度表達(dá)BCRP (ABCG2) 的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的變異體，它們是通過(guò)Dr. Duxin Sun從Dr. Susan Bates，NIH獲得。在這些細(xì) 胞系對(duì)中，測(cè)量每個(gè)活性化合物的化學(xué)敏感性，即IC5tl值，作為這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白影響它們的活 性的能力的初始評(píng)價(jià)。使用不同的接種密度(IxlO3至IxlO6細(xì)胞/孔)和孵育時(shí)間對(duì)每個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行預(yù) 實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化生長(zhǎng)條件。使用連續(xù)十倍稀釋(0.01-100μΜ)。必要時(shí)，采用較小范圍的接近 每種藥物的IC5tl的合適濃度。對(duì)于懸浮培養(yǎng)物像Κ562測(cè)定，使用SRB或MTT確定每孔中細(xì) 胞數(shù)目，并且使用非線性回歸(WinNonlin )確定IC5tl值。轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的程度被評(píng)估為在表達(dá) ABC的細(xì)胞系中的IC5tl/在親代細(xì)胞系中的IC5tl的比。使用已知底物例如鈣黃綠素、米托蒽
32醌和紫杉醇以及抑制劑例如維拉帕米、磺吡酮和煙曲霉毒素C(fUmitrem0rginC)以保證表 達(dá)細(xì)胞系的生存力并確認(rèn)具體的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)耐受性的貢獻(xiàn)。使用ANOVA在5%顯著性水平 進(jìn)行化合物之間的IC5。值的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。或者，可以使用類似于之前報(bào)道的那些檢測(cè)P-糖蛋白介導(dǎo)的甾體糖皮質(zhì)激素的 轉(zhuǎn)運(yùn)的構(gòu)效關(guān)系的方法(13)的方法，使用HPLC或LC/MS/MS進(jìn)行這些細(xì)胞系中的藥物轉(zhuǎn) 運(yùn)，以測(cè)定類似物濃度。在這種情況下，使用有效滲透系數(shù)和轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)(Trff)值用于比較。實(shí)施例7已知的微管蛋白結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)使用類似于Bacher等(95_96)描述的測(cè)定法的旋轉(zhuǎn)柱結(jié)合測(cè)定來(lái)確定二吲哚是 否與紫杉醇、秋水仙堿或長(zhǎng)春新堿競(jìng)爭(zhēng)相同的結(jié)合位點(diǎn)。在37°C下，在存在或不存在不同 濃度(0-20μΜ的范圍)的未標(biāo)記的二吲哚13的情況下，將解聚的微管蛋白與放射標(biāo)記的 紫杉醇、秋水仙素或長(zhǎng)春新堿一起孵育1小時(shí)。然后將該孵育物裝載到尺寸排阻Sephadex G25柱上，并以200x g離心1分鐘，且通過(guò)閃爍計(jì)數(shù)法定量流通中的放射性。該柱保留游離 的放射性配體，但不保留結(jié)合的化合物。因此，在二吲哚13的存在下流通中減少的放射性 表明競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。未標(biāo)記的紫杉醇、秋水仙堿和長(zhǎng)春新堿用作陽(yáng)性對(duì)照。出于質(zhì)量平衡的目的，監(jiān)測(cè)各個(gè)實(shí)驗(yàn)中的總放射性。使用有效地抑制微管蛋白聚 合的本文所述的雜環(huán)或結(jié)構(gòu)修飾的類似物。如果觀察到競(jìng)爭(zhēng)，通過(guò)以下等式計(jì)算各藥劑的 各抑制劑的平衡解離常數(shù)(Ki) =Ki = IC5(l/(l+[L]/Kd)，其中IC5tl是我們的配體的將3H-放射 性配體的結(jié)合抑制了 50%的濃度，[L]是加入的3H-放射性配體的濃度，且Kd是放射性配體 例如3H-長(zhǎng)春新堿的平衡解離常數(shù)。平行進(jìn)行三次實(shí)驗(yàn)?；谝谚b定的其它微管蛋白相互作用的藥物(95-96)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，出乎預(yù)料 的是，3H-標(biāo)記的紫杉醇、秋水仙堿或長(zhǎng)春新堿的結(jié)合會(huì)被二吲哚13或其它化合物抑制。然 而，如果它們的確抑制，則這提供了另一藥理學(xué)工具，由其檢測(cè)對(duì)于微管蛋白相互作用的構(gòu) 效關(guān)系；即，放射性配體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合研究。實(shí)施例8體外肝代謝為了代謝物鑒定，將關(guān)注的二吲哚13與其它化合物與具有NADPH生成系統(tǒng)、尿苷 二磷酸葡萄糖醛酸(UDPGA)和其它必需的輔因子的小鼠肝S9部分(高蛋白濃度)一起在 37°C孵育2小時(shí)。為了鑒定盡可能多的(如果不是全部)代謝物，選擇高的蛋白濃度和長(zhǎng)的 孵育時(shí)間以確保母體藥物向代謝物的最大轉(zhuǎn)化。孵育之后，將蛋白質(zhì)用乙腈(ν ν/1 1) 沉淀。將上清液中剩余的有機(jī)相在氮?dú)庀抡舭l(fā)，且將所得濃縮樣品用于LC/MS/MS分析。使用陽(yáng)離子和/或陰離子電噴射離子化(ESI-)質(zhì)譜法(ThermoFinniganLCQ DECA XP Max離子阱質(zhì)譜儀，San Jose, CA)分析樣品。在每個(gè)母體化合物的預(yù)實(shí)驗(yàn)中確定用于代 謝物的LC分離的梯度洗脫條件和用于質(zhì)譜儀的最佳條件(例如，毛細(xì)管溫度、電壓、套管和 輔助氣流等)。通過(guò)Xcalibur軟件(ThermoFirmigan)控制數(shù)據(jù)獲取，并且使用Metabolite ID和MassFrontier軟件鑒定代謝物。合成了合成標(biāo)準(zhǔn)品，并如果可能的話進(jìn)行獨(dú)立NMR研 究以確定代謝物結(jié)構(gòu)。進(jìn)行了使用不同蛋白質(zhì)(即，微粒體和S9)濃度、藥物濃度和孵育時(shí)間的初步研究 以鑒定線性代謝物產(chǎn)生和動(dòng)力學(xué)分析的合適條件。所有的反應(yīng)都在37°C下在NADPH和/或UDPGA(S9部分)的存在下進(jìn)行。使用WinNonlin(Pharsight)和S性曲線Emax模型，通過(guò) 非線性回歸分析確定描述母體藥物消失的動(dòng)力學(xué)參數(shù)Km和Vmax。通過(guò)加入含有HPLC或 LC/MS/MS分析的內(nèi)標(biāo)的冰冷乙腈(ν ν/1 1)停止反應(yīng)。通過(guò)離心沉淀反應(yīng)混合物中存 在的蛋白質(zhì)，且將上清液用合適的流動(dòng)相稀釋或?qū)⑵渲苯佑糜贖PLC或LC/MS/MS分析。設(shè) 計(jì)HPLC和LC/MS/MS方法并針對(duì)在各生物基質(zhì)中的各分析物進(jìn)行驗(yàn)證，并用于定量。實(shí)施例9急件和亞慢件毒件(劑量探索(Dose-Finding))研究確定在雄性ICR小鼠(Taconic Laboratories)中的最大耐受量(MTD)和10%小 鼠致死劑量(LDltl)。將關(guān)注的類似物以接近其溶解度的濃度溶解在PEG300或鹽水(視情況 而定)中，并且以1 5的比例連續(xù)稀釋以提供一系列給藥溶液。動(dòng)物接受逐漸降低的靜 脈內(nèi)劑量，直到找到在24小時(shí)內(nèi)不導(dǎo)致死亡或明顯毒性的劑量，其對(duì)應(yīng)急性MTD(mg/kg)。 每種藥物需要小于10只小鼠以確定急性MTD。為了確保在體內(nèi)抗腫瘤效力研究過(guò)程中動(dòng)物死亡是由于腫瘤負(fù)荷而不是由于藥 物治療，測(cè)定了類似物的亞慢性毒性。將小鼠分成十個(gè)每組。組1接受急性MTD;組2接受 1/IOMTD ；組3 :1/25MTD ；組4 :1/50MTD ；以及組5 :1/100MTD。使用5天進(jìn)行/2天暫停的方 案持續(xù)連續(xù)2周，經(jīng)尾靜脈(以避免有關(guān)口服或皮下注射后的可變的吸收的問(wèn)題)靜脈內(nèi) 給藥劑量。藥物治療后，監(jiān)測(cè)小鼠的存活多達(dá)額外的31天。建立存活動(dòng)物百分?jǐn)?shù)對(duì)劑量 (mg/kg)的曲線，并通過(guò)非線性回歸確定LD1(I。還會(huì)進(jìn)行紫杉醇和長(zhǎng)春堿的研究。實(shí)施例10對(duì)抗K562和K562/Dox腫瘤異種移植物的體內(nèi)效力將K562和K562/Dox腫瘤細(xì)胞(由法國(guó)巴黎的Dr. J. P. Marie慷慨提供)單獨(dú)地 與Matrigel (Becton Dickinson)混合，并分別皮下注射(0. 2mL的細(xì)胞和Matrigel懸浮 液，含有IxlO7個(gè)細(xì)胞)入8周齡的雄性裸(nu/nu)小鼠的左脅和右脅。這允許技術(shù)人員 在同一動(dòng)物中同時(shí)測(cè)量?jī)煞N腫瘤對(duì)藥物治療的響應(yīng)，降低由于在比較各組時(shí)可能出現(xiàn)的體 重、藥代動(dòng)力學(xué)、毒性等方面的差異而產(chǎn)生的差異性。如果認(rèn)為相關(guān)，也可以包括使用來(lái)源 于過(guò)度表達(dá)其它有關(guān)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的細(xì)胞的腫瘤異種移植物的研究。允許腫瘤生長(zhǎng)約3周，每隔一天測(cè)量腫瘤體積，V= π/6*(長(zhǎng))x(寬)2(75)。當(dāng)腫 瘤體積達(dá)到150mm3時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)分成治療組(每組η = 10)。每個(gè)治療組需要十只動(dòng)物 以保證足夠的統(tǒng)計(jì)功效(0. 8 0. 9)，以鑒定對(duì)照組和藥物治療組之間腫瘤體積的25%差 異。每個(gè)化合物使用五個(gè)治療組組1 未治療的對(duì)照，組2 媒介物治療的對(duì)照，組3-組5 用關(guān)注的類似物以每日0. 01*LD1Q、0. 1*LD1q和LDltl的靜脈內(nèi)劑量治療。因此，在攜帶K562 和K562/DOX異種移植物的50只裸小鼠中檢驗(yàn)各種類似物的抗腫瘤效力。植入之后通過(guò)在 實(shí)驗(yàn)期間每隔一天測(cè)量腫瘤體積持續(xù)多達(dá)45天，或當(dāng)腫瘤體積達(dá)到> 10%的動(dòng)物體重時(shí)， 來(lái)評(píng)價(jià)抗腫瘤效力。使用AN0VA(a =0.05)在各組間比較腫瘤生長(zhǎng)延遲、腫瘤生長(zhǎng)速率、 平均腫瘤體積和最終腫瘤體積。實(shí)施例11在健康動(dòng)物中的藥物動(dòng)力學(xué)雄性ICR小鼠被用于這些研究。三十只動(dòng)物接受藥物的靜脈內(nèi)劑量。將三只小鼠 麻醉，并在給藥之后的不同時(shí)間(至多5個(gè)半衰期)經(jīng)心臟穿刺或眶竇獲得血液樣本(每只約 500-1000 μ L)。使用 LC/MS 方法(ThermoFinnigan TSQ Quantum Discovery MAX 三 重四極質(zhì)譜儀和 LCQ Deca XPMaxIon Trap Mass Spectrometer 可在 Dr. Dalton 的實(shí)驗(yàn)室 第241號(hào)房間獲得)測(cè)定血漿藥物濃度。使用非線性最小二乘法回歸計(jì)算各組的血漿藥物 濃度_時(shí)間曲線下面積(AUC)、分布體積、清除率和半衰期，并使用雙尾t-檢驗(yàn)和多次線性 回歸分析估計(jì)偏差。使用類似的方法在荷瘤雄性裸nu/nu小鼠中評(píng)價(jià)二吲哚13和其它類 似物的藥代動(dòng)力學(xué)優(yōu)勢(shì)，除了在這些時(shí)間點(diǎn)切除腫瘤，且在勻化和提取之后測(cè)定含有親代 (K562)和表達(dá)P-糖蛋白的細(xì)胞(K562/DOX)的腫瘤中的藥物濃度。使用ANOVA比較最大濃 度(Cmax)禾口 AUC腫瘤值。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯的是，在不偏離本發(fā)明的范圍的情況下，可以作出各種 改變，且不應(yīng)當(dāng)認(rèn)為本發(fā)明的范圍限于說(shuō)明書(shū)中的描述。本文引用以下文獻(xiàn)1. Ketcha 等，J. Org. Chem.，1989，54 :4350_4356。2. Sakmoto 等，J. Chem. Soc.，Perkin Trans. 1996，1 1927-1934。3. Mahboobi 等，J.Med. Chem. 2002，45 (5) 1002-1018。4. Mahboobi 等，J. Org. Chem. 1999,64 :8130_8137。5. Hashizume 等，Chem Pharm Bull (Tokyo)，1994，42 (10) :2097_2107。6. Elofson 等，J. Org. Chem. 1964，29。7. Paquer,D.禾口Vialle,J. Bulletin de la Societe Chimique de France,1969, 10 :3595-3601o8. Li 等，Chemistry，2000，6 (9) :1531_1536。9. Maugard φ, Phytochemistry, 2001, 58 (6) :897_904。10. Venepalli 等，J Med Chem, 1992，32 (2) :374_378。11. Rubinstein 等，J Natl Cancer Inst，1990，82 (13) :1113_1118。12. Rose, W. C. Taxol :science and applications, M. Suffness 主編，1995, CRC Press =Boca Raton, FL.第 209-235 頁(yè)。13. Yates 等，Pharm Res, 2003, 20 (11) :1794_1803。
權(quán)利要求
具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物，及其藥理學(xué)上可接受的鹽或水合物其中R1是H、鹵化物、CF3、NO2、OH、 OCH3或CN烷基、烯基、O 烷基和O 芳基，且n是0、1、2、3或4；R2是H或 SO2Ph；R3是在C3或C5用R4取代的苯基；R8R9§；R12R13；在C1、C2或C3用2 、3 或6 吲哚基取代的2 、3 或6 吲哚基，所述吲哚基部分二者中任一個(gè)獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；或在C5、C6或C7用2 、3 或6 吲哚基取代的萘基或未取代的萘基，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R4是R5；C1 3亞烷基 R5；C(O)R6；CH＝CH C(R7) R6； C(O) R7 R6； O C(R7) R6；R8；R7R8 (2 、3 或6 吲哚基)；R8 (2 、3 或6 吲哚基)，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R8R9或R12R13；R5是OH、NO2、NH2、 NH C1 3烷基、N＝N＝N、CN或OR6；R6是H、C1 3烷基、或者獨(dú)立地在C2、C3、C4、C5或C6用R1取代的5 或6 元環(huán)；R7是O、S或NH；R8是 CH2、 CH2OH、C＝O、C＝S、C＝CH2、C＝NOH、C＝N(NH2)；R9是獨(dú)立地在C3用R10取代并在C4和C5用R11取代的苯基；在C4用 C(O)OCH3取代的噻唑基或者在C5、C6或C7用2 、3 或6 吲哚基取代的萘基或未取代的萘基，所述吲哚基部分獨(dú)立地在C1用R2取代，在C4、C5或C6用R1取代，或者用它們的組合取代；R10是H、OH、 OCH3、苯基、萘基或與在C4的R11形成間二氧雜環(huán)戊烯基環(huán)；R11是H、OH或 OCH3；R12是吡咯基、呋喃基、噻吩基或環(huán)戊二烯基；R13是 C(O) 2 、3 或6 吲哚基、 C(O) 咪唑、 C(O) 噻唑、 C(O) 噁唑、 C(O) 異噁唑、 C(O) 苯并噁唑、 C(O) 吡咯、 C(O) 呋喃、 C(O) 噁唑啉、 C(O) 噁唑烷、 C(O) 噁二唑、C(O) 萘基或 C(O)苯基，各自獨(dú)立地在C2、C3、C4、C5或C6用R1取代。FPA00001187409800011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1是H，R3是在C3或C5用R4取代的苯基，且R4與R8在一起。
3.如權(quán)利要求2所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)
4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1是H或F，R3是在C3或C5用R4取代的苯基，R4 是R8-(2-、3-或6-吲哚基)。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)
6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是在C3或C5用R4取代的苯基，且R4是R7R8-(2-、 3-或6-吲哚基)。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu) 和
8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是在C3或C5用R4取代的苯基，且R4是R8R9
9.如權(quán)利要求8所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)
10.如權(quán)利要求8所述的化合物，所述化合物具有結(jié)構(gòu)
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是2-、3_或6-吲哚基。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)
13.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是萘基。
14.如權(quán)利要求13所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)
15.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是R8R90
16.如權(quán)利要求15所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu) 其中Y獨(dú)立地選自H、OH、OCH3 ；和
17.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3是R12R13。
18.如權(quán)利要求17所述的化合物，所述化合物具有選自以下的結(jié)構(gòu)和 且其中ζ獨(dú)立地選自S、0、NH和CH2。O ，
19.抑制與細(xì)胞增殖疾病相關(guān)的細(xì)胞中微管蛋白聚合的方法，所述方法包括 使所述細(xì)胞與藥理學(xué)上有效量的權(quán)利要求1的化合物接觸。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述細(xì)胞增殖疾病是癌癥。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述癌癥是前列腺癌、結(jié)腸癌或乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明提供了吲哚衍生物和類似物化合物以及包含其的藥物組合物。本發(fā)明還提供了使用這些化合物抑制與增殖疾病相關(guān)的細(xì)胞中的微管蛋白聚合或治療癌癥的方法。
文檔編號(hào)C07D401/00GK101932569SQ200880125885
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2008年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月29日
發(fā)明者C·杜克, D·米勒, J·多爾頓, S·安, 楊軍, 黃東珍 申請(qǐng)人:俄亥俄州立大學(xué)研究基金會(huì);田納西大學(xué)研究基金會(huì)